4-1BBL基因转染对小鼠体内胃癌细胞生长的影响

目的观察共刺激分子4-1BBL基因导入小鼠胃癌MFC细胞后在小鼠体内诱导的抗肿瘤效应以及对小鼠免疫状况的影响。方法用脂质体法把pMKITneo/4-1BBL和pMKITneo质粒导入615小鼠胃癌细胞MFC内,再用MFC、MFC/pMKITneo和MFC/4-1BBL细胞分别接种615小鼠,观察其成瘤情况,并测定肿瘤细胞的凋亡率及外周血的CD4~+、CD8~+T细胞和NK细胞的含量。结果4-1BBL基因转染后的胃癌MFC细胞在615小鼠体内成瘤所需的时间长、瘤体的重量轻；且MFC/4-IBBL组的癌细胞凋亡率(22．45±4．11)%明显高于MFC组(18．47±3．34)%及MFC/pMKITneo组(17．87±4．04)%(P＜0．05)；MFC、MFC/pMKITneo组小鼠外周血CD8~+T、NK细胞数明显低于正常对照组和MFC/4-1BBL组(P＜0．05),且MFC、MFC/pMKITneo两组间差异无统计学意义(P＞0．05)。结论4-1BBL基因导入胃癌MFC细胞后能够提高荷瘤机体的免疫能力、延缓肿瘤的发生、抑制肿瘤的发展、促进肿瘤细胞的凋亡。     

携带4-1BBL基因的胃癌细胞总RNA转染树突状细胞疫苗的研究

目的 观察携带4-1BBL基因的胃癌细胞总RNA转染树突状细胞疫苗,在小鼠体内诱导的抗肿瘤效应以及对小鼠免疫力的影响.方法 用脂质体法把pMKITneo/4-1 BBL质粒导入小鼠胃癌细胞MFC内,再提取此细胞的总RNA并转染至树突状细胞内制备MFC/4-1BBL/DC疫苗;把MFC细胞注射于20只615小鼠皮下建立荷瘤小鼠胃癌模型,并随机分为对照组、DC组、MFC/DC组和MFC/4-1BBL/DC组,每组5只;在MFC细胞接种后第7、14天给予相应DC疫苗治疗,于肿瘤细胞接种后第21天,处死实验动物,测量瘤重、测定肿瘤细胞的凋亡率及外周血的CD4+、CD8+T细胞和NK细胞的含量.结果 MFC/4-1BBL/DC组小鼠平均瘤重(2.06±0.39)g显著低于对照组(3.82±0.57)g、DC组(3.63±0.51)g、MFC/DC组(2.67±0.32)g(P＜0.05);且MFC/4-1BBL/DC组肿瘤细胞凋亡率(28.58±2.84)%明显高于MFC/DC组(25.03±1.88)%、DC组(20.66±2.71)%及对照组(19.09±2.73)%(P＜0.05);MFC/4-1BBI/DC组小鼠外周血CID4+T、NK细胞数明显高于对照组和其他治疗组(P＜0.05).结论 携带4-1BBL基因的胃癌细胞总RNA转染树突状细胞疫苗能够提高荷瘤机体的免疫能力、抑制肿瘤细胞的生长、促进肿瘤细胞的凋亡.

