南极假丝酵母脂肪酶发酵条件优化及酶学性质

分别用摇瓶和15L发酵罐,对南极假丝酵母产胞外脂肪酶的培养基成分和操作条件进行了实验研究。得到最优的培养基组成为:豆粉40g／L,淀粉15g／L,豆油5mL／L,K2HPO4g／L,MgsO4·7H2O1g／L,Tween-800.1％,酵母膏5g／L;操作条件为:温度24℃,初始pH值为6.0,通气量为10.0L／min。在此培养条件下,发酵周期缩短至54h。由15L发酵罐生产的酶液酶活达到19.2U／mL。酶液在pH值为4.0～6.0和7.5～9.0范围内较稳定,其最适宜pH值范围为6～8.5;70℃时酶的催化活性最大.在40～70℃的温度范围内保持1h后残留酶活为60％。     

用蛋白质工程技术提取和修饰南极假丝酵母脂肪酶B

从南极假丝酵母中提取的脂肪酶B,具有较高的对应异构体选择性,广泛应用在培养基中,作为不对称有机化学的生物催化剂。近年来,一系列组合蛋白质工程研究和扩展了南极假丝酵母脂肪酶的催化和物理特性。这些工程不但生产出了指定的催化剂,还有助于阐明酶的结构一作用关系,并且有助于说明这些酶的对应异构体选择性。进一步的研究将在工程与酶的关系方面展开讨论。     

南极假丝酵母产脂肪酶在15 L发酵罐中培养条件的研究

对15 L发酵罐中南极假丝酵母(C.antarctica DSM3855)的发酵工艺条件进行了研究,确定了最适的产酶工艺条件:搅拌速度为300 r·min-1,通气量为10 L·min-1,接种量为10%,添加GPE作为消泡剂.在此培养条件下,培养54 h产酶达到高峰值,最高酶活力达到19.3 U·mL-1.     

双水相系统分离纯化南极假丝酵母脂肪酶

对南极假丝酵母脂肪酶(CAL)在双水相中的分配情况进行了研究,考察了温度、聚乙二醇(PEG)相对分子质量、NaC l质量分数和(NH4)2SO4质量分数对分配系数K(CAL)的影响,结果表明:温度对K(CAL)影响不大;低相对分子质量PEG与蛋白质的疏水作用可促进CAL的分配;二相间电势差等对分配平衡、有较大影响。在PEG2 000/(NH4)2SO4双水相体系中,CAL最佳的萃取分离条件为:室温下,质量分数20%PEG2 000,12%(NH4)2SO4,1.5%NaC l,此时,K(CAL)为8.16,CAL回收率为91.2%。     

固定化假丝酵母脂肪酶催化合成辛酸甘油酯

以自制固定化假丝酵母脂肪酶作为催化剂,研究了无溶剂体系中辛酸和甘油直接酯化合成辛酸甘油酯的反应条件。考察了酶的种类、底物的物质的量之比、温度、酶量、甘油的初始含水量和反应时间等因素对辛酸转化率和产物组成的影响。结果证明,以纺织物作为载体制备的固定化假丝酵母脂肪酶适宜催化辛酸甘油酯的合成。最优反应条件为：辛酸与甘油的物质的量之比为2∶1,固定化假丝酵母脂肪酶加量为0.5g/0.69g甘油,温度为40 ℃,振荡培养箱转速为190 r/min。最优反应条件下辛酸转化率可以达到94%以上,经过简单处理的固定化酶可以重复使用4批。     

乙醛对假丝酵母脂肪酶催化活性的影响

采用紫外可见分光光度法和荧光发射光谱法研究了乙醛溶液对假丝酵母脂肪酶水解三油酸甘油酯的催化活性和构象的影响。结果表明,低浓度乙醛能提高酶的催化水解活力,当乙醛浓度为0.221 5 mmol/L时,酶活力提高了18.84%;高浓度乙醛对酶活力有抑制作用,当乙醛浓度为3.322 5 mmol/L时,酶活力降低了25.85%。低浓度乙醛使酶催化反应的最适p H向碱性方向偏移,紫外吸收光谱和荧光发射光谱均有显著增强和光谱峰偏移现象。动力学分析表明,加入乙醛后,酶的V_(max)增大,K_m减小。     

假丝酵母99-125脂肪酶促酯化合成生物柴油的研究

1 INTRODUCTION Biodiesel, that is long-chain fatty acid short-chain alcohol esters (methyl, ethyl, propyl and butyl ester), is produced by esterification of fatty acids or inter- esterification of oils and fats. These fatty acid alcohol esters are not only used as important industrial addi- tives and surfactants, but also used for biofuel. The biodiesel is a biodegradable, environmental friendly, renewable substitute of diesel fuel[1]. The traditional production of biodiesel is by chem- i…     

