急性染铅对大鼠海马Ca~(2+)-CaMKⅡ信号通路影响

目的探讨急性染铅对大鼠海马Ca2+-Ca2+/钙调蛋白依赖蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)信号转导通路影响及作用机制。方法取30 d健康大鼠海马脑片分别用含醋酸铅(20μmol/L)及不含醋酸铅的人工脑脊液(ACSF)孵育,分对照组、谷氨酸组、CaMKⅡ抑制剂(KN-93)组、谷氨酸+醋酸铅组,培养30 min后收集脑片,用Western Blot方法检测谷氨酸组、KN-93组、铅组中环腺苷酸(cAMP)反应元件结合蛋白(CREB)的活性。结果染铅组于染铅0、120min时CREB活性分别为(0.305 6±0.020 8)和(0.172 2±0.023 3),随染铅时间延长明显降低;谷氨酸使磷酸化CREB活性提高47%,对非磷酸化CREB活性无影响;KN-93及谷氨酸+醋酸铅组CREB活性分别下降20%,45%,总量CREB表达无明显改变。结论急性铅中毒可能通过抑制CaMKⅡ活性影响下游信号分子,造成对学习记忆功能的损伤。     

APV对大鼠海马脑片铅及谷氨酸损伤保护作用

目的探讨D-2-氨基-5-膦酸基戊酸(APV)对海马脑片铅(Pb2+)及谷氨酸(Glu)损伤作用及其与脑海马细胞内钙离子浓度变化的关系。方法采用低浓度胰蛋白酶消化法分离大鼠海马细胞,实验设对照组,铅暴露、谷氨酸暴露组、APV干预组,以钙荧光探针Fura-2/AM测定海马细胞[Ca2+]i浓度;用2,3,5-氯化三苯四氮唑(TTC)染色法观察脑片损伤程度。结果 30μmol/L铅、100μmol/L谷氨酸暴露5 min后大鼠海马[Ca2+]i浓度[分别为(234.9±11.38)和(311.9±14.57)nmol/L]明显高于对照组[(109.6±5.37)nmol/L],差异有统计学意义(P0.05);100μmol/L APV组脑海马细胞内钙离子浓度升高抑制率分别为93.4%和98.2%;30μmol/L铅、100μmol/L谷氨酸暴露30 min后大鼠海马脑片损伤率分别为(40.78±3.21)%和(44.44±3.35)%;与铅暴露组、谷氨酸暴露组比较,APV干预组海马脑片损伤率[分别为(4.05±0.67)%、(16.08±1.23)%]明显下降,差异有统计学意义(P0.05)。结论 APV对离体海马脑片Pb2+及谷氨酸损伤具有保护作用,其机制可能与APV抑制Pb2+及谷氨酸诱发海马细胞[Ca2+]i升高、减轻钙超载的细胞毒性作用有关。     

慢性染铅对海马CA1区LTP及ERK2活性影响

目的　探讨慢性染铅对海马CA1区LTP及ERK2活性的影响。方法　用同心圆电极刺激海马的Schaffer侧支 ,于CA1区用细胞外玻璃电极记录单脉冲刺激引起的群峰电位 (PS) ,观察对照组和染铅组大鼠于高频刺激后PS幅值的变化 ;同时利用WesternBlots方法检测海马CA1区ERK2的活性。结果　HFS前记录的对照组和染铅组的PS幅值无显著性差异 ;HFS后染铅组的PS平均幅值与对照组相比下降了 79% (P <0 0 1) ;染铅组CA1区的ERK2的活性比对照组下降了 2 4 1% (P <0 0 1)。结论　慢性染铅可抑制CA1-LTP的形成 ,同时这种抑制与铅对ERK2活性抑制密切相关     

