α干扰素治疗小鼠日本血吸虫病肝纤维化实验研究

目的观察IFN-α是否具有抗日本血吸虫病肝纤维化的作用及疗效.方法以日本血吸虫尾蚴感染IcR小鼠造成肝纤维化模型.10周后顿服吡喹酮杀虫治疗,继以IFN-α皮下注射治疗,并与模型对照组和0.9%氯化钠注射液治疗组比较.肝脏组织切片作苏木素-伊红、苦味酸-酸性品红染色,观察肝脏虫卵肉芽肿平均大小、胶原面积百分比及肝纤维化程度（SSS评分）.结果IFN-α治疗组肝脏虫卵肉芽肿平均大小缩小（P〈0.05）、胶原面积百分比降低（P〈0.05）、SSS评分较模型对照组下降〉2分（P〈0.05）.结论IFN-α治疗小鼠日本血吸虫病肝纤维化有效.     

血吸虫病虫卵肉芽肿与肝纤维化的动态观察

目的:从形态学和血清学角度探讨血吸虫病虫卵肉芽肿与肝纤维化之间的关系.方法:用血吸虫尾蚴感染新西兰家兔,建立血吸虫病动物模型.采用石蜡切片、HE染色动态观察日本血吸虫病急性期、慢性期、晚期肝脏虫卵肉芽肿大小,放射免疫检测仪测定不同时期的血清中透明质酸(hyaluronic acid,HA)含量的变化.结果:感染第6周家兔肝脏出现虫卵肉芽肿,第12周肉芽肿缩小,周围发现成纤维细胞,至第21周时虫卵肉芽肿明显缩小,肝脏纤维化程度增高,并有纤维组织增生.同时,血清HA含量检测显示随感染时间延长,体内HA水平逐渐升高.结论:血吸虫病是一个持续进展的过程,包含虫卵肉芽肿与肝脏纤维化两大病理变化,两者间发病机制不同,肝纤维化是虫卵肉芽肿的间接延伸.     

血吸虫病肝纤维化兔血浆肿瘤坏死因子水平的动态变化

目的 研究兔血吸虫病肝纤维化时血浆肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）的动态变化。方法 将３６只家兔随机分为正常组、感染组。于感染尾蚴后第７０、１００、１３０ｄ，每组随机选６只取血和肝，进行免疫、生化、病理观察。结果 感染组血浆ＴＮＦ－α、有质酸（ＨＡ）、肝组织羟脯氨酸（ＨＹＰ）、交原纤维含量、肝胶原经每人发是分比均显著高于正常组（Ｐ〈０．０１），乐ＴＮＦ－α与血浆ＨＡ、肝细胞ＨＹＰ、肝胶原纤维含量、肝胶原     

银杏叶提取物对实验性肝纤维化逆转的影响

目的 研究银杏叶提取物对大鼠肝纤维化逆转的影响及其可能的机制。方法 应用CCI4诱导大鼠肝纤维化模型。造模完成后给予银杏叶提取物干预肝纤维化的逆转，应用H＆E、Masson和Gordon-Sweet染色观察肝组织病理纤维化分级，生化法检测肝功能指标。RT-PCR法测定肝组织中基质金属蛋白酶-13（MMP-13）表达，免疫组化法检测肝组织中αSMA表达。结果 给予银杏叶提取物可以促进肝纤维化的逆转（P〈0．05），改善肝功能（P〈0．05）．增加恢复过程中肝组织MMP-13的表达（P〈0．05），使αSMA阳性细胞数减少（P〈0．05）。结论 银杏叶提取物可促进CCh肝纤维化的逆转，可能与银杏叶提取物增加肝组织中MMP-13表达、抑制肝脏星状细胞活化、促进活化星状细胞凋亡有关。     

转化生长因子β1,干扰素γ和肿瘤坏死因子α在兔日本血吸虫病发 …

日本血吸虫病发病过程中虫卵肉芽肿和肝纤维化是两种最主要的病理改变 ,肝纤维化是导致日本血吸虫病合并严重并发症与死亡的最根本原因。我们动态观察了感染日本血吸虫尾蚴后的新西兰兔虫卵肉芽肿、肝纤维化的形成过程 ,以形态学为基础 ,观察肝脏干扰素γ(ＩＦＮ γ)、肿瘤坏死因子α(ＴＮＦ α)及转化生长因子 β1 (ＴＧＦ β1 )的表达的动态变化 ,现将结果报道如下。一、材料与方法1 动物 :健康新西兰兔 (下简称兔 )由杭州市药物检验所提供 ,体重 2 .5～ 3.0ｋｇ ,共 70只 ,雌雄各半。其中 1 0只为正常对照组 ,余 6 0只均感染日本血吸虫…     

