新质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrB24的克隆表达

目的研究新质粒介导喹诺酮耐药基因qnrB24的耐药特性。方法 PCR扩增qnrB24基因全编码区,对PCR产物进行测序分析,将qnrB24与克隆载体PHSG398双酶切连接,转化入E.coil JM109受体菌中表达。用E试验纸条法对携带qnrB24的临床菌株、受体菌和克隆表达株进行常用喹诺酮类抗菌药物敏感性试验。结果 qnrB24与qnrB10同源性为98.7%,3个碱基位点发生同义突变,分别为139位C→A,257位C→T,670位A→G,导致氨基酸改变为47位亮氯酸→蛋氨酸,86位丙氨酸→缬氨酸,224位异亮氨酸→缬氨酸。qnrB24基因表达株对常见氟喹诺酮类抗菌药物的敏感性较受体菌下降为原来的近1/8,但耐药水平低于临床分离菌株1/32～1/128。结论本研究首次发现qnrB24基因,qnrB24基因可以轻度增加氟喹诺酮类药物的耐药性。     

氟喹诺酮耐药志贺菌中质粒介导qnr基因的检测

目的检测志贺菌对氟喹诺酮抗菌药物的耐药情况,探讨氟喹诺酮耐药与志贺菌携带质粒介导qnr基因的关系。方法用纸片扩散法对100株志贺菌（福氏志贺菌50株,宋内志贺菌50株）进行耐药性检测,聚合酶链反应（PCR）检测志贺菌质粒介导qnr基因并进行DNA测序,分析qnr基因的存在与药敏结果的关系。结果 100株志贺菌中有9株检出qnr基因,检出率为9%（9/100）,福氏志贺菌为4%（2/50）,宋内志贺菌为14%（7/50）;qnr基因阳性菌株对氧氟沙星的耐药率（11.1%）高于阴性菌株（5.5%）,但差异无统计学意义。qnr基因阳性菌株对5种氟喹诺酮药物的抑菌圈中位数比较均缩小。结论宋内志贺菌质粒介导氟喹诺酮耐药qnr基因的携带率明显高于福氏志贺菌;志贺菌若携带质粒介导qnr基因则会导致对氟喹诺酮药物的敏感性下降。     

质粒介导的喹诺酮类药物耐药研究进展

喹诺酮类药物（Quinolones）是一类广谱、强效的化学合成抗细菌药物。长期以来，细菌通过染色体介导的靶位点改变、蓄积减少（包括孔蛋白缺失、主动外排增加）等机制逐渐对其形成耐药。尽管有报道发现有喹诺酮类耐药基因在移动片段上并可通过转化完成水平基因转移，但质粒介导耐药仍十分罕见。     

变形杆菌质粒介导的喹诺酮耐药基因的检测

目的 了解临床分离的变形杆菌质粒介导的喹诺酮类耐药基因(qnr基因)存在情况.方法 用PCR检测对146株变形杆菌的qnr基因.药敏试验用M-H肉汤微量稀释法.结果 146株变形杆菌中有3株检出qnr基因:分别为qnrA、qnrB2、qnrS1,其中有1株同时携带qnrB2和qnrS1.qnrB2在第259位碱基发生C→A(精氨酸→丝氨酸)突变,3种qnr基因序列已在基因库注册,授权号:EF488761,EF488762,EF501989.3株qnr基因阳性株中2株为产ESBLs菌株.结论 qnr基因在变形杆菌中的携带率较低.     

质粒介导喹诺酮耐药基因qnr在大肠埃希菌中流行现状及耐药特征

目的了解该院分离的大肠埃希菌中质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrA,qnrB,qnrS的流行情况及其耐药特征。方法用PCR法对129株大肠埃希菌进行qnrA,qnrB,qnrS基因检测,并用K-B纸片法检测其对15种抗菌药的体外抗菌活性,另外用琼脂平皿二倍稀释法检测阳性菌株对环丙沙星的M IC值。结果129株大肠埃希菌中,5株(3.88%)检出qnrA基因,8株(6.20%)检出qnrB基因,3株(2.33%)检出qnrS基因。阳性菌株均对亚胺培南敏感且对多种抗生素耐药,其中2株qnrA阳性菌株和3株qnrB阳性菌株对环丙沙星敏感。结论湖北地区大肠埃希菌中存在质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrA,qnrB,qnrS基因的流行,qnr阳性株呈多重耐药,且敏感株中有该类基因的存在,应加强监测。     

