ABO血型抗体吸附剂:冻干红细胞膜的初步研究

目的制备冰冻干燥红细胞膜,探索其作为ABO血型抗体吸附剂去除血型抗体、制备通用型红细胞的可行性。方法收集A、B型红细胞膜,作冰冻干燥处理,与O型血浆中血型抗体反应后,检测血浆中抗体效价,评价其对血浆抗体的吸附效果;检测红细胞结构、功能及血浆中凝血因子活性变化,评价冻干红细胞膜与红细胞及凝血因子的兼容性;采用离心的方法去除残留的冻干红细胞膜。结果冰冻干燥红细胞膜上的抗原可有效吸附血型抗体、降低血浆中的血型抗体效价,全血中红细胞的变形指数、ATP含量,与反应前比较差异无统计学意义(P>0.05),反应前后均在正常参考范围内;全血血浆中各种凝血因子活性在吸附前后比较差异亦无统计学意义(P>0.05)。采用离心法可去除冻干红细胞膜,清除率约为77%。结论冰冻干燥的红细胞膜保持了很好的抗原性,作为ABO血型抗体的吸附剂能够有效去除ABO血型抗体;冰冻干燥红细胞膜不影响其中红细胞和凝血因子的理化性状和生物活性,并可通过离心的方法去除。     

去除血型抗体制备O型红细胞的研究

目的建立去除血浆中血型抗体的O型红细胞的制备工艺,为临床提供安全的O型红细胞制剂。方法使用处理后的冰冻干燥A型、B型红细胞膜,分别加入O型红细胞血浆中吸附血浆血型抗体物质,并检测吸附后红细胞的结构和功能。结果使用海藻糖冻干保存红细胞膜可保存其抗原性,吸附后,可去除血浆中抗A、抗B抗体80%—99%,同时红细胞变形指数、ATP、渗透脆性、上清游离Hb含量与吸附前(正常红细胞)比较差异无统计学意义(P>0.05),均在正常参考范围;流式结果显示,吸附后采用离心方法,红细胞膜去除率可达到77%。结论用冰冻干燥红细胞膜去除ABO血型抗体为O型红细胞的他型输注奠定了基础。     

自制质控品在临床输血相容性检测中的应用研究

目的探索通过自制室内质控品,监测临床输血相容性检测项目的稳定性和重复性,完善输血相容性检测的室内质量控制体系。方法选取血浆制备成O、A、B型和AB型血浆质控品,取RhD阳性的A1、B和O型红细胞制备成红细胞质控品,抗-D(IgG)人血清做抗-D效价测定,确定出现最后1个2+凝集强度的稀释倍数,加入O型血浆中;血浆与红细胞质控品制备后分别经过亲和力、抗体效价检测、抗原性和特异性检测等验证后,按照设计的室内质控模式,分别进行ABO血型鉴定、RhD血型鉴定、交叉配血试验及不规则抗体筛查试验。结果抗原、抗体亲和力均<15 s;抗-A效价>128,抗-B效价>64,抗-AB效价>128,AB型血浆不含抗-A、抗-B;A型红细胞与128倍稀释的抗-A凝集,B型红细胞与64倍稀释的抗-B凝集;抗-A与A红细胞凝集,与B、O红细胞不凝集,抗-B与B红细胞凝集,与A、O红细胞不凝集;A红细胞与抗-A凝集,与抗-B不凝集,B红细胞与抗-B凝集,与抗-A不凝集,O红细胞与抗-A、抗-B均不凝集。结论通过2年的室内质控应用,证实自制质控品性能具有稳定性与可靠性,并能长期保存,符合室内质控品要求,是1种较经济且可行的方法。     

