大豆皂甙Bb对食管癌细胞凋亡的影响及其机制研究

目的探讨大豆皂甙Bb(SSBb)抑制人食管癌细胞Eca-9706生长、诱导凋亡的效应及其机制。方法用噻唑蓝比色法测不同浓度SSBb对Eca-9706细胞生长的抑制率;缺口末端标记法检测Eca-9706细胞的凋亡率;免疫组织化学染色法和免疫印迹法检测人食管癌Eca-9706细胞在SSBb作用下c-met、VEGF、cyclinD1、NF-κB、PTEN、HDAC1、caspase3蛋白表达的变化。结果与对照组相比,SSBb处理的Eca-9706细胞的生长抑制率、凋亡率增加,caspase3、PTEN的免疫反应性和印迹信号增强,cyclinD1、c-met、VEGF、NF-κB、HDAC1的免疫反应性和印迹信号减弱(P0.01)。结论 SSBb对人食管癌Eca-9706细胞增殖有抑制作用,可降低Eca-9706细胞中的c-met和VEGF恶性标志的过高表达,并通过抑制HDAC1、NF-κB,激活PTEN和caspase3信号传导途径诱导食管癌细胞凋亡。     

粉防己碱对绒癌BeWo细胞增殖和凋亡的作用

目的 探讨粉防己碱对人绒癌BeWo细胞株增殖和凋亡的作用.方法 采用不同浓度的粉防己碱处理人绒癌BeWo细胞株,在不同的作用时间采用MTT和流式细胞仪检测细胞增殖及凋亡的变化;Western blot检测PCNA和Survivin的表达.结果 采用不同剂量的粉防己碱处理BeWo细胞不同的时间,细胞均表现出生长的抑制,且为剂量及时间依赖性(P＜0.01).0、5、10、20 μg/mL粉防己碱作用24小时后,细胞凋亡的比例依次为3.52％±0.62％、8.32％±2.1％、13.45％±2.7％和27.38％±3.1％(F =41.616,P＜0.01),PCNA蛋白表达分别为0.85±0.05、0.53±0.04、0.22±0.01和0.03±0.01(F=244.375,P＜0.01),Survivin蛋白表达分别为1.06±0.01、0.98±0.06、0.52±0.03和0.39±0.03(F =529.4,P＜0.01).结论 粉防己碱可以对绒癌细胞株BeWo产生时间及浓度依赖的生长抑制作用,诱导绒癌细胞株的凋亡,有可能成为GTT化疗方案的辅助治疗药物.     

食管癌高发区饮食对Eca-109细胞周期调控因子表达的影响

目的采用血清生理学方法,观察食管癌高发区饮食喂饲大鼠血清对人食管癌细胞Eca-109细胞周期调控因子表达的影响。方法将SD大鼠随机分为3组,分别喂饲大鼠常规饲料、盐亭食管癌高发区饮食(盐亭饮食)及低发区饮食(成都成人饮食)。喂饲30天后取大鼠血清培养Eca-109细胞。为避免大鼠空白血清本身活性对实验结果的影响,设置小牛血清对照,采用RT-PCR、细胞免疫荧光法从mRNA及蛋白水平探讨不同饮食处理的大鼠血清对Eca-109细胞周期调控因子表达的影响。结果与小牛血清对照相比,喂饲盐亭饮食的大鼠血清处理Eca-109细胞后,细胞中原癌基因cyclinD1及CDK4在mRNA及蛋白水平均异常高表达,同时还伴有抑癌基因p16及Rb低表达。盐亭饮食组Eca-109细胞中cyclinD1、CDK4、p16及Rb在mRNA水平的表达量分别是小牛血清对照组的3.6倍、1.7倍、0.2倍及0.22倍。而喂饲常规饲料及成都饮食的大鼠血清对这4个基因表达影响均与小牛血清对照无明显差异。结论盐亭饮食喂饲大鼠血清使Eca-109细胞中细胞周期调控因子cyclinD1、CDK4表达上调,同时下调p16及Rb的表达。     

紫杉醇诱导胰腺癌细胞凋亡Survivin表达的变化及意义

目的 研究紫杉醇(PA)体外化疗对胰腺癌细胞凋亡抑制蛋白Survivin基因表达的影响.方法 培养人胰腺癌细胞株SW1990,加入低浓度的PA,用流式细胞仪分别检测加药前和加药后24、48 h的细胞凋亡率,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹技术(Western blot)检测Survivin mRNA和蛋白的表达.结果 SW1990细胞给予低浓度的PA后,加药前和加药后24、48 h的细胞凋亡率分别为(2.59±0.35)%、(14.75±1.29)%、(22.65±2.80)%;其Survivin mRNA的表达则分别比加药前提高了1.1倍和2.9倍;Survivin蛋白的表达分别增加了1.3倍和3.6倍.结论 应用PA化疗可促使胰腺癌细胞内Survivin表达的增加,抵抗化疗诱导的细胞凋亡.     