革兰阴性杆菌临床分离株质粒介导喹诺酮类耐药研究

目的了解质粒介导耐药机制在革兰阴性杆菌临床株对喹诺酮类抗菌药耐药性形成中的作用。方法以PCR方法筛选541株连续分离的所有环丙沙星耐药或中介革兰阴性杆菌中的耐药基因qnrA;以接合试验了解喹诺酮耐药的可转移性;对qnrA阳性株测定氨基糖苷乙酰化酶aac(6′)-Ib-cr基因,分析了gyrA和parC基因的喹诺酮耐药决定区的变异。结果541株革兰阴性杆菌中,7株肠杆菌科细菌qnrA检测阳性,其中4株为阴沟肠杆菌,在不发酵糖菌中未检出qnrA基因。在7株qnrA阳性菌中,4株喹诺酮耐药性可通过质粒转移,接合子对环丙沙星的MIC较受体菌上升12～125倍。4个接合子中环丙沙星MIC较高的2个结合子携带aac(6′)-Ib-cr,7株qnrA阳性临床分离菌中5株耐药决定区gyrA、parC有变异。结论qnrA在肠杆菌属临床分离株中的检出率较高,aac(6′)-Ib-cr基因及靶位改变与qnrA同时存在可能使细菌对喹诺酮类的耐药性进一步上升。     

从患者胆汁分离的大肠埃希菌中质粒介导的氟喹诺酮类耐药基因的检测

目的 分析浙江省衢州市开化县第二人民医院消化内科胆汁分离的大肠埃希菌的耐药特点并调查质粒介导的喹诺酮类耐药基因的分布情况和流行特点。方法 收集该院消化内科患者2011年1月至2013年6月分离的大肠埃希菌724株,均为非重复性菌株,采用全自动微生物分析仪器VITEK 2 COMPACT进行细菌鉴定及药物敏感性分析,采用聚合酶链反应 (polymerase chain reaction,PCR)分析质粒介导的氟喹诺酮类耐药基因(plasmid-mediated quinolone resistance genes, PMQR) 如qnrA、qnrB、qnrS、aac(6')-Ib-cr和qepA 基因的流行特点。结果 胆源性大肠埃希菌的构成比达18.65%(135/724),其对环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率高达61.5%(83/135)和55.6%(75/135),未检出碳青霉烯类抗生素耐药菌株;PCR检测PMQR基因结果显示:135株胆源性大肠埃希菌中,121株 (89.63%) qnrA1 基因阳性,45株(33.33%) qnrB4 基因阳性,32株 (23.70%) qnrB6 基因阳性,43株(31.85%) qnrS1 基因阳性,34株(25.19%) aac(6')-Ib-cr 基因阳性菌株,未检出qepA基因;其中45株(33.33%)同时携带 qnrA1、qnrB4 基因,32株(23.70%)同时携带 qnrA1、qnrB6, 25株(18.52%)同时携带 qnrA1、qnrB4、qnrS1, 21株(15.56%)同时携带 qnrA1、qnrB4、qnrS1、acc(6')-Ib-cr, 12株(100%)同时携带 qnrA1、qnrB6、qnrS1、acc(6')-Ib-cr, 且环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率随着PMQR基因组合种类的增多而增多。结论 消化内科胆汁分离的大肠埃希菌氟喹诺酮类抗生素耐药严重,耐药基因主要以 qnrA1为主,qnrB4和qnrB6 次之,且存在多种PMQR基因组合形式,这些潜在播散的氟喹诺酮耐药基因对于临床胆道感染的治疗有很大的挑战。     

肺炎克雷伯菌质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrA、qnrB和qnrS的研究

目的调查我院临床分离的产超广谱β-内酰胺酶的肺炎克雷伯菌中,质粒介导的喹诺酮类耐药基因qnrA、qnrB和qnrS的存在情况,为临床预防感染及合理使用抗菌药物提供依据。方法收集2007年7月至2008年12月间临床分离的产超广谱β-内酰胺酶的肺炎克雷伯菌57株,用PCR法检测qnrA、qnrB和qnrS基因,并对部分阳性菌株进行测序。采用E-test方法测定阳性菌株的药敏情况。结果 57株肺炎克雷伯菌中,25株(43.9%)检出qnr基因,其中3株(5.3%)含qnrA基因,21株(36.8%)含qnrB基因,20株(35.1%)含qnrS基因;3株(5.3%)qnrA、qnrB和qnrS同时阳性,13株(22.8%)qnrB和qnrS同时阳性。结论我院产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌质粒介导的喹诺酮类耐药基因qnr携带率很高,临床上应加强喹诺酮类耐药基因的检测,以避免产qnr基因菌株的感染爆发流行。     