蛋氨酸胆碱对铅染毒大鼠CaMKⅡ和CREBmRNA及蛋白表达的影响

目的 研究蛋氨酸胆碱对铅暴露大鼠海马CaMKⅡ和CREB mRNA和蛋白表达的影响.方法 将断乳健康SPF级雄性SD大鼠分为空白对照组、染铅组(0.4 g/L乙酸铅饮水染毒)、蛋氨酸胆碱组(1:1,400 mg/kg)、铅+低剂量蛋氨酸胆碱组和铅+高剂量蛋氨酸胆碱组.铅+低、高剂量蛋氨酸胆碱组在染铅的同时,经灌胃分别给予低、高剂量(100、400 mg/kg)蛋氨酸胆碱混合溶液(1:1),8周后取大鼠海马组织,用实时聚合酶链反应(PCR)法测定CaMKⅡ和CREB mRNA的表达水平,免疫印迹(Western blot)法测定CaMKⅡ、CREB和pCREB蛋白含量.结果 染铅组大鼠海马CaMKⅡI和CREB mRNA的表达水平(0.743±0.185,0.729±0.199)均明显低于空白对照组(0.950±0.238,0.901±0.232),CREB和pCREB蛋白表达量( 0.271±0.045,0.212±0.058)低于空白对照组(0.319±0.058,0.506±0.125),差异均有统计学意义(P＜0.05);给予低、高剂量蛋氨酸胆碱后染铅大鼠海马CaMKⅡ mRNA表达水平(1.014±0.210,1.126±0.379)和CREB mRNA表达水平(1.029±0.335,0.932±0.251)均明显高于染铅组,差异有统计学意义(P＜0.05),铅+高剂量蛋氨酸胆碱组CREB和pCREB蛋白表达量(0.407±0.951,0.563±0.178)明显高于染铅组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 蛋氨酸胆碱可以拮抗铅对海马CaMKⅡ和CREB mRNA和蛋白表达的抑制作用.     

孤独症鼠模型脑组织CaMKⅡ和ERK表达的相关研究

目的探讨钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)和细胞外信号调节激酶(ERK)在孤独症谱系障碍发病中的作用。方法孕12.5 d Sprague-Dawley孕鼠腹腔注射丙戊酸钠600mg/kg建立子代孤独症谱系障碍模型大鼠,对照组注射同等剂量生理盐水。利用HE染色、免疫组化和图像分析技术观察比较出生后1、7、14d和28d两组大鼠脑部CaMKⅡ、ERK表达情况。结果 HE染色:出生后1d、7d模型组神经元数量较少,出生14d后剧增,出生后28d仍高于对照组。免疫组化:出生后1~14d两组CaMKⅡ、ERK表达均显著升高(P0.001),出生28d后表达趋于稳定(P0.05);与对照组相比,模型组各日龄大鼠CaMKⅡ、ERK表达水平均增高(P0.001);CaMKⅡ、ERK于出生后1d、7d表达显著升高(P0.001),出生后14d表达量最多(P0.001),出生28d后趋于稳定(P0.05)。结论孤独症谱系障碍模型大鼠大脑皮层CaMKⅡ、ERK的表达增加,尤其是在出生后早期。     

微波辐射对大鼠海马神经元损伤作用

目的 观察高功率微波(HPM)辐射后原代培养大鼠海马神经元中钙-钙调蛋白依赖蛋白激酶(Ca2 /calmodulin-dependent protein kinase Ⅱ,CaMKⅡ)的变化及其意义.方法 采用30 mW/cm2 HPM辐射原代培养大鼠海马神经元,于辐射后1 h,采用免疫细胞化学等方法观察海马神经元中磷酸化-CaMK Ⅱ(p-CaMKⅡ)的变化.结果 30 mW/cm2 HMP辐射后1 h,大鼠海马神经元细胞形态有所改变,部分细胞胞体略萎缩,胞浆减少,突起变细,长度变短;免疫细胞化学结果显示,同假辐射组比较,辐射组大鼠海马神经元胞浆中棕黄色颗粒明显增多,颜色加深;免疫荧光结果显示,同假辐射组比较,辐射组大鼠海马神经元胞浆中红色荧光明显增强.P-CaMK Ⅱ表达明显增加.结果 HPM辐射后大鼠海马原代培养神经元中CaMK Ⅱ磷酸化增强,参与了海马神经元损伤及突触可塑性改变的病理生理过程.     

