术前化疗对神经母细胞瘤细胞凋亡和增殖的影响作用

目的：探讨术前化疗对神经母细胞瘤细胞凋亡和肿瘤增殖的作用。方法：应用脱氧核糖核酸末端转移酶标记（ＴＵＮＥＬ）和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）免疫组化，观察术前化疗组６例和一期手术组１１例神经母细胞瘤标本的凋亡指数、增殖指数和分裂指数的差异。结果：术前化疗组凋亡指数（９．１７±４．８８）与一期手术组（１０．１１±５．１６）无显著差异，Ｐ＞０．０５；术前化疗组增殖指数（１８．００±９．５５）明显低于一期手术组（２９．００±１３．８０），术前化疗组的分裂指数（１．６７±１．３４）亦较一期手术组（３．６７±２．２４）有明显下降，Ｐ值均＜０．０５。结论：术前化疗对神经母细胞瘤的肿瘤细胞增殖有明显抑制作用。ＴＵＮＥＬ和ＰＣＮＡ检测为观察肿瘤细胞凋亡和细胞增殖的有效方法     

Avastin对神经母细胞瘤株SK-N-SH增殖影响的体外研究

目的 以人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞株为研究对象探讨Avastin对其增殖的影响及可能机制.方法测定不同 Avastin浓度对SK-N-SH细胞上清液VEGF水平的影响,对该株细胞的细胞毒作用及对其细胞周期及凋亡的影响.结果 随着Avastin浓度升高,细胞上清液中游离VEGF水平逐渐下降;在一定剂量范围内,Avastin对该株细胞无明显细胞毒性作用;不同浓度Avastin作用于该株细胞,呈时间依赖性,影响细胞周期分布.结论 Avastin可中和SK-N-SH细胞分泌的VEGF,无明显细胞毒性作用,但可影响细胞周期分布,提示Avastin与化疗药物联合应用可能有协同作用.     

miR-29b对神经母细胞瘤增殖、侵袭和转移的影响研究

目的检测miR-29b在肾上腺和神经母细胞瘤组织中的表达情况,探讨miR-29b对神经母细胞瘤细胞增殖、侵袭和转移能力的影响。方法收集12例神经母细胞瘤患儿的肿瘤组织和癌旁肾上腺组织标本,实时定量PCR检测miR-29b的表达水平;miR-29相关核苷酸(mimics、inhibitor、NC)瞬时转入SK-N-SH神经母细胞瘤细胞后,CCK-8实验检测miR-29b对该细胞系增殖的抑制作用,Transwell小室、划痕实验进行侵袭、迁移能力实验,Western blot方法检测上皮转化相关蛋白(E-cadherin、Vimentin)的表达水平。结果与癌旁肾上腺组织比较,miR-29b在神经母细胞瘤组织的表达水平明显降低(P<0.05);miR-29相关核苷酸(mimics、inhibitor、NC)转染细胞后,miR-29b mimics组出现抑制细胞增殖的效应(P<0.05);Transwell小室实验显示miR-29b mimics组的穿膜细胞量(36.33±8.08)少于miR-29b inhibitor组(112.30±11.68)和NC组(112.30±11.68);划痕实验显示转染miR-29b mimics后,其愈合率(51.67±4.50)%较miR-29b inhibitor组(87.67±3.79)%和NC组(85.00±3.00)%明显下降,细胞的侵袭、迁移能力明显下降;Western blot实验显示,与NC组相比,miR-29b mimics组E-cadherin表达增高,Vimentin表达降低,而miR-29b inhibitor组中E-cadherin表达降低,Vimentin表达增高(P<0.05)。结论神经母细胞瘤组织中miR-29b表达水平下降,miR-29b过表达可以抑制细胞的增殖、侵袭和迁移能力,这种抑癌作用可能与抑制EMT有关。     

脂氧合酶抑制剂NDGA对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞生物学特性的影响

目的探讨脂氧合酶抑制剂去甲二氢愈创木酸(nordihydroguaiaretic acid,NDGA)对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞生长的影响。方法采用MTT比色法、群体倍增时间、HE染色、TUNEL染色法等观察和检测NDGA对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖与凋亡的影响。结果NDGA(5～100μmol/L)可显著抑制SK-N-SH细胞增殖,并诱导其凋亡,其作用呈剂量和时间依赖性。结论脂氧合酶抑制剂NDGA可于体外抑制人神经母细胞瘤细胞的增殖,并诱导其凋亡。     

miR-92a-3p靶向调控PTEN对神经母细胞瘤细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的:探讨微小RNA-92a-3p （micro RNA-92a-3p, miR-92a-3p）靶向调控PTEN对神经母细胞瘤（neuroblastoma,NB）细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:采用miR-92a-3p mimics及其抑制基因（inhibitor）分别转染至SH-SY5Y细胞,根据实验需要分为miR...     

