亚低温对细胞凋亡及凋亡相关基因表达影响的实验研究

目的　研究亚低温对新生鼠缺氧缺血性脑损伤细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响。方法　7日龄大鼠行左侧颈总动脉结扎后吸入 8%氧气 2h,制成缺氧缺血性脑损伤模型。动物随机分成三组 :假手术组 (C组 ) ,缺氧缺血正常温度组 (HI组 ) ,缺氧缺血后 30min亚低温治疗组。应用原位缺口末端标记 (TUNEL)检测凋亡细胞 ,用免疫组化SABC法检测表达bax基因阳性细胞数。结果　 30min后给予亚低温组凋亡细胞及表达bax基因细胞数明显少于HI组 ,差异有显著意义 (P <0 0 1)。结论　亚低温可以通过抑制细胞凋亡 ,抑制凋亡相关基因的表达等机制发挥对缺氧缺血性脑损伤的保护作用。     

亚低温对大鼠缺血性脑损伤后SOCS3表达的影响

目的观察大鼠局灶性脑缺血再灌注后不同时间点细胞因子信号转导抑制因子-3(supressor of cytokine signaling 3,SOCS3)的表达情况及实施亚低温后的变化,进一步探讨亚低温的脑保护作用。方法线栓法制作大鼠大脑中动脉栓塞局灶性脑缺血再灌注模型,同时给予亚低温治疗。HE染色观察病理形态改变,免疫组化法检测SOCS3的表达,TUNEL法检测凋亡细胞。结果与假手术组相比,常温缺血组于再灌注3 h后SOCS3的表达开始增强,至24 h达高峰,7天时仍有表达;亚低温缺血组各时间点表达均明显高于常温缺血组(P<0.05);常温缺血组凋亡阳性细胞数随再灌注时间的延长而逐渐增多,至72h达高峰;亚低温缺血组各时间点的表达均明显少于常温缺血组(P<0.05)。结论脑缺血再灌注损伤后SOCS3的表达增强,亚低温可能通过促进SOCS3的表达发挥缺血后抗神经元凋亡的作用。     

泰素帝对肺腺癌细胞A549凋亡及Survivin表达和Caspase-3活性的影响

目的探讨泰素帝对肺腺癌细胞A549凋亡,生存素(Survivin)表达和Caspase-3活性的影响。方法体外细胞培养,待细胞生长处于对数期时,加入不同浓度泰素帝,MTY比色法检测细胞活性。参考MTT结果,选取100ng/ml泰素帝处理A549细胞。透射电镜,流式细胞术检测细胞凋亡的发生;RT-PCR检测Survivin mRNA的表达;Western印迹法检测Survivin蛋白质的表达;Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3活性。结果泰素帝可抑制A549细胞生长,诱导细胞凋亡,呈时间依赖性降低Survivin的表达,增强Caspase-3酶活性。结论 100ng／ml泰素帝可诱导A549细胞凋亡,Survivin表达降低和Caspase-3活性增强可能是其诱导肺腺癌细胞凋亡的分子途径之一。     

兔软骨终板细胞凋亡与Caspase-3和Fas表达的实验研究

目的：研究软骨终板细胞凋亡与Caspase-3和Fas表达情况及其相互关系。方法：45℃热刺激体外培养的兔软骨终板细胞10min以诱导软骨终板细胞凋亡。TUNEL法检测软骨终板细胞在正常培养和热刺激45℃10min后0．5、1、3、5h的细胞凋亡情况；免疫细胞化学染色法检测Caspase-3和Fas表达情况及其与细胞凋亡程度的关系。结果：与对照组和未处理组相比，热刺激后软骨终板细胞凋亡明显，Caspase-3和Fas表达水平增高（P〈0．01），Caspase-3表达与细胞凋亡程度一致。结论：热刺激可诱导软骨终板细胞凋亡；Caspase-3和Fas参与了软骨终板细胞的凋亡过程；Caspase-3是软骨终板细胞凋亡进程中的重要物质之一．     