血浆与红细胞悬液上清液中抗体效价及血浆蛋白的含量分析

目的了解血浆与红细胞悬液上清液中血型抗体效价和血浆蛋白含量。方法选取无偿献血者162名(A型53例,B型52例,O型57例)制备的血浆和红细胞悬液,对后者混匀后离心取上清液,抗-A、抗-B效价和血浆蛋白的含量检测并进行比较。结果血浆与红细胞悬液上清液中血型抗体效价比较,A型血浆抗-B效价(30.76±23.28),A型红细胞悬液抗体效价(5.00±3.37);B型血浆抗-A效价(20.08±20.62),B型红细胞悬液抗体效价(2.75±2.15);O型血浆抗-A效价(33.54±21.03),红细胞悬液抗体效价(5.33±3.09),血浆抗-B效价(31.37±20.75),细胞胞悬液抗体效价(4.98±2.97)。血浆各类蛋白与红细胞悬液上清液中A型比较均有统计学意义(P<0.01)。血浆抗体效价均数约为红细胞悬液上清液的6倍;血浆各类蛋白约为红细胞悬液上清液的7～8倍。结论悬浮红细胞中抗体效价低且蛋白含量少,可以在交叉配血时只做主侧配血即可。     

献血者抗-A、抗-B抗体效价调查

目的通过对献血者抗-A、抗-B抗体效价的测定,探讨献血者抗-A、抗-B抗体效价的分布和特点及其与年龄、性别、血型的关系,指导疑难血型鉴定和临床安全输血。方法采集献血者标本5031份和对照标本（60岁以上老年组血浆）400份,采用抗体效价盐水测定法检测血浆中抗-A、抗-B IgM抗体效价,对检测结果进行统计和分析。结果献血者血浆中抗-A抗体效价平均积分1：82,抗-B抗体效价平均积分1：70;抗-A、抗-B抗体效价随年龄的增长逐年下降,60岁后快速下降;血浆中抗-A、抗-B抗体效价以女性高于男性;血型不同,其血浆中抗-A、抗-B抗体效价不同,以O型最高,B型次之,A型最低。结论抗-A抗体效价平均积分高于抗-B;老年人抗-A、抗-B抗体效价明显下降;女性献血者血浆抗-A、抗-B抗体效价较高,O型献血者抗-A和抗-B抗体效价高。O型全血和O型血浆不宜异型相输,紧急情况下输血应尽量去掉血浆后输注;O型孕妇在怀孕后应防止新生儿溶血病的发生。     

血型抗体浓缩技术在溶血性输血反应检测中应用

目的探讨海藻糖-聚乙二醇(PEG)法血型抗体浓缩技术在溶血性输血反应(HTR)检测中应用价值。方法以海藻糖-PEG法血型抗体浓缩技术处理已知抗体特异性血清(抗A、B、D、E、M、N、S)和疑似HTR患者血清,再分别检测血型抗体活性或效价,观察标本中红细胞血型同种抗体在浓缩前后的效价变化。结果经海藻糖-PEG法处理后,IgG型血型抗体效价升高2～4倍,IgM型血型抗体效价升高2～6倍,二者升高倍数比较差异有统计学意义(P<0.01);可有效检出低浓度血型抗体。结论海藻糖-PEG法血型抗体浓缩技术操作简便,可提高血型抗体检测灵敏度。     

病毒灭活血样对输血相容性检测的影响

目的探讨新冠肺炎流行形势下,血液样本经56℃ 30 min病毒灭活处理后对部分血型抗原性及抗体效价的影响。方法选取20例不同血型样本和6例含不规则抗体样本,在样本加热灭活处理前后,采用微柱凝集试验分别检测血液样本部分血型抗原性和抗体效价。根据反应凝集强度判断ABO血型抗原性,抗体效价以凝集强度1+为判定标准,比较热灭活前后样本红细胞ABO抗原性和血浆中抗体效价的变化。结果 56℃ 30 min灭活处理的血液样本溶血严重,对ABO血型抗原检测无影响,不规则抗体效价降低1～2个滴度,对效价≤4的抗体会漏检,对效价4的抗体检出无影响。结论血液样本热灭活,对ABO血型系统以外抗体效价有一定影响,但能有效降低操作者的职业暴露风险。     