基质金属蛋白酶及其抑制剂与神经母细胞瘤

早期转移是神经母细胞瘤最为显著的生物学特征之一。降解细胞外基质是肿瘤浸润和转移过程中最为重要的一步，而基质金属蛋白酶又是降解细胞外基质的最重要的酶类，组织金属蛋白酶抑制剂是其天然抑制剂。许多研究已证实基质金属蛋白酶及其抑制剂的表达异常和比例失调与神经母细胞瘤的浸润和转移密切相关。抑制基质金属蛋白酶的活性成为抗神经母细胞瘤转移治疗的一个新靶点。     

丝切蛋白在神经母细胞瘤中的表达及意义

目的探讨丝切蛋白(cofilin, CFL)在神经母细胞瘤中的表达变化与意义。方法收集2017年1月至2019年1月在新疆维吾尔自治区人民医院及新疆维吾尔自治区儿童医院进行手术治疗的神经母细胞瘤患儿的肿瘤组织和癌旁组织各10例, 将最终符合实验标准的12例组织分为两组, 其中6例肿瘤组织作为肿瘤组织组, 6例癌旁组织作为癌旁组织组, 通过实时定量聚合酶链反应(quanti-ficational real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)和蛋白质印迹法检测两组CFL、Bax、Bcl-2、MCL-1的表达水平。将CFL siRNA转染至SK-N-SH细胞内, 采用CCK-8法检测细胞生长情况, 采用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期的差异变化。结果 CFL mRNA和蛋白在肿瘤组织组中的表达水平较癌旁组织组显著升高, 分别为(2.53±1.01)比(1.12±0.47)、(0.74±0.19)比(0.48± 0.15 ), 差异均具有统计学意义(P<0.05);Bax mRNA和蛋白在肿瘤组织组中的表达水平较癌旁组织组显著降低, 分别为(...     

三氧化二砷对神经母细胞瘤细胞增殖的影响

目的探讨三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）对儿童神经母细胞瘤有无潜在的治疗价值及伍用细胞因子有无增强疗效的作用。方法应用四甲基偶氮唑蓝法于体外观察Ａｓ２Ｏ３对神经母细胞瘤细胞株ＳＪ－Ｎ－ＳＨ增殖的影响；并观察Ａｓ２Ｏ３伍用重组人γ－干扰素、肿瘤坏死因子、白细胞介素４、６、１０后的情况。结果０．５～４μｍｏｌ／Ｌ的三氧化二砷明显抑制ＳＪ－Ｎ－ＳＨ细胞的增殖，Ａｓ２Ｏ３伍用γ－干扰素、白细胞介素４可明显增强Ａｓ２Ｏ３对ＳＪ－Ｎ－ＳＨ细胞增殖的抑制，而其他几种细胞因子无明显作用。结论Ａｓ２Ｏ３为治疗神经母细胞瘤的有效药物，联合应用合适的细胞因子可增强Ａｓ２Ｏ３的疗效。     

双酚A对人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖的影响

目的探讨双酚A（BPA）对人神经母细胞瘤SK—N—SH细胞增殖的影响及其可能机制。方法SK—N—SH细胞经培养扩增后分为5组：组1，无干预（对照组）；组2，加17p雌二醇（E2）；组3，加BPA；组4，同时加E2和ICI 182，780；组5，同时加BPA和ICI182，780。分别在0h、24h、48h和72h进行光吸收度值（AV）检测，在72h进行流式细胞仪DNA增殖指数（PI）检测。结果组3的AV在24h、48h、72h均明显增加，分别是组1的1．53、1．25、1．20倍，72h时的PI是组1的1．42倍。组2的结果与组3相似。组4、5中细胞增殖受到ICI182，780的明显抑制。结论BPA能促进人神经母细胞瘤SK—N-SH细胞的体外增殖，该促增殖作用可能是通过雌激素受体依赖途径实现的。     

