糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞产生一氧化氮量及其合酶 …

目的和方法：利用体外培养的人脐静脉内皮细胞，观察糖基化终产物对该细胞产生一氧化氮（ＮＯ）及其对一氧化氮合酶ＮＯＳ活性的影响。结果：发现糖基化终产物组一氧化氮含量明显降低而一氧化氮合酶活性却明显增高，并随浓度，作用时间而发生相应变化。结论：糖基化终产物对内皮细胞产生一氧化氮的影响并不是通过降低ＮＯ合酶活性而起作用。     

糖基化终产物对培养的人脐静脉内皮细胞巨噬细胞炎性蛋白-1α表达的影响

目的: 探讨糖基化终产物(AGEs)对人脐静脉内皮细胞巨噬细胞炎性蛋白-1α mRNA及蛋白表达的影响。方法: 将培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)用不同浓度(100 mg/L、200 mg/L、400 mg/L)的AGEs孵育24 h及同一浓度(400 mg/L)AGEs孵育0 h、12 h、 24 h及36 h。采用原位杂交方法及Western blot检测巨噬细胞炎性蛋白-1α mRNA及蛋白的表达水平。结果: BSA组内皮细胞内巨噬细胞炎性蛋白-1α呈弱表达;100 mg/L、200 mg/L及400 mg/L AGEs孵育24 h后,各组内皮细胞内巨噬细胞炎性蛋白-1α mRNA 表达的平均积分吸光度值分别为18.76±3.17、26.58±1.61及34.23±2.25(BSA组为13.83±1.24,P<0.05);400 mg/L AGEs孵育12 h、24 h 及36 h后,各组内皮细胞内巨噬细胞炎性蛋白-1α mRNA表达的平均积分吸光度值分别为22.67±1.46、34.23±2.25及42.28±3.14(0 h组为12.56±1.24,P<0.05)。100 mg/L、200 mg/L及400 mg/L AGEs孵育24 h后,各组内皮细胞内巨噬细胞炎性蛋白-1α蛋白的表达量分别为BSA组的1.34倍、1.87倍及2.46倍(P<0.05);400 mg/L AGEs孵育12 h、24 h 及36 h后,各组内皮细胞内巨噬细胞炎性蛋白-1α蛋白的表达量分别为0 h组的1.82倍、2.71倍及3.34倍(P<0.05)。结论: 糖基化终产物以时间及剂量依赖的方式促进内皮细胞巨噬细胞炎性蛋-1α mRNA及蛋白的表达。     

糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞产生一氧化氮量及其合酶的影响

目的和方法：利用体外培养的人脐静脉内皮细胞,观察糖基化终产物对该细胞产生一氧化氮（ＮＯ）及其对一氧化氮合酶（ＮＯＳ）活性的影响。结果：发现糖基化终产物组一氧化氮含量明显降低而一氧化氮合酶活性却明显增高,并随浓度、作用时间而发生相应变化。结论：糖基化终产物对内皮细胞产生一氧化氮的影响并不是通过降低ＮＯ合酶活性而起作用。     

糖基化终产物对人单核细胞源树突状细胞糖基化终产物受体表达的研究

目的：探讨糖基化终产物 (AGEs）)对人单核细胞源树突状细胞（MDCs）糖基化终产物受体（RAGE） 表达的影响。 方法： 用免疫磁珠分离人外周血CD14+单核细胞，经含rhGM-CSF（100 μg/L）和rhIL-4（50 μg/L）的RPMI-1640培养，使其分化为MDCs，采用RT-PCR和Western blotting法，观察糖基化-白蛋白（AGE-BSA）对MDCs RAGE mRNA和蛋白表达的影响，同时检测培养液上清中IFN-γ和IL-12的浓度。 结果： AGE-BSA诱导DCs RAGE mRNA和蛋白的表达（P＜0.05），高于空白对照组，并且明显促进了DCs IFN-γ和IL-12的分泌（P＜0.05）。BSA干预组与空白对照组相比差异无显著（P＞0.05）。 结论： AGEs能够上调DCs RAGE的表达，并且促进了DCs IFN-γ和IL-12的分泌，这可能是糖尿病通过DCs促进动脉粥样硬化发生的重要机制之一。     

