人体胃组织褪黑素受体鉴定及生物学特性

为明确人体胃组织是否存在褪黑素受体 (MR) ,应用放射配体结合法检测人体胃组织MR特异结合量。结果发现12 5I标记褪黑素 (12 5I -Mel)最大结合容量 (Bmax) 0 .48± 0 .11fmol/ 蛋白 ;平衡解离常数 (Kd)为 5 1±17pmol/L。动力学分析表明该特异结合为可逆性结合。特异性分析表明对Mel及其激动剂具高度特异性。亚细胞分布 ,以线粒体及细胞核含量最高。GTPrS试验 :MR的Bmax及Kd 值均有改变。结论 :人体胃组织存在MR ,其信号转导通路可能为G蛋白介导的通路     

褪黑素及其受体在生理及病理情况下的变化及意义

目的 :观察褪黑素及其受体在生理及病理情况下的变化及意义。方法 :应用放射配体结合法、免疫组化、原位杂交、RT -PCR、Northernblot以及ELISA等方法检测不同生理及病理情况下褪黑素及其受体的水平。结果及讨论 :1 在生理状态下 ,通过动物实验 ,即观察SD大鼠游泳前后褪黑素及其受体水平的变化 ,发现在应激状态下褪黑素升高的同时而褪黑素受体水平降低 ;在病理性应激研究发现溃疡性结肠炎大鼠褪黑素升高 ,而褪黑素受体降低 ;在缺血性卒中大鼠实验中同样发现褪黑素升高而褪黑素受体降低 ;而预先给予褪黑素进行保护性研究证实褪黑素可有…     

Mel—la,Mel—lb褪黑素受体在大鼠海马分布的原位杂交研究

Mel-la,Mel-1b为分别从人大脑和视网膜克隆的两种褪黑素膜受体。随着褪黑素的各种重要生理作用的不断发现,对其受体的研究也日益广泛和深入,本文采用原位杂交技术研究了Mel-1a,Mel-1b两种褪黑素膜受体mRNA在海马中的表达和分布,结果表明此两种受体mRNA在成年大鼠海马各区神经元中均有表达。由于褪黑素是通过细胞膜上与G蛋白耦联的Mel-1a,Mel-1b受体而发挥作用的,而海马又是与老化密切相关的脑区,提示褪黑素对海马的老化有调节作用。     

鸟类及鼠类的胸腺、腔上囊及脾脏褪黑素受体的鉴定及意义

应用放射配体结合法检测大鼠、小鼠、仓鼠、鸡、鸭、鸽子及鹌鹑的胸腺、腔上囊及脾脏的[~(125)I]褪黑素(M)特异结合位点。结果显示鸟类及鼠类免疫器官均存在[~(125)I]M特异结合位点,并具低结合容量、高亲和力特点;动力学研究表明具可饱和性及可逆性,符合受体的结合及解离过程;特异性研究显示对M及激动剂有高度特异性,符合特异结合位点的全部条件,亚细胞分布的研究表明以细胞核含量最高,线粒体次之,且该结合位点具年龄依赖性降低。结果证实免疫器官存在根黑素受体(MR),免疫组织是M作用的靶器官,M对免疫系统的调节作用是通过免疫组织上MR直接作用的结果。     

褪黑素受体亚型Mel 1a和Mel 1b在大鼠中枢神经系统的分布差异--原位杂交研究

目的 研究Mel 1a、Mel 1b褪黑素膜受体在大鼠中枢神经系统的表达及分布差异。方法 原位杂交组织化学。结果 (1)Mel 1a mRNA阳性细胞主要分布于海马、大脑皮层、视上核、室旁核、视交叉上核、橄榄核、小脑皮层、小脑顶核、脊髓前角、面神经核、巨细胞网状核、纹状皮质、三叉神经核等。(2)Mel 1b mRNA阳性细胞主要分布于小脑皮层和顶核、球状核、栓状核、海马、大脑皮层、脊髓前角、视上核和交叉上核。结论 Mel 1a mRNA在中枢分布广泛、含量丰富，而Mel 1b mRNA在中枢分布较局限。在海马和大脑皮层，这两种受体均有丰富表达。     

凝集素受体在正常成人和胚胎胃组织的分布

凝集素(Lectin)是一类植物蛋白,有与糖连接物上特定的糖基受体专一结合的特性。与凝集素结合的糖基受体称为凝集素受体。目前凝集素已被广泛应用于组织化学以作为研究细胞膜和细胞内外各种     

成人下颌下腺内瘦素和瘦素受体的表达及意义

目的 观察成人下颌下腺内瘦素和瘦素受体的表达和分布。方法 HE染色法和免疫组织化学SABC法。结果 成人下颌下腺内闰管、纹状管和部分小叶间导管上皮细胞呈瘦素及瘦素受体免疫阳性反应，免疫反应产物分布于导管上皮细胞胞质内，细胞核呈阴性反应。结论 成人下颌下腺内有瘦素和瘦素受体表达，可能参与调节胃肠功能及下颌下腺自身的分泌活动。     

