核黄素对人食管癌细胞株生长增殖的影响

[目的]采用细胞培养的方法研究核黄素对人食管癌细胞株生长增殖的影响,探讨核黄素营养水平与食管癌的关系。[方法]常规培养人食管癌细胞株Eca109细胞。(1)用不同浓度的核黄素作用于细胞株,MTT比色法测定Eca109细胞的增殖活性,计算细胞增殖率。(2)采用流式细胞仪法测定核黄素作用Eca109细胞后细胞周期的改变。(3)免疫组织化学法测定核黄素对Eca109细胞作用24 h Cyclin D1蛋白表达的影响。(4)HE染色以观察核黄素作用24 h对Eca109细胞的分化影响。[结果](1)不同浓度的核黄素作用于Eca109细胞后,其增殖率未见明显变化。(2)核黄素的加入使Eca109的细胞周期改变,出现G2/M期阻滞,但不促进其凋亡。(3)核黄素处理24 h后,经过免疫组化测定,食管癌细胞Cyclin D1蛋白表达无降低,与阴、阳性对照组相比差异均无统计学意义(P﹥0.05)。(4)HE染色观察各浓度组细胞形态形态无明显改变。[结论]核黄素不会影响食管癌Eca109的增殖,但可能将细胞阻滞在M期。     

大蒜油和白藜芦醇联合应用诱导胃癌细胞凋亡及对Fas、bcl-2和bax基因表达的影响

目的观察大蒜油和白藜芦醇联合用药对人胃癌MGC-803细胞凋亡及对Fas抗原表达、bcl-2基因、bax基因mRNA表达的影响。方法实验设大蒜油和白藜芦醇联合用药组1（各25μg／ml）、联合用药组2（各50μg／ml）和空白对照组,应用DNA梯度电泳及流式细胞术检测药物作用24h后细胞凋亡情况及Fas抗原表达情况;应用RT-PCR方法检测用药24h和48h后胃癌细胞bcl-2、bax基因mRNA表达水平。结果DNA梯度电泳可见联合用药组出现明显的“Ladder”带;流式细胞术显示各用药组annexin v阳性细胞数比对照组明显增多;联合用药组1和联合用药组2细胞Fas抗原表达阳性率分别为10．59％和14．16％,比对照组（5．27％）明显增高并有显著的统计学意义;各联合用药组Bcl-2基因mRNA表达水平比对照组下降而Bax基因mRNA表达升高。结论大蒜油和白藜芦醇联合用药诱导胃癌细胞凋亡可能与其促进胃癌细胞Fas抗原Bax基因表达增加并抑制bcl-2基因的表达有关。     

白藜芦醇对食管癌Eca109细胞的抑制作用研究

[目的]研究白藜芦醇(Resveratrol,Res)对食管癌Eca109细胞的抑制作用。[方法]将食管癌Eca109细胞分为4组:Res1组、Res2组、Res3组和对照组,Res浓度分别为10、20、40和0μmol/L。用MTT法测定Res对Eca109细胞的抑制作用,采用RT-PCR方法检测Eca109细胞Caspase-3、Fas基因表达情况。[结果]10μmol/LRes处理24h对Eca109细胞有明显的抑制作用;20μmol/LRes处理48h后抑制作用达到极显著水平。20μmol/L和40μmol/LRes处理72h,Eca109细胞Caspase-3、Fas基因表达明显高于对照。[结论]Res可显著抑制Eca109细胞增殖,Res可通过促进食管癌细胞株中Caspase-3、Fas的表达发挥其抗肿瘤作用。     

