蛹虫草菌株原生质体的制备方法试验研究

蛹虫草具有与冬虫夏草极相似的药理作用,可作为冬虫夏草代替品.本试验以蛹虫草菌株CM-1为出发菌株,结果表明蛹虫草菌原生质体制备的快速简便方法为:菌体液体培养96h,用0.6 mol/L甘露醇溶液作为渗透压稳定剂,取1g菌丝体以1∶20比例加入复合酶液,在pH6.8、28℃条件下酶解2.5h,获得原生质体数最多,达到5.08 × 108个/mL;原生质体再生培养基为含0.6 mol/L甘露醇PDA培养基,原生质体再生率最高为4.69％.     

吖啶橙诱变提高蛹虫草虫草素含量的研究

蛹虫草的活性成分与冬虫夏草基本相同,常被用作冬虫夏草的替代品。虫草素是虫草属特有的次生代谢产物,具有很高的药用价值。为提高虫草素含量,应用吖啶橙对蛹虫草无性型孢子进行诱变,筛选虫草素含量高的突变菌株,并对获得的稳定遗传的突变株进行再诱变,经二次诱变得到的突变菌株其虫草素含量可达290.60mg/L,比初发菌株提高了7.4倍。     

利用原生质体诱变筛选植酸酶高产菌株

对产植酸酶的纯化黑曲霉用混合酶制取原生质体进行了研究。研究发现,经诱变后的原生质体在再生过程中菌落形态发生了明显变化,从中选育出了一株植酸酶的高产菌株,并对其遗传稳定性进行了鉴定。     

蛹虫草中虫草素、腺苷综合提取工艺研究

以蛹虫草为材料,采用超声波水提法、超声波醇提法、水热回流法和醇热回流法4种提取方法,选择虫草素和腺苷的最优提取方法,并用正交试验方法考察超声波水提法中提取温度、提取次数、提取时间、料液比4个因素对虫草素、腺苷综合提取效率的影响,确定虫草素、腺苷综合提取最佳工艺。结果表明,超声波水提法是综合提取虫草素和腺苷的最优方法,其最佳工艺条件为:用10倍量的水于60℃超声波提取2次,每次40min。     

不同品种柞蚕蛹培育蛹虫草其性状与成分含量比较

选择5个不同品种柞蚕蛹培育蛹虫草,通过观察检测柞蚕蛹虫草的生产性状、主要成分含量及SOD酶活力,为培育高品质的柞蚕蛹虫草筛选出更适宜的柞蚕品种提供依据。不同品种柞蚕蛹培育的蛹虫草其生产性状、主要成分含量及SOD酶活力均有差异,其中582和抗大的僵化率均在95%以上,子实体数量及鲜草重也明显高于其他品种(P<0.01),分别为23.7根和9.15 g, 22.36根和9.07 g;氨基酸总量和必需氨基酸质量分数从高到低依次为抗大、582、9906、青一、988;虫草素含量最高的是582,达到1 435 mg/kg,其次是9906,为1 320 mg/kg;腺苷含量最高的是988,达到1 070 mg/kg,其次是抗大,为1 021 mg/kg;虫草酸含量由高到低依次为582、抗大、988、青一、9906;虫草多糖含量最高的是抗大,9906品种最低;582品种的蛹虫草中SOD酶活力最高,达到394.0 U/g,其次是抗大,为313.0 U/g, 988最低,为274.0 U/g。初步认为,培育柞蚕蛹虫草最好选择582、抗大或9906柞蚕品种,可以生产出更高品质的蛹虫草。     

蛹虫草不同菌株的栽培试验

对3个不同的蛹虫草菌株,进行菌落培养、液体菌种培养和子实体栽培试验,比较不同菌株菌丝生长状况、子实体产量和质量等方面的差异。结果表明:菌株B1菌丝生长速度最快,菌丝产量高,子实体产量高,且子实体粗长均匀,颜色桔黄,具有较高的经济价值,可作为生产用菌株。     

蛹虫草退化菌株的研究进展

蛹虫草是一种具有药用兼食用的经济真菌,在国内外广泛用作天然药物和民间滋补食品。蛹虫草菌株在继代培养以及保藏过程中非常容易退化,是目前蛹虫草行业急需解决的难题。本文阐述了蛹虫草菌株退化后生物学特征的变化,以及引起退化的原因和防治措施,以期对今后蛹虫草菌株的退化机理研究有所启发,为甄别蛹虫草退化菌株提供依据。     

