二甲双胍对三阴性乳腺癌细胞作用的实验研究

目的探讨二甲双胍对三阴性乳腺癌的作用及可能机制。方法不同浓度的二甲双胍作用三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231后,采用MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot技术检测ERK1/2、pERK1/2的表达水平,将肿瘤细胞接种裸鼠后给予二甲双胍治疗,观察肿瘤组织的抑瘤率。结果不同浓度的二甲双胍与乳腺癌MDA-MB-231细胞共培养后,随着二甲双胍浓度的逐渐增加,MDA-MB-231细胞的增殖抑制也逐渐增加。经统计学分析发现,二甲双胍20mM组与对照组比较;二甲双胍30mM组与20mM组、对照组比较;二甲双胍40mM组与30mM组、20mM组、对照组比较;二甲双胍50mM组与40mM组、30mM组、20mM组、对照组比较,差异均有统计学意义(t分别=16.04;4.36、29.24;21.33、23.46、40.61;3.70、31.80、33.16、64.17,P均<0.05)。乳腺癌MDA-MB-231细胞经二甲双胍处理后,细胞凋亡率(27.31%)明显高于对照组(2.36%),两者比较,差异有统计学意义(t=29.93,P<0.05)。经二甲双胍处理的MDA-MB-231细胞,其ERK1/2的磷酸化水平降低。将乳腺癌MDA-MB-231细胞接种于裸鼠,经二甲双胍治疗后,肿瘤组织的抑瘤率明显高于对照组,两者比较,差异有统计学意义(t=37.63,P<0.05)。结论二甲双胍对三阴性乳腺癌细胞有抑制作用,其机制可能是抑制EGFR信号通路的分子活化。     

二甲双胍对肿瘤抑制作用的研究进展

大量研究证实,糖尿病患者与某些癌症的罹患率之间存在相关关系,而且相比较没有糖尿病的癌症患者,糖尿病合并癌症的患者对化疗药物的敏感性降低、具有更多并发症、预后更差[1]。二甲双胍(metformin)是美国糖尿病学会(American diabetes association,ADA)在欧洲糖尿病研究协会(European Association for the Study of Diabetes,EASD)共识推荐的治疗2型糖尿病     

二甲双胍对宫颈癌Hela细胞的体外抗肿瘤作用

目的以宫颈癌Hela细胞为研究对象,探讨二甲双胍对宫颈癌Hela细胞的体外抗肿瘤作用以及二甲双胍联合卡铂是否对宫颈癌Hela细胞的增殖抑制有协同作用。方法将宫颈癌Hela细胞分为空白对照组、不同浓度(0.01、0.5、1、5、10、20mmol/L)二甲双胍组,采用MTT法检测不同浓度二甲双胍对宫颈癌Hela细胞的增殖活性的影响;并应用AO/EB染色和流式细胞仪研究二甲双胍的体外抗肿瘤机制;将1.0mmol/L及5.0mmol/L的二甲双胍与25mg/L、50mg/L的卡铂单一或联合作用宫颈癌Hela细胞,采用MTT法检测各组细胞OD值,计算细胞增殖抑制率。结果二甲双胍对宫颈癌Hela细胞体外增殖能力有明显的抑制作用,且呈明显的浓度依赖性和时间依赖性;与对照组比较,荧光显微镜下计数发现不同浓度二甲双胍作用宫颈癌Hela细胞24h后,随着二甲双胍浓度的增加,细胞凋亡率逐渐升高(P0.05),而以不同浓度(0、1、5mmol/L)二甲双胍培养宫颈癌Hela细胞48h后,流式细胞仪检测实验组Hela细胞处于G0/G1期比例升高,S期细胞比例下降,差异具有统计学意义(P0.05);二甲双胍联合卡铂对抑制宫颈癌Hela细胞增殖具有协同作用,且随着二甲双胍浓度的增加,细胞增殖抑制率增加(P0.05)。结论证实二甲双胍对体外宫颈癌Hela细胞增殖有明显的抑制作用,它是通过诱导细胞凋亡、细胞周期G0/G1期阻滞来实现的;二甲双胍与卡铂联合应用能够增强卡铂对宫颈癌Hela细胞的增殖抑制作用。     

