促红细胞生成素对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响

目的：观察脑缺血再灌注大鼠腹腔注射人重组促红细胞生成素（Epo）后，脑组织切片的病理形态及细胞凋亡指标caspase-3蛋白的变化。方法：应用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺彬再灌注模型，应用免疫组化染色、原位末端标记法（TUNEL），检测脑缺血再灌注后各组大鼠凋亡细胞数和caspase-3蛋白的表达，经图像分析仪计算凋亡细胞数及测量阳性反应细胞光密度。结果：①治疗组海马CAl区和皮层神经细胞较缺血再灌组数目明显减少；②TUNEL法检测凋亡细胞数与caspase-3蛋白阳性反应细胞数统计学分析显示：再灌注组与假手术组比较、给药组与缺血再灌注组比较均有极显著性差异（P〈0．01），多次给药组与一次给药组比较差异显著（P〈0．05）。结论：促红细胞生成素对局灶性脑缺血再灌注大鼠具有神经保护作用，可能与其明显减少海马及皮层神经元细胞的凋亡数量以及降低caspase-3蛋白的表达有关。     

复方天麻蜜环菌制剂对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的影响

目的：观察复方天麻蜜环菌制剂对大鼠脑缺血再灌注后大脑皮质缺血灶周围区Caspase-3蛋白、凋亡诱导因子时相表达及神经细胞凋亡的影响。方法：应用线栓法建立Wistar大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型，TTC染色观察梗死灶的分布，应用原位末端标记（TUNEL）和免疫组化技术分别观察模型组，复方天麻蜜环菌制剂治疗组和对照组（生理盐水干预组）大脑中动脉栓塞90min再灌注6，24，72h时缺血灶周围脑区Caspase-3蛋白、凋亡诱导因子和TUNEL阳性细胞的时相表达。结果：（1）脑缺血再灌注后在缺血灶周围区均出现三者的表达，且表达有几乎一致的规律性。（2）栓塞90min再灌注24，72h，复方天麻蜜环菌制剂治疗组与其他两组比较，caspase-3、凋亡诱导因子阳性细胞和TUNEL染色阳性细胞的数量均明显减少（P〈0．01）。结论：（1）AIF、Caspase-3参与了局灶性脑缺血后神经细胞的凋亡过程。（2）复方天麻蜜环菌制剂可以减少凋亡诱导因子（AIF）、Caspase-3蛋白的表达，减轻迟发性神经元死亡，对缺血性脑组织有保护作用。     

黄芩苷对脑缺血-再灌注损伤大鼠神经细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的:研究黄芩苷对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤后神经细胞凋亡以及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3、热休克蛋白(HSP)70表达的影响。方法:96只Wistar大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注模型组、黄芩苷组(50,100,200 mg·kg-1),以及尼莫地平(0．4 mg·kg-1)组。利用大鼠大脑中动脉内栓线阻断法制备局灶性脑缺血-再灌注损伤模型,通过HE染色、流式细胞术、免疫组化以及RT- PCR等方法,观察黄芩苷对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤后脑组织病理形态学改变、神经细胞凋亡率以及caspase-3、HSP70表达的影响。结果:黄芩苷可明显改善脑缺血-再灌注损伤所致的大鼠脑组织病理形态学改变,降低神经细胞凋亡率,抑制促凋亡基因caspase-3的表达,促进抑凋亡基因HSP70的表达。结论:黄芩苷对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤具有保护作用,其作用机制可能与黄芩苷抑制caspase-3表达,促进HSP70表达,从而发挥抗凋亡作用有关。     

七十味珍珠丸对大鼠脑缺血再灌注损伤的抗凋亡作用

目的观察七十味珍珠丸(RNSP)对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及抗凋亡机制。方法采用大脑中动脉阻塞模型,实验分组:假手术组、模型组、溶媒对照组和RNSP组。神经功能缺失评分观察大鼠神经缺失体征,红四氮唑染色测量脑组织梗死面积,及Western blot检测海马组织Bcl-2/Bax比值和caspase-3的蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠神经缺失体征明显,脑梗死面积明显增加,Bcl-2/Bax比值减小,caspase-3蛋白表达明显升高。而与模型组比较,RNSP组大鼠神经缺失体征明显改善,脑梗死面积减少,Bcl-2/Bax比值增大,caspase-3蛋白表达明显降低。结论 RNSP对大鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用,与其上调Bcl-2/Bax比值,减少caspase-3蛋白表达的抗凋亡作用有关。     