不同培养基培育蛹虫草中的虫草素和腺苷含量测定

虫草素和腺苷是蛹虫草的重要活性成分,通过高效液相色谱(HPLC)法测定不同培养基培育蛹虫草中的虫草素和腺苷含量,筛选能生产高品质蛹虫草的培养基。测定结果表明,用不同培养基培育的蛹虫草子实体中,其虫草素和腺苷含量存在显著差异,总体表现为粳米+家蚕蛹浸提液培养基>糯米+家蚕蛹浸提液培养基>粳米培养基>糯米培养基,其中用粳米+家蚕蛹浸提液培养基培育蛹虫草子实体中的虫草素和腺苷质量比分别高达15.37 mg/g和39.96 mg/g。此外,相同培养基培育的蛹虫草子实体、菌丝体和培养基质中的虫草素与腺苷含量存在极显著差异,总体表现为子实体>菌丝体>基质。试验结果表明,粳米培养基中添加家蚕蛹浸提液可显著提高蛹虫草中的虫草素和腺苷含量。     

蛹虫草中虫草素差异表达基因cDNA的克隆

采用抑制差减杂交技术（Suppression Subtractive Hybridization，SSH）分离与虫草素合成相关的差异表达基因的cDNA片段，为克隆相关基因提供研究基础。对虫草素表达产生的差异进行基因水平的分析，做了双向调控的分析，即以高表达虫草素的突变型菌株作为检测子，以未作移码诱变处理的出发野生型菌株作为驱动子，同时，以未作移码诱变处理的出发野生型菌株作为检测子，以高表达虫草素的突变型菌株作为驱动子。经过消减杂交后得到一组正调控基因片段的克隆，并对该组克隆进行了序列测定。     

利用一化性柞蚕蛹培育蛹虫草的生产技术

河南省柞蚕区利用一化性柞蚕蛹可常年培育蛹虫草。介绍了培育蛹虫草所需的基础设施要求,概述了菌种的制备过程和蛹虫草的培育技术。     

利用一化性柞蚕蛹培育蛹虫草的试验初报

河南省是一化性柞蚕的适生地,柞蚕蛹资源丰富,可常年培育蛹虫草。试验表明,利用一化性柞蚕的滞育蛹培育蛹虫草,蛹体僵化的快慢与菌种的形态、菌液的稀释倍数、接种剂量有关;蛹体僵化和子实体生长的适宜温度18～27℃。     

植酸酶高产菌株的紫外线-空气等离子体复合诱变选育

利用紫外线、空气等离子体对植酸酶产生菌A.niger0002进行复合诱变选育,选育出植酸酶高产菌株A.nigerUD-025,酶活力达到9.63U/mL,是出发菌株的3.38倍。实验表明,应用空气等离子体诱变选育微生物切实可行。     

紫外链霉素复合诱变选育高产surfactin菌株研究

Surfactin是芽孢杆菌产生的一种抗菌脂肽,在畜牧养殖中有替代抗生素的潜力。野生菌株代谢产生surfactin能力弱,限制了surfactin的开发使用,为提高Bacillus subtilis S21产surfactin的能力,以B.subtilis S21为出发菌株,采用紫外链霉素复合诱变,以期得到高产surfactin菌株。诱变筛选结果表明:经过复合诱变筛选,得到了诱变菌株38',其传代8次后的遗传稳定菌株,surfactin产量为0.28 mg/mL,比出发菌B.subtilis S21的surfactin产量提升了9.33倍,取得较佳的诱变效果。     

纤维素酶高产菌株的选育

从土样中分离筛选出12株产纤维素酶能力较强的菌株。经摇瓶发酵复筛,获得产纤维素酶活较高且稳定的菌株F6,其CMC酶活为887 U/mL,滤纸酶活为210.72 U/mL。以该菌株为出发菌株,经紫外线诱变处理,获得纤维素酶高产菌株4-2-2。将菌株4-2-2摇瓶发酵4 d后,产CMC酶活达3171.598 U/mL,滤纸酶活达1827.372 U/mL,分别比出发菌株提高3.58倍和8.67倍。     

