抗HLA-A*0201重链卵黄抗体的制备及初步鉴定

目的制备高效价特异性鸡卵黄免疫球蛋白(Yolk immunoglobulin,IgY)抗体。方法用纯化HLA-A*0201重链抗原加完全福氏佐剂免疫岭南黄鸡,经水稀释法初步纯化浓缩后,用ELISA鉴定其免疫学活性,测定纯化后蛋白含量,并用SDS-PAGE进行分析鉴定。结果获得ELISA效价为1×106的抗重链IgY抗体,蛋白含量为9.77 mg/ml。经SDS-PAGE分析,出现2条蛋白带,纯度达90%以上。结论用重链抗原加福氏佐剂免疫种鸡制备的IgY抗体产量多、效价高,为结合HLA-A*0201复合体诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞活化奠定了基础。     

乙肝病毒疫苗鸡蛋抗体HBsAg-IgY的制备及体外中和作用

目的:制备特异性的乙肝病毒疫苗鸡蛋抗体(HBsAg-IgY),探索抗体检测条件并进行体外中和作用试验。方法:用重组酵母乙型肝炎疫苗(HBsAg)免疫产蛋母鸡,收集鸡蛋,用鸡卵黄抗体IgY提取系统提取鸡卵黄抗体IgY;用改进的ELISA法检测抗体IgY含量,探索最佳检测条件;采用ELISA法研究IgY对Hepg2.2.15细胞系分泌HBsAg的中和试验。结果:在免疫后第1～3周,鸡卵黄抗体IgY含量开始上升,第6周达到高峰,并可持续2个月。抗HBsAg IgY可中和HepG2.2.15细胞系分泌的HBsAg,抗体在稀释度为1∶200时中和作用最强。结论:采用重组酵母乙型肝炎疫苗免疫母鸡,可持续性获得特异性抗HBsAg IgY;体外实验证实,抗HBsAg-IgY对HepG2.2.15细胞HBsAg具有中和作用。     

抗钩虫特异性卵黄抗体的制备与鉴定

目的 制备并鉴定特异性抗十二指肠钩虫鸡卵黄免疫球蛋白(IgY),为分析抗钩虫IgY抗体的作用奠定基础.方法 制备十二指肠钩虫成虫粗抗原,经皮下和肌肉注射免疫25周产蛋海兰母鸡3次,每只鸡每次的免疫剂量为200 μg,初次免疫后28 d进行加强免疫,加强免疫间隔时间为10 d.水稀释法提取卵黄中的IgY,盐析、透析法纯化IgY,BCA法测定蛋白含量,并进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和Western blot分析.ELISA法动态检测抗体效价,观察抗体效价变化.结果 免疫后55 d的每个鸡蛋能提取40~55 mg IgY,经SDS-PAGE和Western blot分析,纯化的IgY有2条主带,分子量分别是35 ku和60 ku,即IgY的轻链和重链.初次免疫后10 d左右出现抗体,至免疫后50~55 d为高峰,效价达到1 ∶ 10 000以上.IgY与人血清抗体均可识别30 ku处钩虫抗原.结论 十二指肠钩虫成虫粗抗原免疫的海兰母鸡能产生高浓度、高效价、特异性的IgY抗体,为分析抗钩虫IgY抗体的作用奠定了基础.     

抗白念珠菌IgY的动物实验研究

目的:制备抗白念珠菌特异性IgY,并对其活性及应用进行研究。方法:自烧伤继发感染白念珠菌病人的创面分离出的白念珠菌免疫蛋鸡,并对从该鸡产的蛋白中分离提取出的特异性IgY进行纯化及活性测定,同时用于烧伤大鼠感染白念珠菌的预防。结果:本实验制备的IgY有与白念珠菌特异性结合的能力,并能明显抑制烧伤鼠创面(痂下组织)继发感染白念珠菌。结论:抗白念珠菌特异性IgY有助于烧伤鼠预防白念珠菌的继发感染     

抗加特纳杆菌卵黄免疫球蛋白(IgY)的研究

目的 观察鸡卵黄中抗加特纳杆菌抗体的产量、纯度、来源及稳定性。方法 用阴道加特纳杆菌作为抗原免疫Leghorn鸡。通过改良水稀释法提取卵黄中的IgY。双紫外光波长测定抗体含量,SDS-PAGE电泳检测抗体纯度。Westernblot免疫印迹法测定该抗体来源。ELISA检测IgY对温度、酸碱度的稳定性。结果 抗体含量12．8mg／mL蛋黄液,抗体纯度达95％。免疫印迹证明IgY与鸡血清中的IgC具有相同的分子量和抗原性。IgY具有良好的热稳定性,对酸碱具有一定的耐受力。结论 WD水稀释法能得到高产量、高纯度的特异性IgY,而且有良好的生物学活性。     

