西咪替丁抗疟作用的研究Ⅱ.西咪替丁对鼠疟的影响

西咪替丁（ＣＭＤ）４ｄ抑制法抗鼠疟作用结果显示：在剂量为５０ｍｇ／ｋｇ·ｄ、１００ｍｇ／ｋｇ·ｄ和２００ｍｇ／ｋｇ·ｄ时，该药对伯氏疟原虫氯喹敏感株、抗性株及约氏疟原虫氯喹敏感株感染小鼠的红内期疟原虫，均有明显的抑制作用，３组平均抑制率分别为６４．９５％、７７．９７％和５８．１６％。ＣＭＤ对伯氏疟原虫氯喹抗性株的抑制作用显著高于伯氏疟原虫氯喹敏感株（Ｐ＜０．０５）和约氏疟原虫氯喹敏感株（Ｐ＜０．０１）。     

西咪替丁抗疟作用的研究 Ⅲ.西咪替丁对感染疟原虫小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响

应用ＷＨＯ４ｄ抑制原虫法及［３Ｈ］－ＴｄＲ掺入淋巴细胞转化试验，观察西咪替丁（ＣＭＤ）对感染疟原虫小鼠脾淋巴细胞增殖反应的影响。结果显示：ＣＭＤ对感染伯氏疟原虫氯喹敏感株、抗性株及约氏疟原虫氯喹敏感株小鼠的原虫率较其感染未治组明显降低（Ｐ＜０．０１），对其脾淋巴细胞转化试验ＳＩ均明显增高。ＣＭＤ体内及体外作用，单独及与ＣｏｎＡ联合作用，各实验组ＳＩ均显著高于对照组。ＣＭＤ对感染疟原虫小鼠脾淋巴细胞具有刺激增殖作用。     

西咪替丁抗疟作用的研究：Ⅱ.西咪替丁对鼠疟的影响

西咪替丁４ｄ抑制法抗鼠疟作用结果显示：在剂量为５０ｍｇ／ｋｇ．ｄ，１００ｍｇ／ｋｇ．ｄ和２００ｍｇ／ｋｇ．ｄ时，该药对伯氏疟原虫氯喹敏感株，抗性株及约氏疟原虫氯喹敏感株感染小鼠的红内期疟原虫，均有明显的抑制作用，３组平均抑制率分别为６４．９５％，７７．９７％和５８．１６％。ＣＭＤ对伯氏疟原虫氯喹抗性株的抑制作用显著高于伯氏疟原虫氯喹敏感析和约氏疟原虫氯喹敏感株。     

伯氏疟原虫氯喹结合蛋白的分离与定量

目的： 分离伯氏疟原虫敏感株（ Ｃ Ｓ） 与抗氯喹株的氯喹（ｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｅ Ｃ Ｑ） 结合蛋白。方法： 给两株感染鼠ｉｇ Ｃ Ｑ４００ ｍｇ／ｋｇ , ３ ｈ 后, 收集伯氏疟原虫用（ Ｕｌｔｒｏｇｅｌ Ｒ） Ａｃ Ａ３４ 凝胶柱分离蛋白, 按 Ｂｅｒｇｑｖｉｓｔ 法抽提与蛋白结合的 Ｃ Ｑ, 然后用 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ （ 外标法） 定量。结果： Ｃ Ｓ 有５８ 个蛋白峰, 均与 Ｃ Ｑ 结合, 其中以 Ｎｏ６４ ～８６部分（ 峰９） 结合的 Ｃ Ｑ 量最多, 占总结合量的１６４ ％ 。抗氯喹伯氏疟原虫（ Ｃ Ｒ） 有４０ 个蛋白峰, 除８ 个峰外,均与 Ｃ Ｑ 结合, 结合量最多的蛋白部分与 Ｃ Ｓ相同, 在 Ｎｏ６０ ～８３ 部分（ 峰６ 及峰７） , 但是它与 Ｃ Ｑ 的结合能力（ Ｃ Ｑｎｍｏｌ／ ｍｇ 蛋白） 显著高于 Ｃ Ｓ。结论： 分离与测定了 Ｃ Ｓ和 Ｃ Ｒ 两株疟原虫各个蛋白峰的分布与定量, 及其与 Ｃ Ｑ 结合的能力。在同一株疟原虫中, 各蛋白与 Ｃ Ｑ 的结合能力存有差异, 在 Ｃ Ｓ与 Ｃ Ｒ 间此差异更大。     

