姜黄素抗鼻咽癌细胞增殖效应研究

目的 研究姜黄素体外抗鼻咽癌NCE细胞增殖效应.方法 以浓度为25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L的姜黄素处理NCE细胞48h,以MTT法、集落形成法检测姜黄素的细胞毒作用,以AO/EB复合染色、TUNEL检测、电镜和DNA片段化分析等方法分析姜黄素对细胞凋亡的影响.结果 25μmol/L～200μmol/L的姜黄素对NCE细胞增殖的抑制率分别为39.1%、60.9 %、78.3 %与91.3%,对集落形成的抑制率分别为47.0%、72.0%、85.0%与100%;并且可诱导NCE细胞凋亡.结论 姜黄素以剂量依赖性方式抑制鼻咽癌细胞增殖活性,可能是通过细胞凋亡诱导效应而发挥作用.     

白藜芦醇抑制喉癌Hep-2细胞系的生长

目的:研究白藜芦醇对喉癌细胞系Hep-2细胞生长的抑制作用。方法:在显微镜下计算细胞密度,MTT法绘制细胞生长曲线并计算细胞生长抑制率,利用软琼脂集落形成实验在倒置纤维镜下观察白藜芦醇处理Hep-2细胞前后细胞形态学变化及计算集落形成率。结果:各浓度的白藜芦醇均可使细胞生长曲线降低,细胞倍增时间延长。白藜芦醇也可以明显抑制Hep-2细胞形成集落,并发现白藜芦醇对细胞形态的影响与药物的剂量有明显的关系。结论:白藜芦醇对喉癌细胞系Hep-2细胞生长的抑制具有时间和剂量依赖性。     

Genistein对人鼻咽癌细胞系CNE抑制增殖和促进凋亡的作用及机制探讨

目的:研究genistein对人鼻咽癌细胞系CNE抑制增殖和促进凋亡的作用,探讨其抗癌作用的机制。方法:应用MTT检测不同浓度genistein在不同时间对鼻咽癌细胞系CNE的生长抑制作用;透视电镜下观察鼻咽癌细胞演变过程、凋亡细胞及凋亡小体,应用流式细胞仪分析细胞周期及凋亡率。结果:Genistein可明显抑制CNE细胞的增殖,并且这种抑制作用呈时间及浓度依赖性,随浓度的增加时间的延长抑制作用逐渐增强,尤以200μmol/L组最明显;Genistein诱导鼻咽癌细胞的早期凋亡率随浓度的增加而增强,200μmol/L时为49.9%;FCM分析发现genistein阻断CNE细胞生长于细胞周期的G2/M期;电镜观察到用药后凋亡细胞典型的形态学特征。结论:Genistein对鼻咽癌细胞系CNE的生长有明显的呈时间及浓度依赖性的抑制作用,其阻断细胞的生长主要在细胞周期的G2/M期,并且具有明显诱导CNE细胞凋亡的作用。     

Genistein对人鼻咽癌细胞系CNE抑制增殖和促进凋亡的研究

鼻咽癌是头颈肿瘤中具有鲜明流行病学、组织病理学、临床和治疗学特征的一种肿瘤。研究表明癌细胞的增殖活性是影响鼻咽癌生长进展的主导因素，肿瘤细胞的增殖活性与肿瘤的生物学行为与预后密切相关。Genistein（4，5，7-三羟基异黄酮，又名金雀异黄素）是一种广谱的蛋白酪氨酸激酶（protein tyrosine kinase，PTK）抑制剂。[第一段]     

白藜芦醇对甲状腺癌SW579细胞株的抗肿瘤作用及机制探讨

目的 观察白藜芦醇对甲状腺癌SW579细胞株的抗肿瘤作用并探讨可能作用机制。方法　体外常规培养甲状腺癌SW579细胞,将细胞分为对照组和白藜芦醇组（终 浓度为20、40、80 μmol/L）,MTT法检测甲状腺癌SW579细胞活性,BrdU荧光染色检测甲状腺癌SW579细胞增殖,DAPI染色法检测细胞凋亡,caspase-3和caspase-9活性检测试剂盒分析白藜芦醇对甲状腺癌SW579细胞亡的作用机制。结果　白藜芦醇（20、40、80 μmol/L）组甲状腺癌SW579细胞活性、BrdU表达、DAPI染色显著低于对照组,但细胞内caspase-3和caspase-9活性上升（P＜0.01）。Ac-DEVD-CHO和ZLEHD-FMK可显著提高白藜芦醇组（80 μmol/L）中甲状腺癌SW579细胞的活性（P＜0.05）。结论  白藜芦醇对抗甲状腺癌细胞具有抑制作用,通过激活caspase-3和caspase-9内源性凋亡信号通路可能是其作用机 制之一。     

