紧密连接Occludin蛋白在大鼠脑出血致肠屏障改变中表达的变化

目的:研究紧密连接Occludin蛋白在大鼠脑出血致肠屏障改变中表达的变化。方法:健康成年雄性Wistar大鼠36只,随机分为脑出血组和假手术组,每组18只。脑出血组建立急性脑出血模型。HE染色观察空肠病理形态,免疫组化法观察肠粘膜紧密连接Occludin蛋白的表达。结果:15只大鼠脑出血造模成功;脑出血组大鼠空肠出现明显病理改变,紧密连接Occludin蛋白平均光密度低于假手术组(P<0.05)。结论:急性脑出血时,空肠组织出现病理改变,紧密连接破坏,肠粘膜紧密连接Occludin蛋白表达下降。     

非酒精性脂肪肝大鼠小肠黏膜上皮屏障及紧密连接蛋白表达的变化

目的：非酒精性脂肪性肝病（ NAFLD）与肠道屏障功能受损密切相关,本研究探讨非酒精性脂肪肝时肠上皮紧密连接蛋白Zonula Occluden-1（ZO-1）和Occludin的表达变化及其在肠黏膜屏障功能减退中的作用。方法30只雄性SD大鼠随机分为对照组（普通饮食）和高脂模型组,分别于造模的12周、16周检查肝指数（肝湿重/体重）、血清丙氨酸氨基转移酶（ ALT）、血清胆固醇（ TC）、甘油三酯（ TG）、肝组织匀浆丙二醛（ MDA）和超氧化物歧化酶（ SOD）水平,光镜下观察末端回肠黏膜形态,透射电镜下观察小肠上皮细胞紧密连接超微结构,免疫组化方法检测小肠紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的表达。结果16周模型组大鼠肝脏脂肪变性明显,肝指数[（6.3±0.18）％ vs．（5.8±0.12）％]、血清 ALT [（68.61±12.12） U/L vs．（25.10±9.06）U/L]、血 TG[（1.30±0.14）mmol/L vs．（0.72±0.06）mmol/L]和肝组织匀浆 MDA 水平[（6.02±0.92）μmol/g vs．（2.15±0.66）μmol/g]均显著高于对照组（P＜0.01）,肝组织匀浆SOD水平显著低于对照组[（5.12±1.88）U/g vs．（10.52±2.2）U/g,P＜0.01];模型组大鼠末端回肠黏膜形态和小肠上皮细胞紧密连接超微结构未见明显异常,但肠上皮细胞凋亡增加。与对照组比较,16周模型组大鼠小肠ZO-1及Occludin蛋白的表达皆显著下降（0.65±0.12 vs．1.08±0.08;0.62±0.08 vs．0.95±0.10, P ＜0.01）。结论非酒精性脂肪肝时肠黏膜上皮屏障功能减退可能与小肠上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的表达异常有关。     

实验性梗阻性黄疸小肠黏膜上皮紧密连接蛋白的改变

目的：寻求梗阻性黄疸肠黏膜屏障破坏的机制。方法：建立大鼠梗阻性黄疸模型，于胆总管结扎10d后．采用免疫组化和Western blots免疫印迹检测末端回肠黏膜紧密连接蛋白ZO-1（zonula occludens-1），闭锁蛋白（occludin），壳牢素-1，4（claudin-1，-4）的分布和表达，并利用图像分析系统对Western blots图像结果进行定量分析。结果：梗阻性黄疸时大鼠回肠黏膜萎缩明显，平均肠绒毛高度、黏膜厚度和隐窝深度与对照组比较分别下降27．8％、21．7％和25．4％（均P〈0．01）。正常回肠黏膜ZO-1、闭锁蛋白及壳牢素-1分布相似，主要位于顶端细胞膜。沿绒毛下方、均匀连续分布；梗阻性黄疸时分布散乱异常，染色变浅；强阳性表达率分别从对照组的70．0％、80．0％和90．0％降至实验组的35．7％、32．1％和39．2％（均P〈0．05），且肠绒毛高度的下降与ZO-1表达率的降低成正相关（P〈0．01）。而壳牢素-4的数量和分布改变不明显。对Western blot图像定量分析得到相同的结果。结论：梗阻性黄疸时小肠黏膜上皮紧密连接蛋白分布异常及数量改变，影响肠黏膜上皮屏障的完整性，破坏小肠黏膜屏障。[著者文摘]     