IVIG对乳腺癌细胞株MDA-MB-453体外增殖抑制作用的实验研究

静脉注射丙种球蛋白(IVIG), 来源于健康志愿者捐献的血浆经灭菌、分离得到,因此是一种源自人体的安全的生物制品.IVIg主要适用于血小板减少性紫癜(ITP)、自体免疫疾病以及免疫介导的疾病的治疗[1-2].近年来,有文献报道IVIG还可用于治疗各种肿瘤,有一定的临床效果[3-4].乳腺癌是严重威胁人类健康的常见病和多发病,乳腺癌新发病人数每年有增加的趋势.本实验是利用目前较为先进的ATP-荧光发光法检测抑瘤率并结合流式细胞仪检测肿瘤细胞周期、凋亡指数,来探索IVIG体外对乳腺癌细胞增殖的影响.     

非甾体类抗炎药对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖影响的实验室研究

目的 通过研究阿司匹林、塞来昔布及两者分别联合阿那曲唑对乳腺癌细胞MDA-MB-231的抑制作用,探讨并比较阿司匹林和塞来昔布的抗肿瘤作用.方法 采用MTT法检测不同浓度的阿司匹林、塞来昔布及两者分别联合阿那曲唑对乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响.结果 阿司匹林、塞来昔布单药对MDA-MB-231细胞生长均有抑制作用,表现为浓度、时间依赖性,统计学差异具有统计学意义(P<0.05);不同浓度的阿司匹林、塞来昔布分别联合阿那曲唑后对MDA-MB-231细胞的抑制作用较单用阿那曲唑增强,亦表现为浓度依赖性,差别具有统计学意义(P<0.05).结论 阿司匹林和塞来昔布均有抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的作用,两者分别联合阿那曲唑后有协同抗肿瘤的作用.     

苦瓜多糖对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为的影响

目的探讨苦瓜多糖对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为的影响及其机制。方法采取体外培养MDA-MB-231细胞进行分组,苦瓜多糖组给予不同浓度苦瓜多糖(0μg/ml、30μg/ml、60μg/ml、120μg/ml),空白组(苦瓜多糖0μg/ml)培养基中含有与苦瓜多糖组等浓度的DMSO,将各组细胞孵育分别培养至12 h、24 h、48 h处理。MTT法检测细胞增殖率,FMC法检测后细胞周期分布与细胞凋亡率,Hoechst 33342观察凋亡小体变化,Trans well法检测细胞迁移率,免疫组化检测Ki67与Caspase-3阳性率,Western-blot检测MMP-9、Bcl-2、Bax表达水平,RT-PCR检测细胞周期蛋白(CyclinD1)、血管内皮生长因子(VEGF)表达量;体内建立移植瘤裸鼠模型,试验组裸鼠采用苦瓜多糖(120μg/ml)灌胃治疗,早晚一次,1 ml/次,对照组裸鼠灌胃等体积的生理盐水,两组裸鼠治疗6周后测量肿瘤质量、观察肿瘤体积变化。结果与空白组相比,苦瓜多糖组癌细胞增值率与迁移能力随苦瓜多糖剂量增加而降低(P 0. 05),细胞凋亡率、凋亡小体数量随着药用剂量增加而升高(P 0. 05); Western-blot检测结果显示苦瓜多糖组MMP-9、Bcl-2表达水平低于空白组(P 0. 05),Bax表达水平高于空白组(P 0. 05); RT-PCR结果显示苦瓜多糖组CyclinD1、VEGF表达量显著低于空白组(P 0. 05)。试验组肿瘤组织中的Ki67蛋白水平、肿瘤体积、肿瘤质量显著低于对照组(P 0. 05),而试验组肿瘤组织中Casppase-3蛋白水平显著高于对照组(P 0. 05)。结论苦瓜多糖可以通过调控细胞周期、凋亡、迁移侵袭相关蛋白及基因表达,进而调控人乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为。     

二甲双胍不良反应

二甲双胍为常用双胍类降糖药物,临床应用广泛.近年来国内有文献报道其不良反应,现摘述如下.     