上海地区汉族人群杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多样性及单倍型组合研究

目的 分析上海地区汉族人群杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer Ig-like receptors，KIR)基因多态性及单倍型，为进一步研究不同人群KIRs与某些疾病的相关性提供线索。方法 采用序列特异性引物PCR法对87名无关汉族健康志愿者进行KIR基因低分辨率检测和单倍型分析。结果 (1)共检出Xv、KIRlD在内的18个KIRs基因。3DL3、2DL4、3DL2和3DLl存在于所有个体；较常见为2DL3、Z、2DLl、X；其次为2DS4、1D、2DL5、2DSl、3DSl、2DS5；2DS2、2DL2、2DS3、Xv频率较低。(2)共检出13种单倍型，最常见的是单倍型2。(3)共检出18种基因型．以AJ(2．2)、AF(1．2)型最常见，其次为AH(5，2)、AI(1，5)和AG(1，1)。另外有5种基因型FZl(2，9或6，16)、FZ2(1，16或2，15)、FZ3(6，17)、FZ4(4，13)和FZ5(2，6)，目前在白人中尚未发现。结论 上海地区汉族人群有其独特的KIRs基因频率、单倍型频率和基因型频率分布。     

人早孕蜕膜组织及蜕膜基质细胞趋化因子受体及配体的转录特征

妊娠后，蜕膜化的子宫内膜（蜕膜，decidua）和发育的滋养细胞共同构成了母．胎界面。同种异体移植物的胎儿，能够在母体内存活直至足月分娩，这其中涉及母．胎界面极为复杂的免疫调节机制。蜕膜主要由蜕膜基质细胞（decidual stromal cell，DSC）（75％）和淋巴细胞构成，能分泌多种细胞因子，具有广泛的生物学功能，是母．胎界面来自母体的重要成分。     

大麻素Ⅱ型受体(CB2)在人皮肤及皮肤恶性肿瘤的组织分布

目的:研究大麻CB2受体在人皮肤及皮肤恶性肿瘤的组织分布.方法:用兔抗人CB2受体抗体做免疫组化,检测人类皮肤及皮肤恶性肿瘤组织CB2受体表达分布情况.结果:CB2受体在人类皮肤及皮肤恶性肿瘤均有表达分布,且皮肤恶性肿瘤的CB2受体过度表达.结论:大麻素受体CB2的表达与皮肤恶性黑素瘤、基底细胞癌、鳞状细胞癌关系密切.     

促甲状腺素受体在BALB/c小鼠主要组织和器官的分布及其意义

目的:研究正常BALB/c小鼠体内各主要组织、器官的促甲状腺素受体(thyrotrophin receptor,TSHR) mRNA的分布,为Graves病(GD)或／和甲状腺相关眼病(TAO)动物模型的制作提供病理学依据。方法:采用实时荧光定量PCR技术检测BALB/c小鼠甲状腺及腺外部分组织、器官中TSHR mRNA表达水平。结果:以甲状腺组织TSHR mRNA表达水平为标准1,呈相对高表达组织依次为肾上腺、胸腺、睾丸、卵巢及眼外肌,呈相对低表达的组织依次为肾脏、脑组织、腹壁脂肪、下颌下腺、肺脏、腹壁皮肤、眼眶脂肪、肝脏直至脾脏,胰腺、心脏及腹直肌中未见TSHR mRNA表达。结论:BALB/c小鼠体内,TSHR除了在甲状腺中表达外,还广泛存在于甲状腺外组织,且全身各处的TSHR作用机制可能不同。     

血管内皮生长因子C及其受体3在非小细胞肺癌组织中的表达及意义

目的　探讨血管内皮生长因子C(VEGF C)和受体 (VEGFR) 3在人非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其与微血管、微淋巴管形成、淋巴转移、预后之间的关系。方法　对 76例人NSCLC及相应癌旁组织行VEGF C、VEGFR 3及CD34免疫组织化学染色链霉素抗生物素蛋白 过氧化物酶 (SP)法检测 ,进行淋巴管密度计数、微血管密度 (MVD)计数 ,并结合临床和病理资料进行分析。结果　NSCLC中 ,VEGF C的表达与肺癌分化程度负相关 (P =0 0 0 9)。VEGF C和VEGFR 3的表达水平与淋巴结转移呈正相关 (分别P =0 0 0 8,P =0 0 13) ,与淋巴浸润呈正相关 (分别P =0 0 2 7,P =0 0 2 0 )。VEGF C的表达与VEGFR 3在肺癌细胞中的表达呈正相关 (P =0 0 0 9)。VEGF C与淋巴管密度 (P =0 0 0 6 )、MVD(P =0 0 4 6 )呈正相关。淋巴管密度与淋巴结转移 (P =0 0 10 )、淋巴浸润 (P =0 0 19)、TNM分期 (P =0 0 15 )呈正相关 ,MVD与血行转移 (P <0 0 0 1)、TNM分期 (P <0 0 0 1)呈正相关。VEGF C阳性表达与生存时间、5年生存率呈负相关 (P <0 0 0 1)。结论　NSCLC中 ,VEGF C通过自分泌方式作用于受体VEGFR 3,促进肺癌组织生长 ,抑制分化。VEGF C促使肺癌内淋巴管形成 ,促进肺癌淋巴结转移。VEGF C和VEGFR 3表达增高、淋巴管密度增加     