紧密连接蛋白occludin在三硝基苯磺酸诱导大鼠结肠炎肠黏膜屏障中的作用研究

目的探讨紧密连接蛋白occludin在三硝基苯磺酸（trinitro-benzen-sulfonic acid,TNBS）诱导大鼠结肠炎肠黏膜屏障中的作用。方法建立大鼠结肠炎模型。SD大鼠18只,按随机数字表法分为TNBS诱导大鼠结肠炎模型组（n=10）和正常对照组（n=8）,进行疾病活动指数（DAI）和组织学损伤评分,用ELISA法测定结肠组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-10（IL-10）和血清内毒素,采用免疫组织学染色检测紧密连接（tight junction,TJ）相关蛋白occludin的分布。结果TNBS诱导大鼠结肠炎后,和正常组比较,TJ结构遭到破坏,TJ相关蛋白的表达亦减少,结肠组织TNF-α水平升高、IL-10水平降低和血清内毒素水平升高（P〈0.05）。结论TNBS诱导大鼠结肠炎肠黏膜上皮细胞TJ相关蛋白occludin表达下降,肠黏膜上皮屏障的完整性被破坏,导致肠黏膜屏障功能低下,促发炎症反应。     

紧密连接蛋白Occludin在早孕绒毛组织中的表达及其意义

背景：Occludin蛋白是否在人早孕期胚泡植入中发挥作用,目前尚不能确定。目的：探讨紧密连接蛋白Occludin在早孕绒毛组织中的表达及意义。方法：早孕的正常人流绒毛组织和稽留流产绒毛组织各30例,用半定量RT-PCR,Western blot和免疫组化表达等各方法验证紧密连接蛋白Occludin在各组绒毛组织中的表达。结果与结论：紧密连接蛋白Occludin主要表达在于绒毛外的合体滋养细胞的胞浆,胞核和少许间质,细胞滋养细胞Occludin表达低。半定量RT-PCR,Western blot和免疫组化表达等各方法验证紧密连接蛋白Occludin在正常人流和稽留流产绒毛组织中均有表达,前者的表达低于后者,但差异无显著性意义（P〉0.05）。说明紧密连接蛋白Occludin在绒毛组织有表达,细胞滋养细胞Occludin低表达可能是细胞滋养细胞极性消失的原因之一,参与细胞滋养细胞浸润能力形成,但胚胎发育停滞并不单是细胞滋养细胞侵润能力不足引起。     

紧密连接蛋白Occludin在早孕绒毛组织中的表达及其意义☆

背景:Occludin蛋白是否在人早孕期胚泡植入中发挥作用,目前尚不能确定.目的:探讨紧密连接蛋白Occludin在早孕绒毛组织中的表达及意义.方法:早孕的正常人流绒毛组织和稽留流产绒毛组织各30例,用半定量RT-PCR,Western blot和免疫组化表达等各方法验证紧密连接蛋白Occludin在各组绒毛组织中的表达.结果与结论:紧密连接蛋白Occludin主要表达在于绒毛外的合体滋养细胞的胞浆,胞核和少许间质,细胞滋养细胞Occludin表达低.半定量RT-PCR,Western blot和免疫组化表达等各方法验证紧密连接蛋白Occludin在正常人流和稽留流产绒毛组织中均有表达,前者的表达低于后者,但差异无显著性意义(P>0.05).说明紧密连接蛋白Occludin在绒毛组织有表达,细胞滋养细胞Occludin低表达可能是细胞滋养细胞极性消失的原因之一,参与细胞滋养细胞浸润能力形成,但胚胎发育停滞并不单是细胞滋养细胞侵润能力不足引起.     

