透明带多表位疫苗载体的构建及抗生育研究

目的 研究透明带(ZP)多表位疫苗的抗生育效果。方法根据牛核糖核酸酶T细胞抗原(BRNT)、ZP2和ZP3的表位序列设计含限制性核酸内切酶识别位点的反向互补引物,经退火、延伸、酶切后,重组至pQE-80L载体。用表达产物对BALB／c小鼠进行主动免疫,检测抗生育效果。结果构建了ZP表位疫苗载体,成功地诱导出体液免疫应答,ZP3、ZP2及ZP2和ZP3多表位疫苗的避孕率分别为60．00％、50．00％和83．33％。结论ZP2和ZP3多表位疫苗的避孕率高于ZP2或ZP3表位疫苗。     

小鼠透明带溶解液诱导人精子顶体反应

目的 研究小鼠透明带溶解液诱导人精子顶体反应的效果，建立人精子顶体反应模型，方法正常生育力人精子经ＢｉｇｇｅｒｓＷｈｉｔｔｅｎａｎｄＷｈｉｔｔｉｎｇｈａｍｍｅｄｉｕｍ（ＢＷＷ）获能５～６ｈ后，分别用小鼠透明带溶解液（ｍＺＰＳ），ｍＺＰＳ的缓冲液ｈａｌｏｇｅｎｂｕｆｆｅｒ（ＨＢ），Ｃａ＾２＋载体Ａ２３１８７处理１ｈ，对实验和对照组精子用经典的豌豆凝集素（ＰＳＡ）法检测顶体反应。结果 ｍＺＰＳ组的顶体     

Expression of Core Domain of Porcine Zona Pellucida 3β in E. coli

Objective To obtain the recombinant core domain of porcine zone pellucida 3β (cZP3β)for the further research on its functions Methods The nucleotide sequence region from 44 to 306 codons of pZP3β entire cDNA was obtained by PCR and then was cloned into pET-3c vector. After being identified, recon was transformed into E. coli BL21 (DE3) pLysS and then induced by IPTG.Results The recombinant cZP3β was expressed in E. coli up to 15% of total cellular proteins, and was made sure by Western blot analysis.Conclusion The research on expression of core domain of pZP3β could benefit to further investigation of its immunogenicity and the development of antigen preparation.     

Expression of Nonfusion Extracellular Porcine Zona Pellucida Protein 3β in E. coli

Objective To obtain the recombinant nonfusion extracellular porcine zona pellucida protein 3β (pZP3β ) in E. coliMethods By modificated the transition initiation region (TIR) in primers, synthetic nucleotide was gained by PCR. Such gene was cloned into pET-3c vector and trans-formed into E. coli BL21(DE3)pLysS.Results The recombinant nonfusion extracellular pZP3β was expressed in E. coli to 10% of total cellular proteins, and identified by the Western blot method.Conclusion Modification of nucleotide without changing amino acid sequences is an effective means to increase non fusion expression rate of recombinant proteins, such as pZP3β in E. coli.     

猪卵透明带单克隆抗体在体外与人、猪卵巢组织的反应

用ABC免疫组织化学染色法,观察猪卵透明带单克隆抗体(LPD_8、LPC_4),在体外与人、猪卵巢组织的反应。LPD_8和LPC_4使人、猪卵透明带及卵细胞质着色,但不使卵巢的其他结构,如颗粒细胞、卵泡膜细胞及结缔组织着色。这些结果提示:猪卵透明带单克隆抗体对卵巢内分泌功能可能无直接影响,但可通过与卵细胞质结合,抑制卵泡的发育,继而导致卵泡数目减少和内分泌功能降低。作者认为,用本实验提取的两株猪卵透明带单克隆抗体,进行免疫避孕研究前途不大。     

慢速程序冷冻对透明带显微操作后人类胚胎冻存率及发育的影响

[目的]探讨慢速程序冷冻对透明带显微操作后胚胎冻存率及继续发育的影响.[方法]将96个Ⅱ级以上人类多精受精胚胎随机分为单纯透明带打孔组(n=24),胚胎活检组(n=40)及对照组(n=32).为模拟临床种植前诊断活检后胚胎冷冻过程,将透明带显微操作后胚胎继续培养6～10 h再进行慢速程序冷冻,观察各组胚胎冷冻解冻后的冻存率及胚胎继续发育能力.[结果]活检及透明带打孔后冻融胚胎中发生裂解的卵裂球多位于透明带破口附近.活检组胚胎完整率、胚胎存活率及卵裂球存活率分别为10%,25.0%和29.0%,较对照组(43.7%,66.0%和62.4%)明显降低(P<0.01).虽然单纯透明带打孔组冷冻后胚胎完整率及胚胎存活率与活检组无明显差异,但卵裂球存活率较胚胎活检组高(分别为40.9%和29.0%)(P<0.01),以上各组存活胚胎继续发育率差异无显著性(P>0.05).[结论]以丙二醇和蔗糖为冷冻保护剂的人类分裂期胚胎慢速冷冻程序并不适用于化学法透明带打孔活检胚胎的冷冻保存,有关人类活检后胚胎的冷冻保存方法值得进一步探讨.     