针刺对AD模型大鼠海马凋亡相关蛋白Caspase-3的影响

目的:观察针刺对AD模型大鼠海马凋亡相关蛋白Caspase-3的影响。方法:SD大鼠20只,连续6w腹腔注射D-半乳糖(120mg·kg-1)和亚硝酸钠(45mg·kg-1)建立AD模型后随机分成模型组、针刺组(n=10),同时设立非模型组(n=10)。造模后第21d,针刺组大鼠予以针刺百会和肾俞穴治疗,而模型组大鼠不予以治疗。针刺治疗结束后大鼠立即处死,采用免疫组化法检测非模型组、模型组、针刺组大鼠海马Caspase-3表达。结果:免疫组化结果显示模型组大鼠海马Caspase-3表达明显增加,与对照组比较有显著差异(P0.01);而针刺组Caspase-3的表达明显减少,与模型组比较(P0.01)。结论:针刺可抑制大鼠海马Caspase-3表达。     

利拉鲁肽对缺氧诱导的心肌细胞凋亡蛋白Caspase-3和Bcl-2表达的影响

目的 检测胰高血糖素样肽-利拉鲁肽对氯化钴(cobalt chloride, CoCl2)诱导缺氧条件下的心肌细胞中凋亡蛋白Caspase-3和Bcl-2表达量的影响.方法 将原代培养的心肌细胞分为6组:空白对照组,CoCl2诱导化学缺氧组,缺氧+不同剂量利拉鲁肽处理组(1、10、100、1000nmol/L利拉鲁肽).结果 缺氧能诱导心肌细胞中凋亡蛋白Bcl-2表达的增高并抑制Caspase-3蛋白的表达(P<0.05);利拉鲁肽能抑制缺氧诱导的心肌细胞中凋亡蛋白Caspase-3的表达并增加Bcl-2的表达,且利拉鲁肽对凋亡蛋白的影响具有剂量依赖性.结论 利拉鲁肽抑制缺氧诱导的心肌细胞中凋亡蛋白Caspase-3的表达,并促进凋亡蛋白Bcl-2的表达.     

凋亡调节蛋白Fas和Caspase-3在乳腺癌中的表达及意义

目的观察人乳腺癌组织中凋亡调节蛋白Fas和Caspase-3的表达,探讨Fas和Caspase-3与乳腺癌发生、发展的关系。方法收集手术切除的人乳腺癌组织和癌旁相对正常乳腺组织(距癌组织5 cm以上),用免疫组织化学方法对23例乳腺癌标本进行检测。结果在相对正常乳腺组织和乳腺癌组织中Fas蛋白的阳性表达率分别为86.9%和47.3%;乳腺癌组织中Fas的阳性表达率明显低于相对正常乳腺组织。在相对正常乳腺组织和乳腺癌组织中Caspase-3的阳性表达率分别为82.6%和43.5%;乳腺癌组织中Caspase-3的阳性表达率明显低于相对正常乳腺组织。乳腺癌组织中caspase-3与Fas的表达率均与淋巴结转移无关。相关性分析表明,乳腺癌癌中的表达caspase-3与Fas表达呈正相关。结论乳腺癌组织中Fas和Caspase-3表达下调,使肿瘤抗凋亡机制过度激活,可能在乳腺癌的发生和发展过程中起重要作用。     