大肠埃希菌临床分离株对喹诺酮类抗菌药的质粒介导耐药

目的 了解近年来发现的质粒介导耐药机制在大肠埃希菌临床株对喹诺酮类耐药中所起的作用。方法 78株环丙沙星耐药菌株分离自上海5所教学医院。以克隆斑点杂交及Southern杂交方法筛选质粒介导耐药基因qnr；以接合试验了解喹诺酮耐药的可转移性；对qnr基因进行序列分析，以引物步移法对qnr周边质粒DNA进行测序、分析。结果 78株大肠埃希菌中，6株（7．7％）qnr检测阳性。在6株阳性菌中，喹诺酮耐药性均可通过质粒转移，接合子对环丙沙星的MIC较受体菌上升16～250倍。qnr基因与最早报道的序列一致，qnr位于In4族的Ⅰ类整合子上，本研究中的2个新整合子命名为In36及In37。结论 与qnr相关的质粒介导喹诺酮类耐药性在大肠埃希菌临床分离株中有一定程度流行，这可能是我国细菌对喹诺酮类耐药性上升迅速的原因之一。     

大肠埃希菌耐药特征及质粒介导喹诺酮耐药基因分布北大核心CSCD

目的调查大肠埃希菌分离株的耐药特征及质粒介导喹诺酮耐药基因流行状况。方法纸片扩散（K-B）法进行药物敏感试验,采用双纸片法检测产超广谱β内酰胺酶（ESBL）,聚合酶链反应（PCR）检测qnr A、qnr B、qnr C、qnr D、qnr S、aac（6＇）-Ib、qep A基因,限制性酶切反应确定aac（6＇）-Ib-cr基因型。结果 179株大肠埃希菌中95株ESBL表型确证试验阳性,检出率为53.1%;产ESBL菌株未见对美罗培南耐药,对亚胺培南耐药率极低（1.1%）,对阿米卡星、哌拉西林-他唑巴坦、头孢哌酮-舒巴坦耐药率皆低于30%,对哌拉西林、头孢噻肟、头孢曲松、氨曲南、甲氧苄啶-磺胺甲唑耐药率皆高于70%,对庆大霉素、头孢他啶、环丙沙星、左氧氟沙星耐药率在60%~70%;PCR扩增结果显示产ESBL菌株,具有qnr基因9株（9.5%）,其中qnr A 2株、qnr B 5株、qnr S 2株。非产ESBL菌株,具有qnr B基因3株（3.6%）;酶切反应显示产和非产ESBL菌株具有aac（6＇）-Ib-cr基因分别为21株（22.1%）和5株（6.0%）。所有菌株皆未检测到qep A基因。结论产ESBL大肠埃希菌呈现多重耐药趋势,质粒介导喹诺酮耐药基因以aac（6＇）-Ib-cr基因型为主。     

Plasmid-mediated quinolone resistance

The first plasmid-mediated gene involved in quinolone resistance (qnrA1) was reported in 1998. It codes for a pentapeptide-repeat protein that protects type II topoisomerases from quinolones. Additional related plasmid-mediated genes (qnrB, qnrS and qnrC) and chromosomal homologs of them have also been discovered. Two other plasmid-mediated resistance mechanisms were later reported: modification of quinolones with a piperazinyl substituent by the acetyltransferase Aac(6´)-Ib-cr and active efflux by QepA, a pump related to the major facilitator superfamily transporters. These genes have a wide geographical distribution (essentially in enterobacteria), although their real prevalence is only partially known because of the difficulty of phenotypic detection of this type of resistance. Although these mechanism cause low-level resistance, they favor and complement the selection of additional mechanisms of resistance.     