胞外信号调节激酶-丝裂原活化蛋白激酶信号通路在氟致大鼠海马神经元突触可塑性损伤中的作用

目的探讨氟对体外培养大鼠海马神经元胞外信号调节激酶-丝裂原活化蛋白激酶(ERK-MAPK)信号通路关键分子以及突触可塑性相关蛋白表达的影响。方法取出生24 h内的SPF级SD大鼠海马组织体外培养海马神经元,分别设对照(培养基)组、氟处理组(0.8μg/ml氟化钠)、ERK1/2抑制剂组(25μmol/L PD98059)、抑制剂+氟处理组(0.8μg/ml氟化钠+25μmol/L PD98059),继续培养24 h。观察海马神经元的形态,采用CCK8法检测细胞存活率,采用Western-blot技术检测ERK1/2、环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(CREB)及突触素(SYN)、生长相关蛋白(GAP-43)、神经营养因子(BDNF)突触可塑性相关分子的蛋白表达水平。结果与对照组比较,氟处理组、抑制剂+氟处理组海马神经元存活率均降低,差异有统计学意义(P0.05);与氟处理组相比,ERK1/2抑制剂组、抑制剂+氟处理组海马神经元存活率均升高,差异有统计学意义(P0.05)。神经网络丰富型神经元的构成比依次为氟处理组抑制剂+氟处理组ERK1/2抑制剂组、对照组,差异有统计学意义(P0.05)。与对照组比较,氟处理组、ERK1/2抑制剂组、抑制剂+氟处理组海马神经元中p-ERK1/2、p-CREB的蛋白表达水平均降低,差异有统计学意义(P0.05);与氟处理组相比较,抑制剂+氟处理组海马神经元中p-ERK1/2、pCREB蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义(P0.05)。而各组海马神经元ERK1/2、CREB蛋白的表达水平间比较,差异均无统计学意义(P0.05)。与对照组比较,氟处理组、抑制剂+氟处理组海马神经元中SYN、GAP-43、BDNF的蛋白表达水平均降低,差异均有统计学意义(P0.05);与氟处理组比较,ERK1/2抑制剂组、抑制剂+氟处理组海马神经元中SYN、GAP-43、BDNF蛋白的表达水平升高,差异均有统计学意义(P0.05)。结论氟可损伤海马神经元突触可塑性,抑制ERK-MAPK通路可减缓这种损伤作用;ERK-MAPK通路在氟致海马神经元突触可塑性损伤中起调控作用。     

低浓度铅接触大鼠海马突触损伤和学习记忆能力改变及中药的干预作用

【目的】从海马突触损伤、CaMK Ⅱ表达等方面探讨低浓度铅接触行为记忆改变及中药的干预机制。【方法】40只大鼠随机分为4组:空白组饮双蒸水;其他3组饮水中均添加0.02%醋酸铅,中药高低剂量组分别按驱铅丸3.5 g/(kg.d)和2.0 g/(kg.d)的剂量2 ml/d灌服。60 d后,进行Morris水迷宫试验,检测全血、脑组织铅含量;海马组织电镜观察,RT-PCR法和免疫组织化学方法检测脑组织CaMK Ⅱ mRNA及其蛋白表达。【结果】与空白组比较,模型组血铅、脑铅含量显著增高(P<0.01),与模型组比较驱铅丸高剂量组脑铅、血铅含量显著降低(P<0.05);Morris水迷宫试验结果提示模型组大鼠空间定位航行能力下降(P<0.05),中药干预组定位能力较模型组明显提高(P<0.001);模型组CaMK Ⅱ mRNA及其蛋白表达显著降低(P<0.05),与模型组比较高剂量组CaMK Ⅱ mRNA及其蛋白表达显著增高(P<0.05);电镜结果显示驱铅丸能缓解铅导致的海马区神经细胞变性与凋亡。【结论】驱铅丸可以改善铅接触大鼠的记忆障碍,其机理与减缓神经细胞的炎性变及凋亡、增强海马区CaMK Ⅱ mRNA及其蛋白表达等有关。     