TNFα对培养的脐静脉内皮细胞的损伤作用

目的 :探讨肿瘤坏死因子α(TNFα)对脐静脉内皮细胞的损伤作用。方法 :将培养的内皮细胞分为对照组和实验组 ,实验组培养液中含有TNFα(4× 10 5U/L) ;通过普通光镜、扫描电镜、透射电镜观察TNFα对内皮细胞形态和超微结构的影响 ,并运用免疫组化染色来观察TNFα对内皮细胞表达细胞间粘附分子 (ICAM 1)的影响。结果 :(1)光镜、电镜观察结果显示 :实验组内皮细胞拉长 ,由原来的多边形变为成纤维状 ,细胞间距不均且变大 ;微绒毛变短甚至呈泡状 ,个别拉长 ,有些部位细胞膜有缺损以及内质网扩张、线粒体凝聚等改变。并且这些改变有时间依赖性。 (2 )实验组内皮细胞ICAM 1表达明显增强。结论 :TNFα(4× 10 5U/L)对内皮细胞有明显的损伤作用     

流体切应力对内皮细胞粘附分子表达的影响

在动脉粥样硬化(Atherosclerosis,As)的发生发展中各种白细胞,包括单核细胞对内皮细胞的粘附可能起着较为重要的作用。在体内,血流切应力对内皮细胞的形态和功能有重要影响。为了阐明流体切应力对内皮细胞表面粘附分子表达的影响,本文研究了流体切应力(2.23～6.08dyne/cm     

脂质过氧化对培养的人内皮细胞血管细胞粘附分子-1表达的影响

目的:观察脂质过氧化对培养的人内皮细胞血管细胞粘附分子-1表达的影响。方法:培养的人脐静脉内皮细胞随机分为实验组和对照组。实验组与不同浓度联胺(1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L)作用8h, 对照组不加联胺。细胞原位杂交和细胞酶联免疫吸附法分别测定内皮细胞血管细胞粘附分子-1mRNA和蛋白表达。结果:细胞原位杂交结果图像分析表明, 实验组平均吸光度值分别为0.147±0.013、0.292±0.020和0.396±0.022, 是对照组(0.077±0.011)的1.91倍、3.79倍和5.14倍。方差分析表明, 各组间两两比较有显著差异(P<0.01)。细胞酶联免疫吸附测定结果, 实验组平均吸光度值分别是0.158±0.008、0.220±0.017和0.321±0.023, 为对照组(0.104±0.016)的1.53倍、2.12倍和3.09倍。各组间两两比较有显著差异(P＜0.01)。结论:人脐静脉内皮细胞脂质过氧化增加血管细胞粘附分子-1mRNA和蛋白表达, 这可能促进单核细胞粘附血管内皮, 在动脉粥样硬化发生发展中起重要作用。     

人巨细胞病毒感染对脐静脉内皮细胞粘附分子和核转录因子表达的影响

目的　研究人巨细胞病毒 (humancytomegalovirus,HCMV)体外感染对人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)表面细胞间粘附分子 1(ICAM 1)mRNA和核转录因子kappaB(NF κB)表达的影响 ,探讨NF κB活化与ICAM 1mRNA表达的关系。方法　用RT PCR方法检测ICAM 1mRNA的表达 ,用凝胶电泳迁移率改变试验 (EMSA)检测NF κB活性。结果　HUVEC感染HCMV后 1h ,NF κB活性增加 (P <0 .0 5 ) ,感染后 2h ,ICAM 1mRNA表达增加 (P <0 .0 5 ) ,二者均于 8h达高峰 ,至 2 4h时仍维持较高表达(P <0 .0 1) ;加入NF κB活性抑制剂四氢吡咯二硫代氨基甲酸酯 (PDTC)后 ,NF κB活性明显减弱 ,同时ICAM 1mRNA的表达也明显降低 (P <0 .0 1)。结论　HCMV感染可激活NF κB ,使ICAM 1mRNA的表达增加 ,从而引导炎症反应至感染部位 ,并有利于病毒感染在细胞间扩散。NF κB参与ICAM 1转录的调控 ,其活性变化影响ICAM 1mRNA的表达。     