红细胞膜免疫磁珠检测成分血中抗A/抗B的研究

目的比较应用红细胞膜免疫磁珠法及传统方法进行成分血中抗A/抗B效价检测之间的相关性。建立应用红细胞膜免疫磁珠检测血浆标本中高效价抗体的方法。方法采用新鲜细胞试管法、微柱凝胶法及红细胞膜免疫磁珠法进行血浆样本抗体效价检测。将试管法检测效价≥128的样本10倍、15倍、20倍稀释后,用红细胞膜免疫磁珠检测,测定其凝集强度。结果微柱凝胶法最敏感,其次为试管法,红细胞膜免疫磁珠法低于试管法1个滴度。将试管法检测效价≥128的待检样本15倍稀释后,用红细胞膜免疫磁珠检测,其凝集强度≥2+。结论红细胞膜免疫磁珠可做为标准红细胞抗原应用于抗体效价检测,将样本进行15倍稀释,若凝集强度≥2+,则可视其带有高效价抗体。     

24h冰冻血浆代替新鲜浆输注的可行性研究

目的探讨全血4℃保存24 h后制备的普通浆(FP)中部分凝血因子活性的变化,为临床选择不同血浆输注提供实验室依据。方法同日采集100袋全血,按血型比例随机分为2个实验组。第1组6 h内分离血浆并冰冻成块,第2组24 h后分离血浆并冰冻成块。2组于-30℃保存30 d后,进行凝血因子Ⅴ(FⅤ)、凝血因子Ⅶ(FⅦ)、凝血因子Ⅷ(FⅧ)及纤维蛋白原(Fib)的检测。结果 2组FⅤ、FⅦ和Fib水平差异无统计学意义(P>0.05),与FⅧ水平差异有统计学意义(U=2.18,P<0.05)。第2组FⅧ、FⅤ活性分别较第1组下降29.5%、9.7%;而FⅦ和Fib活性均无明显变化。结论全血4℃保存24 h后制备的普通浆凝血因子活性可满足大部分临床输注新鲜浆的要求。     

孕妇O型血中抗A、抗B效价检测的方法学研究

正人类血型至今已知有36种,ABO血型系统在临床输血及致新生儿溶血病实验中意义最为重要,其中孕妇为O型,不规则抗体阴性,配偶为非O型常常需要检测抗A、B效价,因为孕妇体内抗A、B IgG型抗体效价过高(大于256)会通过胎盘屏障与胎儿(非O型)红细胞结合、致敏而发生新生儿溶血病[1,2]。因此,常通过检测孕妇血浆中抗A、B效价来评估新生儿溶血病发生的可能性[3]。目前用2-Me处理标本常达不到实验要求,为了更好地检测抗体效价的真实水平和提高检出率,我们利用IgM     

正常O型人血清ABO血型抗体主要类别的分析

目的通过检测O型及A/B型人血清中IgM类及IgG类抗体的效价,分析正常O型人血清中ABO血型抗体的主要类别。方法分别以盐水介质法和间接抗人球蛋白法检测O型及A/B型人血清中IgM类和IgG类抗A或抗B抗体的效价。结果 O型人血清中IgM类抗A/抗B抗体效价均显著高于IgG类抗A/抗B抗体（均P〈0.01）;O型人血清中IgM类抗A/抗B抗体效价与B/A型人比较无显著性差异（均P〉0.05）,而IgG类抗A/抗B抗体效价显著高于B/A型人（均P〈0.01）;O型人血清中IgG类与IgM类抗A/抗B抗体效价的比值均显著高于B/A型人（均P〈0.01）。结论 O型人ABO血型抗体仍以IgM类为主,但其IgG类抗体效价及在血清中所占的比例要明显高于A/B型人。     