肾上腺素受体激动剂对新生大鼠心肌细胞胞质型磷脂酶A2的活化作用

目的探讨肾上腺素受体(adrenergic receptor,AR)激动剂对培养的新生大鼠心肌细胞胞质型磷脂酶A2(cy-tosolic phospholipase A2,cPLA2)的磷酸化效应及机制。方法分别用β-AR激动剂异丙肾上腺素(10μmol/L)和α1-AR激动剂苯肾上腺素(10μmol/L)处理培养的新生大鼠心肌细胞,Western blot法检测cPLA2及丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、细胞外调节蛋白激酶1/2(ERK1/2)磷酸化水平随时间变化的效应曲线。结果α1-AR激活引起心肌细胞内cPLA2磷酸化水平显著增高,此效应可能由p38MAPK及ERK1/2的磷酸化介导;β-AR激活可引起p38MAPK及ERK1/2的磷酸化,但不伴有cPLA2的磷酸化。结论实验结果揭示了心肌细胞中α1-AR激动在调控cPLA2活性方面的重要作用。     

磷脂酶A_2在阿尔茨海默病发病机制中的作用

磷脂酶A2(PLA2)是一类催化甘油磷脂sn-2酯键水解生成多不饱和脂肪酸和溶血磷脂的超家族酶系。在正常细胞内,PLA2的代谢产物水平很低,作为信号分子来调节许多细胞功能,而当这些代谢产物大量积聚时,会产生神经毒性。近年来大量研究表明,PLA2可以通过以下几个环节参与阿尔茨海默病(AD)的发病机制:Aβ沉积、突触丢失、氧化应激、炎性反应和细胞凋亡,但是AD的确切发病机制目前尚不清楚,现就PLA2在AD发病中的作用予以综述。     

豚鼠的耳气压损伤(模拟潜水实验)

我们用65只健康豚鼠进行潜水模拟实验,水深60m,分为三种减压模式进行。用听神经动作电位为测试听阈变化的指标,中耳阻抗仪观察鼓室压曲线的变化,光镜及电镜观察内耳形态学及超微结构的改变。试验证实三组听力均以潜水后7天阈移最大,鼓室压曲线潜水后除5耳外均为B型曲线。光镜见中耳有病损者39耳(37.85％),内耳有病损者4耳(3.88％);扫描电镜见毛细胞毛缺损及排列紊乱,适射电镜见细胞器有拟伤。     

High-level Expression and Purification of Human Zona Pellucida huZP3a^22-176 and huZP3b^177-348 Peptides in Escherichia coli

Objective To try making huZP3a^22-176 and huZP3b^177-348 polypeptides （representing an intact huZP^322-348 protein without its N-terminal signal peptide and C-terminal transmembrane domain ） express in E. coli at a higher level Methods The cDNAs encoding huZP3a and huZP3b were obtained with PCR method. The pBV221 plasmid was used to construct thermo-inducible recombinant expression vector. Purification of two target expression products employed an improved method of preparative gel polyacrylamide gel electrophoresis. Results Two polypeptides of recombinant huZP3a （rhuZP3a） and recombinant huZP3b （rhuZP3b） were all expressed respectively in an E. coli BL21（DE3）pLysS strain at a higher level, which were recognized by two specific polyclonal antisera in Western blotting test which recognize a linear B cell epitope present in rhuZP3a or rhuZP3b respectively. Using the shake-flask method, approximately 5 mg of rhuZP3a and rhuZP3b with more than 95% relative homogeneity were harvested from 1 L culture respectively. Conclusion The availability of two rhuZP3 polypeptides will help in detecting the immunogenicities of rhuZP3a and rhuZP3b through animal experiments and confirming the function domain of non-glycosylated huZP3 to induce acrosome reaction in vitro.     