干扰素-α对肝纤维化大鼠肝星状细胞凋亡的诱导作用

目的：研究干扰素－α（IFN－α）对肝纤维化大鼠肝星状细胞（HSC）凋亡的影响。方法：用四氯化碳（CCl4)复制肝纤维化模型大鼠32只，随机分为A，B，C3组。A组：6只，造模结束即处死；B组14只，皮下注射－α10万／100g8周，C组12只，注射等量的生理盐水8周。治疗结束时用TUNEL法检测各组肝星状细胞凋亡情况；HE染色观察肝组织学变化；免疫组化染色检测中间丝蛋白（Desmin,),α-平滑肌肌动蛋白（α－SMA），I型胶原，转化生长因子1（TGF－β1）等指标。结果：B组较其他两组肝组织学明显改善，肝纤维化程度减轻，I型胶原，TGF－β1的显色指数降低；B组肝星状细胞明显减少，凋亡指数增加，与C组相比，差异有统计学意义。结论：IFN－α在体内可诱导HSC凋亡，这可能是IFN－α抗肝纤维化的作用机制之一。     

人工冬虫夏草菌液预防实验性肝纤维化的作用机制

目的：观察人工冬虫夏草菌液预防治疗对肝纤维化大鼠几种主要致纤维化因子P38丝裂原活化蛋白激酶（ P38MAPK）、转化生长因子β（ TGF－β）、α－平滑肌肌动蛋白（α－SMA）、结缔组织生长因子（ CTGF）和Ⅳ型胶原（ CollagenⅣ）的影响,探讨人工冬虫夏草菌液预防肝纤维化的作用及可能的机制。方法选择雄性SD大鼠,随机分为3组（ n＝8）,模型组用40％四氯化碳橄榄油溶液背部皮下注射造模,给药预防组在造模的同时给予人工冬虫夏草菌液进行预防治疗,正常对照组背部皮下注射生理盐水。8周后处死实验大鼠,肝脏取材,RT－PCR法检测3组大鼠肝脏组织P38MAPK、TGF－β、α－SMA、CTGF和Collagen Ⅳ mRNA表达变化,用HE及天狼星红染色观察肝脏组织学变化。结果组织学染色发现,给药预防组肝组织结构改变明显轻于模型组,纤维组织沉积也明显轻于模型组;给药预防组大鼠肝组织中P38MAPK、TGF－β、α－SMA、CTGF和CollagenⅣmRNA表达均低于模型组（P＜0．05）。结论人工冬虫夏草菌液能预防肝纤维化形成,能够降低几种主要致纤维化因子mRNA表达水平;P38MAPK信号通路可能参与冬虫夏草抗肝纤维化过程。     

抗纤二号治疗小鼠日本血吸虫病肝纤维化疗效观察及对肝脏PDGF表达的影响

目的 研究抗纤二号治疗小鼠日本血吸虫病肝纤维化疗效及对肝脏血小板衍生生长因子（PDGF）表达的影响。方法 50只日本血吸虫病肝纤维化小鼠均分5组，对照组不作任何治疗。吡喹酮组使用吡喹酮治疗；联合治疗组使用吡喹酮联合中药复方治疗；中药组仅用复方中药治疗。应用HE观察肝脏病理变化，免疫组化方法观察PDGF-BB和α-SMA阳性细胞的表达，massson染色观察肝脏胶原纤维并用图像分析仪进行胶原定量。结果 吡喹酮联合中药复方治疗组的肝脏病理改善最明显，PDGF-BB的表达和α-SMA阳性细胞数及腔原含量的下降均最明显，与吡喹酮组、中药组和对照组比较均有统计学差异（P〈0．05）。中药组PDGF-BB的表达、α-SMA阳性细胞数和肝脏胶原较对照组（18周）均无明显下降（P〉0．05）。结论 抗纤二号治疗不能阻止血吸虫病肝纤维化的进展，但联合吡喹酮治疗具有较好的治疗作用；其抗纤维化的作用可能是由于联合应用能更好的控制肝脏炎症反应和降低PDGF-BB的表达和α-SMA阳性细胞数来实现的。     