SO2吸入对大鼠肺p53、bax、bcl-2 mRNA和蛋白表达的影响

[目的]观察SO2对大鼠肺细胞凋亡相关基因mRNA和蛋白表达的影响。[方法]运用荧光实时定量RT- PCR和免疫组化技术研究了不同浓度SO2(0、14、28、56 mg/m3)吸入对大鼠肺细胞p53、bax、bcl-2三种细胞凋亡相关基因mRNA和蛋白表达的影响。[结果]肺中p53和bax mRNA表达水平及bax/bcl-2比值呈剂量依赖性增加,在低浓度SO2(14mg/m3)吸入条件下,p53、bax mRNA表达水平及bax/bcl-2比值虽然有升高趋势,但统计学上未见显著差异, 在SO2浓度为28．00和56．00mg/m3时均为显著增加(与对照组相比,p53:在14mg/m3为1．07倍,在28mg/m3为1．23倍, 在56 mg/m3为1．39倍;bax:在14 mg/m3为1．12倍,在28 mg/m3为1．77倍,在56 mg/m3为2．26倍;bax/bcl-2比值:在 14 mg/m3为1．13倍,在28 mg/m3为2．19倍,在56 mg/m3为3．01倍);而bcl-2 mRNA表达水平呈剂量依赖性降低,在低浓度SO2(14mg/m3)吸入条件下,bcl-2 mRNA水平虽然有降低趋势,但统计学上未见显著差异,在SO2浓度为28．00和 56．00mg/m3时显著降低(与对照组相比,bcl-2:在14mg/m3为0．99倍,在28mg/m3为0．78倍,在56mg／m3为0．73倍)。免疫组化的实验结果表明吸入SO2后大鼠肺中p53和bax蛋白表达水平呈剂量依赖性增加,而’bcl-2蛋白表达水平呈剂量依赖性降低。[结论] SO2可以改变凋亡相关基因的表达,表明SO2可诱导大鼠肺细胞凋亡,这可能与一些凋亡相关疾病的发生有关。这些机制的阐明有助于对SO2毒作用机制的理解和所致疾病的治疗。     

苯与甲醛对小鼠睾丸细胞凋亡及Bcl-2和Bax表达的影响

目的探讨苯和甲醛联合染毒对小鼠睾丸细胞凋亡的影响及其相关作用的机制。方法按3×3析因设计方法，108只昆明种雄性小鼠随机等分为9个组，每组12只，甲醛和苯染毒剂量分别为0、5、10mg／kg和0、100、400mg／kg，连续灌胃染毒5d，35d后处死，每组6只鼠睾丸做常规病理学切片观察睾丸的形态学变化，并采用免疫组织化学法检测bcl-2、bax的表达。另6只鼠睾丸匀浆离心，取沉渣观察睾丸细胞的凋亡率。结果甲醛和苯各染毒组小鼠睾丸组织结构损伤，染毒浓度越高，病理损害越明显；睾丸细胞bcl-2下调，bax表达上调，并有量-效关系，甲醛和苯染毒各组bcl-2和bax表达的相对灰度值较对照组均有差异（P〈0．01），甲醛和苯的联合效应为协同作用（P〈0．05）；各染毒组睾丸细胞凋亡率高于对照组（P〈0．01），并有量-效关系，二者合用的效应为相加作用（P〉0．05）。结论甲醛和苯可损伤小鼠睾丸的结构，使睾丸细胞凋亡增加、bcl-2表达下调、bax表达上调，bcl-2和bax表达的变化可能是诱导凋亡的机制。     

DHA和EPA对高碘所致脑损伤的拮抗效应

目的观察二十二碳六烯酸(DHA)二十碳五烯酸(EPA)对高碘所致的脑蛋白质、核酸代谢和bcl-2、bax基因表达损伤的拮抗效应。方法体重10～14g的昆明种小鼠随机分为适碘组(IN)、高碘组(IE)和高碘加DHA和EPA组(IEDE)。IN组动物饮含碘量为50μg/L的去离子水,IN和IEDE组饮含碘量为3000μg/L的去离子水,IN和IE组用普通鼠饲料喂养,IEDE组动物用含DHA200mg/kg和EPA100mg/kg的鼠饲料喂养。90d后雌雄2:1合笼,仔鼠继续用亲代喂养条件喂养,30d后处死仔鼠,称全脑和海马组织重量,测大脑蛋白质、DNA、RNA含量和bcl-2、bax基因表达数量。结果IE组动物脑和海马组织重量、蛋白质、DNA、RNA数量和bcl-2基因表达均显著低于IN组,bax基因表达则高于IN组,IEDE组脑、海马重量、蛋白质、DNA、RNA含量与IN组差异无统计学意义,但bcl-2表达低于IN组,bax表达高于IN组,而与IE组比差异无统计学意义。结论高碘能干扰脑蛋白质和核酸代谢及bcl-2、bax基因表达,使脑重量下降,DHA和EPA可拮抗高碘所致的脑蛋白质和核酸代谢的紊乱,但对高碘引起的bcl-2、bax基因表达变化未见明显的调整作用。     