槲皮素对人鼻咽癌HEN1细胞系增殖抑制和诱导凋亡作用的研究

目的:目的:探讨黄酮类化合物槲皮素对人鼻咽癌HEN1细胞系的抑制增殖和诱导凋亡的作用,并对其机制做初步探讨。方法:应用MTT法检测不同浓度槲皮素对人鼻咽癌HEN1细胞的增殖抑制作用;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期分布;比色法测定凋亡相关蛋白caspase-3的表达。结果:槲皮素能明显抑制人鼻咽癌HEN1细胞增殖,存在剂量依赖(r=0.709;P<0.01)与时间依赖(r=0.703;P<0.01);HEN1细胞经不同浓度槲皮素(15、30、60、90、120μmol/L)作用48 h后细胞凋亡率分别为4.81%、9.02%、14.33%、19.65%、28.88%,明显高于对照组(1.70%)(P<0.01);随着槲皮素浓度升高,凋亡细胞和坏死细胞比例增加,将细胞特异性地阻滞在G2/M期,出现凋亡峰;槲皮素组的HEN1细胞凋亡相关因子caspase-3表达明显高于对照组(P<0.05)。结论:槲皮素能通过caspase-3途径抑制人鼻咽癌HEN1细胞增殖,诱导细胞凋亡,并具有细胞周期特异性。     

TPA诱发Hep—2细胞株凋亡的研究

目的：探讨ＴＰＡ诱发人喉鳞癌细胞凋亡的规律及基因调控机制。方法：应用电镜及流式细胞仪分析技术进行观察和检测。结果：１ｎｍｏｌ／ＬＴＰＡ作用２小时，可明显地诱发Ｈｅｐ－２细胞凋亡（凋亡率为１１．１８％）；２４小时内，其诱导效率时间、剂量依赖性增强，最在亡率为２７．８％（１００ｎｍｏｌ／ＬＴＰＡ诱发２４小时）。细胞分裂阻滞于Ｇ１期。Ｂｅｌ－２的表达在１２小时出现明显的抑制，而Ｆａｓ在６小时即出现较高的     

bcl-2反义寡聚脱氧核苷酸抑制人喉癌细胞系增殖的研究

目的探讨ｂｃｌ－２反义寡聚脱氧核苷酸在喉癌基因治疗中的可能作用及机理。方法采用人工合成与ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ起始码及其后４个密码子互补的寡聚脱氧核苷酸（简称反义核酸）片段，处理培养的人喉癌细胞系Ｈｅｐ－２细胞，观察其对细胞增殖的影响。同时采用原位分子杂交及免疫组化技术，检测细胞内ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ及Ｂｃｌ－２蛋白水平，分析其变化规律。结果ｂｃｌ－２反义核酸片段对细胞内ｂｃｌ－２ｍＲＮＡ无明显影响，但可以显著抑制Ｂｃｌ－２蛋白合成，抑制率与反义核酸浓度及作用时间呈正相关。２０．０μｍｏｌ／Ｌｂｃｌ－２反义核酸可以有效地抑制细胞增殖。结论提示ｂｃｌ－２反义核酸可以在翻译水平特异性地抑制Ｈｅｐ－２细胞中Ｂｃｌ－２蛋白的合成与细胞增殖。进一步证明ｂｃｌ－２基因在喉癌的发生发展中具有十分重要的作用。     

17-AAG联合EGCG对人鼻咽癌细胞株增殖和凋亡的影响及机制研究

目的　研究17-烯丙胺-17-去甲氧基格尔德霉素（17-allyamino-17-demethoxygeldanamycin,17-AAG）和表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin-3-gallate,EGCG）单药或联合使用对人鼻咽癌细胞CNE的凋亡诱导作用,寻找鼻咽癌治疗的新方向。方法　MTT法和荧光染色分别检测CNE增殖抑制率及细胞形态的变化;RT-PCR检测Bcl-2、Bax和Caspase-3 mRNA的表达。结果　①17-AAG、EGCG单独作用于CNE细胞24、48、72 h,均有抑制作用,与时间和剂量相关（P＜0.01）;两者联合抑制作用显著增 加,且表现出时间、剂量依赖性（P＜0.01）。②RT-PCR检测联合用药时Caspase-3和Bax的mRNA表达明显高于单独用药组,Bcl-2 mRNA明显低于单独用药组。结论　17-AAG联合EGCG可显著抑制CNE细胞增殖,其可能与上调Bax和Caspase-3的表达发挥其抗鼻咽癌细胞的生长增殖作用。     