丹参酮ⅡA对急性心肌梗死大鼠的心肌凋亡及Bax与Caspase-3表达的影响

目的探讨丹参酮ⅡA对急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌细胞凋亡与Bax、Caspase-3蛋白表达的影响。方法选取36只健康雄性SD大鼠,随机分为假手术组(Sham)、急性心肌梗死组(AMI)和丹参酮ⅡA治疗组(TanⅡA),通过冠状动脉左前降支结扎大鼠建立AMI模型。制模2周后行超声心动图检查观察各组动物心脏功能情况,而后处死动物取出心脏,原位末端凋亡法(TUNEL)检测心肌细胞凋亡情况,Western blot方法检测Bax及Caspase-3的蛋白表达。结果与假手术组比较,AMI组左室射血分数(LVEF)及左室长轴缩短分数(FS)升高,左室舒张末期内径(LVDd)及左室收缩末期内径(LVDs)降低,心肌细胞凋亡数明显升高,Bax与Caspase-3蛋白表达量显著上调(P0.01);与AMI组比较,丹参酮ⅡA能扭转上述变化(P0.01)。结论丹参酮ⅡA对急性心肌梗死大鼠的作用与抑制心肌细胞凋亡和凋亡相关蛋白Bax、Caspase-3表达相关。     

凋亡抑制蛋白c-IAP1和Caspase-3在喉癌中表达的研究

喉癌是耳鼻咽喉外科常见的肿瘤之一,其逐年增加的发病率和死亡率严重威胁着患者的健康,其中以鳞状细胞癌（约90%）为主,其次是腺癌。凋亡抑制蛋白c-IAP1和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3的表达与喉癌的发展变化关系密切。本文将凋亡抑制蛋白c-IAP1和Caspase-3在喉癌中的表达作用进行了系统综述。     

大鼠脊髓缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡及Caspase-1、Caspase-3的表达

目的观察大鼠脊髓缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡及Caspase-1、Caspase-3的表达。方法 48只成年健康Wistar大鼠,采用Naslund腹主动脉阻断法制作脊髓缺血再灌注损伤模型。随机分为空白对照组(n=6)、假手术组(n=6)和损伤组(n=36),观察脊髓缺血再灌注损伤后,脊髓的病理变化、细胞凋亡及Caspase-1、Caspase-3的表达变化的规律。结果观察脊髓缺血再灌注损伤后Caspase-1阳性细胞在损伤后12h表达明显,1d损伤区域及周边出现表达高峰。Caspase-3阳性细胞在损伤后12h表达明显,2d损伤区域及周边出现表达高峰。TUNEL阳性细胞也在脊髓损伤后12h表达明显,2d出现表达高峰。空白对照组、假手术组:Caspase-1、Caspase-3免疫组化少有表达,少见TUNEL阳性细胞。结论脊髓缺血再灌注损伤后存在神经细胞凋亡,Caspase-1、Caspase-3均参与损伤的调节。     

局部亚低温对大鼠局灶脑缺血再灌注后神经营养因子-3表达的影响

目的：观察病变侧缺血至再灌期亚低温(32～33 ℃)对局灶脑缺血再灌注后梗死体积和神经营养因子-3(neurotrophin-3,NT-3)表达的影响。方法：采用改良线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,随机分为假手术组、常温缺血组和亚低温缺血组,缺血30 min后应用负反馈控温半导体制冷块对大鼠病变侧给予亚低温治疗并持续至再灌期。处死大鼠前进行神经功能缺陷评分,氯化三苯四氮唑染色及计算机图像分析技术观察脑梗死体积,采用免疫组织化学方法检测NT-3表达,末端脱核苷酸转移酶介导的dUTP缺口标记技术观察神经细胞凋亡情况。结果：同常温缺血组相比,亚低温缺血组梗死体积明显减少,NT-3阳性细胞数量增加,凋亡的神经细胞明显减少(均P<0.05)。神经功能缺陷评分亚低温缺血组明显低于相应时间点常温缺血组(P<0.05或P<0.01)。结论：病变侧亚低温可通过增加脑缺血后NT-3的表达水平,抑制细胞凋亡而发挥脑保护作用。     