肠杆菌科细菌质粒介导喹诺酮类耐药基因的检测

目的调查肠杆菌科细菌中质粒介导喹诺酮类耐药基因（PMQR基因）的现状、基因型以及PMQR基因阳性菌株携带Ⅰ类整合子的情况及其相关性。方法PCR法对125株肠杆菌科细菌（80株大肠埃希菌、18株肺炎克雷伯菌和27株阴沟肠杆菌）进行PMQR基因和Ⅰ类整合子检测。对阳性扩增产物进行测序分析并对阳性菌株做接合试验,采用琼脂倍比稀释法测定供体菌、受体菌和接合子对喹诺酮类和其他抗菌药物的MIC。结果125株肠杆菌科细菌检出16株（12．8％）qnr基因阳性,其中8株携带qnrS1基因,8株携带qnrB6基因;另检出15株（12．0％）携带aac（6’）-Ib-cr基因。20株PMQR基因阳性菌株携带I类整合子。26株PMQR基因阳性的菌株中有12株接合成功,典型Ⅰ类整合子阳性的菌株中有7株接合成功。与受体菌相比,喹诺酮类等抗菌药物对接合子的MIC值均有不同程度的提高。结论肠杆菌科细菌中存在PMQR基因的流行,PMQR阳性菌株可同时携带整合子基因,这些耐药基因均具有水平转移的特性,故应引起高度重视。     

临床分离阴沟肠杆菌中质粒介导喹诺酮耐药qnrB和qnrS基因的检测

目的了解临床分离阴沟肠杆菌中qnrB和qnrS基因的分布。方法PCR检测qnrB和qnrS基因并将阳性扩增产物进行测序分析;纸片扩散法测定qnrB和qnrS基因阳性菌株对10种抗菌药物的敏感性。结果81株阴沟肠杆菌中,5株qnrB4基因阳性(6.5%)、2株qnrS1基因阳性(2.5%);qnr基因阳性菌株对氯霉素、阿米卡星、头孢西丁、头孢噻肟等显示多重耐药,其中3株对环丙沙星耐药。结论临床分离阴沟肠杆菌中存在qnrB和qnrS基因阳性菌株,为多重耐药菌,临床应加强检测和监测。     

铜绿假单胞菌临床分离株gyrA基因突变与喹诺酮类耐药关系研究

目的：了解铜绿假单胞菌临床分离株gyrA基因突变与喹诺酮类药物耐药的关系。研究其临床意义。方法：通过PCR HinfⅠ酶切分析,PCR－单链构象多态性分析（SSCP）等方法检测铜绿假单胞菌ATCC27853及36株铜绿假单胞菌临床分离株的gyrA基因突变情况。结果HinfⅠ酶切结果显示,所有13株环丙沙星耐药株,3株环丙沙星中介株中的2株,20株环丙沙星敏感株中的1株存在gyrA基因HinfⅠ酶切酶点突;SSCP分析结果显示,所有耐药菌株和中介菌株的gyrA基因基因HinfⅠ酶切位点突变密切相关,但gyrA基因突变不局限于该位点,在常规药敏试验的基础上开展gyrA基因突变检测有重要的临床意义。     

Plasmid-mediated quinolone resistance: an update

In 1998, the first plasmid-mediated gene involved in quinolone resistance (currently named qnrA1) was reported. Extra qnr-like plasmid-mediated genes (qnrB, qnrS, qnrC, qnrD) and their chromosomal homologues have also been characterized. These genes code for a pentapeptide repeat protein that protects type II topoisomerases from quinolones. Since then, there have been reports of two other plasmid-mediated resistance mechanisms: the modification of quinolones with a piperazinyl substituent by the acetyltransferase, Aac(6′)-Ib-cr; and active efflux by QepA and OqxAB, pumps related to major facilitator superfamily (MFS) transporters. These genes have a wide geographic distribution (mainly in Enterobacteriaceae). Because of the difficulties of phenotypic detection of this type of resistance, its real prevalence is only partially known. One important point is that although these mechanisms cause only low-level resistance, they favor and complement the selection of other resistance mechanisms.     

Characterization of plasmid-mediated quinolone resistance determinants in Klebsiella pneumoniae and Escherichia coli from Tokai,Japan

The spread of plasmid-mediated quinolone resistance (PMQR) determinants was evaluated in 150 ceftazidime or cefotaxime-resistant clinical isolates of Klebsiella pneumoniae and Escherichia coli from Tokai, Japan between 2008 and 2011. In this study, qnrB, qnrS, and aac(6′)-Ib-cr genes were detected in 12 (50.0%), 4 (16.7%), and 1 (4.2%) of 24 K. pneumoniae isolates, respectively, while qnrA, aac(6′)-Ib-cr, and qepA genes were detected in 1 (0.8%), 11 (8.7%), and 2 (1.6%) of 126 E. coli isolates, respectively. qnr genes were mainly found in K. pneumoniae (66.7%) and to a lesser extent in E. coli (0.8%). We determined the genetic environment of the qnrB4 gene in 24.6 kb class 1 integron structure, including aar-2, cmlA, blaOXA-10, aadA1, qacEdelta1, sul1, and blaDHA-1. In a time-kill assay, introduction of the qnrB4 or qnrS1 plasmid to the recipient E. coli strain decreased the bactericidal activities of fluoroquinolones such as ciprofloxacin, levofloxacin, and pazufloxacin.     