山楂原花青素诱导食管癌Eca109细胞凋亡的分子机制研究

目的探讨山楂原花青素诱导食管癌Eca109细胞凋亡的分子机制。方法常规培养食管癌Eca109细胞系并分为二甲基亚砜(DMSO)对照组和不同浓度的山楂原花青素实验组;细胞活性(cell counting kit-8,CCK-8)法检测山楂原花青素对Eca109细胞的抑制率;荧光共振能量转移(FRET)法观察山楂原花青素与细胞表面受体形成的异源二聚体的数量;Western blot法分别检测ERK5磷酸化程度和Bax、caspase-3蛋白表达水平;Annexin V-FITC/PI法检测食管癌细胞凋亡率。结果不同浓度的山楂原花青素培养Eca109细胞72h时,IC50约为275μg/ml,因此选用275μg/ml作为实验剂量;山楂原花青素与细胞表面受体形成的异源二聚体的数量呈时间依赖性,24h数量明显增多(P0.05);ERK5磷酸化程度随着时间的延长逐渐增强(P0.05),于36h和48h活性明显增强(P0.01);Eca109细胞的凋亡率随着时间的推移越来越高,72 h已达48.1%(P0.05);Bax和caspase-3蛋白表达在山楂原花青素的作用下,于48h表达最强(P0.01)。结论山楂原花青素可促进食管癌Eca109细胞的凋亡进程。     

Orai1和STIM1在姜黄素诱导人肺腺癌A549细胞凋亡中的作用

目的探讨不同浓度姜黄素诱导人肺腺癌A549细胞凋亡中Orai1和STIM1mRNA水平的改变。方法 A549细胞分别暴露于5、10、15、20、25和30μmol/L姜黄素12、24和48 h后,应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖活力;将不同浓度姜黄素孵育A549细胞24 h后,流式细胞仪检测细胞凋亡率;real-time PCR确定25μmol/L姜黄素处理24 h后,Orai1和STIM1mRNA表达水平。结果姜黄素对A549细胞的抑制作用呈剂量依赖性和时间依赖性,不同浓度姜黄素处理A549细胞24 h细胞存活率分别为96.5%、95.0%、77.4%、63.9%、57%、39.6%,与对照组相比,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。姜黄素处理后,流式细胞仪分析结果显示,细胞凋亡率呈明显剂量依赖关系(P0.05或P0.01)。经姜黄素处理后A549细胞Orai1和STIM1mRNA表达量均明显低于对照组(P0.01)。结论姜黄素可能引起A549细胞Orai1和STIM1 mRNA表达水平发生改变,通过下调Orai1和STIM1mRNA表达量引起细胞凋亡。     

裙带菜多糖对人食管癌细胞TE-13生长抑制作用的研究

[目的]观察裙带菜多糖(PUP)对食管癌细胞TE-13的生长抑制作用,探讨其诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡的机制。[方法]以食管癌细胞TE-13作为研究对象,MTT法检测PUP对其增殖的抑制作用;在电子透镜下观察PUP对TE-13超微凋亡结构的影响;流式细胞技术检测其周期分布和凋亡率;RT-PCR法检测PUP对TE-13细胞中凋亡相关基因Survivin表达的影响。[结果]PUP对食管癌细胞TE-13有显著增殖抑制效应,作用时间越长,在一定范围内的PUP浓度越大,抑制效应越强。PUP作用48h时半数抑制浓度(IC50)为52.17μg/ml。25、50、100μg/ml的PUP作用48h后,TE-13均发生凋亡形态的变化;100μg/ml PUP处理72h后,凋亡率为52.19%;周期分布显示G0/G1期细胞增多,S期细胞明显减少。RT-PCR结果显示PUP能降低食管癌细胞中Survivin mRNA的表达。[结论]PUP在体外显著抑制食管癌细胞TE-13的增殖,其机制与PUP诱导食管癌周期阻滞和下调Survivin mRNA的表达有关。     