LY-294002对大鼠急性脊髓损伤后Caspase-3表达的影响

目的研究LY-294002对急性脊髓损伤大鼠Caspase-3表达的变化。方法选取104只成年健康SD大鼠,按Nystrom法建立大鼠脊髓(T8～9)急性压迫损伤模型,按随机数字表法分为假手术组8只、损伤组48只、LY-294002组48只。免疫组化和Western blot方法检测各组大鼠脊髓损伤部位Caspase-3的表达。结果免疫组化结果发现假手术组大鼠脊髓神经细胞中Caspase-3阳性细胞较少;在脊髓损伤后8 h时,Caspase-3阳性细胞数明显增多,3 d达高峰,7 d表达开始减弱。在经LY-294002处理后的各时间点大鼠脊髓损伤部位的Caspase-3阳性细胞明显少于相同时间点的脊髓损伤组大鼠。Western blot方法发现假手术组大鼠脊髓损伤部位的Caspase-3的表达量很少,而在脊髓损伤后8h时,Caspase-3蛋白表达量明显增多,3 d达高峰,7 d表达开始减弱,在经LY-294002处理后的各时间点大鼠脊髓损伤部位的Caspase-3蛋白表达则明显少于相同时间点的脊髓损伤组大鼠,与免疫组化结果一致。结论LY-294002能够下调急性脊髓损伤大鼠Caspase-3蛋白的表达。     

缺氧缺血性脑病新生大鼠心肌Caspase-3、Cyt C蛋白表达与心肌细胞凋亡的关系

目的:探讨缺氧缺血性脑病(HIE)新生大鼠心肌Caspase-3、Cyt C蛋白的表达及其与心肌细胞凋亡的关系。方法:7日龄新生大鼠制备HIE经典模型。分为HIE组和假手术对照(NC)组,两组分别于HIE后1小时、4小时、12小时、24小时、48小时、72小时、7天取心脏组织,应用免疫组织化学法检测心肌组织Caspase-3、Cyt C蛋白的表达;应用TUNEL法检测心肌细胞凋亡。结果:HIE组24小时Caspase-3出现阳性细胞表达增多,48小时达高峰,24小时~7天Caspase-3的表达均明显高于NC组(P<0.05)。HIE组24小时Cyt C出现较多的阳性细胞表达,72小时达高峰,至7天时仍高于NC组(P<0.05)。HIE组12小时心肌阳性凋亡细胞开始增多,72小时达高峰,12~72小时各时间点阳性凋亡细胞明显高于NC组(P<0.05)。Cas-pase-3、Cyt C蛋白表达与凋亡细胞数二者之间均呈直线正相关。结论:HIE新生大鼠心肌细胞Caspase-3、Cyt C蛋白表达增加,提示Caspase-3、Cyt C蛋白表达对心肌细胞凋亡起促进作用。     

氟伐他汀对大鼠心肌梗死后左室重构及caspase-3表达的影响

目的：观察氟伐他汀对大鼠心肌梗死后左室重构及凋亡基因caspase-3的影响。 方法： 复制心肌梗死动物模型，实验分为4组，Ⅰ组假手术组，Ⅱ组假手术+氟伐他汀组，Ⅲ组模型组，Ⅳ组模型+氟伐他汀组。Ⅱ和Ⅳ组术后给氟伐他汀10 mg·kg^-1·d^-1共4周，观察左室结构及心动超声变化，心肌羟脯氨酸含量及caspase-3表达。 结果： Ⅳ组心肌超微结构和左室重构指标改善程度明显高于Ⅲ组，羟脯氨酸含量及免疫组化caspase-3阳性细胞明显少于Ⅲ组（P<0.05），RT-PCR caspase-3 mRNA表达也明显少于Ⅲ组（P<0.05）。 结论： 氟伐他汀能改善大鼠心梗后左室重构，并下调凋亡基因caspase-3表达，抑制细胞凋亡。     

Immunohistochemical expression of activated caspase-3 in human myocardial infarction