二甲双胍对人绒毛膜癌细胞凋亡的影响

目的观察二甲双胍对人绒毛膜癌细胞凋亡的影响和可能的作用机制。方法选用人绒毛膜癌细胞系JEG-3,分为对照组和二甲双胍组(终浓度为5、10、20、40mmol/L)处理48h后,使用流式细胞术和免疫荧光检测细胞凋亡情况,分别采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)和免疫蛋白印迹检测凋亡相关基因半胱天冬酶-3(Caspase-3)、Bcl-2和凋亡调节蛋白(Bax)的mRNA及蛋白变化趋势。结果和对照组相比,二甲双胍组的JEG-3细胞早晚期凋亡率显著上升,同时Caspase-3和Bax的mRNA及蛋白表达水平显著增加,但Bcl-2的mRNA和蛋白表达显著降低。结论二甲双胍可以通过Caspase-3及Bcl-2/Bax通路诱导JEG-3细胞发生凋亡。     

EPA与ISA联合应用对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的作用研究

【目的14g讨二十碳五烯酸（EPA）联合2,3-吲哚醌（ISA）对人乳腺癌细胞毒活性的作用及可能机制。【方法】联用不同浓度的EPA与ISA孵育人乳腺癌细胞MDA-MB-231不同时间,采用CCK-8法检测IsA对乳腺癌细胞MDA～MB-231的增殖抑制率;以TBA法测定细胞抽提物中脂质过氧化产物丙二醛（MDA）含量,用亚硝酸盐分光光度法测定一氧化氮（N0）含量,考察EPA与ISA对人乳腺癌细胞MDA-M13-231的影响。[结果]ISA对MDA-MB-231细胞增殖有明显的抑制作用,EPA与ISA联用可加强ISA对细胞的增殖抑制,同时伴有MDA水平的增加及N0含量的降低。[结论]EPA能明显增加IsA对MDA-MB-231细胞的细胞毒活性,机制之一是EPA增强了肿瘤细胞内的脂质过氧化作用。     

二甲双胍对SKM-1细胞增殖抑制作用及相关作用机制

目的:探讨二甲双胍对AML-MDS细胞株SKM-1细胞增殖的影响以及相关的机制。方法:采用CCK-8检测细胞增殖;采用流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期;采用蛋白印迹法检测通路蛋白AMPK和周期相关蛋白的表达水平。结果:二甲双胍可抑制SKM-1细胞增殖,该作用依赖于二甲双胍诱导细胞周期G0/G1期停滞而非促进细胞凋亡。G1期相关周期蛋白(CyclinD1、CDK4)表达水平明显下调,而周期抑制蛋白P53、P21CIP1、P27KIP1的蛋白水平上调。此外,与二甲双胍抗肿瘤效应相关的AMPK蛋白磷酸化水平上调。结论:二甲双胍抑制SKM-1细胞增殖活性,这可能与其激活AMPK通路诱导细胞周期停滞有关,但仍需进一步深入研究其相关机制。     

沉默Kin17表达抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的增殖

目的 探讨沉默Kin17表达对乳腺癌细胞生长增殖的影响,为评估该分子作为未来药物靶点的潜能提供依据. 方法 分别用携带Kin17基因特异性siRNA与正常对照siRNA的慢病毒重组载体感染MDA-MB-231细胞,再用嘌呤霉素进行抗性筛选,然后在荧光显微镜下观察阳性细胞的比例;用Real-time PCR与Western blot方法检测稳定转染了慢病毒重组载体的MDA-MB-231细胞中的Kin17mRNA与蛋白表达水平;CCK-8实验检测细胞生长增殖状况. 结果 通过感染携带Kin17特异性siRNA的病毒重组载体,稳定、明显敲减了MDA-MB-231细胞中的Kin17 mRNA与蛋白表达水平,而且显著减缓了该乳腺癌细胞的生长增殖速度. 结论 沉默Kin17表达能抑制三阴表型乳腺癌细胞的增殖,并有可能成为一种潜在的乳腺癌治疗新策略.     