Abstract：

Objective To observe the induced anti-tumor effects and immune state in vivo by the transfection of dendritic cell vaccine into the total RNA of gastric cancer cells carrying 4-1BBL gene.Methods The liposome-mediated pMKITneo/4-1BBL gene was inserted into the MFC gastric cancer cells,and the cell total RNA was extracted and transfected into dendritic cells to make the MFC/4-1BBL/DC vaccine.After MFC cells were injected into the 615 mouse to establish tumor-bearing mouse model,and those 20 mice were randomly divided into control group,DC group,MFC/DC group,MFC/4-1BBL/DC group.The dendritic cell vaccine was subcutaneously injected on the day 7 and 14 after inoculation of tumor cells,and on the day 21 animals were killed and tumor weight was measured,tumor cell apoptosis rate was assayed and the contents of CD4 +,CD8 + T cells and NK cells in peripheral blood were analyzed.Results The mean tumor weight in MFC/4-1BBL/DC group (2.06 ±0.39) g was significantly less than that in control group (3.82 ±0.57) g,DC group (3.63 ±0.51 ) g,MFC/DC group (2.67 ±0.32) g (P ＜0.05).Moreover the apoptosis rate in MFC/4-1BBL/DC group (28.58 ± 2.84 ) % was significantly higher than that in MFC/DC group (25.03 ± 1.88)%,DC group (20.66 ±2.71 )% and control group ( 19.09 ±2.73 )% (P ＜0.05).The percentage of CD4 + T,NK cells in MFC/4-1BBL/DC group was significantly higher than in other groups ( P＜0.05).Conclusion The transfection of dendritic cell vaccine into the total RNA of gastric cancer cells carrying 4-1BBL gene can increase immunity of the bearing tumor mice,inhabit tumor growth and promote tumor cell apoptosis.     

4-1BBL基因修饰前列腺癌细胞的体内抗肿瘤作用

目的 观察转染4-1BBL的小鼠前列腺癌细胞株RM-1体内抗肿瘤效应及对免疫功能的影响.方法 用脂质体法将重组质粒pcDNA3和pcDNA3-4-1BBL分别导入小鼠前列腺癌细胞RM-1中,经G418筛选,建立高表达的细胞株.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和间接免疫荧光法检测4-1BBL的表达.将转染前后的肿瘤细胞,分别接种于C57BL/6小鼠的左肋腹侧皮下观察其致瘤性.CCK-8检测其细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤活性.结果 成功建立高表达4-1BBL的RM-1/4-1BBL细胞株.25 d后,RM-1/4-1BBL组小鼠致瘤体积为(730.0±23.6)mm3较RM-1/pcDNA3组(1490.0±36.4)mm3和RM-1组(1510.0±26.8)mm3均小(P＜0.05).接种RM-1/4-1BBL细胞小鼠的CTL细胞杀伤活性为(35.4±1.6)%,较RM-1/pcDNA3组(12.8土2.0)%和RM-1组(13.7±3.6)%均增强(P＜0.05).结论 4-1BBL基因修饰的小鼠前列腺癌细胞能显著增强小鼠的免疫功能,抑制肿瘤的发展.     

肿瘤-睾丸抗原在胃癌组织中的表达

我们对MAGE 1、MAGE 3、BAGE、LAGE、NY ESO 1、SCP 1、SSX 2和SSX 4这 8种肿瘤 睾丸抗原 (CTA)在胃癌组织及其相应正常组织中的表达进行检测 ,旨在为特异性免疫治疗在胃癌中的应用提供依据。一、对象与方法1.组织标本 :42例胃癌组织标本取自上海瑞金医院普外科 2 0 0 3年 5月～2 0 0 3年 10月间手术治疗胃癌患者 ,同时取距离肿瘤边缘 5cm以上癌旁正常组织作为对照。标本经手术切除后立即放入液氮中 ,3 0min后保存于 -80℃直至RNA抽提。所有胃癌组织及相应正常组织均经术后病理证实。其中 ,男 2 8例 ,女 14例 ,低分化腺癌 2…     

胃癌组织中Notch1和DLL4蛋白的表达及其临床意义

目的 探讨Notch1及其配体DLL4在胃癌中的表达及其与各临床病理特征之间的关系.方法 采用免疫组化SP法检测45例胃癌及25例正常胃组织中Notch1和DLL4的表达情况,并分析它们与各临床病理参数的关系.结果 Notch1和DLL4蛋白在胃癌中表达的阳性率均明显高于正常胃黏膜组织,差异具有统计学意义(P＜0.01);Notch1蛋白在胃癌中表达与肿瘤浸润深度(P＜0.01)、淋巴结转移(P＜0.05)以及远处转移(P＜0.05)有关,DLL4蛋白在胃癌中表达与肿瘤浸润深度(P＜0.01)、淋巴结转移(P＜0.05)以及临床分期有关(P＜0.05);Notch1和DLL4蛋白的表达呈正相关(r=0.355,P<0.05).结论 Notch1和DLL4蛋白在胃癌组织中的表达上调与肿瘤侵袭转移密切相关,可能在胃癌的发生、发展中起重要作用.     