紫杉醇对人喉癌细胞系Hep-2的抑制作用研究

目的：通过体外实验评价紫杉醇对人喉癌细胞系Hep-2的抑制作用。方法：应用人喉癌细胞系Hep-2，将细胞暴露于不同浓度紫杉醇下，分别于6、12、24、48、72h收集标本，进行细胞形态观察；流式细胞仪细胞周期分析；MTT法检测细胞生长情况，绘制细胞生长曲线；应用琼脂糖凝胶电泳进行检测和观察。结果：人喉癌细胞系Hep-2在紫杉醇的作用下，细胞分裂阻滞在分裂期的中期，并诱导细胞发生凋亡；凋亡细胞表现为细胞固缩，核染色质凝聚或者断裂；细胞DNA裂解片段呈现典型的“阶梯状”排列的条带；紫杉醇对Hep-2的细胞毒性与剂量和时间有依赖关系。结论：紫杉醇诱发人喉癌细胞凋亡与细胞分裂期阻滞密切相关，随浓度和时间延长，G2／M期细胞的比率也增高。     

白细胞介素-2基因联合放疗对小鼠头颈鳞癌治疗作用的研究

目的：观察白细胞介素-2（IL-2）基因联合放疗对小鼠头颈鳞癌的抗肿瘤作用。方法：将25只小鼠平分为5组。利用SCCⅦ细胞株在C3H/HeJ小鼠口底建立头颈鳞癌荷瘤动物模型,IL-2组和联合组在荷瘤部位直接注射IL-2基因;EP组和对照组分别注射无目的基因的空载体和PBS,次日联合组与放疗组给予2Gy直线加速器的局部肿瘤放疗。4d后重复IL-2基因治疗,观察肿瘤治疗前后大小变化;检测肿瘤组织中CD4^ ,CD8^ 的表达,IL-2的分泌水平及自然杀伤细胞（NK）和细胞毒T淋巴细胞（CTL）的活性。结果：联合组肿瘤生长明显受抑制,疗效显著优于IL-2组,放疗组,EP组和对照组,IL-2组中,小鼠IL-2分泌水平明显升高,脾细胞NK活性和CTL杀伤活性增强,肿瘤组织内可见大片坏死,并含有大量的CD4^ ,CD2^ 淋巴细胞浸润,结论：IL-2基因治疗可提高肿瘤局部和全身的抗肿瘤免疫应答。能加强放疗的抗肿瘤效果。     

头颈部鳞状细胞癌瞬时受体电位M7通道蛋白与肿瘤细胞增生的关系

目的 探测头颈鳞状细胞癌(简称鳞癌)细胞中可能存在的离子通道蛋白瞬时受体电位通道M7(transient receptor potential melastatin 7,TRPM7),了解离子通道与肿瘤细胞生长和增生的关系.方法 运用免疫组化方法对人类头颈鳞癌SCC-25细胞株进行TRPM7抗体检测,结合被检测到的离子通道蛋白,运用非特异性离子通道阻断剂钆离子(Gd3+)和2-氨基乙氧基苯硼酸(2-aminoethoxydiphenyl borate,2-APB)阻断离子通道,并运用特异性TRPM7-siRNA抑制通道的表达,以了解该通道与细胞生长和增生的关系.细胞数最的评估选用乳酸脱氢酶实验.结果 所有被检测的SCC-25细胞均对1:100稀释比例的TRPM7抗体呈阳性反应,阴性对照组未能检测到免疫反应.非特异性离子通道阻断剂Gd3+对SCC-25细胞生长具有明显的抑制作用,10 靘ol/L Gd3+(n=16)及100 靘ol/L Gd3+(n=16)均可显著抑制SCC-25细胞的生长,与不加药的空白对照组比较差异有统计学意义(t值分别为4.1414和6.2661,P值分别为0.0256和0.0082).离子通道阻断剂2-APB对SCC-25细胞生长的抑制作用十分强大,100 靘oL/L 2-APB(n=16)几乎使SCC-25细胞生长完全停止,与不加药的空白对照组比较差异有统计学意义(t=13.4493,P=0.0008).特异性TRPM7-siRNA能明显抑制SCC-25细胞的生长,在TRPM7-siRNA的终浓度为30 nmol/L时,细胞乳酸脱氢酶释放实验结果显示TRPM7-siRNA能显著降低SCC-25细胞的生长速率(t=4.3446,P=0.0002,n=32),而阴性对照siRNA则不影响细胞的生长.结论 人类头颈鳞癌SCC-25细胞株中存在TRPM7通道;运用离子通道阻断剂或运用特异性TRPM7-siRNA抑制该通道的表达均能明显抑制肿瘤细胞的生长;2-APB对人类头颈鳞癌细胞生长的强大抑制作用表明TRPM7通道蛋白将来可能成为头颈鳞癌治疗的重要靶点之一.     