龙眼参多糖对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤细胞凋亡的影响

目的：研究龙眼参（LYS）多糖对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠细胞凋亡的影响。方法：180只Wistar♂性大鼠随机分为脑缺血再灌注组，LYS多糖高、中、低剂量组，阳性对照组，假手术组。给药组术前连续灌胃7d，于末次给药60min后行手术，采用大脑中动脉局灶性缺血再灌注模型，观察缺血2h再灌注24h后，LYS多糖对各组大鼠脑梗死体积、脑含水量及脑组织中Bcb2、Bax蛋白表达的影响，并在光镜下观察各组大鼠皮层区细胞损伤程度。结果：与脑缺血再灌注模型组相比，LYS多糖能够降低大鼠脑梗死体积和脑含水量，增加脑组织中Bcl-2蛋白表达，减少Bax蛋白表达（P〈0．01或P〈0．05），并减轻皮层神经细胞水肿。结论：龙眼参多糖对大鼠急性脑缺血再灌注损伤具有保护作用，其机制可能与其上调Bcl-2蛋白表达，下调Bax蛋白表达，通过调节凋亡相关基因表达抑制凋亡有关。     

葛根素衍生物对局灶性脑缺血再灌注的保护作用及对caspase-3表达的影响

目的:观察葛根素衍生物（G20）对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠是否具有保护作用,并探讨其作用机制,其保护作用是否与caspase-3的表达具有相关性。方法:以Longa发明的线栓法制作局灶性脑缺血再灌注模型,大鼠被随机分为6组,分别为假手术组、模型组、G(25.0 mg·kg^-1)组、G20(12.5、25.0、50.0 mg·kg^-1)组,给药组于缺血后1.5 h及6 h两次尾静脉给药。通过评价大鼠缺血后神经行为学、脑梗死面积及脑含水量的变化,HE染色观察脑组织神经元病理学改变,以观察G20是否具有脑缺血再灌注损伤保护作用;并以原位末端标记法检测大脑神经元凋亡数目的改变及免疫组化法检测其caspase-3的表达来探讨其作用机制。结果:G20能改善脑缺血后4 h、24 h的神经肌肉运动和前庭运动功能,减少脑缺血再灌注后脑梗死面积及降低脑含水量,减轻脑组织的病理形态学改变,与G组比较,未见大鼠尿液变红等不良反应。G20明显减少了脑组织凋亡细胞的数目,减少了caspase-3的表达。结论:G20对大鼠脑缺血再灌注损伤有保护作用,其机制可能是通过抑制caspase-3的表达发挥抗神经元凋亡作用。     

大鼠脑缺血/再灌注后神经元凋亡及caspase-12 mRNA和蛋白表达的改变

目的研究大鼠局灶性脑缺血/再灌注后caspase-12 mRNA及蛋白的表达,明确内质网信号通路在脑缺血后神经元凋亡调控中的作用。方法60只Wistar♂大鼠随机分为假手术组和缺血组。应用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血/再灌注模型,应用原位末端标记法(TUNEL)、免疫组化染色、RT-PCR技术检测脑缺血/再灌注后各组凋亡细胞数和caspase-12 mRNA及蛋白的表达。结果脑缺血/再灌注后,随着再灌注时间的延长,凋亡细胞数和caspase-12mRNA及蛋白的表达逐渐增高。在脑缺血/再灌注后24h达高峰。与假手术组相比,缺血组在各时间点凋亡细胞数、caspase-12 mRNA及蛋白表达均明显升高(P<0.01)。结论脑缺血/再灌注后神经元凋亡数明显增高,caspase-12 mRNA及蛋白的表达明显升高,提示内质网通路参与了脑缺血/再灌注后神经元凋亡的调控。     

黄芩苷对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠海马神经细胞凋亡的影响

目的探讨黄芩苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及其机制。方法Wistar大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注模型组、黄芩苷组(50,100和200 mg.kg-1),以及尼莫地平0.4 mg.kg-1组。利用大鼠大脑中动脉内栓线阻断法制备局灶性脑缺血再灌注损伤模型,通过HE染色、流式细胞术、免疫组化及RT-PCR等方法,观察黄芩苷对缺血再灌注大鼠脑组织形态学改变、神经细胞凋亡率及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)-3表达的影响。结果黄芩苷50,100和200 mg.kg-1iv均可明显改善缺血再灌注损伤所致的大鼠脑组织病理形态学改变,神经细胞凋亡率从模型组的(20.6±5.4)%分别降至(14.5±3.1)%,(11.12±4.2)%及(10.2±2.6)%,促凋亡基因caspase-3 mRNA表达比模型组分别降低23.2%,36.5%及41.0%,其蛋白表达比模型组分别降低25.6%,41.2%及49.3%。结论黄芩苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其作用机制可能与黄芩苷抑制caspase-3表达有关。     