姜黄素促进Syndecan-1调控细胞紧密连接对严重腹腔感染时肠屏障功能的保护作用

目的探究姜黄素促进Syndecan-1(SDC1)表达,调控细胞紧密连接,对严重腹腔感染时肠屏障功能的保护作用。方法选取由广州医科大学实验动物中心提供120只基因敲除大鼠作为研究对象,根据随机数字表法分为空白对照组、对照组和治疗组各40只。空白对照组只剖腹,对照组行盲肠结扎术,治疗组在盲肠结扎术后静脉滴注姜黄素,检测各组SDC1蛋白表达、核因子kB(NF-kB)蛋白表达、mRNA水平和以及趋化因子10、白细胞介素8、肿瘤坏死因子α等炎性因子水平。结果治疗组SDC1蛋白表达、NF-kB蛋白表达和mRNA水平低于对照组和空白对照组,对照组SDC1蛋白表达、NF-kB蛋白表达和mRNA水平低于空白对照组,差异有统计学意义(P<0.05);治疗组IP-10、IL-8、TNF-α水平低于对照组和空白对照组,对照组IP-10、IL-8、TNF-α水平低于空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论姜黄素可以促进SDC1表达,调控细胞的紧密连接,形成对严重腹腔感染时屏障功能的保护。     

SIRT-1调控紧密连接蛋白保护肠缺血再灌注后引起的屏障损伤

目的 探究沉默信息调节因子1(SIRT-1)调控紧密连接蛋白保护肠缺血再灌注后引起的屏障损伤的机制。方法 选取2014年7月—2021年7月南京医科大学附属江苏盛泽医院因肠系膜血栓导致的部分小肠坏死行手术治疗的5例患者作为研究对象,采集术中切除坏死肠管及部分正常肠管样本,使用生理盐水冲洗肠内容物后,取其中部分坏死和正常的肠黏膜保存于液氮中。提取黏膜中的蛋白,应用蛋白印迹、免疫荧光、qPCR等方法检测SIRT-1和紧密连接蛋白claudin-4表达情况,检测黏膜屏障电阻(TER)的变化。结果 坏死肠管肠黏膜claudin-4表达量为(0.06±0.01),少于正常肠管的(0.22±0.06),差异有统计学意义(t=14.189,P<0.05);SIRT-1激活后,其表达升高,claudin-4表达为(0.61±0.12),高于正常肠管,差异有统计学意义(t=42.334,P<0.05),HE染色可见组织破坏减轻,TER呈现出升高趋势;SIRT-1激活后,TER为(1 213.29±46.34)Ω·cm²,高于未激活的(992.49±24.65)Ω·cm<...     

重症脑卒中患者肠黏膜屏障功能的变化

目的：探讨重症脑卒中患者是否存在肠黏膜屏障功能变化。方法选取重症脑卒中患者67例,按发病部位分为4组,即脑干出血组、脑干梗死组、半球出血组、大面积半球梗死组,分别于患病后24小时、72小时、2周、4周采集静脉血,同时选取健康体检者30例作为对照组,抽取外周血,采用双抗体夹心酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定血清二胺氧化酶(Diamine oxidase,DAO)、D-乳酸(D-lactic acid,D-LAC)含量。结果与对照组比较,重症脑卒中组D-LAC、DAO 均明显升高(均 P <0.01)。脑卒中组不同时点比较表明：4组间比较差异均有统计学意义(均 P <0.01)。各组从发病24小时至2周均处于高水平,不同时点比较差异无统计学意义(均 P >0.05)。结论重症脑卒中患者病后24小时内即可出现黏膜屏障功能损伤,并且损害可持续2周或更长时间。     

Functional changes of intestinal mucosal barrier in surgically critical patients

BACKGROUND:

The gut is capable of inducing multiple organ dysfunction syndrome (MODS). In the diagnosis and treatment of critical ill patients, doctors should pay particular attention to the protection or recovery of intestinal barrier function. However, no reliable diagnostic criteria are available clinically. This study aimed to assess the changes of intestinal mucosal barrier function in surgically critical ill patients as well as their significance.