二甲双胍对胰岛β细胞胰岛素抵抗的作用

盐酸二甲双胍（metformin,MF）是治疗糖尿病的老药,在临床应用已有50多年的历史,其降糖作用机制主要为抑制肝脏糖的异生和糖原分解,降低肝糖输出;抑制肠道葡萄糖吸收及促进外周组织葡萄糖利用^[1-3]。近年研究结果显示本品可改善外周组织的胰岛素抵抗,其机制可能为增加外周组织胰岛素受体数目及亲和力,提高胰岛素受体酪氨酸激酶的活性,     

miR-181a-5p介导虎杖苷体外诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的机制研究

【目的】探讨虎杖苷体外干预对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及凋亡的影响。【方法】以不同浓度(0、2、4、6、8、16μmol/L)的虎杖苷处理乳腺癌MDA-MB-231细胞,MTT方法检测细胞增殖变化。乳腺癌MDA-MB-231细胞分成对照组(常规培养)、虎杖苷组(6μmol/L虎杖苷处理)、虎杖苷+Anti-NC组(转染inhibitor control,6μmol/L虎杖苷处理)、虎杖苷+Anti-miR-181a-5组(转染miR-181a-5 inhibitor,6μmol/L虎杖苷处理)。流式细胞术检测MDA-MB-231细胞凋亡情况,Western blot检测MDA-MB-231细胞Bax和c-caspase-3、caspase-3蛋白表达水平,Realtime PCR方法测定MDA-MB-231细胞miR-181a-5p表达水平。【结果】与对照组比较,2、4、6、8、16μmol/L的虎杖苷处理后的细胞吸光值显著降低(均P<0.05)。与虎杖苷+Anti-NC组比较,虎杖苷+Anti-miR-181a-5组乳腺癌细胞中miR-181a-5p水平降低,吸光值升高,细胞凋亡率降低,细胞中Bax、c-caspase-3、caspase-3蛋白水平降低(P<0.05)。与对照组比较,虎杖苷组乳腺癌细胞凋亡率升高,细胞中凋亡蛋白Bax、c-caspase-3、caspase-3水平升高,miR-181a-5p表达水平升高(P<0.05)。【结论】虎杖苷通过上调miR-181a-5p抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

TRAIL联合Res对乳腺癌MDA-MB-231细胞DR和Caspase表达的影响

目的研究TRAIL联合白藜芦醇（Res）对乳腺癌MDA-MB-231细胞DR和caspase表达的影响。方法MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡及细胞表面DR4、DR5蛋白的表达;分光光度法检测caspase-3、caspase-8相对活性;荧光定量PCR检测DR4、DR5及caspase-3、caspase-8 mRNA的表达。结果50μmol／L和100μmo/L,Res分别与50ng／mL TRAIL联合作用后,对MDA-MB-231细胞增殖的抑制率及细胞凋亡率分别与单独应用相应浓度的Res和TRAIL比较,均存在显著差异（P〈0．01）。50μmol／L和100μmol／LRes分别与50ng／mLT RAIL联合作用后,caspase-3、caspase-8的相对活性与对照组及单用TRAIL、Res比较均明显增强,差异显著（P〈0．01）。Res作用后,细胞表面DR4、DR5荧光指数与对照组比较明显增强。荧光定量PCR结果显示与对照组比较．Res作用后DR4、DR5mRNA表达上调;与单独用药比较,TRAIL联合Resetcagpase-3、easpase-8 mRNA表达上调。结论TRAIL和Res联合应用对诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡具有明显的协同效果,其作用机制可能与增加DR和caspase活性有关。     

二甲双胍的临床应用

二甲双胍为目前国内外常用的双胍类降糖药。在临床上除主要用于降血糖外，还用于治疗多囊卵巢综合征（PCOS）。     

二甲双胍的临床应用

二甲双胍能有效地改善糖脂代谢和胰岛素抵抗,减少心血管危险因素,临床上除了用于治疗糖尿病和糖耐量减低及空腹血糖受损的干预外,近年来还被应用于多囊卵巢综合征和非酒精性脂肪性肝病的治疗。     