γ干扰素对血吸虫病小鼠肝纤维化的影响

γ干扰素对血吸虫病小鼠肝纤维化的影响［贺永文，刘薇，曾令兰等．中华医学杂志，１９９６，７６（５）：３７１］用链酶亲和素－生物素化过氧化物酶复合物技术，观察小鼠感染日本血吸虫后不同时期肝内γ－干扰素（γ－ＩＦＮ）和纤维连接蛋白（ＦＮ）、层连蛋白（ＬＮ）...     

人参皂苷Rg3、IFN-α治疗血吸虫病肝纤维化的肝脏电镜观察

目的观察人参皂苷Rg3、IFN-α抗血吸虫病肝纤维化的肝脏超微结构改变.方法将48只雄性IcR小鼠随机分为健康对照组(A组)、实验对照组(B组)、人参皂苷Rg3治疗组(C组)及IFN-α治疗组(D组)等4组,每组12只.以腹部贴片法感染B、C、D各组小鼠,每鼠感染血吸虫尾蚴18条～22条.肝纤维化造模10周,给予B、C、D各组小鼠吡喹酮杀虫治疗.以人参皂苷Rg3治疗C组小鼠、IFN-α治疗D组小鼠,用药8周后,常规方法制作肝脏组织切片HE染色和VG染色标本及投射电镜标本并观察,比较治疗后小鼠肝脏组织超微结构变化.结果 2治疗组(C、D组)小鼠肝窦周隙中胶原纤维较实验对照组明显减少,未见肌成纤维细胞,但可见贮脂细胞且数量比正常对照组增加;Rg3治疗组肝血窦扩张明显;IFN-α治疗组胞浆内可见滑面内质网增生.结论人参皂苷Rg3和IFN-α抗血吸虫病肝纤维化作用可能与促进肌成纤维细胞向贮脂细胞转变有关.     

Effect of Anluohuaxian Tablet Combined with y-IFN on Schistosomal Liver Fibrosis

The therapeutic effects of anluohuaxian tablet combined with γ-IFN on schistosomal liver fibrosis and its mechanism were studied in a murine model and clinical cases of schistosomal liver fibrosis.Fifty Kunming mice were randomly divided into 5 groups:normal control group,infection control group,anluohuaxian tablet-treated group,γ-IFN-treated group and combined treatment (anluohuaian tablet+γ-IFN) group.Pathologic changes in liver,including hepatic pigmentation and the size of schistosomal egg granuloma,were observed by HE staining after treatment for 8 weeks.The expression of the type Ⅰ and Ⅲ collagen,and TIMP-1 was detected by immunohistochemistry.TGF-β1 mRNA expression was examined by real-time fluorescent quantitative PCR.Sixty patients with schistosomal liver fibrosis were divided into treatment group and control group.The patients in treatment group were treated with anluohuaxian tablet in combination with γ-IFN for 6 months.Be-fore and after treatment,the changes of symptoms and signs,liver function,serum liver fibrosis in-dexes and imaging indexes were observed.The results showed that as compared with infection con-trol group,all forms of treatments relieved the hepatic pathological injury with apparently diminished size of schistosomal egg nodules and decreased percentage of pigmentation (P<0.05).Furthermore,the expression of collagen Ⅰ and Ⅲ,TIMP-Ⅰ,and TGF-β1 mRNA in combined treatment group was significantly decreased as compared with anluohuaxian tablet-treated and γ-IFN-treated groups (P<0.05).In the clinical observation,the serum liver fibrosis indexes,the portal vein width as well as the spleen thickness was significantly reduced in treatment group as compared with control group (P<0.05).It was concluded that the combined use of anluohuaxian tablet with γ-IFN in schistosomal liver fibrosis could protect liver function,alleviate liver fibrosis,and could be used as a choice in treating patients with schiatosomal liver fibrosis.     

