同型半胱氨酸对大鼠脑出血后血肿周围细胞凋亡及Caspase-3表达的影响

目的本实验通过观察同型半胱氨酸(Hcy)对脑出血模型大鼠血肿周围神经细胞凋亡和Caspase-3的表达的影响,探讨实验性脑出血后Hcy的损伤作用及其机制,并为预防及治疗脑出血提供实验理论基础。方法应用立体定向技术制备脑出血模型,Hcy组于术后30min予血肿同侧颅内直接注射Hcy,固定后连续切片作TUNEL染色和Caspase-3免疫组化染色,数据用SPSS13.0统计分析。结果假手术组偶可见TUNEL细胞表达,Caspase-3少量表达;脑出血组6h血肿周边组织出现TUNEL阳性细胞,72h达高峰,Caspase-3在脑出血后6h表达开始增高,24h达到高峰,应用Hcy干预后自12h起各时间点TUNEL细胞和Caspase-3表达均较ICH组增加(P<0.05),以各自高峰时间最为显著(P<0.05),但未能改变TUNEL细胞和Caspase-3表达的高峰时间。结论脑出血后血肿周围细胞凋亡与Caspase-3表达有关,Caspase-3介导了细胞凋亡的发生。Hcy能够促进脑出血后的细胞凋亡,可能与诱导Caspase-3表达有关,进一步证实Hcy为脑血管疾病的独立危险因素之一。     

高血压脑出血患者血肿周围脑组织细胞凋亡与Caspase-3表达规律的临床研究

目的初步探讨高血压脑出血患者血肿周围脑组织细胞凋亡的病理变化规律及其与Caspase-3的关系。方法术中获取19例不同时段脑出血患者血肿灶周围脑组织标本作为病例组,手术入路中远隔血肿部位脑组织标本5例作为对照组。根据脑出血后时间的不同将病例组分为:超早期组(<8h);早期组(8～24h);延期组(> 24h)。所有标本均行TUNEL染色以及Caspase-3免疫组化染色,利用图像分析仪观察阳性细胞数的变化规律,分析凋亡细胞与Caspase-3阳性细胞之间的关系。结果血肿周围脑组织存在TUNEL阳性细胞表达,出血后8～24h达高峰,随后下降,并且与Caspase-3的变化趋势相一致。结论细胞调亡是高血压脑出血患者血肿周围早期细胞死亡的主要形式。做为细胞凋亡的重要调控因子,Caspase-3的表达与脑出血后细胞凋亡的发生发展密切相关。     

脑出血后血肿周围神经细胞凋亡与CasPase-3表达关系的实验研究

目的 研究脑出血后不同时期血肿周围神经细胞凋亡情况和Caspas-3蛋白表达，探讨脑出血后血肿周围神经细胞损伤机制。方法 用立体定向二次注入法向成年大鼠右尾核壳区注射自体动脉血60μl，制成大鼠脑内血肿模型，用相同方法注射等量无活性石蜡油作对照，于脑出血后4h，6h，ld，3d，5d，10d不同时间点断头，取脑，采用原位末端标记法(TUNEL法)和免疫组化法进行动态形态学观察，了解脑出血后不同阶段血肿周围神经细胞凋亡和Caspase-3蛋白的表达。结果 脑出血后4h血肿周围尚无凋亡细胞出现，6h有凋亡发生，以后随时间逐渐增多，3d达高峰后逐渐下降，10d仍可见凋亡细胞。在HE染色中病理改变明显的部位凋亡细胞比较集中，无改变的部位也有凋亡细胞存在。脑出血后6h血肿周围神经细胞Caspase-3开始表达，3d达高峰后逐渐恢复，对照组仅有少量TUNEL阳性细胞及Caspase-3阳性表达细胞。结论 脑出血后血肿周围神经细胞损伤有凋亡机制参与，在出血后6h发生凋亡，第3d达高峰，Caspase-3表达时相变化与血肿周围神经细胞凋亡相一致，Caspase-3表达增加与血肿周围神经细胞凋亡有关。     