白藜芦醇对阿尔茨海默病模型大鼠海马组织CaMKⅡ及PKA C-β基因表达的实验研究

目的探讨白藜芦醇对阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease,AD)模型大鼠海马组织中CaMKⅡ及PKA C-β基因表达的影响。方法鼠龄4~5个月健康雌性Wistar大鼠60只,按体质量随机分为假手术对照组(Sham control)、AD模型组(Model)、白藜芦醇低剂量(Res 20mg/kg)、中剂量(Res 40mg/kg)、高剂量(Res 80mg/kg)干预组及戊酸雌二醇组(ERT)。每组10只大鼠,对后5组大鼠行双侧卵巢摘除术,假手术组大鼠只切除双侧卵巢附近等体积的脂肪。术后一周开始给予干预,干预持续12周,取3只大鼠海马组织石蜡包埋切片进行HE染色检测海马组织神经细胞数量。利用Real-time PCR方法进行其余大鼠海马组织中CaMKⅡ及PKA C-β基因表达的检测。结果 (1)海马组织锥体细胞形态的改变:与假手术对照组比较,AD模型组大鼠海马锥体细胞排列稀疏、紊乱,细胞体积缩小,胞核固缩,胞浆浓缩、深染;白藜芦醇干预后细胞排列较整齐、均匀,结构清晰。(2)海马组织中CaMKⅡ及PKA C-β基因表达的改变:与对照组比较,模型组大鼠海马中CaMKⅡ及PKA C-β基因表达显著降低(P0.05);与模型组比较,白藜芦醇干预组及ERT组大鼠海马中上述两个基因表达显著升高(P0.05)。结论白藜芦醇可以升高AD模型大鼠海马组织中CaMKⅡ及PKA C-β基因的表达,可能是其改善AD模型大鼠记忆的机制之一。     

bFGF对大鼠缺血性脑损伤CaMKⅡmRNA表达影响

目的 研究大鼠脑缺血再灌注后Ca2 >/钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ(CaMK(Ⅱ)mRNA的表达,探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对脑组织缺血再灌注神经元CaMK Ⅱ mRNA的调节作用及机制.方法 应用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,大脑中动脉阻塞1 h再灌注损伤24 h,采用TUNEL法、逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测海马及皮质内神经元凋亡和CaMK Ⅱ mRNA的表达.结果 大鼠缺血再灌注海马及顶叶皮质内神经元凋亡数增加,而CaMKⅡ mRNA表达较假手术组减少,注射bFGF后神经元凋亡数减少,CaMK Ⅱ mRNA表达明显高于缺血再灌注组.结论 bFGF抑制缺血神经元凋亡,参与CaMK Ⅱ mRNA的调节,对缺血神经元有保护作用.     

铅对大鼠行为功能及海马CA1区ERK2活力的影响

目的探讨铅染毒对大鼠空间学习记忆损害的机制。方法将刚出生1天的Wistar仔鼠87只随机分为对照组和低、中、高剂量铅染毒组,分别为21,21,22,23只。各组母鼠通过饮水分别饲以0,0.22,0.67,2.00 mg/ml的醋酸铅水溶液;出生后第2l天起,各组仔鼠则直接饮用与相应母鼠相同浓度的醋酸铅水溶液。于第1,20,40,60,80天各取3只仔鼠海马组织,采用Western Blots方法,以磷酸化抗体检测细胞外信号调节激酶2(ERK2)活力;剩余仔鼠在第80天开始进行水迷宫实验。结果铅染毒仔鼠的定位航行能力和空间搜索能力明显下降,并呈剂量—效应关系;对照组仔鼠海马CA1区ERK2活力随着仔鼠增长其活力明显升高,但到出生后第60天时则达到最高,到第80天略有下降;低剂量组则在第20天时活力明显升高,而在随后的60天里活力明显下降;中、高剂量组酶活力则一直维持在较低水平。以各组第1天的ERK2活力为100,则对照组和低、中、高剂量铅染毒组在第80天时ERK2活力分别为151.3±12.1,129.3±9.1,101.0±8.1,103.0±13.5(中、高剂量组与对照组比较,P<0.01)。结论铅染毒可以扰乱不同发育期大鼠海马CA1区ERK2的活力变化,这很可能是大鼠铅染毒导致空间学习记忆损害的分子机制。     

