超声引导下应用平阳霉素治疗面颈部静脉畸形75例疗效分析

目的:评价超声引导下应用平阳霉素病变内注射治疗面颈部静脉畸形的疗效。方法:75例面颈部静脉畸形患者,其中面部54例,颏下区8例,下颌下区10例,颈部3例。病变最大32mm×39mm,最小6mm×9mm。观察在超声引导下采用平阳霉素病变内注射法的治疗效果及并发症。结果:平均每例患者接受1.64次治疗,其中1次42例,2次21例,3次9例,4次3例。按疗效标准进行疗效判定,治愈63例(84%),基本治愈10例(13.33%),好转2例(2.67%),无效0例(0%),治愈和基本治愈率为97.33%,治疗有效率达100%。治疗后71例(占94.67%)患者出现肿胀,2例(占2.67%)出现一过性头晕,未发现其他并发症。结论:超声引导下病变内注射平阳霉素治疗面颈部静脉畸形安全有效。     

平阳霉素对源于人静脉畸形的内皮细胞增殖和黏附分子表达的影响

目的:观察平阳霉素对体外培养的源于人静脉畸形的内皮细胞(humanvenousmalformationsendothelialcells,HVMECs)增殖和黏附分子表达的影响。方法:采用MTT法检测不同质量浓度平阳霉素(0.01～100μg/ml)作用不同时间(1、6、12、24h)后对HVMECs的增殖抑制率,利用细胞免疫化学及细胞ELISA法检测不同质量浓度平阳霉素作用不同时间后HVMECs黏附分子的表达。采用SPSS11.0统计软件包进行单因素方差分析。结果:平阳霉素的增殖抑制效应表现为剂量依赖性和时间依赖性。未受刺激的HVMECs不表达E-selectin(CD62E)及vascularcelladhesionmolecule-1(CD106)。10μg/ml及100μg/ml平阳霉素明显抑制HVMECs的增殖,未诱导出CD62E及CD106的表达。0.1～1μg/ml平阳霉素诱导HVMECs表达CD62E,而0.5～1μg/ml平阳霉素诱导出CD106的表达,此质量浓度对HVMECs增殖的抑制不明显。结论:平阳霉素增殖抑制表现出剂量和时间依赖效应。低质量浓度平阳霉素不明显抑制HVMECs的增殖,诱导出CD62E和CD106的表达,可能在平阳霉素治疗静脉畸形所引发的炎症反应中起着重要作用。     

Effect of sildenafil on proliferation of human lymphatic malformations endothelial cells

目的探讨西地那非对体外培养的人淋巴管畸形内皮细胞（human lymphatic malformations endothelial cells,HLMECs）增殖的影响及可能机制。方法用组织块培养法对人淋巴管畸形内皮细胞进行体外培养;免疫细胞化学行CD-31、LYVE-1染色鉴定;采用第3代细胞进行后续研究,不同浓度的西地那非（1、2、5、10 μmol/L）作用后,应用倒置显微镜观察HLMECs形态的变化,MTT比色法和EdU染色法检测对细胞增殖的影响,Western 免疫印迹检测血管内皮细胞生长因子C（VEGFC）及其受体VEGFR-3表达的变化。采用SPSS 21.0软件包对数据进行独立样本 t 检验、单因素方差分析和 LSD 检验。结果组织块培养法所获细胞染色显示CD31及LYVE-1呈阳性;西地那非作用后细胞形态改变,密度降低;MTT及EdU染色显示,西地那非作用浓度在2 μmol/L时细胞增殖受到明显抑制（P<0.05）;Western 免疫印迹显示,VEGF-C及VEGFR-3表达水平显著下调（P<0.05）。结论西地那非对体外培养的人淋巴管畸形内皮细胞具有增殖抑制作用,其机制可能与调节VEGFC/VEGFR-3的表达有关。     