83例疑难ABO血型鉴定及分析

目的检测和鉴定ABO疑难血型,为安全输血提供质量保障。方法采用血型血清学方法进行盐水介质正、反定型;对盐水介质正、反定型不合者使用聚凝胺法检测和不规则抗体检测;采用吸收试验和放散试验进行ABO血型的检测,以准确鉴定ABO疑难血型。结果 83例标本ABO血型检测结果为,AB亚型9例、B亚型1例、弱A抗原7例、弱B抗原6例、低抗-A效价2例、低抗-B效价3例、不规则抗体阳性7例、无抗体O型4例、低抗-B效价O型2例、无抗-B抗体A型5例;37例标本经盐水介质和Polybrine法检测,正、反定型结果符合。结论用聚凝胺法、吸收试验和放散试验进行ABO疑难血型检测,能准确、及时鉴定ABO疑难血型。     

抗A和抗B血型定型试剂稳定性观察及对亚型检测的影响

目的检测国产单克隆抗A(B)试剂质量,观察对ABO亚型检测的影响。方法测定四个厂家"单抗A、抗B"试剂效价、亲和力等,并检测稀有的ABO亚型红细胞与单克隆试剂反应情况,同时用人源抗A、抗B试剂作对照。结果所有厂商的试剂均符合国家标准,单克隆抗体仍有漏检ABO亚型现象。结论目前市场销售的单克隆抗A、抗B血型定型试剂,质量基本可靠,但应定期测定其效价、亲和力,受检者ABO血型检测必须用ABO反定型试验复核。     

双精子嵌合体致ABO血型正反定型不符1例简

目的 对1例正定型呈混合凝集的ABO正反定型不符样本进行鉴定.方法 采用微柱凝胶法进行ABO、RhD血型鉴定、直接抗球蛋白试验和不规则抗体筛查,PCR-SSP法进行ABO基因分型,并分析外周血染色体核型.结果 先证者ABO正定型为红细胞混合凝集,反定型检出抗-A1;母亲和父亲分别为O型和AB型.先证者ABO基因座位存在O1、A201和B三个等位基因,其中O1来自母亲,A201和B来自父亲.核型分析显示先证者血液中存在46,XX和46,XY两种细胞,而父母核型正常.结论 先证者为孤雌分裂产生的两个相同的卵子被两个精子受精后所产生的嵌合体.     

Nondeletional ABO*O alleles frequently cause blood donor typing problems

BACKGROUND: Difficulties in the demonstration of expected isoagglutinins is a common problem in ABO reverse typing. Some nondeletional ABO*O alleles have been shown to encode for the expression of minimal amounts of A antigen, resulting in very weak anti-A activity in some cases. It is unknown whether minor problems with ABO reverse typing are related to specific ABO*O alleles. STUDY DESIGN AND METHODS: Among 2196 blood group O red cell (RBC) donations, the ABO alleles of those donations in which the isoagglutinins were incorrectly identified were analyzed with an autoanalyzer. The presence of nondeletional ABO alleles was determined by sequence-specific priming and sequencing. RESULTS: Fifty (2.3%) of the group O RBC donations tested had to be typed manually because of isoagglutinin detection problems in automated typing: reduced anti-A activity was observed in 45 cases, reduced anti-B activity in 4 cases, and variably reduced isoagglutinin activity in 1 case. The nondeletional ABO*O alleles ABO*O03 and ABO*Aw08 were implicated in 38 of these 50 cases (1.7% of all blood group O donors). The remaining samples, including those with reduced anti-B activities, were homozygous for deletional ABO*O alleles. CONCLUSION: Nondeletional ABO*O alleles are the most frequent cause of isoagglutinin detection problems in blood group O donors.     