新疆天然植物黑加仑对食管癌细胞增殖、凋亡的影响

目的:观察新疆天然植物黑加仑水提物对食管癌细胞的影响及其作用机制。方法:采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定不同浓度(10-1、10-2、10-3g/ml)黑加仑水提物作用不同时间(12、24、36h)对人食管癌细胞株Eca109的细胞存活量的影响,以大鼠正常肝细胞(BRL)为正常对照细胞株;用Bradford法测定肿瘤细胞蛋白质合成的变化;采用流式细胞技术(FCM)观察黑加仑作用后肿瘤细胞周期变化及凋亡情况;通过倒置显微镜观察细胞的形态变化。结果:黑加仑水提物10-1g/ml组对人食管癌细胞株Eca109作用24h后,癌细胞的生长和蛋白合成均有明显抑制作用(P<0.05),对正常肝细胞的存活量及蛋白合成均无影响;流式细胞仪检测二倍体峰前出现凋亡峰,细胞凋亡率为49.6%;并且癌细胞呈现典型的凋亡细胞形态。结论:黑加仑水提物可通过诱导细胞凋亡而抑制人食管癌细胞株Eca109细胞的生长。     

孕期及哺乳期锌干预对仔鼠脑组织bcl-2mRNA表达的影响

目的　观察锌与脑组织中 bcl- 2 m RNA表达关系 ,明确锌调节中枢神经系统发育及功能以及锌与神经细胞凋亡间的分子机制。方法　将成年刚怀孕 ICR雌性小鼠随机分为 5组并饲以不同锌水平的饲料 ,使其分别成为严重缺锌组 (1 mg/kg)、轻度缺锌组 (5mg/kg)、适锌组(30 mg/kg)、高锌组 (1 0 0 mg/kg)及高锌对喂组 (1 0 0 mg/kg)。实验动物在孕期和哺乳期均喂饲实验饲料 ,而断奶期 (2 0日龄 ,P2 0 )至成年 (70日龄 ,P70 )各组改喂普遍饲料。在 P2 0和 P70期收集各实验组动物脑组织 ,采用 Northern blot技术检测 bcl- 2 m RNA表达情况。结果　在 P2 0及 P70仔鼠脑组织中均有 bcl- 2 m RNA表达 ;P2 0期缺锌组 (严重缺锌组及轻度缺锌组 )实验仔鼠脑组织bcl- 2 m RNA的表达量明显少于非缺锌组 (适锌组、高锌对喂组及高锌组 ) ,并表现出与膳食锌水平呈正依赖关系 ;成年 (P70 )时 ,各实验组仔鼠脑组织 bcl- 2 m RNA表达水平未见明显差异。结论　锌对脑组织中神经细胞凋亡具有调节作用 ,发育期锌缺乏可促进脑细胞凋亡发生 ,并抑制 bcl- 2m RNA表达 ;补充锌可能通过提高 bcl- 2 m RNA转录水平抑制神经细胞凋亡。     