There is mounting evidence that apoptosis is important in the pathogenesis of myocardial infarction (MI). One of the key events in the process of apoptosis is activation of caspase-3. Much attention has been recently paid to caspase inhibition as a potential treatment for ischemic cardiac disease. To predict the long-term effect of such treatment, it is essential to understand the significance of caspase-3 in the evolution of MI. Our aim was therefore to analyze immunohistochemical expression of activated caspase-3 in MI. Our study included autopsy samples of infarcted heart tissue from 50 patients with MI. Immunohistochemistry was performed by a sensitive peroxidase–streptavidin method on formalin-fixed, paraffin-embedded tissue, using monoclonal antibodies against activated (cleaved) caspase-3. We found caspase-3-positive myocytes in 18 MI less than 24 h old and in 3 MI that were presumably 48 h old. Their density (number of labeled myocytes/mm²) was greater in patients who received reperfusion treatment (mean 0.160±0.373 vs 0.025±0.037, p=0.06). In MI older than 48 h, positive reaction was observed in neutrophil granulocytes in the interstitium and, in subacute MI, it was observed in mononuclear inflammatory cells, myofibroblasts, and vascular endothelial cells. Our results suggest that apoptosis of myocytes is an important mode of cell death in the early MI, being enhanced in patients who received reperfusion treatment. After 48 h, apoptosis is an important mechanism of the clearance of neutrophil granulocytes and other inflammatory cells and of scar formation. Treatment with caspase inhibitors therefore will not only affect myocyte loss but will also interfere with the clearance of neutrophils and with the transformation of granulation tissue into a scar. The study complies with the current laws of the country in which they were performed.     

经颅电刺激在急性脑梗死患者运动功能康复中的作用

目的:研究经颅电刺激(TES)对急性脑梗死偏瘫患者运动功能的康复作用。方法:选取经CT或MRI确诊的急性脑梗死患者60例,随机分为TES组和对照组各30例,两组在基本治疗相同的情况下,TES组自患病后第八天始加作TES治疗共14天,每天给予TES治疗1次,每次磁刺激患侧运动皮层10回。两组分别于患病后第七天(第一次)和患病后第二十一天(第二次)进行TES运动诱发电位(MEP)检查,记录MEP波幅和中枢运动传导时间(CMCT);用简式Fugl-Meyer运动功能量表(FMS)评分和徒手肌力检查法进行运动功能评分。结果:在患病后第七天,MEP波幅和CMCT、FMS和肌力评分等方面,两组结果比较差异无显著意义;在患病后第二十一天(TES组治疗14天)后,两组上述结果均有改善,与治疗前相比差异均有显著意义,特别是TES组运动功能改善更为明显,两组比较差异有显著意义。同时发现当第一次给患者行TES治疗后即刻,部分患者肌力即可提高Ⅰ-Ⅱ级,数小时后又减退至原肌力,经数次治疗后患者肌力得到巩固而且逐步提高。治疗前有15例患者未引出MEP,其中TES组8例,对照组7例;治疗后,未引出MEP的15例患者TES组8例中有3例引出MEP,但潜伏期及CMCT明显延长,而对照组无1例引出MEP。结论:脑梗死急性期进行TES治疗可明显促进患者运动功能的恢复。     

脑缺血再灌注损伤的海马神经元对Bax、Bcl-2和Caspase-3的表达

目的：凋亡调控基因在脑缺血再灌后海马神经元的表达。方法：采用免疫组织化学的方法，观察 昆明小鼠双侧颈总动脉结扎7min后不同再灌时间组(24h组、48h组、72h组、7d组、14d组)海马CAl区神经元Bax、Bcl-2和Caspase-3的活性形式CM1的免疫反应活性。结果：Bax和CM1阳性神经元数在48h组最多，与其他各组相比差异有显著性(P＜0．01)，72h组明显下降，14d组完全消失；而Bcl-2阳性神经元数在48h组增多(与24h组相比，P＜0．01)，72h组下降，7d组再次上升(与72h组相比，P＜0．01)，14d组最多(与48h组相比，P＜0．01)。在24h、48h、72h、7d组，Bax阳性神经元多于Bcl-2阳性神经元(P＜0．05)，14d组则相反。结论：Bax和caspase-3在脑缺血再灌早期表达增强，然后下降以至消失，Bcl-2于再灌后期表达增强。Bax表达上调可能与Caspase-3激活相关。