伯氏疟原虫氯喹结合蛋白的分离与定量

目的： 分离伯氏疟原虫敏感株（ Ｃ Ｓ） 与抗氯喹株的氯喹（ｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｅ Ｃ Ｑ） 结合蛋白。方法： 给两株感染鼠ｉｇ Ｃ Ｑ４００ ｍｇ／ｋｇ , ３ ｈ 后, 收集伯氏疟原虫用（ Ｕｌｔｒｏｇｅｌ Ｒ） Ａｃ Ａ３４ 凝胶柱分离蛋白, 按 Ｂｅｒｇｑｖｉｓｔ 法抽提与蛋白结合的 Ｃ Ｑ, 然后用 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ （ 外标法） 定量。结果： Ｃ Ｓ 有５８ 个蛋白峰, 均与 Ｃ Ｑ 结合, 其中以 Ｎｏ６４ ～８６部分（ 峰９） 结合的 Ｃ Ｑ 量最多, 占总结合量的１６４ ％ 。抗氯喹伯氏疟原虫（ Ｃ Ｒ） 有４０ 个蛋白峰, 除８ 个峰外,均与 Ｃ Ｑ 结合, 结合量最多的蛋白部分与 Ｃ Ｓ相同, 在 Ｎｏ６０ ～８３ 部分（ 峰６ 及峰７） , 但是它与 Ｃ Ｑ 的结合能力（ Ｃ Ｑｎｍｏｌ／ ｍｇ 蛋白） 显著高于 Ｃ Ｓ。结论： 分离与测定了 Ｃ Ｓ和 Ｃ Ｒ 两株疟原虫各个蛋白峰的分布与定量, 及其与 Ｃ Ｑ 结合的能力。在同一株疟原虫中, 各蛋白与 Ｃ Ｑ 的结合能力存有差异, 在 Ｃ Ｓ与 Ｃ Ｒ 间此差异更大。     

环孢霉素A对预防鼠感染疟原虫的实验研究

在小鼠感染伯氏疟原虫的当天，同时经尾静脉注入环孢霉素Ａ（１ｍｇ／ｋｇ·ｄ×２，５ｍｇ／ｋｇ·ｄ×２），观察该药对小鼠感染伯氏疟原虫的预防作用。结果表明：环孢霉素Ａ（５ｍｇ／ｋｇ·ｄ×２）对鼠感染疟原虫有明显的预防效果。提示经尾静脉途径给药环孢霉素Ａ明显比皮下途径给药更具优点。     

肿瘤坏死因子与疟性贫血

本文以化学发光法（ＣＬ）、诱化学发光法（ＩＣＬ）、红细胞变形性（ＥＤ）检测等方法研究了感染伯氏疟原虫ＡＮＫＡ株的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠在注射重组肿瘤坏死因子（ｒＴＮＦ）以后发生严重疟性贫血时，其血浆中活性氧（ＲＯＳ）、相关自由基与ＥＤ及ＥＤ与疟性贫血间的关系。结果发现在严重疟性贫血时动物血浆中ＲＯＳ及相关自由基水平明显增高，ＥＤ明显降低。使用抗氧化剂可以明显改善上述过程而使血红蛋白（Ｈｂ）指数回升。因此认为，疟原虫感染时宿主体内过量肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）的产生可使吞噬细胞释放大量ＲＯＳ及相关自由基，血浆中这类物质的大量聚集使红细胞变形能力受到破坏，这样，红细胞很易于被机体的红细胞清除系统所清除，这可能是疟性贫血发生和加重的又一主要途径。     