牙龈卟啉单胞菌对脐静脉血管内皮细胞产生sICAM-1的影响

目的：观察牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,P.gingivalis)对人类脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)产生可溶性细胞间粘附分子－1（soluble intercellular adhesion molecule-1,sICAM-1)的影响。方法：应用厌氧袋法培养P.gingivalis，并用其感染HUVECs，采和酶联免疫吸附实验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定培养上清中sICAM-1的含量，结果：HUVECs基础表达少量的sICAM-1;P.gingivalis剂量依赖性增强HUVECs产生sICAM-1蛋白的水平；紫外线、超声波和65℃的热处理都不能抑制P.gingivalis的作用；sICAM-1蛋白水平在P.gingivalis刺激后的4h未见改变，增高的作用从刺激后的8h开始，在12h,16h和20h继续增加。结论：活的和灭活的P.gingivalis都剂量依赖性和时间依赖性地增强HUVECs产生sICAM-1,P.gingivalis可能同样诱导牙龈血管内皮细胞表达sICAM-1，升高的sICAM-1可能参与调节牙周病炎症反应和免疫反应过程。     

脐静脉内皮细胞外泌体和内皮祖细胞外泌体对hDPSCs增殖及迁移能力的比较研究

目的 将人脐静脉内皮细胞外泌体(human umbilical vein endothelial cells-derived exosome,HUVECs-exo)和内皮祖细胞外泌体(endothelial progenitor cells-derived exosome,EPCs-exo)对人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells,hDPSCs)增殖和迁移能力的影响进行比较研究,以期为外泌体在牙髓再生中的应用积累经验。方法 采用超速离心法分离提取外泌体,透射电镜观察外泌体形态,纳米粒子跟踪分析技术(nanoparticle tracking analysis,NTA)检测外泌体粒径大小,Western blot蛋白印迹检测外泌体标志蛋白CD9、CD63、TSG101的表达。将两种外泌体按照5、10、20 μg/mL浓度梯度分别作用于hDPSCs,通过CCK-8实验检测hDPSCs增殖能力,细胞划痕实验和Transwell实验检测hDPSCs迁移能力。结果 透射电镜下观察两种外泌体均呈圆盘状,粒径集中在30～150 nm,阳性表达CD9、CD63、TSG101三种标志蛋白。与对照组(Control组)相比,两种外泌体在不同浓度下均对hDPSCs增殖能力无显著促进作用,差异无统计学意义(P>0.05)。细胞划痕实验和Transwell实验表明,与对照组相比,两种外泌体均可促进hDPSCs迁移,差异有统计学意义(P<0.05),其中10 μg/mL外泌体浓度作用效果最明显(P<0.01)。相同浓度的两种外泌体组间作用效果差异无统计学意义(P>0.05)。结论 本实验成功分离提取到两种细胞来源的外泌体并进行鉴定,将不同浓度的两种细胞来源的外泌体作用于hDPSCs,发现对其增殖能力无明显促进作用,但可以促进其迁移,尤以10 μg/mL外泌体浓度促进迁移效果最为明显。     

浓缩生长因子促人脐静脉血管内皮细胞成血管化作用研究

目的 研究浓缩生长因子（CGF）对人脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）的增殖、迁移和分化的作用。方法 取健康志愿者静脉血制成CGF,再用CGF制备浓缩生长因子提取液（CGFe）。体外培养细胞分为2%CGFe组、5%CGFe组、10%CGFe组和对照组。CCK-8和细胞周期实验检测各组细胞增殖活性;划痕实验检测内皮细胞迁移;实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测各组细胞血管内皮生长因子（VEGF）、趋化因子受体4（CXCR4）、血小板衍生因子（PDGF）mRNA表达量。结果 CCK-8法和细胞周期结果显示CGFe明显促进细胞增殖（P<0.05）,且增殖效应呈CGFe浓度依赖性,各组间均有统计学差异（P<0.05）;划痕实验中12 h时实验组划痕愈合效率明显高于对照组,且愈合效率与CGFe浓度呈正比（P<0.05）;CGFe明显促进VEGF、CXCR4、PDGF的mRNA表达量,促进效应与浓度呈正比（P<0.05）。结论 CGFe能有效促进HUVECs的增殖、迁移和成血管分化。     