MEK1/2在脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞ICAM-1表达中的作用

目的：探讨MEK1/2在脂多糖诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）ICAM-1表达中的作用。 方法： 用不同浓度LPS或LPS加MEK1/2特异性抑制剂PD98059和HUVECs孵育不同时间后，分别采用RT-PCR和Western blotting检测ICAM-1 mRNA和蛋白的表达。 结果： LPS呈时间-浓度依赖性地上调HUVECs ICAM-1 mRNA和蛋白的表达。LPS预处理后2 h，HUVECs ICAM-1 mRNA和蛋白的表达即开始升高，LPS(100 μg·L-1)作用后6 h,ICAM-1 mRNA和蛋白的表达基本达到高峰；PD98059(10 μg·L-1)可显著抑制LPS(100 μg·L-1)诱导6 h的ICAM-1 mRNA和蛋白的表达，抑制率分别为54.4%和44.9%（P<0.01 vs LPS）。 结论： 调控MEK1/2通路可能为内毒素休克诱导血管内皮损伤的防治提供新的策略。     

肺炎衣原体对血管内皮细胞的感染及其对ICAM-1表达的影响

目的:观察肺炎衣原体对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的感染及其对细胞分泌和表达细胞间粘附分子1(ICAM-1)的影响,探讨C.pneumoniae感染在动脉粥样硬化形成中的作用及其可能机制。方法:用人喉表皮癌(HEP-2)细胞培养C.pneumoniae,以C.pneumoniae感染HUVE细胞,经透射电镜及PCR检测有无感染。用流式细胞仪检测感染前后HUVE细胞表面ICAM-1蛋白的表达的变化,用荧光定量RT-PCR检测ICAM-1mRNA的变化。结果:C.pneumoniae能感染体外培养的HUVE细胞;感染后12h,细胞表面ICAM-1蛋白的表达即增加,其峰值约在感染后24h;荧光定量RT-PCR结果显示其增加在mRNA水平。结论:C.pneumoniae能感染体外培养的人脐静脉内皮细胞并增加ICAM-1的表达,提示C.pneumoniae感染可能是动脉粥样硬化的始动因子之一,其致动脉粥样硬化机制可能与感染后血管内皮细胞粘附分子表达的增加有关。     

SPP对人脐静脉内皮EA.hy926细胞表达粘附分子的作用

目的:通过研究在N,N-二甲基鞘氨醇(DMS)作用下,人脐静脉内皮EA.hy926细胞株(EA株)表达粘附分子CD54(ICAM-1)和CD62p(PS)的变化,探讨第二信使1-磷酸鞘氨醇(SPP)参与动脉粥样硬化(AS)粘附过程的机制。方法:采用流式细胞仪分群作用衡量EA细胞株和单核细胞之间的粘附率,用细胞免疫组化法检测DMS作用于EA株后引起的粘附分子的表达。结果:随着DMS作用剂量或作用时间的增加,CD54与CD62p的表达均减少,同时粘附率也相应地下降。结论:AS早期的粘附过程可能是通过SPP来转导信息,以促进粘附分子表达。     

MAPK通路在晚期糖基化终产物诱导人脐静脉内皮细胞骨架结构改变中的作用

目的：探讨晚期糖基化终产物通过MAPK信号转导通路引起人脐静脉内皮细胞骨架结构改变的作用机制。方法：用胰酶消化法分离培养人脐静脉内皮细胞，以不同浓度的晚期糖基化终产物修饰的人血清白蛋白（AGE-HSA）与之作用不同时间，并选用不同的试剂以及主导激活或抑制的腺病毒突变体以阻断或激活MAPK通路，与对照组进行比较，采用免疫荧光染色法显示细胞骨架肌动蛋白F-actin的结构改变。结果：AGE-HSA以剂量和时间依赖的方式引起内皮细胞骨架蛋白F-actin结构的改变，未经修饰的HSA无此作用;p38通路的特异性抑制剂SB203580和ERK通路的特异性抑制剂PD98059均可抑制AGEs对细胞骨架的作用，而JNK通路抑制剂SP600125则无此作用；MKK6b、 MEK1结构活性型突变体的重组腺病毒可明显诱导细胞骨架改变，MKK7活性型则无此作用;且MKK6b、 MEK1无活性型突变体可明显抑制AGEs对细胞骨架的作用；p38α亚型的无活性突变体可阻断MKK6b结构活性型突变体诱导的细胞骨架改变。结论：AGE修饰蛋白通过MAPK家族中的p38和ERK信号转导通路引起内皮细胞骨架肌动蛋白F-actin的重组和再分布。     