A Study on Preparation of Anti-helicobacter Pylori Egg Yolk IgY and Its Biological Activity

目的:从免疫了幽门螺杆菌(Hp)抗原的母鸡蛋黄中提取抗Hp-IgY.方法:用超声破碎的Hp抗原免疫21周龄罗曼产蛋母鸡,取免疫后所产鸡蛋卵黄,利用水稀释法加硫酸铵盐析方法,提纯IgY,ELISA间接法检测抗体效价,Bradford法检测抗体蛋白含量,SDS-PAGE法检测其相对分子质量及纯度.结果:母鸡初次免疫后第7天,抗体效价即渐渐升高,约第45天达到高峰;蛋黄抗体经纯化后,抗Hp-IgY蛋白纯度可达90％以上,含量为6.25 g/L.结论:用超声破碎的Hp抗原免疫母鸡,盐析法提纯免疫母鸡产蛋黄中的抗Hp-IgY,可获得高纯度及高效价的抗Hp的特异性蛋黄抗体.     

抗幽门螺杆菌蛋黄免疫球蛋白IgY的制备及生物活性的研究

目的:从免疫了幽门螺杆菌(Hp)抗原的母鸡蛋黄中提取抗Hp-IgY。方法:用超声破碎的Hp抗原免疫21周龄罗曼产蛋母鸡,取免疫后所产鸡蛋卵黄,利用水稀释法加硫酸铵盐析方法,提纯IgY,ELISA间接法检测抗体效价,Bradford法检测抗体蛋白含量,SDS-PAGE法检测其相对分子质量及纯度。结果:母鸡初次免疫后第7天,抗体效价即渐渐升高,约第45天达到高峰;蛋黄抗体经纯化后,抗Hp-IgY蛋白纯度可达90%以上,含量为6.25 g/L。结论:用超声破碎的Hp抗原免疫母鸡,盐析法提纯免疫母鸡产蛋黄中的抗Hp-IgY,可获得高纯度及高效价的抗Hp的特异性蛋黄抗体。     

抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)卵黄免疫球蛋白(IgY)的制备与性质研究

目的观察鸡卵黄中抗耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant staphylococcus aureus,MRSA)抗体的含量、纯度、来源及稳定性。方法用耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)作为抗原免疫Leghorn鸡;通过改良水稀释法提取卵黄中的IgY;双紫外光波长测定抗体含量,SDS-PAGE电泳检测抗体纯度;Western blot免疫印迹法测定该抗体来源;ELISA检测IgY对温度、酸碱度的稳定性。结果抗体含量13.3 mg/mL蛋黄液,抗体纯度达96%;免疫印迹证明IgY与鸡血清中的IgG具有相同的分子量和抗原性;IgY具有良好的热稳定性,对酸碱具有一定的耐受力。结论改良水稀释法能得到高产量、高纯度的特异性IgY,而且有良好的生物学活性。     

抗白念菌IgY的动物实验研究

目的：制备抗白念珠菌特异性IgY,并对其尖性及应用进行研究。方法：自烧伤继发感染白念珠菌病人的创面分离出的白念珠菌免疫蛋鸡,并对从该鸡产的蛋白中分离提取出的特异性IgY进行纯化及活性测定,同时用于烧伤大鼠感染白念珠菌的预防。结果：本实验制备的IgY有与白念珠菌特异性结合的能力,并能明显抑制烧伤鼠创面（痂下组织）继发感染白念珠菌。结论：抗白念球菌特异性IgY有助于烧伤鼠预防白念珠菌的继发感染。     

抗HPV16L1 IgY抗体的制备及活性检测

目的 制备出高特异性的抗HPV16L1 IgY抗体,为HPV16L1蛋白的检测提供一种方法.方法 用纯化HPV16 L1蛋白免疫母鸡,分别收集鸡蛋,4℃下保存备用;经聚乙二醇法提取鸡蛋黄中IgY抗体;用酶联免疫吸附法检测IgY抗体效价的测定;采用免疫组织化学法通过对转染pcDNAEGFP-HPV16L1(含EGFP-HPV16L1融合基因)质粒的CHO细胞中L1蛋白的检测评价IgY抗体的特异性.结果 3次免疫之后,IgY抗体效价达到1:10 240,同时可特异性与转染pcDNAEGFP-HPV16L1(含EGFP-HPV16L1融合基因)质粒的CHO细胞中EGFP-HPV16L1 结合.结论 采用HPV16L1蛋白免疫母鸡,成功获得了较高效价的特异性IgY抗体,并可用于HPV16L1蛋白的细胞学检测,为IgY抗体在免疫组织化学检中的应用提供实验依据.     