结核分支杆菌利福平耐药基因突变的研究

目的了解我国结核分支杆菌耐利福平（ＲＦＰ）分离株ｒｐｏＢ基因突变情况，建立快速检测结核分支杆菌耐药基因型的分子药敏试验方法。方法通过聚合酶链反应－单链构象多态性（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）和ＰＣＲ－直接测序法（ＰＣＲ－ＤＳ）分析５０株结核分支杆菌临床分离株的ｒｐｏＢ基因。结果３株结核分支杆菌药物敏感株和２株非ＲＦＰ耐药株中，仅１株ｒｐｏＢＳＳＣＰ图谱异常的药物敏感株出现５３１位密码子ＴＣＧ→ＴＴＧ突变。４５株ＲＦＰ耐药株中，１０株ＳＳＣＰ和ＤＳ分析均未见ｒｐｏＢ突变，３５株ＳＳＣＰ和ＤＳ分析异常，其中１４株为５３１位密码子ＴＣＧ→ＴＴＧ或ＴＧＧ或ＴＡＣ突变，１４株为５２６位ＣＡＣ→ＴＡＣ或ＧＡＣ或ＣＣＣ或ＣＴＣ或ＧＴＣ突变，２株为５１６位ＧＡＣ→ＧＴＣ或ＴＡＣ突变，２株为５１６位和５２６位及５１５位和５１６位密码子双点突变，３株ｒｐｏＢ序列与结核分支杆菌不同。结论大多数结核分支杆菌耐ＲＦＰ是由于其ｒｐｏＢ基因突变所致，采用ＰＣＲ－ＳＳＣＰ和ＰＣＲ－ＤＳ方法可快速测定结核分支杆菌ＲＦＰ耐药基因型     

恶性疟原虫云南株丝氨酸重复抗原部分基因的克隆和序列分析

用ＰＣＲ方法特异性扩增ＳＥＲＡ基因片段，并将该基因片段克隆于Ｍ１３噬菌体，用双脱氧链末端终止法进行测序，应用ＰＣＧＥＮＥ软件对该基因序列进行了分析，结果显示该基因片段长度为４５３ｂｐ，Ａ＋Ｔ／Ｇ＋Ｃ为２．６∶１，符合恶性疟原虫结构基因的特点。同源性分析显示该基因在不同虫株间高度保守，我国ＰＦＤ－３／ＹＮ虫株ＳＥＲＡ基因片段仅与Ｂ１、Ｂ２、Ｂ３（巴西）株及Ｓ１６（塞内加尔）株在第６６７位氨基酸有不同，与ＦＣＲ３（冈比亚）、ＦＣＢＲ（哥化比亚）、及Ｓ１４、Ｓ１５（塞内加尔）等其它虫株ＳＥＲＡ基因序列完全一致。抗原表位预测分析显示该多肽Ｎ端和Ｃ端可能有抗原表位存在。     

几种血液病骨髓幼稚前体细胞异位的组织学观察

采用塑料包埋改良的苏木素伊红加姬母萨氏染色及ＬＳＡＢ免疫组化技术对２８例骨髓增生异常综合征（ＭＤＳ）（ＲＡ１２例，ＲＡＥＢ１０例及ＲＡＥＢ－Ｔ６例）和７６例非ＭＤＳ（巨幼细胞性贫血，ＭＢＡ６例，ＡＩＨＡ１０例，ＰＮＨ１０例，ＭＦ１０例，ＰＶ１０例，ＩＴＰ１０例，ＰＲＣＡ１０例，ＣＡＡ１０例）患者骨髓活检中的ＡＬＩＰ现象作了研究，发现ＡＬＩＰ现象不是ＭＤＳ骨髓组织所特有的。除ＭＤＳ骨髓切片阳性（≥３     

Comparison of effects of pyronaridine, amodiaquine, mefloquine and qinghaosu on rodent malaria.