杏贝冲剂对哮喘豚鼠磷脂酶A2的影响

目的:探讨杏贝冲剂对哮喘气道炎症关键物质磷脂酶A₂(PLA₂)的影响。方法:以卵蛋白激发造成豚鼠哮喘模型,观察杏贝冲剂作用下PLA₂及其介导的支气管-肺泡灌洗液(BALF)中炎细胞成分、血浆炎性介质血栓素B₂(TXB₂)、6-酮-前列腺素F_1α(6-K-PGF_1α)的变化,并对哮喘症状加以分析。结果:杏贝冲剂治疗组PLA₂、TXB₂水平降低,BALF中嗜酸细胞成分明显减少,哮喘激发时间和症状改善。结论:杏贝冲剂通过对PLA₂的影响,起到抗炎控制哮喘的作用。     

脂蛋白相关磷脂酶A_2与缺血性脑卒中的关系

脂蛋白相关磷脂酶A2(Lp-PLA2)是磷脂酶A2超家族中的一个亚型,不仅可以水解血小板活化因子,还能水解低密度脂蛋白氧化过程中形成的氧化磷脂生成溶血卵磷脂和氧化型游离脂肪酸。研究证实Lp-PLA2参与动脉粥样硬化的形成,与斑块的不稳定性密切相关。缺血性脑卒中患者Lp-PLA2活性明显升高,而且与神经功能缺损相关,提示Lp-PLA2不仅可能成为独立的缺血性脑卒中风险预测因子,还可以初步评估预后。Lp-PLA2抑制剂研制及基因治疗,为延缓动脉粥样硬化进展、稳定粥样斑块提供了可能。     

磷脂酶相关脂蛋白A2在冠心病患者服用他汀类药物时的应用

  目的  探讨磷脂酶相关脂蛋白A2（Lp-PLA2）作为冠心病患者服用他汀类药物疗效监测指标的适用性。  方法  采用回顾性分析方法，用队列设计研究，选取到云南新昆华医院就诊的冠心病患者58例，分为2组:服用他汀类药物的29例冠心病患者为观察组；未服用他汀类药物的29例冠心病患者为对照组。观察组和对照组，性别、青年和中老年、有无糖尿病及有无吸烟等，差异无统计学意义（P > 0.05）；对2组患者的Lp-PLA2进行比较和分析，并评估相关因素对Lp-PLA2的影响。  结果  观察组的总体Lp-PLA2 [139.6（94.0，181.1）ng/mL]低于对照组[278.6（207.0，358.3）ng/mL]，差异有统计学意义（P < 0.001）。  结论  Lp-PLA2可作为冠心病患者服用他汀类药物疗效监测的有效指标。     

重组人血小板型PLA2体外抗菌活性研究

目的观察重组人血小板型磷脂酶A2（PLA2）的体外抗菌活性。方法将不同浓度的重组PLA2与9种细菌在37％共同孵育2h,然后倾注琼脂板,次日记录每一琼脂板上的菌落生成数（CFU）,计算出PLA2杀菌率和PLA2的最低杀菌浓度（MBC）。结果重组人血小板型PLA2对金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、炭疽杆菌、表皮葡萄球菌、粪肠球菌等革兰氏阳性（G^＋）菌有较强杀菌作用,作用2h后PLA2的MBC范围为0．015～0．240μg／ml。对大肠杆菌、伤寒沙门氏菌、铜绿假单胞菌、变形杆菌等革兰氏阴性（G^-）菌则需要较高浓度的血小板型PLA2,作用2h后的MBC为30～90μg／ml。结论血小板型PLA2对G^＋菌有较强的杀菌作用,对G^＋菌的杀菌作用较弱。     

磷脂酶A2抑制剂对肝脏缺血再灌注的保护作用

为研究一氧化氮/内皮素（NO/ET）失衡与肝缺血再灌注（I/R）损伤的关系以及磷脂酶A2抑制剂消炎痛(INDO)对NO/ET的调节作用,采用肝I/R模型,比较I/R组和INDO组NO/ET的变化情况及其与肝I/R损伤的关系。再灌注急性期血NO代谢产物（NO2－/NO3－）降低、ET升高致NO/ET比值降低,血TNF-α、肝丙二醛（MDA）及酶的漏出增加,肝ATP含量降低,肝损伤加重;INDO可阻止再灌注后NO2－/NO3－下降、改善NO/ET平衡、减轻肝损伤。认为肝I/R损伤与NO/ET失衡有关,INDO对肝I/R急性期的保护作用与其对NO/ET的调节作用有关。     

脂蛋白相关磷脂酶A_2与动脉粥样硬化性脑梗死关系的研究进展

动脉粥样硬化是一种慢性炎症过程,炎性标志物参与了动脉粥样硬化性脑梗死的发生与发展。脂蛋白相关磷脂酶A2(LP-PLA2)是由炎性细胞分泌的一种炎性标志物,可用于动脉粥样硬化性脑梗死的危险分层,其与初次动脉粥样硬化性脑梗死的再次复发存在一定的相关性。LP-PLA2有可能作为脑梗死复发的风险预测标志物,降低其水平有可能作为一种非降脂治疗策略预防脑梗死的复发。     

