共查询到16条相似文献,搜索用时 93 毫秒
1.
大肠杆菌BL21(DE3)中表达重组蛋白的研究 总被引:5,自引:2,他引:5
为了研究在大肠杆菌BL21 (DE3)中重组蛋白的表达特点,探讨重组蛋白在大肠杆菌中表达时可溶性蛋白与包涵体出现的特点,从表达载体中表达了植物ACC合成酶.经SDS-PAGE电泳与双波长扫描分析,确定目的蛋白随表达时间、菌液密度的增加而增加.但是其最佳表达时间为2.5 h,菌液密度OD600为0.6,IPTG的最佳浓度为0.6 mmol/L,此时目的蛋白含量占全菌蛋白含量之比最高.植物ACC合成酶在大肠杆菌中表达时以包涵体的形式存在,未能检测到可溶性蛋白的表达. 相似文献
2.
3.
丝瓜ACC合成酶cDNA在T7启动子的作用下 ,经IPTG诱导 ,在大肠杆菌中高效表达 ,表达外源蛋白可占菌体总蛋白的 45 2 % .表达的ACC合成酶一部分以可溶的形式存在 ,具有与天然ACC合成酶相似的酶活性 ,将反应底物S 腺苷蛋氨酸 (SAM)转化为 1 氨基环丙烷 1 羧酸 (ACC)并在细菌培养基中积累 ,另一部分则以无活性的包涵体形式存在于菌体中 . 相似文献
4.
丝瓜ACC合成酶cDNA在T7启动子的作用下,经IPTG诱导,在大肠杆菌中高效表达,表达外源蛋白可占菌体总蛋白的45.2%.表达的ACC合成酶一部分以可溶的形式存在,具有与天然ACC合成酶相似的酶活性,将反应底物S-腺苷蛋氨酸(SAM)转化为1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)并在细菌培养基中积累,另一部分则以无活性的包涵体形式存在于菌体中. 相似文献
5.
6.
重组蛋白sHLA-G1的原核表达与纯化 总被引:1,自引:0,他引:1
为了进一步在蛋白质水平对人白细胞抗原HLA-G进行分析,利用已经构建好的克隆质粒pGEM-T-HLA-G1,进一步构建了重组原核表达质粒pET28a-sHLA-G1。SDS-PAGE检测表明,重组蛋白sHLA-G1在大肠杆菌(E.coli)中得到稳定表达,原核表达的重组蛋白sHLA-G1主要以包涵体形式存在。包涵体蛋白经充分洗涤、尿素溶解后用钴离子树脂纯化,并用SDS-PAGE和Western印迹进行了分析,鉴定结果表明,该蛋白纯度达到90%以上,并能与HLA-G特异性抗体87G反应。该研究结果为进一步的复性工作奠定了基础。 相似文献
7.
测定了猪生长激素基因工程菌不同表达了效率时细菌总蛋白的含量以及包涵体中重组猪生长激素占包涵体总蛋白的比值。结果表明:随着表达效率的提高,细菌总蛋白含量缓慢增加,最后稳定在一定水平上,当表达效率增加,包涵体中重组猪生长激素占包涵体中总蛋白的百分数也增加,两者上升超势基本一致。 相似文献
8.
将含凝血酶原-2的质粒成功地转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导培养,获得凝血酶原-2包涵体.经对培养基成分及操作条件进行优化,详细考察了碳源、氮源、无机盐、诱导起始时间、诱导剂添加量、接种量、发酵温度和转速等因素对目标蛋白表达量的影响.在优化的条件下,重组凝血酶原-2包涵体的产量为110 mg/L发酵液,占菌体总蛋白的21.7%. 相似文献
9.
10.
11.
REN Gui-ping QU Juan-juan PEI Fu-cheng LI Jing-peng LIU Xiang-yu LI Lu WANG Jun-wei* 《东北农业大学学报(英文版)》2005,12(1):11-13
To obtain the protein of duck interferon alpha and study its biological activities, the prokaryotic ex-pression vector of DuIFN-α was constructed and expressed in BL21 (DE3) plysS. Using PCR technique, the proteingene of DuIFN-α was cloned from pMD-18-duIFN-α recombinant. The gene was then inserted to pGEM-T vectorand identified by restriction endonuclease analysis and sequencing. DuIFN-α was ligated with the prokaryotic expres-sion vector of pET30 a, then transformed into BL21 (DE3) plysS. The best inducing time and IPTG concentration for the expression of this recombinant protein was tested through the expression of the positive recombinant with differ-ent time span and different IPTG concentration. Lots of the protein of DuIFN-α were expressed in BL21 (DE3)plysS with 1 mmol·L-1 IPTG for 4 hours and its molecular weight for 34 000. 相似文献
12.