不同来源TIMP-1基因表达对人乳腺癌MDA-MB-231细胞生物学行为影响的研究

目的研究不同来源金属蛋白酶1组织抑制剂（TIMP-1）对人乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭与转移特性的影响。方法分别构建内源性和外源性TIMP-1表达乳腺癌细胞模型，检测MDA-MB-231细胞、MDA-MB-231（TIMP-1）细胞和MDA-MB-231（AdTIMP-1）细胞在体外增殖速度、克隆形成、重组基底膜侵袭抑制试验、细胞移动试验和SCID免疫缺陷小鼠移植瘤形成试验进行体内外研究。结果通过细胞体外增殖速度检测显示，内源性TIMP-1的表达有可能促进肿瘤细胞的生长；外源性TIMP-1的表达有可能抑制肿瘤细胞的生长。无论是内源性还是外源性的TIMP-1表达均不影响肿瘤克隆形成能力和肿瘤形成能力。内源性TIMP-1的表达有可能促使肿瘤细胞的移动能力增强；外源性TIMP-1表达不影响肿瘤细胞的移动能力。内、外源性TIMP-1对MDA-MB-231的侵袭能力均有抑制作用，但外源性TIMP-1的抑制作用更大。通过体内致瘤实验显示，内源性TIMP-1的表达可显著促进肿瘤生长;外源性TIMP-1的表达可显著抑制肿瘤生长。结论不同来源的TIMP-1对MDA-MB-231细胞的生物学行为有不同影响。     

低频低强度超声辐照微泡对三阴性乳腺癌MDA-MB-231/DOX细胞耐药性的影响

目的 探讨低频低强度超声辐照微泡(LILFU-MB)对MDA-MB-231/DOX细胞耐药性的影响。方法 筛选LILFU-MB非毒性照射时间;选取不同浓度(10-2μM,10-1μM,100μM,101μM,102μM,103μM)阿霉素(DOX)分别处理细胞24h,测定DOX对耐药细胞的半抑制浓度(IC50)。将细胞分为对照组、DOX组、LILFU-MB组、DOX+LILFU-MB组,检测细胞增殖、迁移、凋亡情况以及P-gp、Bcl-2、Cyt-c和Caspase-3蛋白表达水平。结果 LILFU-MB非毒性照射时间为30s,能降低DOX对耐药细胞的IC50。与单独DOX处理和LILFU-MB处理相比,DOX+LILFU-MB组细胞增殖率和迁移率最低,细胞凋亡核型改变最明显,细胞凋亡率、Cyt-c和Caspase-3蛋白表达水平均升高(P＜0.05),Bcl-2蛋白表达水平显著降低(P＜0.05),同时DOX+LILFU-MB组明显下调P-gp蛋白的表达(P＜0.05)。结论 LILFU-MB通过下调P-gp蛋白表达,抑制MDA-MB-231/DOX细胞增殖、迁移并促进细胞凋亡,进而逆转三阴性乳腺癌MDA-MB-231/DOX细胞耐药性。     

二甲双胍联合卡铂对宫颈癌U14细胞的体内抗肿瘤研究

目的以宫颈癌U14细胞小鼠皮下移植瘤模型为研究对象,探讨二甲双胍联合卡铂对宫颈癌U14小鼠移植瘤模型肿瘤的体内抗肿瘤作用。方法建立宫颈癌U14细胞小鼠皮下肿瘤模型,将其分为生理盐水对照组、二甲双胍组、卡铂组、二甲双胍联合卡铂组,每组各9只;二甲双胍100 mg/kg/day注入小鼠腹腔内,共18天,卡铂以50mg/kg注入小鼠腹腔内,共1次,对照组腹腔内注入等量的生理盐水。给药后开始记录荷瘤小鼠的生存状态,且每2天测定其肿瘤体积及小鼠体重,18天后处死小鼠,并对其肿瘤体积、小鼠体重、平均生存期进行比较,同时留取各组小鼠肿瘤组织观察其病理组织学变化。结果二甲双胍联合卡铂给药组能显著抑制肿瘤生长,与其他3组对比具有极显著性差异(P0.01);实验周期内,各组小鼠体重均有所增长,但组间无明显差异,证实各组给药剂量下均无明显毒性反应;HE染色病理结果显示,与其他各组比较,联合给药组肿瘤组织多见局灶性坏死,细胞核深染,呈褐色,细胞核固缩、溶解、碎裂,染色质部分红染。结论体内实验研究证实,二甲双胍联合卡铂能显著抑制宫颈癌U14细胞株小鼠皮下移植瘤的生长,二甲双胍能够增强卡铂的化疗敏感性。