EGCG诱导头颈部鳞状细胞癌细胞凋亡的初步研究

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸脂（epigallocatechin-3-gallate,EGCG）对头颈部鳞状细胞癌（简称鳞癌）细胞凋亡的诱导作用及其分子机制。方法不同浓度EGCG处理头颈部鳞癌细胞系TU212和TU17772小时,流式细胞法检测细胞凋亡率;Western-blot检测凋亡相关蛋白的表达水平;然后用EGCG处理TU212和TU177,在不同时间点观察蛋白激酶（proteinkinase,AKT）和p-AKT的表达水平。结果EGCG呈剂量依赖性引起头颈部鳞癌细胞凋亡;caspase 9、caspase 3的活化水平和PARP的表达显著增加;同时,EGCG呈时间依赖性地降低AKT蛋白的表达活性。结论EGCG可诱导头颈部鳞癌细胞凋亡,这一过程很可能是通过AKT介导的信号通路和线粒体介导的凋亡通路来实现的。     

Detection of lymph node micrometastases in patients with squamous carcinoma of the head and neck

While the significance of large cervical node metastases in patients with head and neck squamous carcinomas is well established, the import of a finding of regional nodal micrometastases (where a micrometastasis is defined as a metastatic deposit greater than 0.2 mm and not greater than 2.0 mm in greatest dimension) or isolated tumor cells in those patients is less clearly understood. Some earlier investigators have suggested that finding micrometastases does not have an impact on prognosis; some later investigators, however, have taken issue with this position, arguing that finding either micrometastases or isolated tumor cells might portend a poorer prognosis for head and neck cancer patients. At this juncture, it is difficult to advance a single recommendation for handling a finding of micrometastases or isolated tumor cells. It would be helpful if two courses of action were followed: first, while the detection of micrometastases and isolated tumor cells remains an investigatory practice, data should be collected and analyzed with an eye to discerning whether such findings are indeed of significance to the individual head and neck cancer patient. Second, rigorous definitions of micrometastases and isolated tumor cells (such as the definitions suggested here) should be developed and widely employed so as to permit ready comparison between the results as they are reported by different investigators.     

Cancer stem cells in head and neck squamous cell carcinoma

Recent studies have demonstrated that cancer stem cells (CSC) play an important role in the pathobiology of head and neck squamous cell carcinomas (HNSCC). This subpopulation of undifferentiated, self-renewing cells is responsible for resistance to conventional anti-cancer therapy, cancer recurrence, metastasis and ability to form a heterogeneous tumor. CSC are identified on the basis of specific markers, including membrane proteins or cell enzymes, or by using their self-renewal properties. As their resistance to standard HNSCC treatment may eventually lead to the lack of treatment success, there is an urgent need to better understanding CSC biology and identify them as potential target new treatment modality.     

The effects of thymostimulin on immunological function in patients with head and neck cancer

Patients with head and neck carcinoma show deficits of cellular immunity, probably due to low molecular mass factors (LMMFs) released by the tumour. Thymostimulin (TP1) restores the defective monocyte chemotaxis and dendritic cell clustering capability in the presence of the tumour when administered pre-operatively. In the present study we investigated these immune parameters in 39 patients treated with TP1 for 10 days pre- and 6 months post-operatively and in 22 patients who were not treated with TP1 for 6 months after operation. Removal of the tumour in non-TP1-treated patients also resulted in a restoration of monocyte and dendritic cell functions, while TP1 treatment gave no additional effect. LMMF levels in the blood of both TP1-treated and non-TP1-treated patients remained elevated even after removal of the tumour, and it is therefore concluded that it is unlikely that depression of cellular immunity is a direct effect of these LMMFS.     

头颈部肿瘤患者自然杀伤细胞活性及计数分析

本文对25例头颈部肿瘤患者的外周血NK细胞杀伤活性及NK细胞计数进行测定，其中有15例患者手术治疗切除肿瘤，于术后三周复查NK活性及NK计数，并与正常人组对照。实验结果显示：头颈部肿瘤患者NK活性及NK计数均低于正常人，两组比较均有极显著性差异（P＜0．01）；术后患者的NK活性比术前有明显提高，配对t检验P＜0．01，NK计数比术前也有所提高，配对t检验P＜0．05，有显著性差异；NK活性的水平与肿瘤的分期有相关性，晚期（T4期）癌症患者NK活性明显低于早期（T1、T2）患者，可以看出NK活性随着肿瘤的发展而降低，肿瘤对宿主有免疫抑制作用；NK活性与NK数量之间无显著的相关性，二者之间的相关系数r＝0．344。