LncRNA GM15886在高氧诱导支气管肺发育不良新生小鼠肺组织的表达规律及生物信息学分析

[摘 要] 目的：探讨长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）GM15886在高氧诱导新生小鼠支气管肺发育不良（bronchopulmonary dysplasia,BPD）肺组织中表达水平的变化,并运用生物信息学分析,预测其在BPD模型中的作用机制。方法：在已建立BPD模型小鼠肺组织lncRNA基因芯片中选取并验证GM15886,应用lncRNATargets、Multi Experiment Matrix和Ensemble数据库预测其靶基因;将64只新出生C57BL／6J小鼠随机分为高氧组和空气组,每组各32只;高氧组新生小鼠置于95％高氧环境下,空气组暴露于空气环境下,分别选取生后第0天、3、5、7天处死小鼠取肺组织,HE染色评价肺组织病理变化;采用qPCR检测GM15886、HIPK1 mRNA表达水平;免疫组化检测HIPK1表达情况。结果：lncRNATargets预测GM15886碱基序列能够和HIPK1第二个外显子碱基序列完全结合。qPCR示高氧组第3、5、7天GM15886表达量升高,分别为1.91±0.28、2.12±0.38、2.35±0.43,与第0天相比,差异均具有统计学意义（P均＜0.05）;HIPK1在第3、5、7天相对表达量分别为1.16±0.33、0.92±0.31、3.12±0.46,第7天表达量高于第0、3、5天（P均＜0.05）;HIPK1免疫组化表现与RNA表达的结果相对应。结论：随着高氧暴露时间的延长,肺组织GM15886表达量增加;生信分析和上述实验表明GM15886可能靶向HIPK1参与BPD的发病机制。     

高氧诱导支气管肺发育不良新生小鼠肺组织中lncRNA表达谱的变化

目的:分析长链非编码RNA (long non-coding RNA,lncRNA)在高氧诱导支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasi,BPD)小鼠模型肺中表达谱的变化?方法:构建高氧诱导支气管肺发育不良新生小鼠模型,利用lncRNA芯片技术检测正常小鼠肺及BPD小鼠肺组织中lncRNA表达谱的变化,经过对原始数据进行预处理,筛选出差异表达的lncRNA?结果:与对照组相比,模型组差异表达的lncRNA(差异倍数≥2倍且P < 0.05)共1 769条,其中882条上调,887条下调;5倍以上上调的共140条,下调的共71条;10倍以上上调的共28条,下调的有2条?结论:高氧诱导BPD发生时,肺组织中lncRNA的表达谱发生了显著变化;这些差异表达的lncRNA,可能参与了BPD发生?发展过程?     

慢病毒介导TGF-β1 siRNA对高体积分数氧致新生小鼠肺损伤的影响

目的：探讨以慢病毒介导的小分子干扰RNA技术（siRNA）沉默转化生长因子β1（TGF-β1）基因对高体积分数氧致新生小鼠肺损伤的影响.方法：将100只新生昆明小鼠随机分为高氧组、干扰组、阴性干扰组、空气组4组,每组动物25只.分别构建含TGF-β1短发卡RNA（shRNA）及阴性对照序列的PRNAT-u6.2载体,慢病毒包装.于小鼠出生后3d时将两类慢病毒载体以鼻腔吸入法分别导入干扰组和阴性干扰组小鼠肺内.出生后4～14d时将高氧组、干扰组、阴性干扰组小鼠置于含600mL/LO2的氧箱内饲养.空气组仅置空气下饲养.出生后4,7,14,21,28d时分别随机杀取各组5只动物并取左上肺制作石蜡切片,进行组织形态学变化观察,测定放射状肺泡计数（RAC）和肺泡平均截距（MLI）.右肺组织以RT-PCR,Western Blot法分别检测TGF-β1 mRNA和蛋白表达水平.结果：经测序和双酶切鉴定,表达TGF-β1 shRNA的慢病毒载体构建成功;干扰组肺组织TGF-β1 mRNA水平在小鼠出生后4d即明显低于其他3组（P〈0.05）;出生后7,14,21,28d时干扰组TGF-β1 mRNA和蛋白表达水平均低于高氧组和阴性干扰组,但高于空气组（P均〈0.05）.出生后7,14,21,28d干扰组MLI低于高氧组和阴性干扰组而高于空气组（P均〈0.05）.RAC高于高氧组和阴性干扰组而低于空气组,差异均具有统计学意义（P〈0.05）.高氧组与阴性干扰组在各时间点上述各项指标的差异无统计学意义.结论：慢病毒载体介导的TGF-β1小分子干扰RNA对高体积分数氧吸入所致新生小鼠肺损伤具有保护作用.     