Blood schizontocidal effect of antimalarials were compared by 4-day suppressive test with an extended observation period of 31 days. On a drug-sensitive Plasmodium berghei ANKA strain, pyronaridine (PND) exhibited the best effect, followed by amodiaquine (ADQ), mefloquine (MFQ), and qinghaosu (QHS). On a moderately chloroquine-resistant P. berghei NS line, the order of effects was the same, PND greater than ADQ greater than MFQ greater than QHS. On a highly pyronaridine-resistant P. berghei RP line, ADQ, MFQ and QHS showed cross resistance with PND.     

咯萘啶,阿莫地喹,甲氟喹及青蒿素对伯氏疟原虫..

The asexual stages of P. berghei ANKA were completely eliminated as revealed in a "4-day suppressive test" with the daily dose of pyronaridine 12.5 mg base/kg or amodiaquine 25 mg base/kg. Mefloquine 25 mg base/kg and qinghaosu 100 mg/kg though exerted obvious suppressive effect, the cure rates were only 50% and 0%, respectively. In treating chloroquine-sensitive P. berghei ANKA strain pyronaridine exhibited the best therapeutic activity, which was followed by amodiaquine, mefloquine and quinghaosu. In treating moderately chloroquine-resistant P. berghei NS line the cure rate of pyronaridine 12.5 mg/kg.d x 4 was 70%, but none of the 10 infected mice from any group was cured by amodiaquine 100 mg/kg.d, mefloquine 100 mg/kg.d or qinghaosu 200 mg/kg.d. Though the latter 3 drugs showed prominent suppressive effects, parasitemia remained positive or recrudesced after dosing. We demonstrate that parasites resistant to chloroquine had cross resistance to amodiaquine, mefloquine and inghaosu at various degrees. Amodiaquine 100 mg/kg.d, mefloquine 100 mg/kg.d and qinghaosu 200 mg/kg.d exhibited no obvious suppressive activity on highly pyronaridine-resistant line of P. berghei, indicating the existence of cross resistance to pyronaridine.     

三氟乙酰伯氨喹对鼠疟红内期原虫作用

参照ＷＨＯ推荐的“４ｄ抑制性试验法”给药，并采用延长疗效的观察期和取血再转种的方法证明：三氟乙酰伯氨喹２０ｍｇ／ｋｇ·ｄ×４ｄ能完全清除血内的伯氏疟原虫ＡＮＫＡ株；对抗氯喹伯氏疟原虫ＮＳ系和抗咯萘啶伯氏疟原虫ＲＰ系亦显示有不同程度的抑制作用，但疗效明显较差，与用伯氨喹相似。提示，８－氨基喹啉类药物与氯喹、咯萘啶等红内期杀灭剂有一定的交叉抗性。     

抗氯喹伯氏疟原虫ANKA株过度表达的54 kDa蛋白免疫电镜定位

抗氯喹伯氏疟原虫ANKA株过度表达的54kDa蛋白是我们首次发现的一种蛋白,本文应用免疫电镜技术对其在伯氏疟原虫ANKA株体内的定位进行了研究。结果表明54kDa蛋白主要散在分布于疟原虫滋养体及裂殖体胞质中;疟原虫寄生的红细胞中也有少量分布;抗氯喹伯氏疟原虫体内54kDa蛋白的含量远高于氯喹敏感伯氏疟原虫。本文结果有助于理解疟原虫的抗氯喹机制。     

伯氏疟原虫氯喹敏感株和抗性株中的氯喹积聚和排出

目的探测进入抗氯喹疟原虫中的氯喹量较敏感株低的原因是受阻于感染的红细胞，还是疟原虫自身，以及抗氯喹疟原虫是否具有快速排出氯喹的特点。方法：给两株感染小鼠ｉｇ氯喹，用高压液相（外标法）检测感染红细胞和疟原虫中的氯喹量。结果：ｉｇ氯喹４．０６ ｍｇ／ｋｇ与４００ｍｇ／ｋｇ氯喹３ｈ后，敏感株感染红细胞和抗氯喹株感染红细胞中的氯喹量无明显差异，而抗氯喹疟原虫中的氯喹量，两个剂量组分别较敏感的低５４．０％与４２．１％（Ｐ＜０．００１）。比较ｉｇ氯喹３ｈ与７ｈ后疟原虫积聚的氯喹量，敏感株两者相同，抗性株７ｈ后不仅无明显减少，相反地上升（０．４５２±０．０７９ｎｍｏｌ／ｍｇ蛋白与０．５５９±０．１２４ｎｍｏｌ／ｍｇ）蛋白（Ｐ＜０．０２）。结论：进入抗氯喹疟原虫中的氯喹量低，其受阻部位是在疟原虫本身而不是在感染的红细胞，未发现抗氯喹疟原虫快速排出氯喹。     