黄芪苷保护缺血损伤BMECs的作用机制研究

目的 探讨黄芪苷通过NO/Cav-1/MMP-9/Caspase-3信号通路保护缺血损伤脑微血管内皮细胞(BMECs)的作用机制。方法 采集出生2 w清洁级SD大鼠大脑皮质,采用连续消化法获得大脑皮质细胞,取生长状态良好的第2～3代BMECs细胞进行研究。取等量的BMECs细胞,加入缺血液的为缺血组,加入缺血液+10μmol/L黄芪苷为低浓度实验组,加入缺血液+50μmol/L黄芪苷为中浓度实验组,加入缺血液+100μmol/L黄芪苷为高浓度实验组,加入等量PBS为空白对照组。MTT法检测BMECs增殖,Western-blot法检测Caspase-3和MMP-9表达水平,试剂盒检测Cav-1和NO表达水平。结果 与空白对照组比较,缺血组、低浓度实验组、中浓度实验组、高浓度实验组BMECs细胞增殖水平均明显下降,差异均有统计学意义(t=5.38、4.92、4.35、3.89,均P<0.05);与缺血组比较,低浓度实验组、中浓度实验组、高浓度实验组、空白对照组BMECs细胞增殖水平均上升,除低浓度实验组比较差异无统计学意义(P>0.05)外,中浓度实验组、高浓度实验组、空白对...     

甲基纳曲酮对肝癌HepG2的VEGF的mRNA表达的抑制作用

目的:观察甲基纳曲酮对肝癌HepG2细胞VEGF的m RNA的影响。方法:分别将含0.01μmol甲基纳曲酮(低剂量组)、0.05μmol(中剂量组)、0.1μmol(高剂量组)培养基与肝癌HepG2细胞共孵72h,以等体积生理盐水处理组设立空白对照组。应用RT-PCR检测肝癌HepG2细胞中VEGF基因表达水平。结果:RT-PCR显示,甲基纳曲酮高剂量处理组作用72h的胞VEGF在m RNA水平表达均较对照组下调,低浓度组、中浓度组、高浓度组分别为0.75±0.03、0.58±0.05、0.47±0.04,各组均与对照组相比具有显著性差异(F=107.9,p=0.000),且具有时间依赖关系。结论:甲基纳曲酮能够下调肝癌HepG2细胞VEGF在m RNA的表达。     

洛铂对卵巢癌细胞SKOV3增值抑制及对bax、bcl-2凋亡基因表达的影响

目的:研究洛泊作用于浆液性卵巢癌细胞SKOV3后其对凋亡基因bcl-2和bax表达的影响。方法:体外培养卵巢癌细胞SKOV3,用MTT比色法检测洛铂对SKOV3细胞株的增殖抑制作用,流式细胞仪检测凋亡相关蛋白bax、bcl-2的表达。结果:体外培养的卵巢癌SKOV3细胞经不同浓度的洛泊处理后细胞生长明显受到抑制,洛泊作用于卵巢癌SKOV3细胞可诱导细胞的凋亡,同时随着洛铂浓度的增加,bax基因的表达增加,而bcl-2表达减少。结论:卵巢癌SKOV3细胞对洛泊具有药物敏感性,洛泊可诱导卵巢癌细胞的凋亡,bax蛋白的表达增加和bcl-2蛋白表达的减少可能是洛泊诱导卵巢癌细胞的凋亡机制之一。     

铁过度负荷对大鼠免疫性肝损伤的影响及血管紧张素的作用

目的探讨铁过负荷和血管紧张素Ⅱ一型受体(AT1)阻断剂Losartan(LOS)在大鼠免疫性肝损伤中的作用。方法雌性大鼠50只分为5组(对照,肝损伤,肝损伤+LOS,肝损伤+右旋糖酐铁(ID)和肝损伤+ID+LOS)。采用卡介苗(BCG)加脂多糖(LPS)诱导法复制免疫性肝损伤模型;通过腹腔注入ID建立铁过负荷动物模型。检测血清铁(SI)、转铁蛋白(TRF)、总蛋白(TP)含量及天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性;检测肝组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和铁(HIC)含量;采用流式细胞计量分析检测细胞凋亡调节蛋白基因bcl-2和bax表达量的变化,计算细胞凋亡指数(AI)、细胞增殖指数(PI)和bax与bcl-2比值(bax/bcl-2)。结果(1)肝损伤大鼠AST活性高于对照组、TP和TRF含量低于对照组,MDA含量增加伴有SOD活性降低;bax表达量、bax/bcl-2和AI均大于对照组。(2)与肝损伤动物比,肝损伤+ID大鼠AST活性升高,MDA升高,bax表达量、bax/bcl-2和AI均增大;HIC高于对照组。(3)与肝损伤大鼠比,肝损伤+LOS组的AST活性降低,TRF升高;MDA含量降低,SOD活性升高;bcl-2表达量增加,bax/bcl-2和AI减小。(4)肝损伤+ID+LOS组的AST活性和MDA含量小于肝损伤+ID组,而TRF高于肝损伤组。结论铁过负荷增加脂质过氧化并易化细胞凋亡,加重免疫性肝损伤。血管紧张素Ⅱ易化这一肝细胞损伤过程。     