钙对染铅大鼠海马NMDAR和mGluR5受体介导相关基因mRNA及CaMKⅡ蛋白表达的影响

目的通过研究钙对染铅大鼠海马NMDAR和m Glu R5受体介导相关基因mRNA及CaMKII蛋白表达的影响,为进一步以补钙预防铅的危害提供理论依据。方法选择体质量(50±2)g的清洁级雄性SD大鼠60只,共分五组,每组12只,分别为对照组(基础饲料,蒸馏水)、染铅组(基础饲料,0.2%醋酸铅饮水)、试验Ⅰ组(基础饲料添加0.5%碳酸钙,0.2%醋酸铅饮水)、试验Ⅱ组(基础饲料添加1%碳酸钙,0.2%醋酸铅饮水)和试验Ⅲ组(基础饲料添加2%碳酸钙,0.2%醋酸铅饮水)。连续饲养60 d后,取海马,用荧光定量RT-PCR法测定海马中Grm5、Camk2a、Grin1、Homer1、Prkca和ERK2的mRNA表达量,Western-blotting测定大鼠海马中CaMKII的蛋白表达量。结果与对照组相比,染铅组海马中Grm5、Camk2a、Grin1、Homer1、Prkca、ERK2的mRNA表达量及CaMKII的蛋白表达量均极显著降低(P0.01)。与染铅组相比,试验组钙浓度在一定范围内越高,目的基因表达量相对升高越多,试验Ⅱ组CaMKII的蛋白表达量极显著上升(P0.01)。结论一定浓度的钙可干预铅致大鼠海马组织的损伤。     

慢性铅暴露对小鼠CaMK Ⅱ蛋白表达的影响

目的观察和探讨铅对小鼠海马钙／钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ（CaMKⅡ）蛋白表达的影响。方法小鼠出生第1d起，染铅组母鼠开始通过饮水饲以不同浓度醋酸铅2．4，4．8，9．6mmol/L。幼鼠出生后，先通过哺乳接触铅，断乳后则自行饮用与母鼠饮用浓度相同的含铅水。分别在14，28，42，56d处死小鼠，用蛋白免疫印记法观察各组小鼠海马区CaMKⅡ蛋白表达状况。结果慢性铅暴露对小鼠脑海马CaMKⅡ蛋白表达总体上呈现下降趋势，2．4mmol/L染铅组中．14dCaMKⅡ蛋白表达呈现上升趋势，与相应天数对照组相比差异无统计学意义；4．8，9．6mmol/L染铅组中，CaMKⅡ蛋白表达与相应期对照组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。结论铅扰乱CaMKⅡ蛋白正常表达。     

氯胺酮对疼痛抑郁共病大鼠海马ERK/CREB信号通路的影响

目的研究氯胺酮对疼痛抑郁共病大鼠海马ERK/CREB信号通路的影响。方法将38只大鼠随机分为对照组(n=10)和造模组(n=28),造模组采用牛Ⅱ型胶原-完全弗氏佐剂注射。采用机械缩足反应阈值测定(MWT)、强迫游泳实验(FST)判断造模成功后,将模型组随机平均分为氯胺酮组和生理盐水组。采用MWT、FST检测氯胺酮对疼痛抑郁共病的治疗作用。采用免疫印迹法检测大鼠海马组织中磷酸化的ERK1/2、CREB蛋白表达量。结果与生理盐水组比较,氯胺酮组大鼠的FST不动时间缩短,MWT阈值增加(P均<0.05)。氯胺酮组大鼠海马p ERK1/2、p CREB表达量均明显高于生理盐水组(P<0.05)。结论氯胺酮能够有效改善疼痛抑郁共病大鼠的疼痛及抑郁症状,其作用机制可能与海马ERK/CREB信号通路有关。     