METHODS:

Thirty-eight surgically critical ill patients were enrolled as a study group (APACHE II>8 scores), and 15 non-critical ill patients without intestinal dysfunction were selected as a control group (APACHE II<6). General information, symptoms, physical signs, and APACHE II scores of the patients were recorded. The patients in the study group were subdivided into an intestinal dysfunction group (n=26) and a non-intestinal dysfunction group (n=12). Three ml venous blood was collected from the control group on admission and the same volume of plasma was collected from the study group both on admission and in the period of recovery. The plasma concentrations of endotoxin, diamine oxidase (DAO), D-lactate, and intestinal fatty-acid binding protein (iFABP) were detected respectively. The data collected were analyzed by the SPSS 17.0 software for Windows.

RESULTS:

The levels of variables were significantly higher in the study group than in the control group (P<0.01). They were higher in the intestinal dysfunction group than in the non-intestinal dysfunction group (DAO P<0.05, endotoxin, D-lactate, iFABP P<0.01). In the non-intestinal dysfunction group compared with the control group, the level of endotoxin was not significant (P>0.05), but the levels of DAO, D-lactate and iFABP were statistically significant (P<0.05). The levels of variables in acute stage were higher than those in recovery stage (P<0.01). The death group showed higher levels of variables than the survival group (endotoxin and D-lactate P<0.01, DAO and iFABP P<0.05).

CONCLUSION:

The plasma concentrations of endotoxin, DAO, D-lactate, and intestinal fatty-acid binding protein (iFABP) could reflect a better function of the intestinal mucosa barrier in surgically critical ill patients.KEY WORDS: Intestinal mucosal barrier, Endotoxin, Diamine oxidase, D-lactate, Intestinal fatty-acid binding protein     

热打击对大鼠血脑屏障通透性及紧密连接蛋白Occludin的影响

热射病是由于机体产生的热量超过了体温调节代谢散热的能力,致使核心体温急剧升高,以核心体温大于40℃、中枢神经系统功能异常以及多脏器功能损害为主要临床表现的临床急危重症[1].随着人类对气候的影响,随之而来是热浪越来越频繁、越来越严重,热射病的发病率也逐年升高[2-3],并经常在急诊误诊[4],在过去的二十年里其死亡人数已超过龙卷风、飓风、地震、雷击等死亡人数的总和[5],约20％热射病患者遗留神经功能损害[1],已成为严重威胁公共健康的急重症疾病之一[6].     

血清OX40L、Occludin与急性缺血性脑卒中患者病情程度及预后的相关性

目的 探讨急性缺血性脑卒中患者血清OX40配体(OX40L)、闭合蛋白(Occludin)的水平,分析其与患者病情严重程度及预后的关系。方法 选取2016年1月至2020年1月在该院接受治疗的135例急性缺血性脑卒中患者为观察组。另选取同期该院体检健康者100例为对照组。采用酶联免疫吸附试验检测血清OX40L、Occludin水平差异。患者出院后6个月采用改良Rankin量表(mRS)评估预后状况,并分为预后良好组93例(mRS评分≤2分)和预后不良组42例(mRS评分>2分)。采用多因素Logistic回归分析影响急性缺血性脑卒中患者预后不良的危险因素。结果 观察组血清OX40L、Occludin水平与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。急性缺血性脑卒中重度组血清OX40L、Occludin水平高于中度组、轻度组,中度组血清OX40L、Occludin水平高于轻度组,差异有统计学意义(P<0.05)。预后不良组血清OX40L、Occludin水平明显高于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,美国国立卫生...     