丹参酮ⅡA对人卵巢癌细胞SKOV3增殖与凋亡的影响

目的:探讨丹参酮ⅡA(TanⅡA)对人卵巢癌细胞SKOV3的生长抑制和诱导凋亡作用及其可能机制。方法:培养人卵巢癌细胞SKOV3,经TanⅡA作用后,通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定丹参酮ⅡA对人卵巢癌细胞SKOV3的增殖抑制作用;流式细胞术检测细胞周期;RT-PCR检测Survivin与Smac/DIABLO mRNA表达水平;免疫荧光细胞化学检测Survivin蛋白及Smac/DIABLO蛋白的表达。结果:1.0～10.0μg/ml TanⅡA对人卵巢癌细胞SKOV3具有生长抑制作用,并具有时间-剂量依赖性。实验组较对照组G1/G2期细胞数量增多,而S期细胞数量减少(P<0.05)。随着TanⅡA干预浓度的增加和作用时间的延长,Survivin mRNA的表达受到明显抑制(P<0.05),而Smac/DIABLO mRNA的表达明显上调(P<0.05)。Survivin蛋白及Smac/DIABLO蛋白均表达于SKOV3细胞,其表达多定位于细胞质中,偶见于细胞核。结论:TanⅡA对人卵巢癌细胞SKOV3具有生长抑制和诱导凋亡作用,其作用机制可能是通过抑制人卵巢癌细胞SKOV3 Survivin和促进Smac/DIABLO的表达而实现的。     

p53凋亡刺激蛋白2在食管鳞癌组织及食管癌EC109细胞中的表达及意义

目的研究ASPP2在食管鳞癌(ESCC)组织及人食管癌EC109细胞中的表达及其意义。方法采用SP免疫组化染色法及TUNEL染色法检测42例ESCC及13例正常食管黏膜组织ASPP2蛋白的表达和细胞的凋亡情况,分析ESCC中细胞的凋亡阳性率与ASPP2表达的相关性;采用免疫荧光染色法检测人食管癌EC109细胞中ASPP2蛋白的分布;实时荧光定量PCR(RT-q PCR)法检测经顺铂(cisplatin,CDDP)干预后的实验组及未干预的对照组细胞ASPP2 mRNA的表达情况。结果 ASPP2蛋白在ESCC和正常食管黏膜组织的阳性率分别为52.4%(22/42)及84.6%(11/13),差异具有统计学意义(x~2=4.298,P=0.038);凋亡阳性率在ESCC及正常食管黏膜分别为54.8%(23/42)和7.7%(1/13),差异有统计学意义(x~2=8.943,P=0.003)。在ESCC中,凋亡阳性率与ASPP2的表达呈正相关(r=0.666,P0.01)。免疫荧光染色结果显示,ASPP2蛋白主要分布于EC109细胞的胞核及胞质中。经CDDP干预后,ASPP2 mRNA的相对表达是对照组的3.6倍(t=3.220,P=0.005)。结论 ASPP2异常表达与食管癌的发生发展、增殖凋亡密切相关,可作为理想的肿瘤标志物,用于辅助ESCC诊断并指导临床治疗。     

番茄红素抑制食管癌细胞EC109增殖及其作用机制的研究

目的探讨番茄红素抑制食管癌细胞EC109增殖及可能的作用机制。方法通过体外细胞培养,采用MTT法检测番茄红素对经PPARγ抑制剂GW9662处理前后的食管癌细胞EC109活力的影响,Western blotting检测番茄红素对PPARγ蛋白表达水平的影响。SPSS17.0软件对结果进行统计学处理。结果番茄红素可抑制食管癌细胞EC109的活力,并呈剂量-效应关系和时间-效应关系(P0.05),与番茄红素处理组比较,GW9662和番茄红素联合处理组食管癌细胞活力高(P0.05),而PPARγ蛋白表达水平低(P0.05),与DMSO对照组比较,番茄红素处理组PPARγ蛋白表达水平高(P0.01)。结论番茄红素可抑制食管癌细胞EC109的增殖,通过上调PPARγ蛋白的表达是实现其抑制作用的途径之一。     

The role of dietary fatty acids in predicting myocardial structure in fat-fed rats

Background

The purpose of this study was to identify the affect on the proliferation Eca-109 cells treated with oxidized low-density lipoprotein (ox-LDL) combined with adriamycin (ADM).

Methods

Eca-109 cell were cultured in the presence of oxLDL/ADM, and cell proliferation tested by MTT and cell apoptosis was monitored by the proportion of apoptosis and cell cycle by flow cytomester. We simultaneously evaluated the level of associated- apoptosis Bcl-2, Bax, and Caspase-3 gene mRNA and protein.

Results

OxLDL were cytotoxic and activate apoptosis. OxLDL combined with ADM significant enhanced the proportion rate of apoptosis on a time and dose dependency. The expressions of the inhibiting apoptosis Bcl-2 gene mRNA and protein were down regulated, whereas, the expressions of the promoting apoptosis Bax, and Caspase-3 genes mRNA and protein were up regulation.