原发性肝癌和癌旁组织中NK细胞受体表达及意义

目的:通过研究原发性肝癌和癌旁组织中NK细胞表面受体活化性及抑制性受体的表达,分析探讨这两种受体含量变化在原发性肝癌发生发展中的关系及其临床价值。方法:通过流式细胞术及免疫组织化学方法检测52例原发性肝癌组织及其癌旁组织中NK细胞数及其活化性、抑制性受体的表达,并结合临床相关因素进行统计学分析。结果:原发性肝癌的NK细胞数量明显低于癌旁对照组(P<0.01),原发性肝癌组织活化性受体NKG2D、NKP44明显低于癌旁组织(P<0.05),而抑制性受体CD158b、CD159a明显高于癌旁组织(P<0.05)。NKG2D、NKP30、NKP44的表达与肝癌临床分期负相关,即在早中期的患者含量较高,越晚期患者肝癌组织中NKG2D、NKP30、NKP44含量越低(P<0.05),NK细胞中抑制性受体CD158b、CD159a的含量在越晚期患者肝癌组织中含量越高(P<0.05)且与AFP高低有关及HBsAg的感染有联系。而NK受体的表达在是否有远处转移、肿瘤分化程度之间以及不同的病灶大小之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:原发性肝癌发病可能与NK细胞减低及NK细胞活化性受体表达降低、抑制性受体表达升高有关。     

二噁英染毒模型小鼠相关受体及代谢酶的分布

目的 探讨引起小鼠早期妊娠毒性敏感与相关受体、代谢酶水平的关系,了解子宫组织的敏感性是否与二噁英(TCDD)代谢活化而导致局部毒性蓄积有关.方法 收集TCDD妊娠早期毒性模型小鼠的子宫、肝脏和肾脏组织,用免疫组织化学法对芳香碳氢化合物受体(AhR),受体核转位蛋白(ARNT)和细胞色素氧化酶(Cyp1a2)在组织细胞中分布进行检测.结果 正常妊娠小鼠的子宫、肝脏和肾脏组织细胞质有AhR、Cyp1a2弱阳性信号,细胞核内ARNT有强阳性信号.用不同浓度TCDD处理小鼠,各组织细胞质内的AhR阳性信号随浓度的提高而增加.50 ng/L剂量TCDD暴露使肝脏(18.038±3.0916,P＜0.01),子宫(8.8140±1.4574,P＜0.01)的AhR阳性面积比提高,以及吸光度(A)值显著升高(0.1143±0.0066,0.2399±0.0054,P＜0.01);而肾脏中2种指标均未见显著性差异.相同处理组Cyp1a2变化则主要表现在吸光度的变化,肝脏(0.2047±0.0150,0.31112±0.0107,P＜0.01),子宫(0.1892±0.0232,0.3152±0.0432,P＜0.05)和肾脏(0.2545±0.0202,0.3334±0.0168,P＜0.05)A值均显著升高;组织细胞核内ARNT阳性吸光度在肝脏(0.7496±0.0469,0.2458±0.006,P＜0.01)和子宫(0.4766±0.0359,0.2139±0.0253,P＜0.01)显著下降,在肾脏则表现为阳性信号从细胞核进入细胞质.100 ng/L剂量TCDD暴露则引起所有组织AhR和Cyp1a2阳性显著增强;肝脏和子宫ARNT信号消失,肾脏中ARNT信号从核内转入细胞质.结论 肝脏、子宫和肾脏AhR和CYP1A2酶可受TCDD类物质诱导,细胞信号面积随TCDD暴露量的增加而增大;肝脏和子宫细胞核内的ARNT随TCDD暴露量的增加,细胞信号减弱至消失,但肾脏ARNT进入胞质.说明子宫与肝脏具有相同的TCDD诱导特征,具有活化内外源性有毒化合物的功能,这应该是引起小鼠早期生殖毒性的原因之一.     