Morphological effects of pyronaridine on malarial parasites

The ultrastructural changes caused by a new antimalarial drug, pyronaridine, were investigated using mice infected with erythrocytic forms of Plasmodium berghei and P. falciparum cultivated in vitro in human erythrocytes. The first changes observed in both parasites after exposure to pyronaridine occurred in the food vacuoles. This suggests that the target organelle of this drug may be the food vacuole of malarial parasites. In addition, rapid alterations were also noted within the pellicular complex of both plasmodia.     

恶性疟原虫对咯萘啶/磺胺多辛/乙胺嘧啶敏感性体外测定方法的研究

[目的 ]建立一种简便有效的体外微量测定方法 ,以监测恶性疟原虫对咯萘啶 /磺胺多辛 /乙胺嘧啶敏感性的变化。 [方法 ]设计制作咯萘啶 /磺胺多辛 /乙胺嘧啶 3种药物伍用测定板 ,采用WHO推荐的Rieckmann体外微量法 (WHO标准化法 )测定涂药板效果。测得的原始数据采用W H Wernsdorfer的专门软件进行分析 ,判定用体外微量法测定恶性疟原虫对上述 3种药物伍用测定板敏感性的可行性 ,并依据分数抑制浓度 (FIC)判定咯萘啶与磺胺多辛 /乙胺嘧啶之间是否有协同效应。 [结果 ]3药伍用测定板效果稳定 ,其ED5 0 分别为咯萘啶 0 11pmol/井、磺胺多辛 2 15 12pmol/井和乙胺嘧啶 2 6 9pmol/井。同时证明 ,咯萘啶与磺胺多辛 /乙胺嘧啶之间有协同效应。 [结论 ]恶性疟原虫对咯萘啶 /磺胺多辛 /乙胺嘧啶的敏感性可用体外微量法进行测定。     

实验观察伯氏疟原虫再感染对免疫记忆形成的影响

目的探讨疟疾再感染对免疫记忆形成的影响。方法用伯氏疟原虫感染DBA/2小鼠,感染后3 d进行根治性治疗,并于初次感染后90 d进行再感染。通过姬姆萨薄血膜染色法计数红细胞感染率,流式细胞术检测再感染前(0 d)和再感染后(1、3、5 d)不同时间点脾细胞中记忆性T细胞和记忆性B细胞百分率。结果再感染前小鼠脾细胞中记忆性T、B细胞百分率均略高于正常鼠;再感染后,小鼠仅出现短暂的低水平原虫血症,记忆性T、B细胞百分率分别于再感染后第1 d和第3 d较对照组显著升高(P<0.01),但再感染后第5出现一定程度的下降。结论疟疾再感染可促进免疫记忆的产生,但高水平的免疫记忆不能持久存在。     