血府逐瘀汤对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡及半胱氨酸蛋白酶表达的影响

目的观察血府逐瘀汤对大鼠脑缺血再灌注损伤早期神经细胞凋亡、Bcl-2、Bax蛋白及半胱氨酸蛋白酶(caspase-3)表达的影响。方法将40例健康SD大鼠随机分为中药组和对照组各20只。中药组将药物血府逐瘀汤按人与大鼠体表面积折算动物等效药量,按生药25g·kg-1·d-1灌胃。对照组同期给予等量的葡萄糖生理盐水灌胃,连续灌胃3d后采用线栓法制作大鼠大脑中动脉局灶性缺血再灌注损伤动物模型。40只大鼠建模成功后测量各组神经功能缺损评分,而后腹腔麻醉断头杀死大鼠,取侧脑室层面额叶皮层组织制备石蜡切片,TUNEL法检测脑皮层凋亡神经细胞,用氯化三苯四氮唑染色及免疫组化染色测量脑组织caspase-3阳性细胞数及Bcl-2、Bax蛋白表达。结果建模成功后,中药组神经功能缺损评分为(1.84±0.49)分低于对照组的(3.14±0.61)分,差异有统计学意义(P<0.05)。2组模型大鼠大脑皮层内均检测到凋亡细胞,其中中药组大鼠皮层内凋亡细胞指数明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。中药组Bcl-2蛋白阳性细胞指数明显高于对照组,Bax蛋白阳性细胞指数及脑组织中caspase-3阳性细胞数明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论血府逐瘀方能够降低脑缺血再灌注后大鼠神经功能缺损程度,其机制可能与抑制低缺血再灌注后脑组织中caspase-3及Bax蛋白的表达,上调Bcl-2蛋白表达有关。     

法舒地尔预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤细胞色素C和caspase-3表达的影响

目的研究法舒地尔对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤细胞色素C(CytC)和caspase-3蛋白表达的影响,探讨其脑保护机制。方法线栓法制作大鼠中动脉缺血再灌注损伤模型。成年雄性SD大鼠120只随机分成3组:假手术组(Sham组)、脑缺血再灌注模型组(Mod组)、法舒地尔干预组(Fas组),再分为再灌注3h、12h、24h和48h,以及TTC染色组5个亚组,每组8只大鼠。缺血再灌注后进行神经功能缺损评分(NDS),免疫组织化学方法检测脑组织中CytC蛋白、cas-pase-3的表达,TTC染色测量鼠脑梗死体积并计算百分比。结果①Sham组大鼠无神经功能缺损,NDS评分为0,TTC染色亦未见脑组织梗死;Mod组和Fas组大鼠均有明显的神经功能缺损,TTC染色亦可见明显的脑组织梗死;但与Mod组相比,Fas组神经功能缺损少、NDS评分低(P<0.01),脑梗死体积减小(P<0.05)。②与Sham组相比,脑缺血再灌注后,Mod组和Fas组大鼠脑组织CytC和caspase-3的表达显著升高(P<0.01),其中CytC表达高峰出现在12h,caspase-3表达高峰出现在24h;Fas组和Mod组间比较显示Fas组CytC和caspase-3的表达又显著低于Mod组(P<0.01)。结论①法舒地尔能减轻大鼠脑局灶性缺血再灌注引起的神经功能缺损,减小脑梗死体积。②部分抑制脑缺血再灌注引起的CytC和caspase-3表达增加可能是法舒地尔的脑保护机制之一。     

依托咪酯对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制

目的 探讨依托咪酯对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用及其机制.方法 将120只♂ SD大鼠随机均分为假手术组、模型组和依托咪酯高、低剂量组,ip给予各组大鼠相应药物后,采用线栓法制备大脑中动脉栓塞再灌注模型,评价依托咪酯对大鼠脑缺血再灌注的保护作用.参照Bederson评分标准评价大鼠的神经功能损伤,采用TTC染色法观察大鼠的脑梗死体积,采用免疫组化法分析大鼠海马CA1区NAIP、caspase-3及caspase-7蛋白的表达,采用HE染色法观察大鼠脑组织的病理变化.结果 与模型组比较,依托咪酯组大鼠的神经功能损伤和脑梗死容积明显减轻,大鼠海马CA1区NAIP蛋白的表达明显增强,caspase-3蛋白的表达明显减少;依托咪酯高、低剂量组间比较无明显差异;各组大鼠海马CA1区caspase-7蛋白的表达无显著差异.结论 依托咪酯对大鼠脑缺血再灌注造成的脑损伤具神经细胞保护作用,其机制可能与上调NAIP蛋白的表达、抑制caspase-3蛋白的活化有关.     