温度对产甘油假丝酵母产甘油发酵过程的影响

研究了温度对产甘油假丝酵母分批发酵生产甘油及其生长动力学的影响。结果表明:在温度为28—36℃时,由于发酵周期随温度升高而显著缩短,导致细胞生长、甘油合成和葡萄糖消耗的比速率也随温度升高逐渐增加;当温度为32℃时最适于产甘油假丝酵母合成甘油,甘油产量、得率和产率分别达到120.3 g/L,0.523 g/g,1.43 g/(L.h);应用Logistic方程对细胞生长动力学进行了模拟,获得不同温度下的生长动力学参数;根据细胞生长动力学参数,得到28—36℃时甘油分批发酵过程中细胞质量浓度同温度、时间之间的一般关系式,经验证该模型在28—36℃范围内可用于预测不同温度下的细胞生长情况。     

产朊假丝酵母流加发酵法生产谷胱甘肽

研究了产朊假丝酵母在不同葡萄糖浓度下的谷胱甘肽(GSH)分批发酵过程,在此基础上进一步考察了重复补料、恒速流加和指数流加等不同培养方式对GSH发酵生产的影响. 结果发现,这几种培养方式都可以实现酵母细胞和GSH的高产. 综合比较,无论是从细胞还是从GSH的产量、得率和生产强度的角度来看,指数流加都是较为理想的选择. 经过48 h的指数流加培养,细胞干重达到40.9 g/L, GSH产量和胞内GSH含量分别达到857.2 mg/L和2.25%.     

培养条件对产朊假丝酵母合成谷胱甘肽的影响

考察了培养基组成,培养条件对产朊假丝酵母生长和谷胱甘肽合成的影响,包括不同碳源,氮源及其浓度,pH,装液量,接种量等。确定以葡萄糖、磷酸氢二铵作为碳源和氮源,较佳浓度分别为20g/L和3g/L,接种量为10％,在20 g/L 的糖 浓度时获得的谷胱甘肽总量可达74mg/L,胞内含量为1.4％左右。此外还研究了三种前体氨基酸和ATP的加入量,加入时间对发酵的影响。     

硫酸铵沉淀和层析法分离纯化纳豆激酶的研究

利用生产纳豆激酶的Bacillus subtilis进行深层发酵.采用发酵液离心除菌,20%～60%饱和度的硫酸铵沉淀,Superdex 75凝胶过滤层析和SP Sepharose Fast Flow离子交换层析对活性组分进行分离提纯.用纤维平版法测定了活力,并用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)对分离纯化的效果进行了检验.结果表明在SDS-PAGE中观察到单一条带,分子量27.7 kD,最终纯化倍数和酶活回收率分别为8.4和49%.     

Purification and Characterization of Microbial Hyaluronic Acid by Solvent Precipitation and Size-Exclusion Chromatography

Abstract

Samples of hyaluronic acid (HA) produced by submerged fermentation using a synthetic culture medium were recovered, purified, fractioned, and characterized using solvent precipitation and size-exclusion chromatography (SEC). The samples showed a wide molar mass distribution in the range 10³–10⁷ Da, most of which had an average molar mass between 10⁴ and 10⁵ Da after purification by sequential precipitations. Fractions of HA with molar mass above 10⁵ Da were purified by SEC in a semi-preparative scale with nearly no protein contamination. Characterization and fractionation of the HA was carried out by SEC in a analytical and semi-preparative scale using Shodex OHPak SB806M HQ and Superose 6 columns, respectively.     

肥料磷铵溶解净化法的研究

在湿法磷酸净化中,氨化对多种杂质有沉淀去除作用,由此提出了肥料磷铵溶解净化法,用于制备生产各种精细磷化工产品的优质磷源,过滤所得残渣可返回肥料系统,不造成磷损失。以粉状磷酸一铵为原料,考察了不同温度、固液比、搅拌时间和搅拌速度对溶解浸出法溶出率、溶出液中P2O5含量的影响。通过单因子试验和正交试验,筛选出了适宜的工艺条件为:溶解温度70℃,固液比0.7,搅拌时间8min,中速搅拌,溶出率和溶出液中P2O5质量分数分别达67.04%和19.78%,铁和氟的去除率分别达99%和97%以上。     