铅暴露大鼠海马区神经颗粒素表达与学习记忆关系研究

【目的】探讨铅接触大鼠脑组织海马区神经颗粒素表达及在学习记忆障碍中的作用。【方法】32只Wistar大鼠随机分为4组,每组8只,3个染铅组分别在饮用的蒸馏水中添加0.02%、0.10%、0.20%醋酸铅为低、中、高剂量染铅组,空白对照组饮用蒸馏水,连续45 d复制慢性铅中毒模型,对各组进行Morris水迷宫试验,麻醉后分别检测各组动物血铅、脑铅含量;RT-PCR检测海马区组织Ng mRNA、CaMKⅡmRNA表达;免疫组化方法检测P-CaMKⅡ表达,Western Blotting法检测Ng蛋白表达。【结果】1)与空白对照组比较,染铅各组血铅、脑铅含量均显著增高(P0.01),高剂量组动物体重显著降低(P0.05);2)Morris水迷宫结果显示,随染铅浓度增高,潜伏期显著延长(P0.05);通过强化训练,各组动物均获得了一定的定位能力,但各染铅组动物潜伏期显著高于空白对照组(P0.05);3)与空白对照组比较,各浓度染铅组Ng mRNA及CaMKⅡmRNA表达均显著降低(P0.05);4)Ng的Western Blotting结果显示,与空白对照组比较,中、高剂量染铅组Ng蛋白表达均显著降低(P0.01),低剂量组表达也下降,但没有显著差异;P-CaMKⅡ的免疫组化结果显示,与空白对照组比较,低、中、高剂量染铅组表达均显著降低(P0.05或0.01)。【结论】Ng作为突触后CaM结合蛋白和PKC的作用底物,参与介导了铅导致的的学习记忆障碍。     

痴复康方改善PSCI大鼠的空间学习和记忆能力及其作用机制

目的研究痴复康方对卒中后认知障碍(PSCI)大鼠的影响并探讨其机制。方法对48只大鼠双侧颈总动脉结扎制作PSCI模型,分为正常组、模型组、尼莫地平组及痴复康方低、中、高剂量组。通过Morris水迷宫实验测试大鼠的空间学习和记忆能力,病理观察海马组织改变,qPCR法检测海马组织N-甲基-D-天门冬氨酸受体NR2B亚基(NR2B)、钙调蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)、高迁移率族蛋白B1 (HMGB-1)、转化生长因子β1 (TGF-β1)、 Smad7 mRNA的表达。结果与正常组相比,模型组大鼠逃避潜伏期延长,穿越原平台次数减少,原平台象限停留时间缩短(P均<0.01);大鼠海马组织神经元减少,细胞排列松散、不规则,部分可见核仁消失、锥体细胞减少;NR2B、 CaMKⅡ、 mRNA表达减少,HMGB-1、 TGF-β1、 Smad7 mRNA表达增加(P均<0.01)。与模型组相比,痴复康方各剂量组随着剂量增加,大鼠逃避潜伏期缩短,穿越原平台次数增加,原平台象限停留时间延长(P均<0.01);大鼠海马组织神经元增加,坏死细胞减少,细胞核固缩减少,正常神经元增加,细胞轮廓清晰,排列整齐;NR2B、 CaMKⅡmRNA表达增加,HMGB-1、 TGF-β1、 Smad7 mRNA表达减少(P均<0.01),以高剂量组改善最明显。结论痴复康方能提高PSCI大鼠模型的空间学习和记忆能力,其机制与减少海马神经元坏死,上调海马组织NR2B、CaMKⅡmRNA表达,下调HMGB-1、 TGF-β1、 Smad7 mRNA表达有关。     

慢性铝暴露对大鼠海马细胞外调节蛋白激酶2及cAMP反应元件结合蛋白mRNA和蛋白表达的影响

目的 通过观察细胞外调节蛋白激酶2(ERK2)及cAMP反应元件结合蛋白(CREB)通路的变化,研究慢性铝暴露对大鼠学习记忆功能的影响机制.方法 将80只初断乳清洁级雄性Wistar雄性大鼠随机分为4组,分别为对照(蒸馏水)组和2、4、6 mg/ml三氯化铝染毒组,每组20只.采用自由饮水方式进行染毒,连续染毒3个月.测定大鼠脑铝和血铝含量,采用Western Blot法和Real-time PCR(RT-PCR)法分别检测海马组织中ERK2和CREB mRNA及蛋白的表达水平.结果 与对照组比较,各浓度铝染毒组大鼠血铝和脑铝含量均升高,海马组织中ERK2和CREB蛋白及mRNA的表达水平均下降,差异有统计学意义(P＜0.05);且随着铝染毒浓度的升高,大鼠血铝和脑铝含量呈上升趋势,海马组织中ERK2和CREB蛋白及mRNA的表达水平均呈下降趋势.结论 慢性铝暴露可能通过抑制大鼠海马中ERK2/CREB通路而损伤大鼠的学习记忆能力.     