JNK在豚鼠丁胺卡那霉素中毒后耳蜗毛细胞的激活表达

目的 :观察JNK在丁胺卡那霉素中毒后豚鼠毛细胞的激活表达。方法 :健康豚鼠随机分为实验组和对照组各 6只 ,分别行 30 0mg·kg-1·d-1丁胺卡那霉素和生理盐水肌注。 8d后处死 ,处死前检测其畸变产物耳声发射(DPOAE)幅值变化。左耳铺片 ,右耳冰冻切片。用免疫组织化学方法检测JNK在毛细胞中的激活表达情况。结果 :对照组DPOAE幅值无明显改变 ,冰冻切片中Cortis器无JNK激活表达 ,耳蜗铺片内、外毛细胞正常。实验组DPOAE幅值明显下降 ,与对照组对比有显著性差异 (P <0 .0 1) ,冰冻切片中Cortis器中外毛细胞P JNK表达阳性 ,而内毛细胞、支持细胞无表达。耳蜗铺片显示外毛细胞大部分受损。结论 :JNK激活能够在丁胺卡那中毒后豚鼠外毛细胞中表达 ,在耳蜗损害机制中发挥重要作用     

蛇毒Ⅱ类磷脂酶A2功能分化的分析研究

目的：研究蛇毒Ⅱ类磷脂酶A2(PLA2)中D49 PLA2和K49 PLA2的功能分化及其功能分化决定位点的鉴定。方法：运用序列比较分析，进化树构建和DIVERGE v1．04软件计算研究D49 PLA2和K49 PLA2的功能分化情况及其分化位点。结果：序列比较分析，进化树构建和DIVERGE v1．04软件计算结果表明蛇毒Ⅱ类PLA2中D49 PLA2和K49 PLA2的确发生了功能分化，对于K49 PLA2来说，1S，7K，11Q，E12，R34，T56，N88，L92，E108，K116，K128可能为功能分化决定位点。对于D49 PLA2，L2，G33，G35，F46和Y118可能为功能分化决定位点。结论：我们首次通过序列比较分析，进化树构建和DIVERGE v1．04软件计算鉴定出蛇毒Ⅱ类PLA2中D49 PLA2和K49 PLA2可能的功能分化位点，为今后通过基因重组和定点突变方法研究蛇毒Ⅱ类PLA2结构功能关系提供了线索。     

配体活化的过氧化物酶体增殖物激活受体γ诱导结肠癌细胞凋亡

目的:探讨配体活化的过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)抑制结肠癌细胞生长,及诱导细胞凋亡的作用。方法:逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫杂交(Western-blot)法测定PPARγ在SW480和LS174T结肠癌细胞中的表达。MTT法检测PPARγ激动剂15脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)和吡格列酮(Pioglita-zone,PGZ)对结肠癌细胞生长的抑制作用。流式细胞术检测细胞凋亡率,电镜观察凋亡细胞形态。免疫细胞化学法检测凋亡相关分子Fas、bcl-XL蛋白表达的变化。结果:PPARγ在SW480和LS174T结肠癌细胞株中均有表达,15d-PGJ2和PGZ对两种细胞的生长均有抑制作用,并呈剂量依赖效应。15d-PGJ2和PGZ显著诱导结肠癌细胞凋亡率增加(P<0.05或P<0.01),电镜显示凋亡细胞特有的形态学改变。免疫细胞化学结果显示,PPARγ激动剂诱导Fas蛋白表达明显增多(P<0.01),bcl-XL蛋白表达显著降低(P<0.01),该改变与凋亡程度呈正相关。结论:PPARγ经配体活化后,通过诱导凋亡抑制结肠癌细胞增殖,该作用可能与促凋亡基因Fas抗原表达上调以及凋亡抑制基因bcl-XL表达下调相关。     

人血浆脂蛋白磷脂酶A2 与缺血性脑卒中的研究进展

动脉粥样硬化（atherosclerosis,AS）形成是缺血性脑卒中的病理学基础。大量的研究认为,人血浆脂蛋白磷脂酶A2（plasma lipoprotein-associated phospholipase A2,Lp-PLA2）作为一种新型炎症因子,具有促进动脉粥样硬化形成的作用,是判断心脑血管疾病发生的的独立风险因素。该文将人血浆脂蛋白磷脂酶与缺血性脑卒中相关研究进展综述如下。