Conclusion

These results suggested that oxLDL have cytotoxicity and activate apoptosis on the Eca-109 cells. OxLDL combined with ADM have a synergistic effect on the apoptosis induced Eca-109 cells. Furthermore, oxLDL may contribute to the improvement of clinical chemotherapy of cancer need to make further investigation.     

Effects of a Regional Chinese Diet on Proliferation of Human Esophageal Cancer Cell Line Eca-109 by a Sero-Physiology Method

Esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) is prevalent in Yanting (YT) country located in southwestern China. Residents in the YT region have an unusual diet pattern and the role of the YT diet on the risk of ESCC is still uncertain. The present study was to examine the possible effects of sera from rats fed with the YT diet on proliferation of human esophageal cancer cell line Eca-109 by means of a sero-physiology approach. Firstly, two feasibilities were assessed to set up the sero-physiology method. We found that rats fed with a human adult diet in Chengdu region (ESCC-low-risk-area) for 30d had very close body weight gains in comparison with the control rats fed with the conventional diet, confirming the feasibility of feeding rats with a human diet without affecting their normal growth. Cell growth results showed that 5% non-deactivated rat serum had exactly the same effect on the proliferation of Eca-109 cells compared with the fetal bovine sera (FBS) control, confirming the feasibility of cultivating Eca-109 cells with the rat serum instead of FBS. Subsequently, cell proliferation results indicated that rats’ sera fed with the YT diet significantly promoted Eca-109 cells proliferation but inhibited human normal liver epithelial cell line control HL7702 proliferation, whereas rats’ sera fed with the Chengdu diet didn't have these effects on the two cell lines. The different effects of the two human diets on proliferation of Eca-109 cells demonstrated that the sero-physiology method is effective in studying the relationship between diet and cancer, and there maybe exist cancer-promoting factors in the YT diet.     

盐亭食管癌高发区饮食对人食管癌细胞增殖的影响

目的采用血清生理学方法,观察盐亭食管癌高发区饮食喂饲大鼠血清对人食管癌细胞Eca-109生长增殖的影响。方法将24只雄性SD大鼠分为3组,分别喂饲大鼠常规饲料、健康成人饮食及盐亭饮食7天,每天定时记录采食量及体重。用MTT法探讨用大鼠血清培养人食管癌细胞的适宜条件;分别以人正常肝上皮细胞HL7702及10%灭活小牛血清作为对照,采用细胞生长曲线、细胞群体倍增时间、3H-TDR掺入实验研究盐亭饮食喂饲大鼠血清对人食管癌细胞生长增殖的影响。结果喂饲健康成人饮食与常规饲料的大鼠其采食量及体重无差异;用5%未灭活大鼠血清取代10%灭活小牛血清适合人食管癌细胞培养;盐亭食管癌高发区饮食喂饲大鼠血清可明显促进人食管癌细胞生长,却不利于人正常肝上皮细胞生长,且与其他3个组均有统计学差异(P<0.05)。结论盐亭食管癌高发区饮食具有促进人食管癌细胞Eca-109生长增殖的作用。     

藤梨根提取物对食管癌EC109细胞抑制作用

目的 观察藤梨根乙酸乙酯提取物对食管癌EC109细胞生长、凋亡影响,并探讨其作用机制.方法 体外培养食管癌EC109细胞,分别给予不同浓度的藤梨根乙酸乙酯提取物进行干预,四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测用药后EC109细胞凋亡率变化,免疫组化法检测用药后EC109细胞B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl -2)、Bcl -2相关X蛋白(Bax)蛋白表达变化,激光共聚焦显微技术测定用药后EC109细胞胞内[Ca2+]i变化.结果 细胞培养24、48、72 h后,对照组细胞凋亡率分别为(1.67±0.76)％、(2.32±0.45)％、(2.98±0.89)％,Bcl -2蛋白表达率分别为(50.12±3.41)％、(49.78±5.65)％、(51.25±6.34)％,Bax蛋白表达率分别为(17.98±2.85)％、(18.27±3.12)％、(17.76±3.64)％,而各干预组细胞凋亡率为7.05％ ～51.11％,均明显增加(t=5.419～17.826,P＜0.05),存在时-效和量-效趋势,同时其细胞Bcl -2蛋白表达降低,为43.32％ ～ 10.46％,Bax蛋白表达上调,为24.54％～ 63.47％,均存在时-效和量-效趋势,当作用时间≥48 h或浓度≥100 μg/mL时,干预组上述变化与对照组比较,差异有统计学意义(Bcl-2∶t=3.58～10.14;Bax∶t =5.047 ～ 11.065,P＜0.05);用药后细胞内[Ca2+]i明显升高,12h达高峰,此后缓慢减低,至48 h仍明显高于对照组.结论 藤梨根乙酸乙酯提取物可以明显抑制食管癌EC109细胞增殖,并诱导细胞发生凋亡,可能与降低其Bcl -2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,升高细胞内[Ca2+]i有关.     