组织金属蛋白酶抑制因子-1在胃癌中的表达

目的 探讨组织金属蛋白酶抑制因子－1在胃癌中表达的意义。方法 采用免疫组化S－P法对47例胃癌组织进行TIMP－1的检测。结果 TIMP－1主要表达于胃癌癌周基质细胞，癌细胞少量表达，TIMP－1的表达强度与胃癌患者淋巴结转移（P＜0．01）、浆膜浸润（P＜0．01）、TNM分期（P＜0．05）均相关。结论 TIMP－1可作为判断胃癌恶性行为的重要生物学标记物。     

几丁质酶3样1蛋白在胃癌组织的表达及其临床意义

目的:通过生物信息学探讨几丁质酶3样1蛋白(CHI3L1)在胃癌中的作用及其临床意义。方法:利用Oncomine、基因表达谱交互分析(GEPIA)和Kaplan-Meier Plotter等数据库探讨CHI3L1在胃癌中的表达及其与患者生存之间的关系。利用Methsurv数据库分析CHI3L1启动子和CpG位点甲基化水...     

细胞间粘附分子-1在胃癌组织中的表达及临床意义

目的:探讨细胞间粘附分子-1(ICAM-1)在胃癌中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组织化学法检测胃癌组织中ICAM-1的表达情况,并与临床病理参数作相关分析。结果:58例胃癌组织中,ICAM-1的阳性表达率为34.5%,其表达率与肿瘤浸润深度、肝转移及血管侵犯无明显相关(P＞0.05);ICAM-1表达阳性率在肠型胃癌显著高于弥漫型胃癌(P＜0.01),淋巴结转移者显著低于无淋巴结转移者(P＜0.01);随肿瘤TNM分期的增高,ICAM-1的阳性表达率也逐渐下降(P＜0.05)。结论:胃癌组织中ICAM-1表达与淋巴结转移和肿瘤分期密切相关。     

survivin在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨胃癌组织中凋亡抑制因子survivin的表达及其与各临床病理因素的关系,评价survivin在胃癌预后判断中的价值。方法应用免疫组织化学EnVision两步法检测140例胃癌组织中survivin的表达情况,回顾性分析survivin与各临床病理因素及预后之间的关系。结果胃癌组织中survivin表达阳性率为46.4%(65/140)。累及浆膜层的胃癌survivin表达阳性率(53.2%)明显高于未及浆膜层者(32.6%),TNM分期Ⅲ、Ⅳ期的胃癌survivin表达阳性率(55.2%)明显高于Ⅰ、Ⅱ期者(38.4%)(P均<0.05)。分化较差的胃癌survivin表达阳性率(52.2%)与分化较好者差异无显著性意义(35.4%,P=0.059)。survivin表达阳性患者5年生存率(34.4%)明显低于表达阴性者(58.6%,P<0.006)。Cox回归模型分析显示,survivin表达状态是胃癌根治术后独立的预后因素,阳性表达提示预后不良。结论凋亡抑制因子survivin在胃癌组织中具有较高的表达率,其表达与胃癌的浸润深度和TNM分期相关。survivin的表达状态是胃癌根治术后独立的预后因素,阳性表达提示预后不良。     