抗白色念珠菌鸡卵黄抗体(IgY)的研制

目的：观察鸡蛋黄中抗体的产量、纯度、来源及稳定性。方法：应用白色念珠菌作为抗原免疫25周龄Leghorn鸡，通过改良水溶法（WD）提取蛋黄中抗体IgY，双紫外光测定抗体含量，SDS-APGE电泳检测抗体纯度，Western blot免疫印迹法测定该抗体来源，ELISA检测热处理后的抗体活性。结果：抗体含量13mg/ml蛋黄液，抗体纯度达到95%，Western blot免疫印迹证明该抗体与鸡血清中的IgG具有相同的分子量和抗原性。ELISA检测热处理后的抗体活性，其具有良好的热稳定性。结论：鸡蛋黄内含有丰富的抗体，通过WD水溶提取法可得到高产量，高纯度的特异性抗体IgY，证明其来源于鸡血清中的IgG，对热具有高度稳定性。     

IgY与双歧杆菌防治小鼠白色念珠菌感染的研究

目的 观察特异性抗白色念珠菌鸡蛋黄抗体IgY和双歧杆菌的体内生物学效应，探讨将二者复合应用的可能性。方法 建立无特殊病原菌(Specific pathogen free,SPF)小鼠烧伤后口服白色念珠菌感染模型，应用活菌计数方法检测其回肠膜粘附白色念珠菌量、盲肠内容物白色念珠菌量以及白色念珠菌脏器移位率。结果 烧伤SPF小鼠喂服IgY和双歧杆菌后，均能明显抑制肠道内白色念珠菌生长和白色念珠菌粘附肠上皮细胞；二者复合应用后还能明显降低脏器白色念珠菌移位率。结论 特异性鸡蛋黄抗体IgY具有良好的体内生物学效应且优于单独使用双歧杆菌，二者复合应用效果最佳。     

抗内毒素IgY的制备及稳定性研究

目的 用大肠杆菌J5制备特异抗内毒素IgY，探索防治内毒素血症的新途径。方法 用大肠杆菌J5作抗原免疫25周龄Roman鸡，水溶法提取抗体，进行SDS-PAGE及Western blot分析，通过酶联染色反应检测其免疫学活性，ELISA检测其时酸、碱和酶的稳定性。结果 抗体含量为11．4mg／ml蛋黄液，纯度为92．3％，分子量为180KD，初步鉴定其时内毒素具有特异性结合作用，并且对酸、碱、酶有很好的稳定性。结论 用大肠杆菌J5株免疫鸡可刺备出特异性抗内毒素的IgY，且具有良好的稳定性，作为口服制剂为预防和治疗内毒素血症奠定了基础。     

副溶血性弧菌高免卵黄抗体的制备和不同提纯方法效果的比较

目的：通过比较聚乙二醇（PEG）沉淀法、氯仿抽提法和氯仿/PEG法3种卵黄抗体（IgY）提纯方法的提纯效果,为批量提纯高质量IgY提供依据。方法：制备副溶血性弧菌灭活疫苗,采用肌肉多点注射法免疫高产蛋鸡,收集鸡蛋,分别采用PEG沉淀法、氯仿抽提法和氯仿/PEG法对鸡蛋中的IgY进行提纯,比较3种提纯方法获得的IgY的蛋白质量浓度、抗体效价和纯度,结合操作过程、成本效益及安全性对3种提纯方法进行综合分析比较。结果：3种方法所提纯的IgY中,蛋白质量浓度从高到低依次为氯仿抽提法、氯仿/PEG法、PEG法;抗体效价相差不大,氯仿抽提法稍高;抗体纯度由高到低依次为PEG法、氯仿/PEG法、氯仿抽提法。PEG法安全性较好,但提取效率相对较低,成本投入较高;氯仿抽提法能够高效地从卵黄中获得IgY,但提取物中掺杂了大量的杂质蛋白;氯仿/PEG法提纯效率高,抗体纯度好,成本效益相对较高。结论：PEG法适用于实验室中少量IgY的提取;氯仿/PEG法的提取效率高,抗体纯度好,可用于批量提取高质量的IgY。     

IgY联合乳酸杆菌防治阴道白色念珠菌感染的实验研究

目的:观察特异性抗白色念珠菌IgY和乳酸杆菌的体内外生物学效应,探讨将二者复合应用的可能性。方法:分离人阴道上皮细胞,用抗白色念珠菌IgY和乳酸杆菌对阴道上皮细胞预处理后进行白色念珠菌黏附抑制试验;建立小鼠白色念珠菌性阴道炎模型,通过阴道局部给抗白色念珠菌IgY和乳酸杆菌来观察其疗效。结果:抗白色念珠菌IgY和乳酸杆菌均能抑制白色念珠菌黏附阴道上皮细胞,并能减少白色念珠菌在小鼠阴道内的定植和减轻小鼠阴道局部的炎症反应。结论:特异性抗白色念珠菌IgY具有良好的体内外生物学效应且优于单独使用乳酸杆菌,二者复合应用效果最佳。