南昌地区淋球菌对抗生素的耐药性及质粒谱分析

目的了解南昌地区淋病患者感染的淋球菌对抗生素的耐药状况,探讨质粒在介导淋球菌耐药中的作用。方法采用纸片法分析69株淋球菌对头孢噻肟,头孢曲松、头孢他啶、青霉素、壮观霉素、环丙沙星的敏感性;头孢硝基噻吩显色法测定β-内酰胺酶;碱裂解法提取淋球菌菌株质粒,琼脂糖凝胶电泳法分析质粒谱型。结果对青霉素、环丙沙星、壮观霉素耐药的菌株分别为39株(39/69,56.52%)、67株(67/69,97.10%)、1株(1/69,1.45%),头孢噻肟,头孢曲松,头孢他啶未发现耐药株。β-内酰胺酶阳性菌株为35株(35/69,50.72%)。检出质粒菌株37株(37/69,53.62%),质粒谱型共5型,以39.5 Kb和39.5 Kb+42.5 Kb型为主。结论青霉素、环丙沙星的耐药率较高,在本地区已不适宜作为治疗淋病的药物,头孢噻肟,头孢曲松,头孢他啶的敏感性较高,可作为本地区治疗淋病的首选药物,壮观霉素已出现耐药株应引起重视。质粒的介导在淋球菌耐药性的形成中起着重要的作用。     

碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌分子流行病学和耐药基因分析

目的：探究徐州医学院附属医院临床分离的耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的分子流行病学特征及耐药基因。方法收集并鉴定该院2013年2～12月临床分离非重复碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌株55株。肠杆菌基因间重复性共有序列（ERIC）‐聚合酶链反应（PCR）分析菌株的分子流行病学特征。药敏试验采用琼脂稀释法,改良 Hodge 方法检测碳青霉烯酶,亚胺培南＋乙二胺四乙酸双纸片协同法检测金属β‐内酰胺酶,PCR 方法检测细菌携带的耐药基因。结果 ERIC‐PCR 将55株肺炎克雷伯菌分为4型,以Ⅰ型为主,共41株。55株肺炎克雷伯菌对除多黏菌素和替加环素外的其他抗菌药物显示了较高的耐药性。改良 Hodge 试验阳性43株,金属酶检测试验结果均为阴性。 PCR 结果显示,K PC‐2型44株,CTX‐M‐9型27株,S HV 型22株, TEM 型23株,其中有25株同时携带3种或3种以上的耐药基因。结论该院分离的碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌对临床大多数常用抗菌药物显示较高水平的耐药性;其耐药机制主要是 K PC‐2碳青霉烯酶,CTX‐M‐9、S HV 和 TEM 型β‐内酰胺酶同时参与其多重耐药机制。     

肺炎链球菌红霉素相关耐药基因与耐药表型的关系

目的:了解肺炎链球菌(Streptococcuspneum oniae,SP)临床分离株红霉素耐药基因的流行状况及和耐药表型的关系。方法:对住院儿童分离到的43株肺炎链球菌进行红霉素药敏试验,并用PCR法检测与红霉素耐药相关的红霉素核糖体甲基化酶基因(ermB)、主动外排转运基因(mefA)。结果:43株肺炎链球菌红霉素药敏试验40株耐药(占93%),3株敏感。红霉素ermB基因总检出率为76.7%(33/43),mefA基因总检出率为23.3%(10/43)。3株红霉素敏感的肺炎链球菌均未检出ermB基因和mefA基因;40株红霉素耐药肺炎链球菌ermB基因和mefA基因的PCR检出率分别为82.5%(33/40)和25%(10/40)。共有35株肺炎链球菌检出ermB基因或/和mefA基因,其中单独携带ermB基因的耐药表型为25株(占71.4%);单独携带mefA基因的耐药表型2株(占5.7%);同时携带ermB基因和mefA基因的耐药表型8株(占22.9)%。结论:ermB基因和mefA基因同时表达或单独表达均可导致红霉素耐药,ermB基因表达是儿童肺炎链球菌对红霉素耐药的主要原因,mefA基因表达是造成对红霉素耐药的次要原因。红霉素已不是治疗肺炎链球菌的有效药物。