沉析法与粉碎法制备高纯度聚苯砜的性能对比

针对聚苯砜(PPSU)树脂生产流程中纯化困难的特点,设计出一种沉析纯化方法,即PPSU在聚合完成后以粉末态析出,再经过纯化过程得到高纯度的PPSU树脂。对沉析纯化法和传统粉碎纯化法制备的两种PPSU树脂进行了灰分含量、特性黏度、粒径、热稳定性等系列对比测试,同时比较了两种PPSU薄膜的透光率、雾度和拉伸性能。结果表明,沉析法大幅提高了PPSU的纯化效果,其制备的PPSU粉体粒径更小,产物灰分含量更低;沉析法有利于保证PPSU树脂分子量和分子链结构的完整,其特性黏度比粉碎法PPSU提高了34.5%;由于PPSU树脂分子结构和组成未变,两种方法制备的PPSU树脂热稳定性基本一致;沉析法制备的PPSU薄膜的透光率更高、雾度更低,拉伸性能更好。     

PEG沉淀结合层析分离重组乙肝病毒表面抗原

应用聚乙二醇(PEG)沉淀结合层析技术纯化乙肝病毒表面抗原(HBsAg),对PEG浓度、pH值、离子强度等影响PEG沉淀的因素进行了正交实验研究. 结果表明,浓度为0.12 g/mL的PEG6000在4℃, pH 9.0条件下沉淀HBsAg纯化效果比较理想,纯化倍数达3.7,回收率96.8%,有效地去除了生物大分子杂质和牛血清白蛋白(BSA),PEG在后续的凝胶过滤中可以除去,整个工艺的回收率可提高到41%.     

四甲基氢氧化铵的提纯实验研究

通过单因素实验考察了四甲基氢氧化铵的电解工艺。以钛基镀铱板为阳极,不锈钢为阴极,在电解槽中恒电流密度电解提纯四甲基氢氧化铵,主要考察了电解工艺中离子交换膜种类、原料浓度、电解温度和电流密度对电流效率的影响。当采用上海上化水处理厂3361为阳离子交换膜,在原料室四甲基氢氧化铵浓度25%、电解液温度50℃、电流密度8 ASD(A/dm2)时,电流效率可达66.74%,产品中金属离子杂质总含量从25×10-6降至0.8×10-6,氯离子浓度从0.65×10-6降至0.01×10-6。采用等离子体发射光谱仪(ICP-AES)、分光光度计对产品四甲基氢氧化铵进行表征。     

沉淀法制备纳米氧化锌的研究

通过实验和理论分析 ,对均匀沉淀法和直接沉淀法制备纳米氧化锌进行了比较 ,以硝酸锌为原料 ,尿素为均匀沉淀剂制得的氧化锌粒径小、分布窄、分散性好 ,远优于直接沉淀法制备的纳米氧化锌。     

沉淀法制备纳米α-Al2O3的工艺

利用硝酸铝溶液和碳酸铵溶液的沉淀反应制备一种氧化铝的前驱体-氢氧化铝。研究了pH值、溶液浓度、分散剂用量对纳米氧化铝粒径的影响。用差热、透射电子显微镜、比表面、激光粒度分析仪等测试手段对产物进行分析。结果表明,当反应温度45℃、pH=5．0、分散剂用量为1．0％（质量百分数）、铝盐浓度为0．1mol／L时,制得的产物经800℃煅烧1．0h,颗粒大小为5—10nm;在1210℃煅烧1．0h可转化为α-Al2O3,一次粒子粒径为40nm左右。     

低温等离子体在催化剂制备及协同催化反应中的研究进展

等离子体化学作为一个全新的研究领域,引起了越来越多学者的兴趣和重视。作者综述了目前等离子体在催化剂制备及协同催化反应中的应用,在此基础上,展望了等离子体化学未来的研究趋势。     

Concerted Electron/Proton Transfer Mechanism in the Oxidation of Phenols by Laccase

This study aimed to assess structural requirements in the enzyme/substrate interactions that are responsible for tuning the enzymatic reactivity. To better assess the role of the aspartic residue in the substrate‐binding pocket of basidiomycete‐type laccases, we compared the catalytic efficiency of wild‐type enzymes to that of a mutant in which carboxylic acid residue Asp206 was changed to alanine. Oxidation efficiency towards phenolic substrates by laccases of Trametes villosa, Trametes versicolor and a T. versicolor D206A mutant was studied at two pH values. By the Hammett approach and Marcus analysis, we obtained unambiguous evidence that the oxidation takes place by a concerted electron/proton transfer (EPT) mechanism, and that at pH 5 (optimum pH for enzyme activity) the phenolic proton is transferred to Asp206 during the concerted electron/proton transfer process.