芳香烃受体新生鼠高氧肺损伤中的表达和调节机制

目的:研究芳香烃受体AhR(AhR)在新生鼠高氧肺损伤中的表达情况,并探讨AhR在肺损伤过程中的分子调节机制.方法:在高氧条件下,运用qpCR、Western blotting检测高氧环境下新生鼠肺组织AhR的表达变化,通过ELISA检测白介素-33(IL-33)的分泌变化.将小鼠肺上皮细胞MLE-12暴露于高氧环境,...     

大黄素对高氧诱导新生大鼠肺组织的保护作用

目的 研究大黄素对高氧肺损伤的保护作用及机制.方法 采用高氧暴露法(85％)建立新生SD大鼠支气管肺发育不良(bronchopulmonary dysplasia,BPD)模型,测定大鼠体质量和肺组织含水量,对肺组织标本进行组织学分析,酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中IL-1β 、IL-8、TNF-α改变,Wes...     

高氧肺损伤新生大鼠肺组织中SPOCK2基因表达的研究

目的：探讨 SPOCK2 基因在高氧肺损伤新生儿支气管肺发育不良（bronchopulmonary dysplasia,BPD）大鼠模型中的表达意义。方法：利用高氧肺损伤诱导 BPD 动物模型,将新生 SD 大鼠随机分成空气对照组、高氧模型组。HE 染色观察肺组织病理改变,qPCR 法检测肺组织中 SPOCK2 mRNA 的表达水平,免疫组化法测定肺 SPOCK2 蛋白的表达。同时在体外利用高氧刺激 A549 人肺上皮细胞,qPCR 法检测细胞 SPOCK2 mRNA 的表达水平。结果：成功构建 BPD 新生大鼠模型。HE 染色显示高氧模型组肺组织均产生类似 BPD 的病理损伤,并且生后10、14 d高氧模型组大鼠肺组织辐射状肺泡计数（pulmonary radical alveolar counts,RAC）值较空气对照组显著减少,差异有统计学意义（P < 0.05）。免疫组化显示空气对照组 大鼠肺组织中SPOCK2 蛋白表达量高于高氧模型组,生后10、14 d空气对照组肺组织SPOCK2 蛋白表达呈阳性。qPCR结果示空气对照组大鼠肺组织中SPOCK2 mRNA 表达量随时间递增,于生后18 d时表达量最高,生后24 d时仍处于高值（P < 0.05）,成年时下降;与空气对照组比较,高氧模型组大鼠肺组织中SPOCK2 mRNA 表达量降低,生后10、14 d时两组差异有统计学意义（P < 0.05）。高氧模型组 A549细胞SPOCK2 mRNA 表达量高于空气对照组（P < 0.05）,且有先上升后下降的趋势。结论：SPOCK2 基因可能参与肺发育过程,并可能在高氧刺激时对肺组织起保护作用。     