神经母细胞瘤的靶向治疗

神经母细胞瘤临床上并不少见,诊断时半数以上患儿已经发生远处转移。与白血病相比,神经母细胞瘤的治疗比较困难,除早期可以完全切除的以外,其余病例即使经过大剂量化疗、手术切除、局部放射治疗、造血干细胞移植及生物治疗,     

苦参碱对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的作用及机制

目的 探讨苦参碱(matrine,Ma)对人神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB) SH-SY5Y细胞的作用及机制。方法 取对数生长期的细胞,分为对照组(含细胞无Ma)及4个浓度组（Ma的作用浓度）分别为0.5 mg/ml、1.0 mg/ml、2.0 mg/ml和3.0mg/ml,每组5个复孔。应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的增殖抑制率;流式细胞仪(FCM)检测凋亡率;RT-PCR方法检测TrkA mRNA的表达。最后采用SPSS 16.(0统计软件进行单因素方差分析,P＜0.05为差异有统计学意义。结果 MTT比色法检测对照组及各浓度组增殖抑制率分别为(7.25±1.55)％、(12.56±1.94)％、(17.22±0.90)％、(22.39±0.78)％和(25.35±1.38)％;流式细胞仪检测对照组及各浓度组凋亡率分别为(5.30±0.60)％、(10.04±1.18)％、(14.34±1.79)％、(21.36±0.96)％和(24.80±1.53)％;RT-PCR方法检测TrkA mRNA的表达,对照组及各浓度组的灰度值分别为：0.502±0.043、0.584±0.032、0.644±0.052、0.836±0.056和0.948±0.030。以上检测各组间比较差异均有统计学意义(P＜0.05)。结论 苦参碱在体外环境下作用神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,可以有效抑制该细胞的增殖、诱导调亡并促进TrkA mRNA的表达,这为临床上神经母细胞瘤的治疗开拓了新的思路。     

苦参碱抑制神经母细胞瘤LA-N-5细胞增殖及MYCN基因mRNA的表达

目的：神经母细胞瘤是4岁以下儿童最常见的恶性实体肿瘤,MYCN基因的高表达导致预后更加恶劣。苦参碱作为中药苦参的重要成分对多种肿瘤有治疗作用,该实验拟应用苦参碱作用神经母细胞瘤细胞(LA-N-5),对肿瘤细胞增殖及MYCN基因mRNA表达受抑制情况进行初步研究,希望可以为神经母细胞瘤的治疗开拓新的思路。方法：以终浓度为0.25 mg/mL,0.50 mg/mL,0.75 mg/mL,1.00 mg/mL苦参碱作用神经母细胞瘤LA-N-5细胞, MTT法检测LA-N-5细胞增殖情况变化,采用SYBR 绿色荧光染料Ⅰ的实时荧光定量RT-PCR检测MYCN基因mRNA表达受抑制情况。结果：苦参碱对LA-N-5细胞增殖的抑制呈明显的剂量、时间依赖性,随剂量的增加,作用时间的延长,抑制效果逐渐加强。1.00 mg/mL作用72 h后肿瘤细胞增殖抑制效率达36.3%,单细胞MYCN基因mRNA表达9.7±0.35拷贝,抑制效率达44.6%。结论：应用苦参碱在体外环境作用LA-N-5细胞,可以有效抑制该细胞的增殖、原癌基因MYCN mRNA的表达,为临床上神经母细胞瘤的治疗开拓了新的思路。     

小白菊内酯诱导人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞凋亡的研究

目的 探讨小白菊内酯对人神经母细胞瘤细胞系SK-N-SH细胞凋亡的影响及机制.方法 MTT法检测不同浓度小白菊内酯对SK-N-SH细胞增殖抑制的影响,同时计算IC50,根据IC50选取实验组小白菊内酯浓度(10、15μmol/L);流式细胞仪分析对照组及实验组肿瘤细胞凋亡率;EMSA检测NF-κB的活性;Western Blot法检测细胞凋亡相关蛋白表达.结果 小白菊内酯抑制神经母细胞瘤SK-N-SH细胞生长,并呈浓度依赖关系.用10、15μmol/L小白菊内酯处理细胞48 h后凋亡率分别为(35.63±0.98)％,(53.32±1.08)％,与对照组(6.42±1.26)％比较,差异显著(P＜0.01).EMSA结果表明,小白菊内酯处理组细胞NF-κB活性降低.Western Blot结果显示,小白菊内酯使细胞中Bax、Caspase-3蛋白表达增强,Bcl-2蛋白表达降低.结论 小白菊内酯促进神经母细胞瘤SK-N-SH细胞凋亡,可能与抑制NF-κB活性,下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax、Caspase-3蛋白表达有关.     