在Eca109细胞中Lrig1对Survivin和Caspase-9的调控研究

目的采用多亮氨酸重复区免疫球蛋白样蛋白1(Lrig1)过表达的方式,确定在食管鳞癌细胞(Eca109细胞)中是否存在Lrig1对Survivin和含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase-9)的调控。方法使用重组质粒GV-219-Lrig1转染Eca109细胞使其过表达Lrig1;采用荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法和蛋白质印迹法分别检测细胞中Lrig1、Survivin和Caspase-9的信使核糖核酸(m RNA)及蛋白的表达水平,使用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果重组质粒GV-219-Lrig1转染Eca109细胞24 h后,在m RNA水平,Lrig1表达量显著增高(P0.01),而Survivin和Caspase-9无明显变化(P0.05);在蛋白水平,Lrig1和Cleaved-Caspase-9表达量都显著增加(P0.05),而Survivin表达量无明显变化(P0.05);流式细胞仪检测结果显示,与GV-219(NC组)相比,重组质粒GV-219-Lrig1转染的Eca109细胞24 h细胞晚期凋亡率增加1.6%。结论在Eca109细胞中,过表达Lrig1使其在转录和蛋白水平的表达量显著增加,可明显增加Cleaved-Caspase-9的蛋白水平。但对Survivin的表达没有影响。其调控机制尚待进一步研究。     

苯巴比妥促癌过程中细胞凋亡与bcl-2和bax mRNA表达的变化

目的 研究苯巴比妥（PB）促肝癌过程中细胞凋亡与相关基因bcl-2和bax mRNA表达,探讨PB促肝癌的分子机制。方法 建立大鼠肝癌启动／促进模型,采用TUNEL法检测促癌过程中肝细胞凋亡,提取总RNA用RT-PCR检测bcl-2和bax mRNA在促癌过程中的表达。结果 经DEN启动诱发的大鼠肝癌前病灶细胞凋亡率显著高于正常组。高、低剂量PB组和启动组随时相点延长细胞凋亡率降低,且各时相点间凋亡率差异显著（P〈0．05）。经DEN启动的各组（高、低剂量组和启动对照组）bcl-2 mRNA表达显著高于正常对照组,高剂量组随时相点延长bcl-2 mRNA表达呈增高趋势。经启动处理的各组bax mRNA表达高于正常对照,高剂量组bax mRNA表达随时间延长而降低。结论 在促癌阶段,促癌物PB能抑制凋亡,诱导抗凋亡基因bcl-2 mRNA轰达上调和俚凋亡基因bax mRNA轰达下调．提示凋亡抑制可能是促癌的机制之一。     

正已烷对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡调控基因影响

目的 观察正己烷对大鼠卵巢颗粒细胞凋亡调控基因bcl-2、bax、bcl-x1、xiap mRNA表达的影响.方法 48只成年雌性Wistar大鼠按体重随机分为4组,分别给予浓度为0,3.01,9.03,27.1 g/m3正己烷静式吸入染毒;每天4 h,每周6 d,持续6周;染毒结束待大鼠进入动情期,处死并提取卵巢颗粒细胞,并采用实时荧光定量PCR法测定颗粒细胞bcl-2,ax、bcl-x1、xiap mRNA表达水平.结果 随着染毒剂量增加,各组bcl-2 mRNA表达呈下降趋势(2-△△CT值分别为1.069,0.762,0.698,0.690),bax mRNA表达呈上升趋势(2-△△CT值分别为1.039,1.242,1.317,1.895),各染毒组与对照组比较,差异均有统计学意义(P＜0.05).各染毒组bcl-x1 mRNA表达与对照组差异无统计学意义(P＞0.05);27.1g/m3染毒组xiap mRNA表达(0.694)低于对照组(0.999),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 正己烷上调大鼠卵巢颗粒细胞bax,下调bcl-2、xiap mRNA表达,可能是正己烷致使卵巢颗粒细胞凋亡的机制之一.     