支气管肺发育不良新生兔肺组织中转化生长因子β1的表达

目的:探讨高浓度氧并机械通气致新生兔支气管肺发育不良(BPD)中肺组织转化生长因子β1 (TGF-β1) mRNA及蛋白表达的变化.方法:120只新生兔随机分为4组,每组30只.A组给予高吸气峰压(2.45 kPa)机械通气,B组给予中吸气峰压(1.77 kPa)机械通气,C组给予低吸气峰压(0.98 kPa)机械通气,机械通气中均吸入高浓度氧(体积分数90%).A、B、C组各分为3个亚组,每个亚组10只,通气时间分别为1 h、3 h、6 h,正常对照组(D组)不做任何处理.通气结束,颈动脉放血处死动物.分别应用RT-PCR及免疫组织化学方法测定肺组织TGF-β1 mRNA 及蛋白的表达.结果:高浓度氧并机械通气处理后,TGF-β1蛋白表达3 h增加,6 h达高峰,肺组织TGF-β1 mRNA 1 h增加,3 h达高峰, A组增加较B组、C组明显,均高于D组(P<0.05).结论:高浓度氧并机械通气诱发的BPD中存在TGF-β1的过度表达,其机制可能与抑制肺泡的发育成熟有关.     

阿奇霉素对高氧暴露新生大鼠肺损伤保护作用的研究

目的：探讨阿奇霉素（azithromycin,AZM）对治疗新生大鼠支气管肺发育不良（bronchopulmonary dysplasia,BPD）的有效性。方法：将新生大鼠随机分成空气-生理盐水（RA-Saline）组、空气-阿奇霉素（RA-AZM）组、氧气-生理盐水（O₂-Saline）组、氧气-阿奇霉素（O₂-AZM）组,O₂-Saline组和O₂-AZM组大鼠组在出生12 h内暴露于浓度为95%~100%的高氧中以建立BPD新生大鼠模型,RA-AZM组、O₂-AZM组在生后第1~10天每天腹腔注射AZM（40 mg/kg）,RA-Saline组和O₂-Saline组给予等剂量的生理盐水,观察大鼠的生存率;qPCR检测炎症因子和趋化因子的表达;测量肺泡平均线性截距（mean linear intercept,MLI）及次级肺泡隔的生成、肺血管密度来评估AZM对BPD新生大鼠肺发育的影响,并通过免疫组化检测肺组织中性粒细胞及巨噬细胞来评估AZM对炎症细胞的影响。结果：与O₂-Saline组比较,O₂-AZM组大鼠10 d存活率差异无统计学意义（P > 0.05）;qPCR结果显示,与O₂-Saline组比较,O₂-AZM组大鼠白介素-6（interleukin-6,IL-6）、单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemotactic protein-1, MCP-1）、纤溶酶原激活物抑制剂-1（plasminogen activator inhibitor-1,PAI-1）表达显著下降（P < 0.05）,中性粒细胞趋化因子-1 （cytokine induced neutrophil chemoattractant-1,CINC-1）表达差异无统计学意义（P > 0.05）;ELISA 结果表明,与 O₂-Saline 组比较,O₂-AZM组大鼠IL-6水平显著下降（P < 0.05）;免疫组化结果显示,O₂-AZM组大鼠肺组织巨噬细胞及中性粒细胞聚集显著减少,肺血管密度及次级肺泡隔计数增加,差异均有统计学意义;HE病理分析结果显示,与O₂-Saline组比较,O₂-AZM组大鼠 MLI显著缩短,差异有统计学意义（P < 0.05）。结论：AZM可降低高氧暴露新生大鼠肺组织炎症因子和趋化因子的释放,抑制炎症细胞的趋化或募集,改善高氧暴露新生大鼠BPD样肺损伤。     

宫内致敏及生后高氧暴露对新生小鼠TGF-β1及α-SMA表达的影响

目的观察宫内炎性致敏及生后高氧暴露新生小鼠转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)在新生鼠肺组织的表达情况,探讨支气管肺发育不良(Bronchop-ulmonary dysplasia,BPD)发病机制。方法新生小鼠按照随机数字表法分为LPS组+空气组、LPS+高氧组、生理盐水+空气对照组、生理盐水+高氧组,应用HE染色、放射性肺泡计数(RAC)、免疫组织化学、免疫荧光化学和荧光定量PCR技术,讨论生后第1、3、7、10、14天肺组织的病理改变,检测TGF-β1、α-SMA蛋白和基因mRNA表达水平。结果LPS+高氧组和生理盐水+高氧组出现肺发育障碍,肺泡逐渐融合,RAC逐渐降低,与生理盐水+高氧组比较,LPS+高氧组降低明显(P<0.05)。②LPS+高氧组和生理盐水+高氧组第3天后肺组织TGF-β1蛋白表达明显高于LPS组+空气组和生理盐水+空气组(P=0.000),随着暴露时间的延长进行性增高。③LPS+高氧组和生理盐水+高氧组7d后肺组织α-SMA蛋白表达明显高于LPS组+空...     