三氧化二砷联合长春瑞滨、多西他赛对神经母细胞瘤SK-N-SH细胞系杀伤作用和细胞周期的影响

目的观察三氧化二砷(As_2O_3)、长春瑞滨(vinorelbine)、多西他赛(docetaxel)对神经母细胞瘤SK-N-SH细胞系的杀伤作用和细胞周期的影响,为临床寻找新的治疗手段及合理用药提供依据。方法采用流式细胞术检测经过As_2O_3、vinorelbine或docetaxel作用后SK-N-SH细胞的凋亡率和细胞周期分布的变化,探讨它们对SK-N-SH细胞的杀伤作用和细胞周期的影响。结果As_2O_3作用48h、72h、96h和120h时SK-N-SH细胞的凋亡率分别为(10.91±2.27)%、(23.85±5.52)%、(36.61±14.75)%、(52.93±2.47)%;As_2O_3可使SK-N-SH细胞周期阻滞在G2/M,作用48h时处于G2/M期阻滞的细胞比例最高(26.54%±5.67%);Vinorelbine和docetaxel对SK-N-SH细胞具有杀伤作用,它们各自作用于SK-N-SH细胞的IC50分别为35nmol/L和90nmol/L;以不同浓度的vinorelbine或docetaxel作用于SK-N-SHI细胞48h,随着G2/M期阻滞的比例增高,SK-N-SH细胞的凋亡率随之升高。结论 As_2O_3对SK-N-SH细胞的杀伤作用具有时间依赖性,As_2O_3可使SK-N-SH细胞周期阻滞在G2/M期。Vinorelbine和docetaxel对SK-N-SH细胞的杀伤作用和G2/M期阻滞有关,属于G2/M期特异性杀伤药物。     

二氧化碳对小鼠神经母细胞瘤细胞跨间皮细胞迁移影响的实验研究

目的 本实验研究不同气体条件对神经母细胞瘤细胞跨间皮细胞迁移的影响,探讨CO2气腹对腹腔肿瘤细胞迁移影响的潜在机制.方法 经0.125%胰酶预处理后,通过腹腔灌洗分离培养C57/BL6小鼠腹膜间皮细胞.间皮细胞纯化通过细胞形态学及免疫组化方法(小鼠间皮细胞角蛋白特异性抗体AE1/AE3)鉴定.MTT实验确定细胞活力.使用Transwell系统培养连续间皮细胞层,分别暴露于100%CO2及5%CO2 2 h,经荧光染色后的小鼠神经母细胞瘤细胞(Neuro2a)加入至Transwell系统上室,细胞迁移数目经多功能检测仪进行测定.结果 MTT实验提示,间皮细胞于5%CO2及100%CO2暴露后4 h、6 h、10 h及24 h后两组细胞活力分别为0.82±0.28比0.62±0.22、0.87士0.24比0.62±0.28、0.88±0.69比0.69±0.81及1.05±0.86比0.97±0.25,差别无统计学意义.迁移实验表明,间皮细胞于100%CO2中暴露后,细胞屏障功能下降,Neuro2a迁移数目增加258.56±71.08比77.05±27.89(P＜0.05).结论 100%CO2利于神经母细胞瘤细胞跨间皮细胞迁移.因此,小鼠模型中发现的CO2气腹后神经母细胞瘤转移增加可能与间皮细胞屏障削弱有关.