苯并[a]芘、铅单独及联合作用对体外神经元存活率的影响及对DNA的损伤

目的　研究苯并 [a]芘、铅单独及其联合作用对体外神经元毒性及胞核DNA的损伤。方法　取 8日龄SD大鼠小脑粒细胞培养 ,按以下分组进行处理 :①空白对照组 ;②溶剂对照组 (等量DMSO +S9 mix平行处理 ) ;③低浓度铅染毒组 (PbAc5 μmol L) ;④高浓度铅染毒组 (PbAc5 0 μmol L) ;⑤低浓度BaP染毒组(BaP5 μmol L +S9 mix) ;⑥高浓度BaP染毒组 (BaP5 0 μmol L +S9 mix) ;⑦低浓度铅 +低浓度BaP联合染毒组 ;⑧低浓度铅 +高浓度BaP联合染毒组 ;⑨高浓度铅 +低浓度BaP联合染毒组 ;⑩高浓度铅 +高浓度BaP联合染毒组。染毒 90分钟 ,胰酶消化法收集标本 ,台盼蓝染色法检测存活率 ;单细胞凝胶电泳法检测胞核DNA的损伤。结果　①两种浓度的BaP、铅单独或联合染毒均可降低细胞存活率 (P <0 0 5 ,P <0 0 1)。②高浓度BaP单独染毒组 (第 6组 )、两种毒物联合染毒且其中 1种或 2种为高浓度组 (第 8、9、10组 )与对照组相比胞核DNA损伤程度均有显著差异 (P <0 0 1)。结论　①BaP、铅均有一定的体外神经毒性 ,二者联合作用可使毒性增强。②胞核DNA损伤可能是BaP引起体外神经毒性的机制之一。     

白藜芦醇对裸鼠移植瘤bcl-2与bax基因表达影响

目的探讨白藜芦醇预防性给药对裸鼠胃癌移植瘤细胞凋亡相关基因bcl-2、bax表达影响。方法胃癌MGC-803细胞建立裸鼠胃癌移植瘤模型,白藜芦醇低(50 mg/kg)、中(100 mg/kg)和高(150 mg/kg)剂量预防性给药;透射电镜、原位末端标记染色(TUNEL)法观察各组裸鼠胃癌移植瘤细胞凋亡发生情况,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组化法检测各组裸鼠胃癌移植瘤组织内bcl-2、bax基因和蛋白表达情况。结果白藜芦醇低、中、高剂量用药组细胞凋亡情况明显高于模型组,中、高剂量组bcl-2值分别为(0.26±0.072)和(0.24±0.083),低于模型组(0.41±0.056),差异有统计学意义(P<0.05);中、高剂量组bax值分别为(1.31±0.11)和(1.47±0.089),高于模型组(1.17±0.045),差异有统计学意义(P<0.05);免疫组化结果显示bcl-2蛋白表达低于模型组,而bax蛋白表达高于模型组。结论白藜芦醇诱导裸鼠胃癌移植瘤细胞凋亡作用与上调bax和下调bcl-2表达有关。     