紫外线—氯化锂复合诱变选育泰妙菌素高产菌株

目的 筛选泰妙菌素高产菌株。方法 以TMⅡ09—003为出发菌株,经UV照射180s后,将菌悬液均匀的涂布于加有0.8%的氯化锂平板上,在避光条件下于温度26℃～27℃,湿度60%～65%的环境下培养成熟后,进行挑取单菌落、初筛、复筛。以HPLC法测化学效价。结果 经UV照射180s后,氯化锂加量为0.8%剂量对菌株的致死率为88.6%。对用此剂量处理获得的诱变菌株进行了筛选,最终获得4支高产菌株,分别为：TMⅡ09—236、TMⅡ09—253、TMⅡ09—441和TMⅡ09—447。     

蛹虫草培养残基中虫草素的水热回流提取及含量测定

【目的】 探究水热回流法提取蛹虫草培养残基中活性成分虫草素的最佳工艺参数。【方法】 选取液料比、提取次数、提取温度、提取时间4个因素进行单因素试验和正交试验,并通过高效液相色谱法（HPLC）测定虫草素含量,确定水热回流法提取蛹虫草培养残基的最佳工艺参数。【结果】 方法学验证结果表明,蛹虫草培养残基中虫草素含量的HPLC测定方法精密度、重复性、稳定性相对标准偏差（RSD）均<2%,准确度RSD为2.64%,标准曲线线性相关性高。正交试验结果显示,影响水热回流法提取效果的因素依次为提取时间、提取次数、液料比、提取温度,其中提取时间和提取次数对提取物虫草素含量均有显著影响（P<0.05）,提取温度和液料比影响不明显（P>0.05）。单因素试验和正交试验结果表明,蛹虫草培养残基的最佳提取工艺参数为：液料比25：1、提取次数5次、提取温度70 ℃、提取时间60 min,该提取条件下测得蛹虫草培养残基中虫草素含量为1.48 mg/g。【结论】 采用本研究确定的水热回流法最佳工艺参数能有效提取蛹虫草培养基活性成分,且操作简单实用,提取物活性成分得率稳定,为后续蛹虫草培养残基产品开发提供参考依据。     

采用固相分离与反相色谱法制备柞蚕蛹虫草虫草素

虫草素是蛹虫草中具有药用功能的活性成分。采用超声波技术获得柞蚕蛹虫草虫草素萃取液后,利用固相萃取柱对虫草素进行预分离,再利用反相制备型高效液相色谱监测制备虫草素。试验结果表明,采用固相萃取柱可以高效地分离柞蚕蛹虫草萃取液中的虫草素,虫草素洗脱液中的虫草素质量分数达47.05%,经反相高效液相色谱监测制备的虫草素样品纯度达到99%以上,其萃取、分离、制备工艺简单,具有实用价值。     

利用蚕虫草培育过程的优化以提高虫草素产量的研究进展

蚕虫草是冬虫夏草的最佳替代品之一,其虫草素的含量高于冬虫夏草中虫草素的含量,而虫草素具有重要的药用价值,如何提高虫草素的产量一直是研究者关心的问题之一.本文基于过去的相关研究,对利用蚕虫草培育过程的优化来提高虫草素产量的具体方法进行阐述、分析、总结和讨论.     

蚕体和蛹粉代料培养基上的蛹虫草生长状况与品质检测

在实验室条件下以优选的蛹虫草菌株YCC-XD-2在家蚕蛹、蛾培养基和蛹粉代料培养基上培育蛹虫草,比较不同培养基上的蛹虫草的生长状况和虫草素含量,探究高产优质蛹虫草的培养方式。蛹虫草菌种在蚕体和蛹粉代料培养基上均生长良好,其中:蚕体培养基以蚕蛾培养基上的蛹虫草生长较好;蛹粉代料培养基以糯米+蛹粉培养基上的蛹虫草生长较好。蚕体培养基培育蛹虫草子实体中的虫草素含量显著高于蛹粉代料培养基培育的蛹虫草,其中,蚕蛾培养基培育蛹虫草子实体中的虫草素质量比高达21.97 mg/g。在相同培养条件下,蛹虫草子实体中的虫草素含量高于菌丝体和培养基质。试验结果表明,利用家蚕蛹、蛾培养基可以生产出高品质蛹虫草。