重组酶Cre基因在大肠杆菌中的高效表达及其一步纯化和活性检测 总被引:2,自引:1,他引:2
为了实现DNA重组酶Cre在体外的应用, 以pET-30a高效表达载体为基础构建了pTE30-Cre质粒.将此质粒导入大肠杆菌BL21(DE3)中进行IPTG诱导的Cre基因的高效表达.对表达出的Cre重组酶蛋白进行镍离子鳌合法一步纯化,并以带有两个同向loxP位点的质粒为底物,对纯化出的Cre酶进行活性检测.该实验为Cre酶的体外应用奠定了基础. 相似文献
13.
禽流感病毒(AIV)非结构蛋白NS1在病毒粒子中不存在,因此,可以通过检测NS1抗体来鉴别禽流感病毒感染鸡群和免疫鸡群.将ns1基因和T4噬菌体soc基因在大肠埃希氏菌中融合表达,融合蛋白可以作为鉴别禽流感免疫鸡群和感染鸡群的检测抗原.采用RT-PCR方法扩增禽流感病毒H9N2的ns1基因(654bp);将该片段克隆至pSOC质粒soc基因3’端,成功构建了重组质粒pSOC-NS1,用该重组质粒转化EcoliB121(DE3)感受态细胞,以终浓度1mmol/mL的IPTG诱导表达.SDS-PAGE结果表明pSOC-NS1融合蛋白相对分子质量约39000.Western-blot证实,表达产物与AIV H9N2病毒感染的小鼠血清具有良好的反应性. 相似文献
14.
利用RT-PCR技术从甘蓝型油菜宁油16号(Brassica napus L.)中克隆到乙酰羟基酸合酶基因BnAHAS1的cDNA序列,该序列含有1个1 968 bp的开放阅读框,编码蛋白质655个氨基酸,分子量约为7.1×104,预测等电点为6.16。将该基因克隆到原核表达载体pCold II中,经酶切和测序鉴定后,将正确的重组质粒pCold IIBnAHAS1导入大肠杆菌BL21(DE3)。在15℃下以终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导12 h后,获得预期大小的重组蛋白质His-BnAHAS1,并用Western blot确定此重组蛋白质为目的蛋白质。 相似文献
15.
[目的]探索获得大量高纯度重组人瘦素的方法。[方法]通过5 L发酵罐对重组人瘦素大肠杆菌pET32a-OB[BL21(DE3)]进行了高密度发酵,并通过DEAE sepharose Fast Flow阴离子层析分离将IPTG诱导表达的人瘦素进行纯化,并通过ESI-Q-TOF-MS/MS分析验证目的蛋白。[结果]得到的培养物为3 L左右,OD600为20.25,纯化后的人瘦素纯度为98%左右。[结论]发酵罐发酵得到的菌体密度要远大于正常用三角瓶培养的菌体密度,阴离子交换层析法制备重组人瘦素符合大量生产高纯度重组人瘦素的要求。 相似文献
16.
黄河蜜甜瓜1-氨基环丙烷1-羧酸合成酶基因片段的克隆和反义载体的构建 总被引:3,自引:0,他引:3
从伤诱导的黄河蜜甜瓜(Cucumismelocv.Huanghemi)成熟果实的中果皮组织中分离总RNA,经反转录和PCR扩增得到974bp的cDNA片段,克隆到质粒载体pGEM-3zf,经测序与Genbank中甜瓜1-氨基环丙烷1-羧酸合成酶(1-amino-cyclopropane-1-carboxylieacidsynthase,ACS)基因同源性为99%。克隆片段经双酶切消化,反向插入到植物表达载体pBI121的35S启动子和NOS终止子之间,构建成ACS基因的反义表达载体。 相似文献