支气管肺发育不良模型新生鼠肺组织中miR15b 及 miR16的表达

目的：探讨miR15b及miR16在高氧诱导支气管肺发育不良（ BDP）新生大鼠中的表达。方法60只新生大鼠随机分为高氧组和空气组,每组30只,分别置于高氧（氧浓度≥90％）和空气中持续喂养;于生后第1、4、7天取材,HE染色光镜下观察大鼠肺组织形态结构变化,并采用实时荧光定量PCR和免疫组织化学染色方法分别检测大鼠肺组织中miR15b、miR16和VEGF蛋白表达水平。结果随着高氧暴露时间延长,高氧组新生鼠逐渐表现出肺组织发育不良、肺泡结构简单化、肺泡数目减少和肺微血管发育受阻等病理改变。高氧暴露第7天,高氧组miR15b及miR16的相对表达量明显高于空气组,高氧组VEGF表达量明显低于空气组,差异有统计学意义（P＜0.05）。 miR15b、miR16的表达量与VEGF的表达量呈负相关。结论 miR15b及miR16通过调控VEGF的表达在BPD的形成过程中发挥重要作用。     

姜黄素对高氧致新生鼠支气管肺发育不良的保护作用

目的 研究姜黄素对高氧暴露致新生鼠支气管肺发育不良的影响,探讨其作用机制.方法 给予出生6 h内的SD大鼠持续60%氧暴露14d建立肺损伤模型.通氧的同时予姜黄索100 ms/(kg·d)灌胃.观察肺组织病理学改变,进行辐射状肺泡计数(RAC),末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口标记技术(TUNEL)检测肺组织细胞凋亡.免疫组化和Western blot法检测肺组织活化半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的表达.结果 与空气对照组相比,随着氧暴露时间的延长,高氧组的大鼠出现肺发育停滞的典型病理表现:肺泡增大、结构简化,肺泡隔增厚.RAC明显减少,肺组织细胞凋亡明显增加,免疫组化和Western blot法均显示肺组织活化Caspase-3表达明显升高.姜黄素能改善损伤的肺病理结构,并在干预14d后使RAC显著增多,肺组织凋亡细胞显著减少,干预4d后肺组织活化Caspase-3显著降低.结论 姜黄素可减轻高氧暴露所致的BPD,可能是通过抗凋亡机制实现其保护作用.     

结肠癌组织中肺腺癌转移相关转录本1的表达及其临床意义

目的探讨长链非编码RNA肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)在结肠癌组织中的表达及其临床意义。方法收集121例结肠腺癌组织标本,并以其自身正常组织作为对照,提取组织RNA,实时定量聚合酶链反应法检测结肠癌及其自身正常对照组织中MALAT1的表达水平,并在结肠癌细胞系SW620中过表达MALAT1,观察其对肿瘤细胞迁移的影响。结果结肠癌组织MALAT1表达较自身正常对照组织表达显著升高(P<0.01)。有淋巴结转移的结肠癌组织中MALAT1的表达高于无淋巴结转移的结肠癌组织(P<0.05);有淋巴结转移的结肠癌标本中,淋巴结组织中MALAT1的相对表达量高于结肠癌组织(P<0.05)。SW620转染pc DNA3/MALAT1基因组迁移细胞数明显高于单纯SW620细胞组和SW620转染载体pc DNA3组(P<0.05);单纯SW620细胞组与SW620转染载体pc DNA3组迁移细胞数比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论在结肠癌中,长链非编码RNA-MALAT1可作为一个潜在的检测指标,为临床判定预后和后期治疗提供理论基础。     