细胞外钙受体在妊娠期高血压疾病胎盘组织中的表达及意义

目的 探讨妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中细胞外钙受体(CASR)mRNA及蛋白表达水平变化及其意义.方法 采用免疫组化方法和免疫荧光及RT-PCR技术分别检测妊娠期高血压疾病患者65例(妊娠期高血压组22例,子痈前期轻度组24例,重度组19例)及健康足月孕妇30例(对照组)胎盘组织中CASR的定位、mRNA及蛋白表达水平.结果 (1)CASR主要位于胎盘细胞滋养细胞、绒毛滋养细胞及血管内皮细胞上.(2)妊娠期高血压组患者胎盘组织中CASR的mRNA表达水平与对照组比较,差异有统计学意义(g=7.07,P=0.0004).子痫前期轻度组和子痫前期重度组,两组比较,差异也有统计学意义(q=20.96,P＜0.0001).(3)CASR的蛋白在妊娠期高血压组患者胎盘组织中表达水平为59.0532±8.039,对照组为54.8585±4.3035,两组比较,差异无显著性(q=0.08,P=0.7759).而子痫前期轻度组、子痫前期重度组两组比较,差异有统计学意义(q=16.18,P＜0.0001).结论 妊娠期高血压疾病患者胎盘组织中CASR的mRNA表达激活及CASR的蛋白异常表达,导致妊娠期高血压疾病的发病和胎盘病理改变的发生发展.     

重度子痫前期患者胎盘组织趋化因子及其受体的表达和意义

妊娠免疫耐受是正常妊娠时母体形成的一种特殊类型的外周免疫耐受,保护作为半同种移植物的胎儿不被母体免疫系统排斥而成功妊娠,这有赖于免疫活性细胞的分化及功能调整。趋化因子(Chemokine,CK)及其受体不但直接参与了淋巴细胞的增殖和活化,还促进母胎界面T淋巴细胞及NK细胞的游走和活化,可影响一系列的细胞活动,包括粘附、血管生成和扩散。因此CK受体与配体结     

T细胞受体Vβ基因在自身免疫性甲状腺病病变组织中的表达及意义

目的研究国人Graves病、桥本甲状腺炎甲状腺内浸润T淋巴细胞的T细胞受体(TCR)Vβ基因家族的利用,发现优势利用基因,为阐明自身免疫性甲状腺病(AITD)的T细胞克隆的分布模式及防治提供依据.方法穿刺或手术取得12例Graves病、15例桥本甲状腺炎病人的甲状腺组织,提取RNA.抽取5例Graves病、5例桥本甲状腺炎和7例正常人之外周静脉血,分离外周血淋巴细胞(PBL),提取RNA.以24个Vβ基因家族特异的寡核苷酸为上游引物,以一个Cβ特异的寡核苷酸为下游引物,进行逆转录-聚合酶链反应,比较各个Vβ基因家族的表达.结果Graves病及桥本甲状腺炎患者甲状腺内TCRVβ基因家族的平均表达阳性数分别为(5.3±1.2)个,(13.4±3.0)个;而且Vβ3、Vβ5和Vβ8的表达在Graves病更常见.以上两组病人及正常对照PBL之TCRVβ基因家族的平均表达分别为(23.0±1.0)个,(22.2±1.3)个和(22.4±1.7)个.结论Graves病甲状腺内淋巴细胞的TCRVβ基因显示明显的限制性利用,某些Vβ家族的使用率更高,提示寡克隆扩增的甲状腺抗原特异性T细胞可能与Graves病的发病有关,这可能有重要的治疗意义.相反,桥本甲状腺炎病变内TCRVβ利用的限制性较差或无限制性,可能与随疾病进展,非特异性免疫机制的介入有关.     

人PIWIL3特异性抗体的制备和PIWIL3蛋白在肿瘤组织中的分布

目的:制备人Argonaute家族中PIWIL3蛋白的特异性抗体,并检测其在人多种肿瘤组织中的表达和分布.方法:根据序列同源性和多肽免疫性,利用内部多肽选择数据库选择最佳的多肽免疫原合成多肽,再与KLH结合用于免疫;免疫所得的抗血清经多肽包被的凝胶进行亲和层析纯化,酶联免疫吸附分析技术(ELISA)检测纯化后抗体与多肽的结合能力,Western blot检测抗体对相应蛋白的结合能力.人肿瘤组织芯片检测该蛋白在多种肿瘤组织的表达和定位.结果:成功制备特异性人PIWIL3蛋白多克隆抗体.ELISA和Westernblot检测均表明该抗体具有很好的结合能力.肿瘤组织芯片检测到PIWIL3蛋白在人星形细胞神经胶质瘤和脑脊膜瘤胞质中表达.结论:应用内部多肽选择数据库可以得到最佳的多肽免疫原,以区分亚家族中其他有高度序列同源性的蛋白,成功制备出纯度和结合能力均较好的特异性人PIWIL3抗体,对研究人类特定肿瘤的发病具有潜在的应用价值.