Effect of Anluohuaxian Tablet Combined with γ-IFN on Schistosomal Liver Fibrosis

The therapeutic effects of anluohuaxian tablet combined with γ-IFN on schistosomal liver fibrosis and its mechanism were studied in a murine model and clinical cases of schistosomal liver fibrosis, Fifty Kunming mice were randomly divided into 5 groups： normal control group, infection control group, anluohuaxian tablet-treated group, γ-IFN-treated group and combined treatment （anluohuaian tablet＋γ-IFN） group. Pathologic changes in liver, including hepatic pigmentation and the size of schistosomal egg granuloma, were observed by HE staining after treatment for 8 weeks. The expression of the type Ⅰ and Ⅲ collagen, and TIMP-1 was detected by immunohistochemistry. TGF-β1 mRNA expression was examined by real-time fluorescent quantitative PCR. Sixty patients with schistosomal liver fibrosis were divided into treatment group and control group. The patients in treatment group were treated with anluohuaxian tablet in combination with γ-IFN for 6 months. Before and after treatment, the changes of symptoms and signs, liver function, serum liver fibrosis indexes and imaging indexes were observed. The results showed that as compared with infection control group, all forms of treatments relieved the hepatic pathological injury with apparently diminished size of schistosomal egg nodules and decreased percentage of pigmentation （P〈0.05）. Furthermore, the expression of collagen Ⅰ and Ⅲ, TIMP-1, and TGF-β1 mRNA in combined treatment group was significantly decreased as compared with anluohuaxian tablet-treated and γ-IFN-treated groups （P〈0.05）. In the clinical observation, the serum liver fibrosis indexes, the portal vein width as well as the spleen thickness was significantly reduced in treatment group as compared with control group （P〈0.05）. It was concluded that the combined use of anluohuaxian tablet with γ-IFN in schistosomal liver fibrosis could protect liver function, alleviate liver fibrosis, and could be used as a choice in treating patients with schiatosomal liver fibrosis.     

一氧化氮与血吸虫病肝损伤发病机制的关系研究

为了研究一氧化氮在血吸虫病肝损伤发病中的作用，采用Ｓ－Ｐ免疫组织化学法，观察家兔（ｎ＝４０）经皮肤感染血吸虫尾蚴后８、１２、１６、２０、２４周家兔肝诱导型一氧化氮合成酶（ｉＮＯＳ）和巨噬细胞（ＣＤ６８）的免疫组织化学表达与定位。结果显示，血吸虫病家兔肝的虫卵肉芽周围、门静脉分支管壁、肝窦壁、中央静脉壁有ｉＮＯＳ和ＣＤ６８阳性免疫反应物，肝细胞内有ｉＮＯＳ阳性免疫反应物。正常家兔肝脏ｉＮＯＳ和ＣＤ６８免疫组织化学染色均为阴性。认为一氧化氮在血吸虫肉芽形成及肝脏微循环障碍中具有重要作用     

小鼠日本血吸虫病肝纤维化肝脏CTGF的表达及意义

目的研究结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)在日本血吸虫病肝纤维化小鼠肝脏中的表达状况及意义。方法用昆明小鼠感染尾蚴复制小鼠日本血吸虫病肝纤维化模型;RT-PCR和免疫组化分别检测小鼠肝脏CTGFmRNA和蛋白的表达,免疫组化方法观察各阶段肝脏α-SMA阳性细胞的表达。结果模型组10周时形成典型的肝纤维化,此时模型组小鼠肝脏CTGFmRNA和蛋白表达、α-SMA 细胞数达高峰,10周、14周、18周时与治疗组相比均有明显的统计学差异(P均>0.05);CTGFmRNA和蛋白表达水平与α-SMA 细胞数均呈直线相关性。结论CTGF基因和蛋白表达增高与小鼠日本血吸虫病肝纤维化形成有密切关系;CTGF在小鼠日本血吸虫病肝纤维化形成过程中的作用可能主要通过作用于活化的肝星状细胞来实现的。     