转染4-1BBL的前列腺癌细胞瘤苗体外诱导抗肿瘤免疫作用

目的:观察转染4-1BBL重组腺病毒载体的小鼠前列腺癌细胞瘤苗体外诱导抗肿瘤免疫作用及机制。方法:利用复制缺陷型腺病毒AdEasy-1系统,通过基因重组技术构建Ad-m4-1BBL及Ad-eGFP。将Ad-m4-1BBL和Ad-eGFP感染小鼠前列腺癌细胞RM-1,以丝裂霉素C(MMC)处理,制成肿瘤细胞疫苗(TCV,TCV-Ad-eG-FP,TCV-Ad-m4-1BBL),经体外与同系小鼠脾淋巴细胞共同培养,ELISA法检测脾细胞分泌细胞因子(IL-2,INF-γ)的影响,CCK-8试剂检测脾淋巴细胞特异性杀伤活性。结果:转染4-1BBL基因的小鼠前列腺癌细胞瘤苗TCV-Ad-m4-1BBL高表达4-1BBL蛋白,培养上清中细胞因子IL-2[(180.24±2.22)pg/ml]和INF-γ[(1 512.46±23.64)pg/ml]表达水平均明显高于TCV和TCV-Ad-eGFP组(P<0.05),TCV-Ad-m4-1BBL瘤苗诱导RM-1细胞特异性杀伤率[(34.24±2.64)%],相比TCV-Ad-eGFP[(14.65±3.21)%]和TCV[(9.82±1.48)%],差异有显著性(P<0.05)。但针对Hepal-6细胞,3种瘤苗均无效。结论:表达4-1BBL的小鼠前列腺癌细胞瘤苗能诱导有效的抗肿瘤免疫反应。     

由Survivin启动子驱动的人4-1BBL基因的腺病毒载体的构建

目的 构建并鉴定由具有肿瘤特异性启动作用的生存素启动子(Survivin Promotor)驱动4-1BBL(CD137 Ligand)基因的腺病毒载体.方法 用聚合酶链反应(PCR)和逆转录(RT)-PCR的方法,分别从人肺癌细胞株A549中克隆Survivin启动子和共刺激分子4-1BBL基因,通过T载体和转移载体将目的基因亚克隆到腺病毒载体上,293A细胞包装成病毒颗粒rAD-Survivin promotor-4-1BBL,4-1BBL流式抗体检测基因在人喉癌细胞株HEp-2及人乳腺细胞株Hs 578Bst上的表达.结果 通过PCR检测、直接测序证实目的基因克隆成功并亚克隆到表达载体上,免疫细胞化学方法证实病毒包装成功,流式检测发现重组腺病毒载体rAD-Survivin promotor-4-1BBL能够特异性地在肿瘤细胞HEp-2上高表达4-1 BBL.结论 由Survivin-promotor驱动4-1BBL基因的具有肿瘤特异性腺病毒载体构建成功.     

重组腺病毒介导hPSMA和4—1BBL基因转染小鼠树突状细胞的变化及临床意义

目的：研究hPSMA和41BBL基因转染小鼠树突状细胞（DC）后的变化及其在前列腺癌方面的临床意义。方法 以含hPsMA和41BBL基因的重组腺病毒载体转染C57BL／6j小鼠骨髓来源的DC,将培养的DC分为阳性组（Ad／hPsMAIRES-m4—1BBL组）、阴性对照组（Ad5LacZ组）和未转染组,分别加入重组腺病毒、空载质粒腺病毒和生理盐水后,采用流式细胞仪测定腺病毒的转染效率;用相差显微镜、扫描电镜和透视电镜观察DC的形态学变化;用流式细胞仪分析表型变化;用Western blot检测DC hPSMA蛋白的表达。结果：经体外诱导培养后获得的树突状细胞在相差显微镜、透视电镜和扫描电镜下均观察到具有典型形态的成熟DC;流式细胞仪检测腺病毒转染效率为70％,Ad／hPSMA-IRES-m4—1BBL组DC细胞表面MHCⅡ、CD80、CD86较其余两组无明显差异（P〉0．05）,但4-1BBL有明显提高（P〈0．05）;Western blot检测DC蛋白表达出PSMA。结论：本实验中获得的DC具有成熟DC的典型特征,DC表面的4-1BBL表达率明显上调,表达出PSMA蛋白。本研究将为DC应用于前列腺癌的生物治疗奠定基础。     