肿瘤坏死因子α对体外培养人牙囊细胞血管内皮生长因子表达的影响

目的研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)对体外培养人牙囊细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法原代培养人牙囊细胞,传代至第4代,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)及酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测TNF-α对体外培养人牙囊细胞VEGF mRNA表达及上清液中VEGF含量改变的浓度和时间效应。结果①不同浓度TNF-α作用1h后,TNF-α处理组人牙囊细胞VEGF mRNA表达均较对照组增强(P<0.05),最佳效应浓度为25ng/ml;不同浓度TNF-α作用12h后,除1ng/ml组外,其余各组上清液中VEGF蛋白含量明显高于对照组(P<0.05)。②在时间效应上,25ng/mlTNF-α作用1h后人牙囊细胞VEGF mRNA表达最强,然后随时间延长其表达逐渐下降,但仍强于对照组(P<0.05);细胞培养上清液中VEGF蛋白含量随时间延长逐渐增加,但TNF-α处理组VEGF蛋白含量高于对照组(P<0.05)。结论TNF-α能够促进体外培养人牙囊细胞合成并分泌VEGF。     

多粘菌素B和热处理对牙龈卟啉单胞菌诱导ECHUV产生sICAM-1的影响

目的：观察多粘菌素B和热处理对牙龈卟啉菌诱导人类脐静脉血管内皮细胞（endothelial cells of human umbilical vein,ECHUV）产生可溶性细胞间粘附分子－1（soluble intercellular adhesion molecule-1,sICAM-1）的影响，以探讨P．gingivalis诱导ECHUV产生sICAM-1的有效部位。方法：采用酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）测定培养上清中sICAM-1的含量。结果：P.gingivalis、大肠杆菌脂多糖（LPS）和肿瘤坏死因子－α（TNF－α）强烈诱导ECHUV产生sICAM-1，多粘菌素B明显抑制大肠杆菌LPS的诱导作用，热处理完全废除了TNF－α的作用，而这两种方法都不能降低P.gingivalis对ECHUV产生sICAM-1的影响。另外，P.gingivalis毒力株W83的诱导强度明显高于非毒力株ATCC33277。结论：P.gingivalis可能通过LPS以外的耐热的有效位点诱导ECHUV产生sICAM-1，这一位点可能与P.gingivalis的有效毒力因子有关。     

口腔癌相关成纤维细胞对人淋巴管内皮细胞增殖、迁移、侵袭、成管的影响

目的 研究口腔癌相关成纤维细胞（CAFs）在口腔鳞状细胞癌淋巴管生成过程中的作用。方法 通过组织块法分离、培养口腔鳞状细胞癌患者的CAFs和正常成纤维细胞（NFs）,免疫组织化学染色鉴定CAFs和NFs。利用24孔的transwell细胞培养室分别将CAFs（实验A组）、NFs（实验B组）与人淋巴管内皮细胞（HLEC）共培养,以DMEM高糖培养基作为空白对照组,在倒置相差显微镜下观察各组HLEC的增殖、迁移、侵袭、成管能力。结果 培养96、144、192 h,实验A组HLEC的数目均多于实验B组和空白对照组,实验B组多于空白对照组（P<0.01）。培养96 h后,实验A组HLEC的迁移和侵袭数目均多于实验B组和空白对照组,实验B组多于空白对照组（P<0.01）。培养24 h后,实验A组HLEC的成管数目多于实验B组和空白对照组,实验B组多于空白对照组（P<0.01）。结论 口腔CAFs促进了HLEC的增殖、迁移、侵袭和成管作用,并且CAFs的促进作用大于NFs。