贝母甲素对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的研究贝母甲素对大鼠脑缺血再灌注损伤的作用及其机制。方法将SD大鼠随机分为5组:正常组,模型组,贝母甲素2.5、5、10 mg组,每组15只大鼠。采用大脑中动脉线栓法制局灶性脑缺血模型,贝母甲素给药组大鼠在手术前10 d每日分别灌胃贝母甲素2.5、5、10 mg·kg-1,在手术24 h后再连续3 d分别灌胃贝母甲素2.5、5、10 mg·kg-1。正常组和模型组在同一时间灌胃等量生理盐水。给药结束后进行神经功能评分,HE染色观察脑组织损伤,检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)的含量,免疫组化法检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达,ELISA法检测白细胞介素(IL)-6、IL-18和IL-1β的含量,Western blotting法检测caspase-9、caspase-3、bax、bcl-2、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、beclin1、p62、PI3K、Akt和mTOR蛋白的表达。结果正常组大鼠神经功能评分为0分,模型组神经功能评分为(2.8±0.4)分。与模型组相比,贝母甲素2.5、5、10 mg组大鼠的神经功能评分显著降低(P <0.05),脑组织形态得到改善;caspase-9、caspase-3、bax表达显著下调,bcl-2表达显著上调(P <0.05);MDA和LDH含量显著降低,SOD含量显著升高(P <0.05);ICAM-1阳性细胞比率显著降低,IL-6、IL-18和IL-1β的含量明显降低(P <0.05);p62、PI3K、Akt和mTOR表达明显下调,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和beclin1表达明显上调(P <0.05),且效果随着给药量的增加而呈增强趋势。结论贝母甲素对大鼠脑缺血再灌注损伤起保护作用,减轻病理损伤和神经功能障碍,这可能与其抑制细胞凋亡、氧化应激和炎症反应,调节PI3K/Akt/mTOR自噬通路有关。     

脑缺血再灌注损伤大鼠海马神经元凋亡及c—fos蛋白表达研究

目的：观察脑缺血再灌注损伤大鼠海马神经元凋亡及c-fos蛋白的表达。方法：采用大脑中动脉阻断法制备大鼠脑缺血再灌注模型,取海马组织,用免疫组织化学方法检测海马神经元c-fos蛋白表达及TUNEL法观察细胞凋亡情况。结果：脑缺血再灌注损伤大鼠与对照组比较海马区c-fos蛋白阳性细胞表达增强（P〈0．05）,凋亡细胞表达增多（P〈0．05）。结论：脑缺血再灌注损伤大鼠海马区c-fos蛋白阳性细胞表达增强,凋亡细胞表达增多。     

康脑液1号对大鼠脑缺血再灌注细胞凋亡及GFAP表达的影响

目的观察康脑液1号对SD大鼠脑缺血再灌注细胞凋亡及胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达的影响,探讨其对脑缺血再灌注保护作用的可能机制。方法采用栓线法复制SD大鼠大脑中动脉梗死模型（MCAO）,分别于缺血2h后再灌注1d、3d、7d。将180只大鼠随机分为5组（每组36只）：假手术组,模型（缺血再灌注）组,盐酸法舒地尔注射液组,康脑液1号A组,康脑液1号B组。观察康脑液1号对大鼠脑缺血再灌注神经功能、脑梗死面积和病理形态学的影响。采用TUNEL法检测缺血半暗带和灶中心区凋亡细胞,采用免疫组化法检测缺血半暗带和灶中心区GFAP表达的变化。结果模型组与假手术组相比,缺血半暗带凋亡细胞及GFAP阳性细胞数目增多（P〈0.05）。康脑液1号可不同程度地降低实验性脑缺血大鼠的神经功能评分、减小梗死灶面积并减轻脑组织病理形态改变（P〈0.05）;康脑液1号2组大鼠脑组织缺血半暗带凋亡细胞和GFAP表达减少,而梗死灶中心凋亡细胞和GFAP表达却增多。结论康脑液1号可能通过调节脑缺血再灌注细胞凋亡和GFAP表达而促进脑损伤修复及重塑,从而发挥脑保护作用。     