前列腺特异性膜抗原和4-1BB配体共表达基因疫苗诱导的抗肿瘤作用

目的 探讨小鼠4-1BB配体(m4-1BBL)对截短的人前列腺特异性膜抗原(tPSMA)基因疫苗诱导的抗肿瘤作用.方法 构建携带tPSMA和m4-1BBL基因的真核表达载体pDC316-tPSMA-IRES-m4-1BBL,以及编码tPSMA的对照载体pDC316-tPSMA和空载体pDC316.3种质粒分别于C57BL/6小鼠股四头肌内接种免疫,CCK-8试剂盒检测小鼠脾细胞体外特异性杀伤前列腺癌细胞株RM-1-tPSMA的活性,观察小鼠体内肿瘤生长变化.结果 pDC316-tPSMA-IRES-m4-1BBL疫苗诱导增强的靶细胞特异性杀伤率为42.62%,pDC316-tPSMA组为24.81%,pDC316组为10.81%,组间杀伤率比较差异有统计学意义(P<0.05).pDC316疫苗免疫小鼠7 d成瘤,瘤体积2657.4 mm3;pDC316-tPSMA组9 d成瘤,瘤体积1334.5 mm3;pDC316-tPSMA-IRES-m4-1BBL组12 d成瘤,瘤体积445.8 mm3;组间瘤体大小比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 共表达tPSMA和m4-1BBL的基因疫苗能显著增强小鼠抗前列腺肿瘤作用.

Abstract：

Objective To investigate the influence of m4-1BBL on the anti-tumor effects induced by truncated human prostate specific membrane antigen (tPSMA) gene in mice. Methods A eukaryotic expression plasmid encoding tPSMA and m4-1BBL (pDC316-tPSMA-IRES-m4-1BBL), pDC316-tPSMA and pDC316 were constructed. C57BL/6 mice were vaccinated in the quadriceps femoris, respectively. The CTL activity of spleen cells from the immunized mice against prostate cancer RM-1-tPSMA was detected by CCK-8 kit in vitro. The tumor growth was then observed. Results The target cell specific cytotoxicity rate induced by pDC316-tPSMA-IRES-m4-1BBL was 42.6%, compared to 24.8% in the pDC316-tPSMA group and 10.8% in the pDC316 group. The difference was significant (P<0.05). The volume of tumor in the pDC316 group was 2657.4mm3 7 d after vaccination, compared to 1334.5 mm3 in the pDC316-tPSMA group, 9 d after vaccination. In the pDC316-tPSMA-IRES-m4-1BBL group, the tumor volume was 445.8 mm3, 12d after vaccination. The difference was significant (P<0.05). Conclusion Gene vaccines co-expressing tPSMA gene and m4-1BBL gene could significantly enhance anti-prostate cancer effects in mice.     

WIF-1基因启动子区甲基化在胃癌组织中的检测

目的检测胃癌组织及正常胃黏膜组织中WIF-1基因启动子区甲基化情况,并结合临床病理资料,探讨WIF-1基因甲基化状态与胃癌发生、发展的相关性。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应（methylation—specinc PCR,MSP）检测30例胃癌组织、30例癌旁组织及10例正常胃黏膜组织中WIF-1基因启动子区甲基化情况。结果胃癌组织、癌旁组织及正常对照组WIF-1基因启动子甲基化阳性率分别为76．6％（23／30）、13．3％（4／30）和0．0％（0／10）,胃癌组织甲基化率明显高于后两组,差异有统计学意义（均P〈0．05）。胃癌组织中不同年龄、性别、分化程度的WIF-1基因甲基化阳性率差异均无统计学意义;有淋巴结转移组甲基化率（90％）高于无淋巴结转移组甲基化率（50％）,差异有统计学意义（P〈0．05）;而Ⅲ～Ⅳ期和Ⅰ～Ⅱ期胃癌组织中WIF-1基因甲基化阳性率分别为90．5％与44．4％,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论WIF-1基因启动子区发生高甲基化导致其表达下调或缺失与胃癌的发生、发展以及临床病理特征有着密切的关系,通过MSP法检测胃癌组织及正常组织的甲基化率,为胃癌的早期诊断及综合治疗寻找新的靶点。     