糖基化终产物刺激大鼠骨髓内皮细胞表达细胞间粘附分子-1的机制探讨

目的:探讨糖基化终产物(AGEs)致内皮细胞表达细胞间粘附分子-1(ICAM-1)与自由基产生之间的关系。方法:内皮细胞(EC)用抗AGEs抗体、抗IL-1多抗、N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理1 h后AGEs作用6 h,测定IL-1、超氧化物歧化酶(SOD)、ICAM-1、内皮细胞-中性粒细胞粘附率。结果:AGEs刺激后ICAM-1表达增加[吸光度(A)为0.65-0.14 vs 0.11-0.02]的内皮细胞SOD活性降低[(0.69-0.19)10³U/L vs(1.71-0.42)10³U/L]。ICAM-1的增加可被抗AGEs抗体[吸光度(A)为(0.12-0.01)]、NAC[吸光度(A)为(0.11-0.05)]和抗ICAM-1抗体[吸光度(A)为(0.10-0.04)]抑制。外源性IL-1也可刺激内皮细胞表达ICAM-1[吸光度(A)为(0.72-0.23)]。结论:AGEs刺激内皮细胞表达ICAM-1可能与其导致细胞自由基的产生有关;AGEs还可通过刺激其他细胞产生细胞因子间接作用于EC,参与促进ICAM-1表达。     

球状脂联素上调脂联素受体1抑制晚期糖基化终产物诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的初步研究

目的:观察球状脂联素(gAd)对晚期糖基化终产物(AGEs)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡时脂联素受体1(AdipoR1)表达的影响。方法:体外培养HUVECs,用不同浓度AGEs作用HUVECs,以及预处理gAd后再联合AGEs作用HUVECs。MTT比色法测定细胞活性、Annexin V-FITC/PI双染标记流式细胞仪检测细胞凋亡、实时定量RT-PCR检测内皮细胞AdipoR1 mRNA的表达。结果:AGEs作用HUVECs,细胞凋亡具有AGEs浓度依赖性(P0.05)。相同浓度AGEs作用HUVECs,有和无gAd预处理的2组比较,用gAd预处理组明显拮抗HUVECs凋亡(P0.01)。实时定量RT-PCR检测发现,gAd具有上调AdipoR1 mRNA表达的作用,与相同浓度AGEs作用的无gAd预处理组比较,差异显著(P0.01)。结论:gAd可能通过上调AdipoR1表达拮抗AGEs诱导HUVECs的凋亡。     

瑞舒伐他汀通过抑制晚期糖基化终末产物受体改善晚期内皮祖细胞再内皮化功能

 目的: 研究C反应蛋白(CRP)对晚期内皮祖细胞的晚期糖基化终产物受体(RAGE)表达的影响,并探讨瑞舒伐他汀是否改善CRP诱导的晚期内皮祖细胞再内皮化功能。方法: Western blot检测RAGE蛋白表达情况,MTT检测细胞活力、Transwell小室检测迁移能力及黏附能力来观察瑞舒伐他汀对于CRP诱导的晚期内皮祖细胞再内皮化功能的影响。结果: 随着CRP刺激浓度增加,RAGE蛋白表达量逐渐增加;而瑞舒伐他汀预孵育后,RAGE表达量逐渐下降。瑞舒伐他汀对于CRP诱导后的晚期内皮祖细胞的细胞活性没有显著改变;而迁移能力和粘附能力均随着瑞舒伐他汀浓度逐渐增加而增加,其中10^-6 mol/L瑞舒伐他汀组与CRP对照组比较均显著增强(P<0.01)。结论: CRP上调晚期内皮祖细胞RAGE的表达,瑞舒伐他汀可通过抑制RAGE表达增强CRP诱导的晚期内皮祖细胞的迁移和粘附能力,从而改善其再内皮化功能。