脑出血患者血肿周围组织神经元凋亡与Bcl-2、Bax蛋白表达关系的研究

目的探讨脑出血(ICH)患者血肿周围组织神经元凋亡与凋亡相关基因Bcl2、Bax蛋白表达的关系。方法采用缺口末端标记法、免疫组化法分别检测ICH患者血肿周围组织神经元凋亡率和Bcl2、Bax表达水平,分析神经元凋亡率与Bcl2、Bax表达及Bax/Bcl2值的关系;出血量与Bcl2、Bax表达及Bax/Bcl2值的关系,以及神经元凋亡率与出血量、病程、神经功能缺损程度评分(NDS)的关系。结果ICH患者血肿周围组织神经元凋亡率及Bcl2、Bax表达明显高于正常对照组(均P<0.01);血肿周围组织神经元凋亡率与Bcl2表达呈负相关(r=-0.682,P<0.01),与Bax、Bax/Bcl2值表达呈正相关(r=0.592、0.740,均P<0.01)。出血量与血肿周围组织Bcl2表达呈负相关(r=-0.677,P<0.01),与Bax表达及Bax/Bcl2值呈正相关(r=0.654、0.751,均P<0.01)。细胞凋亡率与出血量及NDS呈正相关(r=0.829、0.897,均P<0.01),与病程不相关。结论细胞凋亡机制参与了ICH后继发性神经元损伤;Bcl2、Bax蛋白及Bax/Bcl2值对凋亡具有调控作用。     

大鼠脑出血后血肿周围区神经元胀亡及3-AB对其胀亡、凋亡的影响

目的 通过建立大鼠脑出血动物模型,观察大鼠脑出血后血肿周围区神经元胀亡时程、分布变化规律及3.氨基苯甲酰胺(3-AB)对神经元胀亡、凋亡的影响.方法 成年健康Wistar大鼠84只随机分为脑出血+3-AB组(A组)、脑出血组(B组)、对照组(C组).A、B组脑尾壳核注入自体血50μl,A组3-AB腹腔注射干预.分别于术后6h、1d、2d、3d、5d、7d处死.根据Rosenberg法对各组大鼠进行神经功能评分;在光、电镜下观察神经元胀亡随时间、空间的变化规律;Caspase-3免疫组化,探讨3-AB对其胀亡和凋亡的影响.结果 脑出血大鼠神经功能评分在24h最高;血肿周围神经元出现胀亡和凋亡;胀亡指数在24h达高峰,此后逐渐下降,3组比较有统计学差异.凋亡亦在24h达高峰,Caspase-3阳性神经元数目3组相比有统计学意义.结论 脑出血后血肿周围神经元胀亡和凋亡共存;胀亡随时间、空间变化而呈规律性改变;3-AB能抑制其胀亡,促进凋亡.     

BMSCs介导STAT3对脑出血大鼠海马组织eIF2α、Glu表达水平的影响

目的 探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对脑出血(ICH)大鼠海马组织真核细胞翻译起始因子2 α亚基(eIF2 α)、谷氨酸(Glu)表达水平的影响及其机制。方法 100只SD大鼠,随机选取10只分离BMSCs,剩余90只采用Ⅳ型胶原酶构建ICH模型。90只大鼠随机分为假手术组、ICH组和BMSCs移植组,每组30只。造模成功后24h,BMSCs移植组大鼠经尾静脉注入BMSCs,其余2组注入等体积0.9%氯化钠溶液。观察大鼠一般情况,评估神经功能,测定脑组织含水量。蛋白印迹测定海马组织内质网应激相关因子、eIF2α及JAK/STAT3通路蛋白水平,高效液相色谱法测定Glu浓度,TUNEL法分析细胞凋亡情况。结果 ICH组大鼠神经功能缺损评分(NSS)和脑组织含水量显著大于假手术组,海马组织葡萄糖调节蛋白78 (GRP78)蛋白相对表达量显著低于假手术组,CAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)和Caspase-12蛋白相对表达量显著高于假手术组,海马组织eIF2 α蛋白相对表达量和Glu水平显著高于假手术组,海马神经细胞凋亡率显著高于假手术组,海马组织JAK、p-JAK、STAT...     