灵芝孢子提取物对Lactacystin致PC12细胞损伤的保护作用

[目的]探讨灵芝孢子提取物对Lactacystin诱导PC12细胞损伤的保护作用。[方法]体外培养PC12细胞,建立Lactacystin诱导PC12细胞损伤的模型,观察细胞形态,用CCK-8法检测细胞活力,annexin V-FITC/PI流式细胞法检测细胞调亡。[结果]用不同浓度的灵芝孢子提取物处理PC12细胞时,细胞存活率与对照几乎一致,并未表现出细胞毒性。经20μmol/L的Lactacystin处理24 h后,PC12细胞活力比对照组降低,仅为对照组的63.2%。模型组经不同浓度的灵芝孢子提取物预处理后,细胞活力明显提高,其保护作用随浓度升高而升高。Lactacystin诱导PC12细胞凋亡,处理24 h后细胞凋亡率为48.86%,经灵芝孢子提取物处理后,细胞凋亡率明显降低。[结论Lactacystin能诱PC12细胞凋亡,灵芝孢子提取物能对Lactacystin致PC12细胞损伤有一定的保护作用。     

全蝎水浸液通过上调Bax的表达诱导宫颈癌细胞凋亡

[目的]探讨全蝎水浸液诱导宫颈癌细胞死亡的形式以及Bax在其中所起的作用。[方法]MTT法检测细胞死亡;全蝎水浸液和空白培养液作用于宫颈癌细胞,分别于0h、48h、72h时通过流式细胞仪检测宫颈癌细胞的凋亡情况;Western blot检测在全蝎水浸液诱导前后Bax蛋白的表达水平。[结果]全蝎水浸液诱导宫颈癌细胞死亡具有剂量依赖性;宫颈癌细胞的死亡形式主要为凋亡;Bax蛋白的表达水平在全蝎水浸液诱导的宫颈癌细胞中有显著升高。[结论]全蝎水浸液能通过诱导细胞凋亡杀伤宫颈癌细胞,此凋亡可能与Bax的表达上调有关。     

枸杞多糖对人宫颈癌细胞生长及细胞凋亡影响

目的观察枸杞多糖对体外培养的人宫颈癌Hela细胞生长及其细胞凋亡的影响。方法不同剂量的枸杞多糖作用于体外培养的宫颈癌Hela细胞，用苔盼蓝染色、四甲基偶氮噻唑蓝（MTT）法及流式细胞仪检测人宫颈癌Hela细胞存活率、抑制率及细胞凋亡等指标。结果枸杞多糖可明显抑制人宫颈癌Hela细胞的生长，抑制率司达96．85％，并呈剂量效应关系，细胞凋亡率可达36．8％。结论枸杞多糖对人宫颈癌Hela细胞生长具有抑制作用，其抑制机制可能是通过影响人宫颈癌细胞的生长周期和诱导其凋亡而实现。     

核黄素对人食管癌细胞株生长增殖的影响

[目的]采用细胞培养的方法研究核黄素对人食管癌细胞株生长增殖的影响,探讨核黄素营养水平与食管癌的关系。[方法]常规培养人食管癌细胞株Eca109细胞。(1)用不同浓度的核黄素作用于细胞株,MTT比色法测定Eca109细胞的增殖活性,计算细胞增殖率。(2)采用流式细胞仪法测定核黄素作用Eca109细胞后细胞周期的改变。(3)免疫组织化学法测定核黄素对Eca109细胞作用24 h Cyclin D1蛋白表达的影响。(4)HE染色以观察核黄素作用24 h对Eca109细胞的分化影响。[结果](1)不同浓度的核黄素作用于Eca109细胞后,其增殖率未见明显变化。(2)核黄素的加入使Eca109的细胞周期改变,出现G2/M期阻滞,但不促进其凋亡。(3)核黄素处理24 h后,经过免疫组化测定,食管癌细胞Cyclin D1蛋白表达无降低,与阴、阳性对照组相比差异均无统计学意义(P﹥0.05)。(4)HE染色观察各浓度组细胞形态形态无明显改变。[结论]核黄素不会影响食管癌Eca109的增殖,但可能将细胞阻滞在M期。