TMSG-1在人前列腺癌细胞株与前列腺癌组织中的表达及临床意义

目的 探讨肿瘤转移抑制基因-1(TMSG-1,亦称LASS2)在人不同转移潜能前列腺癌细胞株中与前列腺癌组织中的表达及其临床意义.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)及细胞爬片免疫荧光组织化学方法,检测TMSG-1在人不同转移潜能前列腺癌细胞株低转移潜能(PC-3M-2134)和高转移潜能(PC-3M-IE8)中的表达.并采用免疫组织化学方法检测TMSG-1在人前列腺增生及前列腺癌组织中的表达,同时探讨其与临床病理特征之间的关系.结果 TMSG-1在PC-3M-284细胞株中的mRNA及蛋白表达(2.70±0.30、75.26±2.68)均明显高于在PC-3M-IE8细胞株中的表达(1.10±0.20、38.08±1.84),差异有统计学意义(P＜0.05).通过免疫组织化学观察表明TMSG-1在前列腺增生及前列腺癌组织中均有表达,但在前列腺增生中的阳性表达率(32/40)明显高于在前列腺癌中的阳性表达率(21/60).两者差异有统计学意义(P＜0.05).并且TMSG-1在前列腺癌组织中的表达与年龄、Gleason分级、淋巴结转移及TNM分期密切相关(P＜0.05),而与肿瘤的大小无明显相关.结论 TMSG-1在低转移潜能前列腺癌细胞株中的mRNA及蛋白表达明显高于在高转移潜能前列腺癌细胞株中的表达,证明它是一种肿瘤转移抑制基因.TMSG-1在人前列腺增生与前列腺癌组织中的表达之间差异有统计学意义,并且TMSG-1在前列腺癌中的表达与年龄、Gleason分级、淋巴结转移及TNM分期密切相关.

Abstract：

Objective To investigate the expression of tumor metastasis suppressor gene 1 (TMSG-1 as well LASS2) in different prostate cancer cell lines and prostate cancer tissues and its clinical significance. Methods Sixty patients with prostate cancer had undergone surgery between 2008 and 2010.Forty patients with prostatic hyperplasia were chosen. Immunofluorescence histochemistry was used to study the distribution of TMSG-1 in cells, immunohistochemistry was used to observe the difference in TMSG-1 expression between prostatic hyperplasia and prostate cancer tissues, and the relationship between the TMSG-1 expression and clinicopathological features in prostate cancer tissues was analyzed. Results The level of TMSG-1 mRNA in PC-3M-2B4 cell line with low metastatic potentiality (2. 70 ±0. 30) was higher than in PC-3M-IE8 cell line (1. 10 ±0. 20). Immunofluorescence histochemistry revealed that most of the collected prostate cancers and prostatic hyperplasia tissues expressed TMSG-1 in cytoplasma, and nuclei were stained in a few of prostate cancer tissues. The average fluorescence intensity of TMSG-1 in PC-3M-2B4 cells (75. 26 ±2. 68) was obviously higher than in PC-3M-IE8 cells (38. 08 ± 1. 84). There was obviously different expression of TMSG-1 between prostate cancers (21/60) and prostatic hyperplasia ( 32/40 ) ( P ＜0. 05 ) . The TMSG-1 levels in prostate cancer tissue were significantly correlated with ages,Gleason grade, lymph node metastasis and tumor, nodes, metastasis (TNM) staging (P ＜0. 05) , but not with the size of tumor. Conclusion The expression level of TMSG-1 mRNA and protein in prostate cancer cell lines with low metastatic potentials significantly higher than in prostate carcinoma cell lines with high metastatic potentials, which proves that TMSG-1 is a tumor metastasis suppressor gene. From the difference in the TMSG-1 expression between human prostatic hyperplasia and prostate cancer tissues and the correlation with age, Gleason grade, lymph node metastasis and TNM stage in prostate cancers, we infer that TMSG-1 is an important prognostic indicator in judging prostate cancer cell growth, progression and metastasis.