银杏叶提取物对急性脑梗死大鼠凋亡基因的影响

目的:探讨了银杏叶提取物对急性脑梗死大鼠凋亡基因的影响。方法:运用线栓法构建66只大鼠急性脑梗死模型,并随机分为假手术组、模型组和治疗组,每组22只,其中假手术组只分离血管不插线。治疗组大鼠给予尾静脉注射银杏叶提取物2.5 mg·kg^-1,假手术组和模型组均给予尾静脉注射等体积的PBS溶液。治疗72 h后处死大鼠,取脑组织,采用实时荧光定量PCR分析3组大鼠脑组织中Bcl-2、Bax和caspase-3 mRNA水平;采用免疫组化法测定脑组织凋亡基因相关蛋白Bcl-2、Bax和caspase-3的表达;采用TUNEL染色法分析脑细胞凋亡指数。并分析10 d内3组大鼠的生存曲线。结果:与假手术组比较,建模后模型组和治疗组大鼠脑组织中Bcl-2 mRNA Bax和caspase-3 mRNA和蛋白质水平显著升高(P<0.05)。经治疗后,治疗组大鼠脑组织中caspase-3和Bax mRNA和蛋白质水平较模型组明显下降(P<0.05),而Bcl-2 mRNA和蛋白质水平较模型组显著升高(P<0.05)。建模后,模型组和治疗组大鼠脑组织细胞凋亡指数较假手术组显著升高加(P<0.05),治疗组大鼠治疗后脑组织中细胞凋亡指数较模型组显著下调(P<0.05)。与假手术组比较,模型组和治疗组大鼠10 d内存活率明显下降,但治疗组存活率明显高于模型组(P<0.05)。结论:银杏叶提取物能够有效调节急性脑梗死大鼠凋亡基因及其相关蛋白的表达,从而降低脑组织细胞的凋亡,对脑组织具有一定的保护作用。     

双参通脉滴丸对缺血再灌注损伤性大鼠脑梗死面积及神经细胞凋亡的影响

目的:研究双参通脉滴丸对大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织梗死面积和神经细胞凋亡的影响及该影响是否存在剂量依赖性。方法:采用双侧颈总动脉阻断的方法建造大鼠脑缺血再灌注损伤模型。将大鼠随机分为假手术组、模型组、双参通脉滴丸(高、中、低剂量)组。采用TTC染色法测定脑组织梗死面积,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测脑组织凋亡神经细胞。结果:双参通脉滴丸(高、中、低剂量)组TTC染色法测定脑组织梗死面积与模型组比较差异显著,与假手术组无统计学意义;采用TUNEL法检测脑组织凋亡神经细胞数与模型组比较有差异,与假手术组相近。结论:双参通脉滴丸能减轻大鼠脑缺血再灌注损伤后脑组织梗死面积,抑制脑神经细胞的凋亡,并且其作用存在剂量依赖性。     

阿魏酸对蛛网膜下腔出血模型大鼠脑干组织和基底动脉细胞凋亡的影响

目的:探讨阿魏酸对蛛网膜下腔出血(SAH)大鼠脑干组织神经细胞和基底动脉细胞凋亡的影响。方法:将50只雄性SD大鼠随机分为假手术组、SAH模型组,阿魏酸低(20 mg·kg^-1)、中 (40 mg·kg^-1)和高(80 mg·kg^-1)剂量组,采用枕大池内新鲜自体动脉血二次注入法建立大鼠蛛网膜下腔出血模型,术后各治疗组灌胃给药7 d,假手术组和模型组均给予等体积生理盐水。分别采用TUNEL技术和免疫组化法观察脑干组织神经细胞凋亡和基底动脉细胞中caspase-3的表达。结果:与假手术对照组比较,SAH大鼠脑干组织中神经细胞凋亡阳性率明显升高(P<0.01),基底动脉血管内皮细胞和平滑肌细胞中caspase-3表达显著增加(P<0.01),而SAH大鼠灌胃服用阿魏酸7 d后,阿魏酸低、中和高剂量组(20,40,80 mg·kg^-1)大鼠脑干组织中神经细胞凋亡率均显著降低(P<0.05,P<0.01,P<0.01),动脉基底血管内皮细胞和平滑肌细胞中caspase-3阳性表达率明显降低。结论:阿魏酸通过抑制脑干组织和基底动脉细胞中凋亡相关基因的表达,从而达到对SAH大鼠脑功能的保护作用。