锌指结构9、结缔组织生长因子在大鼠肝星状细胞中的表达

目的:通过研究肝纤维化大鼠原代肝星状细胞锌指结构9(ZF9)、结缔组织生长因子(CTGF)的表达及其动态变化,初步探讨CTGF、ZF9在肝星状细胞活化中的作用。方法:32只雄性SD大鼠皮下注射40%植物油CCl4,每周2次,并分别于注射1,4,8周后作大鼠肝原位灌注,分离肝星状细胞,Western blot法检测CTGF蛋白,RT-PCR检测ZF9 mRNA水平。结果:正常大鼠肝星状细胞ZF9基因可见弱表达,注射CCl41周后其表达增强,注射CCl44周后转录明显增强,8周时仍高表达。正常大鼠肝星状细胞CTGF蛋白无明显表达,模型组大鼠皮下注射CCl41周后,蛋白出现少量表达,注射CCl44周后,表达进一步增加,第8周CTGF蛋白表达更强。结论:ZF9、CT-GF基因随着肝损伤的加重,在肝星状细胞中的表达逐渐增加,共同促进肝纤维化的发生。     

日本血吸虫感染小鼠肝星状细胞差异表达microRNA的鉴定

目的 筛选并验证在感染日本血吸虫小鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)中差异表达的microRNA(miRNA)。方法 12只6周龄的BALB/c雄性小鼠随机分为正常对照组和感染日本血吸虫组,其中对照组3只,感染组9只。采用Ⅳ型胶原酶体外灌注、密度梯度离心和CD11b磁珠阴性分选相结合的方法,分离小鼠肝脏中的原代HSC。取正常小鼠和感染血吸虫后第42天、49天、56天小鼠的原代HSC样本进行miRNA高通量测序,筛选感染后差异表达的miRNA,并利用定量PCR（quantitative PCR, qPCR）技术验证测序结果。结果 通过miRNA测序,筛选出感染后HSC中差异表达的宿主miRNA共89条,其中75条表达上调,14条表达下调;qPCR验证部分表达改变miRNA的结果显示,miR-17-5p、miR-21a-5p、miR-25-3p、miR-100-5p、miR-122-5p的表达趋势与测序结果基本一致。结论 日本血吸虫感染导致宿主HSC部分miRNA表达谱发生了明显改变,这些差异表达的miRNA在血吸虫病肝纤维化进展中起着重要调控作用,其可能在肝纤维化发生发展过程中参与对某些信号通路的调控,确切机制需进一步深入研究。本研究结果为这些miRNA在血吸虫病肝纤维化中的功能及其机制研究提供重要基础。     

小鼠日本血吸虫模型肝组织坏死形态学观察

建立小鼠日本血吸虫肝虫卵肉芽肿模型和自然感染模型，发现早期肝脏出现，片状或灶性凝固性坏死，后期发生纤维组织增生。提示肝组织凝固性坏死诱发肝纤维化，与虫卵肉芽肿引起的纤维化协同作用可能是血吸虫性肝硬化的又一发生机理。     

含有RGD序列环肽介导的干扰素脂质体对大鼠肝纤维化的治疗作用

目的探讨通过构建针对大鼠肝星状细胞(HSC)受体介导的靶向脂质体(RGD—SSL),观察包裹重组人干扰素α1b(IFN—α1b)的长循环脂质体(SSL)对胆管结扎大鼠肝纤维化的治疗效果。方法实验大鼠随机分成4组：假手术组、肝硬化模型组(BDL组)、IFN—SSL治疗(BDL IFN—SSL)组、1FN-配基-SSL治疗(BDL 1FN—RGD—SSL)组,每组10只。构建包裹IFN—d1b的SSL,通过聚乙二醇(PEG)将能与HSC特异性结合的配基[cyclo(RGD)]连接于脂质体的表面,观察对胆管结扎大鼠肝纤维化的治疗作用。检测各组大鼠血清肝功能、血清肝纤维化指标、肝组织羟脯氨酸含量、肝脏组织学的变化,运用RT-PCR法检测肝脏Ⅰ型胶原的表达。分离HSC,用Western印迹检测α-平滑肌肌动蛋白(α—SMA)的表达。结果IFN-RGD—SSL治疗组大鼠肝纤维化程度均明显低于IFN—SSL治疗组,肝功能指标、血清肝纤维化指标、肝羟脯氨酸含量和肝脏组织学改变较IFN—SSL治疗组明显改善;肝脏Ⅰ型胶原mRNA和HSC的α—SMA表达量明显下降。结论构建的受体介导的长循环脂质体对大鼠胆管结扎肝纤维化具有靶向性的治疗作用。