大鼠脑缺血再灌注后Caspase-3、Bcl-2和Bax的表达

目的探讨大鼠脑缺血再灌注后caspase-3、Bcl-2和Bax在脑皮质神经元中的表达。方法将动物随机分为假手术组及缺血组,参照zea longa线栓法建立大鼠左侧大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型,各组大鼠分别在左侧MCAO2h再灌注不同时间点断头取脑,脑皮质神经元中caspase-3、Bcl-2和Bax的表达通过免疫组化法来测定。结果缺血组大鼠脑皮质caspase-3的表达较假手术组显著增强(P<0.01),缺血组大鼠脑皮质Bcl-2的表达较假手术组显著增强(P<0.01),缺血组大鼠脑皮质Bax的表达较假手术组显著增强(P<0.01)。结论短暂性脑缺血再灌注上调脑皮质神经元中caspase-3和Bax的表达促细胞凋亡,上调脑皮质神经元中Bcl-2的表达抗细胞凋亡。     

三七及其应用时间对急性脑出血大鼠脑水肿、脑血肿体积和脑组织Blc-2表达的影响

目的 探讨三七及其应用时间对急性脑出血大鼠脑水肿、血肿体积和脑组织Blc-2表达的影响.方法 应用自体血注射建立脑出血大鼠模型并随机分为脑出血后即刻给药组、第1 d给药组、第2 d给药组、第3 d给药组、第5 d给药组、第7 d给药组及对照组;在相应时间给予各组大鼠三七颗粒溶液灌胃,每日2次;制模后第8 d观察各组大鼠脑组织含水量、血肿体积及血肿周围脑组织Bcl-2的表达.结果 除即刻给药组外,各给药组大鼠脑组织含水量、血肿体积明显小于对照组(均P<0.01);第3 d给药组明显小于其他给药组(均P<0.01).与对照组相比,各给药组大鼠脑组织Bcl-2表达明显增高(均P<0.01),第3 d给药组明显高于其他给药组(均P<0.01).结论 急性脑出血后第3 d给予三七干预对减轻脑水肿、减少血肿体积效果最好.提高脑组织Bcl-2蛋白表达可能是三七减轻脑出血后脑损害的机制之一.     

ATRA诱导胶质瘤C6细胞凋亡过程中Bcl-2和Caspase-3表达的研究

目的研究全反式维甲酸（ATRA）诱导胶质瘤C6细胞凋亡过程中Caspase-3和Bcl-2表达情况,探讨ATRA诱导胶质瘤C6细胞凋亡的机制。方法用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法绘制ATRA不同浓度不同时间（6、12、24、48、72h）对胶质瘤C6细胞作用后细胞生长曲线,逆转录酶-多聚酶链反应（RT—PCR）检测凋亡相关基因Bcl-2和Caspase-3 mRNA水平的表达变化影响,Western blot分析Caspased和Bcl-2在胶质瘤C6细胞中的表达情况。结果胶质瘤C6细胞经ATRA诱导后,细胞的增殖明显受到抑制,通过RT-PCR结果证实Bcl-2 mRNA在ATRA作用下明显呈低表达而Caspase-3 mRNA的表达随时间延长逐渐增高,Western blot检测结果显示ATRA作用后,下调凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达并激活了凋亡蛋白Caspase-3的表达。结论ATRA对胶质瘤C6细胞的增殖具有抑制作用。     

脑出血灶周组织Bax、Bcl-2的表达与神经元凋亡关系的实验研究

目的 检测脑出血灶周组织Bax、Bcl-2的表达,探讨与神经元凋亡的关系。方法 对健康家犬30只在DSA介入下刺破大脑中动脉制作脑出血模型,选择出血后6h、12h、24h、48h、72h及96h共6个时间点,每点5只,均于相应时间点处死后取脑．检测出血灶周Bax、Bcl-2及神经元凋亡的表达。结果 Bax及神经元凋亡的表达均于48h达高峰,至96h皆明显下降（与48h比较。P〈0．01）;Bcl-2出血后72h达高峰,至96h末见明显下降（与72h比较,P〉0．05）;Bax的表达与神经元凋亡呈正相关（P〈0．05）;Bcl-2与神经元凋亡的表达出血后48h前均呈正相关（P〈0．05）,48h后均呈负相关倾向,但无统计学差异（P〉0．05）。结论 Bax及Bel-2 参与了ICH后出血灶周神经元凋亡的过程,前者诱导和加重了神经元凋亡,后者有抑制凋亡作用,但显示其强度不足。     