小鼠疟原虫感染经氯喹治疗痊愈后再感染免疫特征分析

目的　探讨疟原虫感染小鼠在原虫血症高峰期经氯喹治愈后,再感染同/异种疟原虫的疾病进程和免疫保护特征。方法　用非致死型约氏疟原虫17XNL株（P. y 17XNL株）感染C57BL/6小鼠,感染率达高峰时（第9天）半数小鼠以氯喹治疗,其余小鼠自然痊愈。痊愈后小鼠于初次感染90 d后分别采用等量致死型约氏疟原虫17XL株（P. y 17XL株）或伯氏疟原虫ANKA株（P. b ANKA株）再次感染,采用吉姆萨薄血膜染色法观察原虫血症水平变化,并应用酶联免疫吸附试验和流式细胞术分别检测再感染前后小鼠血清中IgG抗体水平和脾细胞中记忆性T细胞亚群比例。结果　初次感染P. y 17XNL株后,自愈与氯喹治愈组小鼠血清IgG抗体水平分别为（5.047 ± 0.924）、（4.429 ± 0.624） pg/mL,差异无统计学意义（t = 0.437,P > 0.05）;但均显著高于无感染正常组小鼠的（1.624 ± 0.280） pg/mL（F = 22.522,P < 0.01）。自愈和氯喹治愈组小鼠再感染P. y 17XL株或P. b ANKA株并痊愈后,各组小鼠血清IgG抗体水平分别为（15.487 ± 1.173）、（14.644 ± 1.523）、（15.965 ± 1.150） pg/mL和（15.185 ± 1.333） pg/mL,差异无统计学意义（F = 0.542,P > 0.05）;但均高于初次感染组,差异有统计学意义（F = 67.383,P < 0.01）。感染P. y 17XNL株后自愈及氯喹治愈组小鼠再感染P. y 17XL株或P. b ANKA株并痊愈后,各组小鼠CD4+记忆性 T细胞比例分别为（34.023 ± 2.289）%、（35.608 ± 1.779）%、（34.208 ± 2.106）%和（32.820 ± 1.930）%, CD8+记忆性T细胞比例分别为（17.103 ± 1.627）%、（17.873 ± 1.425）%、（17.935 ± 2.092）%和（18.918 ± 2.823）%,组间差异均无统计学意义（F = 0.944、0.390,P均> 0.05）;但均高于初次感染后小鼠,且差异有统计学意义（CD4+记忆性T细胞,F = 50.532,P < 0.01;CD8+记忆性T细胞,F = 21.751,P < 0.01）。结论　小鼠疟疾经氯喹治疗痊愈不影响宿主在再感染时产生有效免疫保护力。初次感染后,小鼠对同种和异种疟原虫再感染均具有一定保护性且对同种疟原虫再感染的抵抗力强于异种疟原虫。     

An enzymatic differential assay for urinary diamines,spermidine, and spermine

Summary Subsequent to the hydrolysis of urinary conjugated amines by heating with hydrochloric acid, free amines were isolated by cation-exchange chromatography. SPD and SPM in an aliquot of amine extract were first oxidized by PAO from Penicillium chrysogenum, producing PUT and hydrogen peroxide. DIAs, which consist of the initially present DIAs plus PUT produced by PAO, were subsequently oxidized by PUO from Micrococcus rubens, producing hydrogen peroxide. In an another aliquot of the amine extract DIAs and SPD were oxidized by PUO, producing hydrogen peroxide. Quinone dye, derived from hydrogen peroxide generated in each end-point reaction, was measured spectrophotometrically at 555 nm, and the amounts of the respective amines in urine were calculated. Significantly elevated levels of DIA, SPD, SPM, and an elevated DIA to SPD ratio were found in urine from 46 cancer patients, as compared to 34 normal control subjects. An increase in DIA and the ratio of DIA to SPD was found at clinical tumor stage I of the alimentary tract. The levels of DIA remained fairly constant and the ratio of DIA to SPD was consistently decreased with advancing clinical tumor stages. In patients who had undergone curative resection, there were greater decreasing rates (80% of cases for DIA and 80% for SPD) than in patients who had undergone noncurative resection (45.5% for DIA and 36.4% for SPD).Abbreviations DIA(s) diamines (putrescine plus cadaverine) - PUT putrescine - CAD cadaverine - SPD spermidine - SPM spermine - PAO polyamine oxidase - PUO putrescine oxidase - MES 2-(N-morpholino) ethanesulfonic acid monohydrate - TOOS sodium N-ethyl-N-(2-hydroxy-3-sulfopropyl)-m-toluidine - 4-AA 4-aminoantipyrine - IFO Institute for Fermentation, Osaka, Japan - CEA carcinoembryonic antigen - AFP alpha-fetoprotein