脑梗死后微血管渗透性改变及出血性转化的预测

目的探讨缺血性脑梗死后急性期和亚急性期微血管渗透性改变及脑梗死后出血性转化(hemorrhagic transformation,HT)的预测。材料与方法收集缺血性脑梗死病人43例,急性期10例,亚急性期33例,进行常规MRI及DCE-MRI扫描。利用药代动力学模型计算容积转运常数Ktrans,比较每一个病人梗死区和对侧正常脑组织的Ktrans值以及出血组和非出血组的Ktrans值有无差异,比较不同时期梗死区强化对预测HT的意义。结果所有病人梗死区Ktrans值较对侧正常脑组织明显增高(P0.05)。10例在急性期有脑实质强化的病人都有继发出血,在亚急性期和慢性期15例病人有继发出血,18例没有继发出血,Fisher's精确检验有统计学意义(P0.05)。与亚急性期HT或没有HT的病人相比,急性期有HT组病人的Ktrans值明显增高(P0.05),但是亚急性期HT和非HT的病人Ktrans值比较没有统计学差异(P0.05)。结论急性期脑实质强化对HT的预测有更高的特异性,且渗透性比亚急性期更高。早期脑实质强化及HT与毛细血管内皮的紧密连接和基底膜损伤有关。后期脑实质强化及HT与侧枝循环的建立有关,DCE-MRI可以定量评估血脑屏障的渗透性,对进一步研究HT的分型提供更科学的依据。     

缺血性脑卒中患者C反应蛋白、纤维蛋白原和神经元特异性烯醇酶的动态变化

目的:探讨缺血性脑梗死患者不同病变时期血中C反应蛋白、纤维蛋白原、神经元特异性烯醇酶(NSE)的变化与缺血性脑卒中关系。方法:临床确诊缺血性脑卒中患者69例,分别检测缺血性脑卒中患者不同病变时期的C反应蛋白、纤维蛋白原、NSE的浓度,选择20例门诊健康体检者作为正常对照组。结果:缺血性脑卒中患者的C反应蛋白:急性期为(17.28±3.82)mg/L;亚急性期为(11.55±1.95)mg/L;恢复期为(7.10±1.30)mg/L。与正常值(4.65±1.39)mg/L相比差异均有显著意义(t=12.717～2.5382,P<0.05或0.01)。纤维蛋白原急性期,亚急性期和恢复期分别为(4.62±0.61),(4.09±0.62),(3.21±0.65)mg/L,与正常值(2.26±0.22)mg/L比差异有显著性意义(t=2.3602～1.8244,P均<0.01)。NSE急性期是(22.27±5.69)mg/L;亚急性期是(13.62±2.74)mg/L;恢复期为(9.16±1.44)mg/L,与正常组(3.08±1.51)mg/L比较差异也均有显著性意义(t=19.1844～6.0735,P<0.01)。随着病程的发展,从急性期到亚急性期以及恢复期,C反应蛋白、纤维蛋白原、NSE的浓度均有明显的下降(F=12.042～3.322,P<0.05)。结论:随着病情的进展,C反应蛋白、纤维蛋白原、NSE存在着动态变化,病情好转,三者的浓度明显下降,呈正相关。     

用SELDI蛋白芯片技术筛选缺血性脑卒中患者血清蛋白标志物的研究

目的研究缺血性脑卒中患者血清蛋白质谱的变化,从而筛选特异性的蛋白标志物。方法采用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）技术和弱阳离子交换芯片（CM10）首先对训练组72例缺血性脑卒中患者和性别年龄匹配的80例正常对照者血清蛋白表达谱的差异进行分析,建立决策树分类模型后,对测试组（55例缺血性脑卒中患者和60例正常对照者）进行盲法验证。结果在质荷比（M/Z）2000～50000Da范围内,共检测到94个蛋白质峰,筛选出差异蛋白质峰29个,以质荷比（M/Z）分别为5659、5878、7304、7398和9003Da的5个差异蛋白峰,建立的决策树分类模型对缺血性脑卒中患者诊断的敏感性为95.8%（69/72）,特异性为97.5%（78/80）,正确诊断率为96.7%（147/152）。用该模型对测试组进行双盲检测,结果显示敏感性、特异性和正确诊断率分别为94.5%（52/55）、95.0%（57/60）和94.8%（109/115）。结论应用SELDI-TOF-MS技术可以筛选出缺血性脑卒中患者相关的血清蛋白标志物,建立的决策树分类模型可能对缺血性脑卒中患者的诊断具有重要的临床价值。