CXCL4与高氧诱导新生小鼠性别差异性肺损伤的相关研究

目的：探讨肺组织CXC趋化因子配体4（chemokine C?X?C motif ligand 4,CXCL4）与高氧诱导新生小鼠性别差异性肺损伤的关系及相关机制。方法：32只C57BL/6J新生小鼠（雄性、雌性各16只）随机分为4组：高氧雄性组、高氧雌性组、空气雄性组、空气雌性组（每组8只）。高氧组小鼠置于95％氧浓度下暴露7 d,空气组于室内环境（FiO2 = 21％）中饲养。串联质谱标签（tandem mass tags,TMT）定量蛋白组学技术检测4组小鼠肺组织中蛋白质的表达变化,筛选差异表达的蛋白质;ELISA法检测肺组织匀浆CXCL4含量;HE染色法观察小鼠肺组织病理改变;冰冻切片免疫荧光染色检测肺组织“M4”型巨噬细胞（MMP7+ S100A8+）分布情况。结果：高氧暴露组肺组织肺泡化程度降低,辐射状肺泡计数（radial alveolar count,RAC）明显减小（P < 0.001）;与高氧雌性组相比,高氧雄性组RAC值下降（P < 0.01）。TMT筛选出的CXCL4在高氧雄性组差异性表达上调;肺组织匀浆验证了质谱分析结果。高氧雄性小鼠肺组织MMP7+ S100A8+细胞增多。结论：高氧诱导新生小鼠肺损伤程度存在性别差异,雄性损伤程度高于雌性,可能与CXCL4诱导肺“M4”型巨噬细胞形成存在一定的相关性。     

支气管肺发育不良新生鼠肺组织甲状腺转录因子及波形蛋白的表达意义

目的观察高氧暴露新生鼠肺泡Ⅱ型细胞(AECⅡ)标记[甲状腺转录因子,(TTF-1)]及成纤维细胞标记[波形蛋白,(Vimentin)]的表达规律,探讨支气管肺发育不良(BPD)发病机制。方法新生小鼠随机分为:对照组及BPD组,高浓度氧暴露制作BPD小鼠模型,观察肺组织病理变化,于实验后3、7、14、21 d应用免疫荧光双标及荧光定量PCR技术检测TTF-1及Vimentin蛋白、mRNA的表达情况。结果与对照组比较,BPD组高氧暴露后小鼠肺组织逐渐出现肺泡发育障碍、胶原沉积明显;AECⅡ标记TTF-1表达逐渐减弱,成纤维细胞标记Vimentin表达逐渐增强,14、21 d时两者可见明显的共表达;BPD组21 d TTF-1mRNA表达较同时间对照组下调(P<0.05),而Vimentin mRNA表达较同时间对照组上调(P<0.05)。结论高氧致AECⅡ向成纤维细胞转化可能是BPD纤维化的重要机制。     

表观遗传修饰在支气管肺发育不良发病机制中作用的研究进展

支气管肺发育不良（BPD）是早产儿常见的慢性呼吸系统危重疾病之一。BPD的发病机制涉及遗传因素和环境因素之间复杂的相互作用,而表观遗传学则在整合遗传因素与环境因素中起关键作用。目前国内外关于表观遗传修饰在BPD形成过程中作用的研究较少,现就DNA甲基化、组蛋白修饰和非编码RNA（ncRNA）等表观遗传修饰在BPD发病机制中的作用进行阐述,为BP发病机制的研究提供新思路。     

乳腺癌组织中lncRNA MALAT1的表达及临床意义

目的 探讨长链非编码RNA MALAT1在乳腺癌组织中的表达及临床意义。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）方法检测64例乳腺癌患者癌组织标本及其对应的癌旁组织标本中MALAT1的表达情况,分析其与乳腺癌的临床病理特征关系以及诊断价值。结果 MALAT1在乳腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织（P<0.05）,且癌组织中MALAT1的表达水平与ER、PR表达情况以及淋巴结转移明显相关明显相关（P<0.05）;ROC曲线分析发现AUC为0.706。结论 组织中高表达的MALAT1可作为乳腺癌诊断的一个潜在的新型生物学标志物。     