人脑出血后海马神经元损伤与Caspase-3的关系

目的　研究人脑出血后海马神经元损伤与凋亡促进因子Caspase- 3之间的关系。方法　选取10例因脑出血而死亡的尸检脑标本,应用HE染色,Caspase- 3免疫组织化学染色和Caspase- 3m RNA原位杂交,观察脑出血时海马CA1 区神经元损伤变化与Caspase- 3表达之间的关系。结果　海马CA1 区,出血5 h可检测Caspase- 3免疫组化染色的阳性细胞(10 .4个/高倍视野) ,2 2～4 8h时达高峰(2 1.7～2 4 .3个/高倍视野)。Caspase- 3m RNA原位杂交阳性表达始于5 h(6 .75个/高倍视野) ,2 4 h达高峰(14 .6 0～18.30个/高倍视野) ;二者均在72 h后呈明显下降趋势。出血2 4 h,可检测到TUNEL阳性细胞,持续至72 h。Caspase- 3m RNA与Caspase- 3呈正相关,相关系数为0 .717(P<0 .0 5 )。4～16 h受损神经元形态基本正常,2 4～4 8h细胞凋亡特征明显,72 h后,几乎所有神经元形态呈现严重病理变化。结论　人脑出血后海马神经元发生一系列形态学变化,其演变规律与凋亡促进因子Caspase- 3有密切相关性。     

胰岛素对大鼠脑缺血再灌注后Caspase-3表达及细胞凋亡的影响

目的探讨胰岛素对大鼠脑缺血再灌注后Caspase-3表达及细胞凋亡的影响。方法将动物随机分为假手术组、缺血组及干预组,参照zea longa线栓法建立大鼠左侧大脑中动脉闭塞（mid-dle cerebral artery occlusion,MCAO）再灌注模型,干预组大鼠在脑缺血即刻给予胰岛素及葡萄糖腹腔注射,分别在左侧MCAO2h再灌注不同时间点断头取脑,脑皮质神经元Caspase-3的表达通过免疫组化法来测定,并采用TUNEL法原位标记DNA片段,检测TUNEL阳性细胞的变化。结果缺血组大鼠脑皮质Caspase-3的表达较假手术组显著增强（P〈0.01）,TUNEL阳性细胞数较假手术组显著增多（P〈0.01）;给予胰岛素处理后,Caspase-3的表达较缺血组明显减弱（P〈0.01）,TUNEL阳性细胞数较缺血组明显减少（P〈0.01）,但两者均显著高于假手术组（P〈0.01）。结论短暂的脑缺血再灌注可导致脑皮质神经元Caspase-3的表达增加,促进细胞凋亡,胰岛素可下调脑皮质神经元Caspase-3的表达,发挥神经保护作用。     

亚低温对大鼠脑创伤后海马区凋亡相关蛋白表达的影响

目的观察亚低温对大鼠创伤性脑损伤(TBI)后海马CA3区细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2、Bax及Caspase-3表达的影响,探讨亚低温脑保护的分子生物学机制.方法将大鼠随机分成假手术、单纯脑损伤和脑损伤后亚低温治疗3组,应用改良Marmarou方法制作大鼠TBI模型,分别用流式细胞仪(FCM)和免疫组化法检测各组动物脑海马CA3区细胞凋亡率和Bcl-2、Bax及Caspase-3蛋白的表达.结果与假手术组相比,大鼠TBI后海马CA3区细胞凋亡率及Caspase-3表达增高(P<0.05),Bcl-2/Bax表达比下降(P<0.05).亚低温治疗后,大鼠脑海马CA3区细胞凋亡率及Caspase-3表达较单纯脑损伤组降低(P<0.05),而Bcl-2/Bax表达比升高(P<0.05).结论亚低温对TBI的脑保护作用机制可能与干预伤后凋亡相关基因表达并减少神经细胞凋亡有关.     