Abstract：

Objective This study was to assess the effect of CO2 pneumoperitoneum on transepithelial neuroblastoma cell migration. Methods Purification of primary murine peritoneal mesothelial cells was achieved by sequential, peritoneal lavage after 0. 125% trypsin pretreatment. Purity of the mesothelial cell culture was confirmed by cell morphology and immunohistochemical staining for specific cytokeratine (AE1/AE3). In all experiments vitality of the cells was confirmed by MTT assay. Monolayers of mesothelial cells were established on transwell systems. Following incubation with 100% CO2 or 5% CO2 for 2 h, fluorescent stained Neuro2a (neuroblastoma) cells were added to the upper chamber and their migration to the lower chamber was measured by multi - detection reader. Results The conversion of MTT was nearly same 4h, 6 h, 10 h and 24 h after 5% CO2 or 100% CO2 exposition,0. 82 ± 0. 28 VS 0. 62 ± 0. 22,0. 87 ± 0. 24 VS 0. 62 ± 0. 28, 0. 88 ± 0. 69 VS 0. 69 ± 0. 81 and 1. 05 ± 0. 86 VS 0. 97 ± 0. 25 respectively. Migration studies showed that the barrier function of the mesothelial monolayer decreased. A significantly increased migration of neuroblastoma cells was found after 100% CO2 exposure 258. 56 ± 71. 08 VS 77. 05 ± 27. 89 (P＜0. 05). Conclusions 100% CO2 facilitated transepithelial neuroblastoma cell migration. Thus, the increased neuroblastoma metastasis observed after CO2 pneumoperitoneum in mice might be related to an impaired mesothelial barrier function.     

熊果酸对神经母细胞瘤细胞增殖凋亡及MYCN表达的影响

目的实验研究熊果酸作用于体外培养的神经母细胞瘤细胞株（SH—SY-5Y）,对肿瘤细胞增殖、凋亡及MYCN基因mRNA表达的影响,探讨熊果酸对儿童神经母细胞瘤的治疗的作用。方法以终浓度为4uM／L、8uM／L、12uM／L的熊果酸作用于神经母细胞瘤细胞SH—SY-5Y,WST-1法检测SH—SY-5Y细胞增殖情况,流式细胞术检测SH—SY-5Y细胞凋亡情况,采用RealtimePCR方法检测MYCNmRNA的表达情况。结果熊果酸对SH—SY-5Y细胞增殖的抑制呈明显的剂量、时间依赖性,随剂量的增加,作用时间的延长,抑制效果逐渐加强;熊果酸对SHSY-5Y细胞凋亡的促进呈明显的剂量依赖性,随剂量的增加,促进凋亡效果逐渐加强;熊果酸对SH—SY-5Y细胞MYCN表达有抑制作用并有明显的剂量依赖性,随剂量的增加,抑制效果逐渐加强。12uM／L作用72h后神经母细胞瘤细胞增殖抑制效率达98．3％,MYCN基因mRNA表达抑制率达52．37％。结论应用熊果酸在体外环境作用SH—SY-5Y细胞,可以有效抑制该细胞的增殖、促进细胞凋亡、抑制原癌基因MYCNmRNA的表达。     

小剂量维甲酸诱导对神经母细胞瘤耐药的影响

目的探讨小剂量维甲酸诱导对神经母细胞瘤(NB)化疗耐药的影响。方法选择人NB细胞株SH SY5Y,用RT PCR方法检测小剂量全反式维甲酸(ATRA)作用下TrkB mRNA水平;通过四甲基偶氮蓝比色(MTT)法及流式细胞仪(FCM)检测ATRA诱导前后顺铂对人NB细胞株SH SY5Y的生长及凋亡的影响。结果SH SY5Y中未检测到TrkB mRNA表达,用1、10、100nM/LATRA诱导5d后可检测到TrkB mRNA表达,且随ATRA浓度增加TrkB mRNA水平逐渐升高。100nM/LATRA诱导7d,TrkB mRNA的相对比值与诱导5d比差异无显著性意义(P>0.05);MTT分析显示:BDNF+顺铂组(无TrkB表达)、ATRA+顺铂组(无BDNF刺激)细胞存活率同单用顺铂组比较无显著性差异(P>0.05);10nM/LATRA+BDNF+顺铂组NB细胞存活率明显高于单用顺铂组(P<0.01);FCM分析显示:ATRA+BDNF+顺铂组NB细胞凋亡率明显低于单用顺铂组(P<0.01)。结论存在BDNF的条件下,小剂量ATRA能阻断顺铂对SH SY5Y的细胞毒性作用,从而使SY5Y细胞对化疗耐药。