口服米索前列醇不良反应32例分析

为探讨甲醛对小鼠睾丸生殖细胞的DNA损伤及凋亡相关基因bcl-2、bax蛋白在染毒小鼠睾丸细胞中的表达,分别用0．2、2、20mg／k的甲醛小鼠腹腔注射,利用单细胞凝胶电泳检测睾丸生殖细胞的DNA损伤,同时对睾丸生殖细胞采用免疫组化法进行bax及bcl-2蛋白染色,并结合图像分析推测bax及bcl-2的蛋白表达变化。结果显示在甲醛0．2mg／kg的浓度时小鼠生殖细胞有最明显的DNA损伤,3种浓度甲醛处理组bax蛋白表达均明显增多,而bcl-2阳性蛋白表达明显低于阴性对照组,差异有统计学意义。说明甲醛可造成机体内生殖细胞的DNA损伤,还可通过抑制bcl-2、增加bax的表达而诱导细胞凋亡,从而影响生殖细胞。     

白细胞介素-17对子宫内膜癌细胞株HEC-1-B基质金属蛋白酶-2,-9基因表达及肿瘤细胞侵袭转移的影响

目的 探讨白细胞介素(interleukin,IL)-17对子宫内膜癌细胞株HEC-1-B基质金属蛋白酶(matric metalloproteinases,MMP)-2,-9基因表达及肿瘤细胞侵袭转移能力的影响.方法 选择对数生长期人子宫内膜癌细胞株HEC-1-B,在无血清培养基中加入白细胞介素-17终浓度分别为1 ng/mL,10 ng/mL,100 ng/mL和无血清培养(空白对照)进行干扰处理后,分别纳入干扰组(干扰组1、干扰组2、干扰组3)及对照组.采用免疫荧光细胞化学方法检测子宫内膜癌细胞株HEC-1-B是否表达白细胞介素-17特异性受体C (IL-17RC)蛋白.采用逆转录荧光定量PCR法检测不同浓度白细胞介素-17对子宫内膜癌细胞株HEC-1-B基质金属蛋白酶-2,-9 mRNA基因表达水平的影响.采用transwell小室检测不同浓度白细胞介素-17干预后,子宫内膜癌细胞株HEC-1-B侵袭转移能力的变化.结果 人子宫内膜癌细胞株HEC-1-B高表达特异性白细胞介素-17受体C.白细胞介素-17各浓度干扰组(干扰组1,干扰组2,干扰组3)与对照组比较,干扰组基质金属蛋白酶-9 mRNA表达增加,差异有显著意义(P＜0.01),且各浓度干扰组表现呈浓度依赖;而干扰组基质金属蛋白酶-2 mRNA表达无明显变化;干扰组穿膜细胞数明显增多,与对照组比较,差异有显著意义(P＜0.01),且各浓度干扰组表现呈浓度依赖;而干扰组2与干扰组3穿膜细胞数较干扰组1增多,差异有显著意义(P＜0.05).结论 白细胞介素-17能增强基质金属蛋白酶-9基因表达,促进子宫内膜癌细胞侵袭转移.     

二十二碳六烯酸联合顺铂对人食管癌耐药细胞周期及凋亡的影响

目的探讨二十二碳六烯酸(DHA)与顺铂(DDP)联用对食管癌细胞Eca109/DDP增殖、周期和凋亡的影响。方法采用递增药物质量浓度持续作用诱导法建立耐DDP的食管癌细胞Eca109/DDP。DHA联合DDP作用于Eca109/DDP细胞,MTT法检测Eca109/DDP细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡。结果递增药物质量浓度持续作用诱导6个月后,细胞可以在含1μg/ml DDP的培养液中正常生长,其对DDP的耐药指数为15.886,所得细胞命名为耐DDP的食管癌细胞Eca109/DDP。单用DHA浓度≤1.560μg/ml时,对Eca109/DDP细胞无明显抑制作用(P0.05),但与DDP 1μg/ml合用能显著促进DDP抑制Eca109/DDP细胞的增殖(P0.05),并促进DDP诱导Eca109/DDP细胞周期改变、细胞凋亡增加。细胞周期表现为G1期细胞明显增多(P0.05),S期细胞、G2期细胞明显减少(P0.05);细胞的凋亡率明显增加(P0.05)。结论 DHA促进DDP抑制Eca109/DDP细胞增殖可能与改变Eca109/DDP细胞周期、增加细胞凋亡有关。