白藜芦醇对慢性铅暴露小鼠脑组织Nrf2信号通路的影响

目的研究白藜芦醇干预对慢性铅暴露小鼠脑组织氧化应激进程中核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路的影响。方法 48只健康C57BL/6雄性小鼠随机分为4组,每组12只:对照组、铅染毒组、铅染毒+白藜芦醇干预组及白藜芦醇组。铅染毒模型组小鼠给予自由饮用0.2%醋酸铅去离子水12周。期间干预组及白藜芦醇组小鼠每日给予白藜芦醇灌胃干预(50 mg/kg BW)。收集小鼠血清及全脑并测定其血清和海马组织中铅含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、还原型谷胱甘肽(GSH)及丙二醛(MDA)含量,通过Western blot方法检测γ-谷氨酸半胱氨酸合成酶(γ-GCS)、Nrf2总蛋白以及Nrf2核蛋白的表达。结果与单纯铅染毒组比较,白藜芦醇干预组小鼠脑组织MDA含量降低(P<0.05),GSH-Px活性以及GSH含量均显著升高(P<0.05),同时Nrf2以及下游基因γ-GCS的蛋白表达水平均显著提高(P<0.05)。结论白藜芦醇干预可诱导铅暴露小鼠大脑皮层Nrf2蛋白活化,上调细胞保护性γ-GCS蛋白的表达,促进GSH系统维持稳态,从而拮抗铅对脑组织的氧化损伤。     

鱼藤酮对大鼠星形胶质细胞CaMKⅡ基因和蛋白表达的影响

目的 研究鱼藤酮对大鼠原代培养星形胶质细胞钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMK Ⅱ)活性的影响.方法 MTT法检测染毒星形胶质细胞活力,激光共聚焦结合Fluo-4荧光法动态测定细胞内游离钙浓度([Ca2 ]i),采用RT-PCR技术检测CaMK Ⅱα和CaMK Ⅱβ mRNA的表达,Western-blot技术观察磷酸化CaMK Ⅱ蛋白活性的变化.结果 1.0和2.0 μmol/L鱼藤酮染毒时星形胶质细胞活力明显降低,染毒星形胶质细胞[Ca2 ]i呈浓度依赖性升高,CaMK Ⅱα亚基mRNA明显下调(P<0.05),CaMK Ⅱ蛋白活性显著降低(P<0.01).结论 鱼藤酮染毒星形胶质细胞内游离钙浓度的升高,CaMK Ⅱ基因表达和蛋白活性显著降低,可能是其诱导神经细胞变性损伤的重要原因之一.     

碘缺乏和甲状腺功能减退对大鼠仔鼠海马ERK1/2表达的影响

目的观察碘缺乏和甲状腺功能减退对大鼠仔鼠海马细胞外信号调节蛋白激酶1及2(ERK1/2)表达的影响。方法健康2月龄孕Wistar大鼠28只,按体重随机分成对照组、甲状腺功能减退组[按饮水中含丙基硫尿嘧啶(PTU)剂量分为5mg/L组和15mg/L组]和碘缺乏组,每组7只。分别于出生后第7、14、21、28和42天每组随机取5只仔鼠,灌流固定大脑,用组织病理切片和免疫组化染色观察分析海马的ERK1/2表达。结果在出生后14、21、28和42天时,海马CA1和CA3区的ERK1/2表达在PTU5mg/L组、PTU15mg/L组和碘缺乏组显著低于对照组(P0.05)。DG区的ERK1/2表达与对照组相比差异无显著性。出生后7天时,各组间ERK1/2表达差异无显著性。结论碘缺乏和甲状腺功能减退可降低海马CA1和CA3区的ERK1/2表达。