中国汉族人群检出B(A)803C→G等位基因并引起重度新生儿溶血病的研究

目的研究ABO血型系统中血清学定型违反一般血型遗传规律的家系中基因型的遗传学基础，并分析引起重度新生儿溶血病（HDN）的原因。方法对一母亲为O型、父亲为AB型、新生儿为AB型的家系进行研究。利用亲子鉴定，血清学实验，PCR-序列特异性引物（SSP）法和ABO基因第6及第7外显子直接测序的方法进行基因定型，揭示此家系的血型基因分子生物学背景。同时采用微柱凝胶技术做HDN检查，并对新生儿的主要生化和血常规指标进行动态观察。结果亲子鉴定结果显示三代AB型家系成员有亲子关系，本AB型家系成员血型血清学表现为红细胞与多种不同厂家的单克隆抗-A、抗-B和人源性抗-A、抗-B均发生强凝集（4＋）；反定型血清中不含有抗-A和抗-B抗体。PCR-SSP法未检出三代AB型家系成员的A和B型基因。ABO基因第6及第7外显子直接测序方法检测到三代AB型家系成员均有B（A）803C→G的变异基因存在。新生儿发生重度HDN。结论本家系遗传学基础是B（A）803G血型基因能够合成同时具有A和B双功能活性的糖基转移酶。首次报道了因B（A）血型新生儿红细胞上同时有大量A和B抗原而引起重度ABO系HDN。     

Reduction of anti-A and anti-B isoagglutinin titers of group O whole blood units employing an ABO antibody immune adsorption column

BackgroundMassive hemorrhage is a leading cause of death from trauma. There is growing interest in group O whole blood transfusions to mitigate coagulopathy and hemorrhagic shock. Insufficient availability of low-titer group O whole blood is a barrier to routine use. We tested the efficacy of the Glycosorb® ABO immunoadsorption column to reduce anti-A/B titers in group O whole blood.MethodsSix group O whole blood units were collected from healthy volunteers, and centrifuged to separate platelet poor plasma. Platelet-poor plasma was filtered through a Glycosorb® ABO antibody immunoabsorption column, then reconstituted to prepare post-filtration whole blood. Anti-A/B titers, CBC, free hemoglobin, and thromboelastography (TEG) assays were performed on pre-and post-filtration whole blood.ResultsMean( ± SEM) anti-A (224 ± 65 pre vs 13 ± 4 post) and anti-B (138 ± 38 pre vs 11 ± 4 post) titers were significantly reduced (p = 0.004) in post-filtration whole blood. No significant changes were detected in CBC, free hemoglobin, and TEG parameters on day 0. Free hemoglobin increased throughout storage (48 mg/dl ± 24 Day 0 vs 73 ± 35 Day 7 vs 96 ± 44 Day 14; p = 0.14).ConclusionsThe Glycosorb® ABO column can significantly reduce anti-A/B isoagglutinin titers of group O whole blood units. Glycosorb® ABO could be employed to provide whole blood with lower risk of hemolysis and other consequences of infusing ABO incompatible plasma. Preparation of group O whole blood with substantially reduced anti-A/B would also increase the supply of low-titer group O whole blood for transfusion.     

The etiology of ABO hemolytic disease of the newborn

The etiology of ABO hemolytic disease of the newborn is complex because of the natural presence of anti-A and/or anti-B in individuals who do not possess the A and/or B antigen. Although only IgG anti-A and anti-B can cross the placenta, these antibodies are found in the circulation of most newborn infants born to blood group O mothers. The A and B antigens are much weaker on the red blood cell of newborn infants than of adults. This relatively weak reactivity constitutes a major protective factor against maternal antibodies which have crossed the placental barrier. However, much variation was found in the strength or the reactivity of the A antigen among infants born at term. This variation was large enough to account for the poor quantitative relationship between maternal antibody levels and the ensuing hemolytic process in the infant. Thus, the variation in antigen strength among newborns constitutes an unpredictable factor in the etiology of ABO hemolytic disease. Infants with a relatively weak A antigen can tolerate a moderately high level of circulatory anti-A without any untoward effects, while in the presence of the same antibody level, infants with a relatively strong A antigen, a portion of the red blood cells will be destroyed.