SSeCKS蛋白在新生大鼠高氧肺损伤中的表达

目的 观察新生大鼠高氧肺损伤模型肺组织中Src抑制的蛋白激酶C的底物(SSeCKS)的表达及细胞定位.方法 64只新生大鼠按照随机数字表法分为空气对照组和高氧暴露组,分别建立动物模型,于12、24、48、72 h处死动物,进行肺组织的病理学检查及肺湿干质量比(W/D)检测,应用Western blot及免疫组化法检测各组各时相点肺组织中SSeCKS蛋白的表达,用间接免疫荧光双标法明确SSeCKS蛋白在肺组织中的定位.结果 病理HE染色:高氧暴露24 h肺泡内出现少量红细胞,肺泡擘增厚;48 h肺泡内红细胞增多,肺间隔增宽,粒细胞附壁;72 h出现肺出血,肺泡内可见大量的红细胞,肺泡间隔粒细胞浸润.Western blot法检测SSeCKS蛋白:空气对照组可检测到极少量的SSeCKS的表达,高氧暴露24 h表达增加,72 h达到最高,72 h内随高氧暴露时间延长而增加;免疫组化定量分析与Western blot结果一致;间接免疫荧光双标法明确SSeCKS定位于毛细血管内皮细胞.结论 提示SSeCKS参与了新生大鼠高氧肺损伤的过程.     

桔梗总皂苷对支气管肺发育不良新生大鼠肺损伤的作用及机制研究

目的 探讨桔梗总皂苷(PGS)对高氧致支气管肺发育不良(BPD)新生大鼠肺损伤及HGF/c-Met信号通路的影响.方法 将66只SD新生大鼠分为对照组、BPD组、地塞米松(TD)组及桔梗总皂苷低、中、高剂量组,每组11只.除对照组外,通过持续吸入高浓度氧(氧体积分数为90％)复制BPD模型.桔梗总皂苷低、中、高剂量组分...     

60%氧暴露对新生小鼠一般状态及肺病理形态学的影响

目的探讨中浓度氧（60％O2）暴露对新生小鼠发育中肺的影响。方法30只新生雌性KM小鼠,随机分为实验组和对照组,每组15只,实验组置于封闭氧箱中（60％O2）,对照组置于空气中（21％O2）,记录吸氧后2、7、14、21、28d小鼠体质量、肺组织病理改变以及辐射状肺泡计数（RAC）。结果实验组吸氧7d后体质量明显降低（P〈0．05）,苏木素一伊红染色下正常肺泡结构消失、肺泡融合、肺泡间隔增厚,RAC较对照组明显减少（P〈0．01）。结论持续较高浓度氧吸人可致新生小鼠生长障碍和肺泡化阻滞,出现类似人类支气管肺发育不良的肺部改变。     

转化生长因子-β1在中浓度氧致新生鼠支气管肺发育不良模型中的作用

目的：探讨中浓度氧（60%O2）暴露对新生小鼠发育的影响及损伤,并观察转化生长因子-β1（TGF-β1）在新生鼠慢性肺部疾病支气管肺发育不良（BPD）肺损伤中的作用。方法：30只新生雌性KM小鼠,随机分为实验组和对照组,每组15只。对照组置于空气中（FiO20.21）;实验组置于封闭氧箱中（FiO20.6）,制备中浓度氧致新生雌性小鼠BPD模型,记录吸氧后2 d、7 d、14 d、21 d、28 d小鼠体重,应用HE染色观察不同时间点HE染色肺组织病理改变,免疫组化技术观察TGF-β1蛋白表达水平。结果：实验组小鼠体重吸氧7 d后明显降低,HE染色下正常肺泡结构消失、肺泡融合、肺泡间隔增厚。高氧暴露72 h后,TGF-β1的表达升高,随着吸氧时间的增长TGF-β1的表达逐渐升高。结论：持续较高浓度吸氧可致新生雌性小鼠生长障碍和肺泡化阻滞,出现类似人类支气管肺发育不良的肺部改变。TGF-β1在肺纤维化的发生和持续过程中均发挥重要作用。