实验性脑出血大鼠脑内Caspase-3mRNA的表达作用研究

目的动态观察实验性脑出血大鼠脑内血肿周围神经细胞凋亡情况和Caspas-3蛋白及mRNA表达水平的变化,探讨脑H{血后血肿周围神经细胞损伤机制。方法健康雄性Wistar大鼠随机分为生理盐水对照组、假手术组和脑出血模型组,分为术后3h,6h,12h,24h,48h,3d,5d,7d共8个时相点,采用尾状核注射自体非抗凝动脉血复制大鼠脑出血模型,术后制作冰冻切片,对切片进行TUNEL染色,以及Caspase-5免疫组化和原位杂交染色,之后利用图像分析仪,观察阳性细胞数。结果脑出血后3h血肿周围尚无凋亡细胞出现,6h有凋亡发生,以后逐渐增多,3d达高峰后逐渐下降,生理盐水对照组仅有少量TUNEL阳性细胞。假手术组及生理盐水对照组3h无Caspase-3蛋白和mRNA表达,生理盐水对照组6h以后有少量表达,脑出血模型组在6hCaspase-3蛋白和mRNA开始表达,3d时Caspase-3的蛋白达到高峰,5d以后逐渐下降,24hCaspase-3mRNA表达达高峰,5d以后逐渐下降。脑出血后血肿周围脑组织Caspase-3蛋白的表达与TUNEL阳性细胞数呈正相关（r=0．515,P〈0．05）;Caspase-3蛋白表达与mRNA表达呈正相关（r=0．625,P〈0．05）。结论脑出血后血肿周围神经细胞损伤有凋亡机制参与,在出血后6h发生凋亡,第3天达高峰。Caspase-3的表达在Caspase-5蛋白水平变化趋势与脑m血后细胞凋亡的趋势一致,Caspase-3的mRNA水平的表达高峰时间先于Caspase-3蛋白的表达及凋亡的发生,提示Caspase-3的表达决定脑出血后细胞凋亡的发生,在脑出血后细胞凋亡中起促进作用。     

脑出血后灶周组织形态和焦亡相关蛋白表达水平的研究

目的 观察自发性脑出血后血肿周围脑组织内神经胶质细胞的组织形态学特点及焦亡相关蛋白caspase-1、IL-18和IL-1β的表达水平变化。方法 高血压性脑出血死亡者(发病后3Symbol～A@33h死亡)的全脑标本5例,出血侧为实验组,非出血侧为对照组; 血肿周围的脑组织(1×1×0.3 cm³)的石蜡切片行常规H&E染色及caspase-1、IL-18和IL-1β蛋白的免疫组化染色,光学显微镜下观察脑组织内神经胶质细胞的组织形态特点及caspase-1、IL-18和IL-1β蛋白的表达水平变化,计数阳性细胞的数量,析因设计的方差分析和费舍尔最小显著差异确定显著性水平。结果 血肿周围脑组织内的神经胶质细胞胀大,核质凝集、碎裂和溶解; caspase-1、IL-18和IL-1β蛋白表达在神经胶质细胞、血管内皮细胞和壁细胞的胞浆内,IL-18和IL-1β蛋白还同时表达在上述细胞的细胞外基质内; caspase-1、IL-18和IL-1β蛋白表达明显增强,阳性细胞显著增多(P Symbol|@@0.01)。结论 自发性ICH后血肿周围脑组织内的神经胶质细胞胀大,核质凝集、碎裂和溶解; caspase-1、IL-18和IL-1β蛋白表达水平显著上调。这提示神经胶质细胞的焦亡途径被启动,其可能是脑出血后脑组织继发性损伤的机制之一。     

不同频次腹腔注射促红细胞生成素对脑缺血急性期大鼠海马神经元保护作用的比较

目的探讨最佳的促红细胞生成素(EPO)给药频次,更有效地保护脑缺血急性期大鼠海马神经元。方法将80只雄性SD大鼠随机分为3组:正常组、模型组、治疗组。除正常组外,其余2组均制成脑缺血再灌注模型;治疗组又分为3个亚组,各亚组之间EPO给药方法相同(腹腔注射)、剂量也相同(3000IU/kg),仅给药频次不同,3次给药组为缺血即刻给1次,缺血再灌后4h给1次,以及缺血再灌后12h给1次;2次给药组为缺血即刻给1次、缺血再灌4h给1次;1次给药组仅为缺血即刻给1次。以上5组大鼠均在缺血再灌24h后制作标本,分别用于HE染色观察病理形态变化、免疫组化染色分析海马Bcl-2、Bax表达;另外用Western Blot测定海马组织Caspase-3的表达。结果 3个亚组对比模型组,Bax表达量显著下降(P<0.05);2次给药组对比模型组,Bcl-2的表达量明显升高(P<0.05);2次给药组与3次给药组对比模型组Caspase-3的表达量显著下降(P<0.05)。结论 EPO能够通过抑制凋亡来保护海马神经元,并且2次给药组具有明显的优势,由此可知,2次给药组接近最佳的给药方法。