民族药铁包金基于FGF2/FGFR1通路改善抑郁样行为的作用机制研究※

目的 观察民族药铁包金对脂多糖（LPS）诱导的抑郁样行为的干预作用,并探讨其基于FGF2/FGFR1信号通路的分子作用机制。方法 将150只SPF级雄性小鼠随机分成3批,每批分成5组,即模型组、铁包金低剂组（2 g/kg）、铁包金中剂组（4 g/kg）、铁包金高剂组（8 g/kg）、氟西汀组（20 mg/kg）,各组给药1 h后分别进行强迫游泳实验（FST）、悬尾实验（TST）及开场实验（OFT）。另取60只SPF级雄性小鼠随机分成6组,即正常对照组、模型对照组、铁包金低剂组（2 g/kg）、铁包金中剂组（4 g/kg）、铁包金高剂组（8 g/kg）、氟西汀组（20 mg/kg）,各组持续给予相应药物7 d,最后一次给药后注射LPS,采用糖水偏好实验和FST评价动物抑郁样行为。采用Western Blot方法测小鼠海马组织中成纤维细胞生长因子2（FGF2）、磷酸化及总成纤维细胞生长因子受体1（FGFR1）的含量。结果 铁包金可以缩短小鼠强迫游泳和悬尾不动时间,对小鼠自发活性行为则没有影响,提示铁包金具有良好的抗抑郁效果。同时,铁包金能够显著增加LPS抑郁小鼠糖水偏好值,减少小鼠游泳不动时间;并可显著增加小鼠大脑海马FGF2表达量,提高FGFR1磷酸化水平。结论 铁包金具有抗抑郁作用,其作用机制与激活大脑海马FGF2/FGFR1信号通路相关。     

基于FGF/FGFRs 信号通路探讨中医药治疗器官纤维化研究进展

肺、肝、肾、心等多种实质器官可发生器官纤维化,会导致器官结构破坏、功能丧失,严重威胁患者健康。大量研究发现中医药可调控成纤维细胞生长因子（FGF） /成纤维细胞生长因子受体（FGFRs） 信号通路,减少组织损伤部位炎性细胞的浸润及成纤维细胞的分化来抑制肺、肝、肾、心肌纤维化。笔者系统总结了FGF/FGFRs 信号通路在器官纤维化中的作用及中医药治疗机制的研究进展,以期为器官纤维化的中医药治疗提供参考。     

大柴胡汤加减对胆囊胆固醇结石湿热证小鼠FXR/FGF15/FGFR4信号通路的影响

目的:基于法尼酯衍生物X受体(FXR)/成纤维细胞生长因子15(FGF15)/成纤维细胞生长因子受体4(FGFR4)通路观察大柴胡汤加减对胆囊胆固醇结石(CS)湿热证模型小鼠的影响,以从方证对应的角度,探讨CS湿热证的分子生物学机制.方法:将48只6周龄小鼠随机分为空白组、模型组、大柴胡汤加减组(23.4 g·kg-1...     

肾炎防衰液通过FGF21/SIRT1信号通路防治糖尿病肾病的机制研究

目的 观察肾炎防衰液对糖尿病肾病(DN)小鼠的干预作用,并基于成纤维细胞生长因子21(FGF21)/沉默信息调节蛋白1(SIRT1)信号通路探讨其防治DN的潜在分子机制。方法将40只雄性C57BL/6小鼠随机分为正常组、模型组、肾炎防衰液组及厄贝沙坦组,每组10只。除正常组外,其余组小鼠采用高脂饲料喂养联合小剂量多次腹腔注射链脲佐菌素(STZ)方法构建DN模型。造模成功后,肾炎防衰液组给予肾炎防衰液20.93 g/(kg·d)灌胃,厄贝沙坦组给予厄贝沙坦22.75 mg/(kg·d)灌胃,正常组和模型组给予等量的生理盐水灌胃,均每日1次,连续12周。灌胃期间观察各组小鼠的体重和血糖水平;灌胃结束后,检测各组小鼠肾功能指标[尿白蛋白肌酐比(UACR)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)]、肾重/体重比、脂代谢指标[血清总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平]、血清FGF21水平,HE、PAS、Masson染色观察肾脏病理形态,免疫组化染色观察肾脏组织中SIRT1蛋白表达情况,免疫荧光染色观察肾脏组织中LC3、p62蛋白表达情况。结果 灌胃前,各造模组小...     

艾灸通过成纤维细胞生长因子受体1和血管内皮细胞生长因子受体2抑制肉瘤微环境血管生成

目的:观察艾灸对肉瘤微环境中成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)和血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)的影响,探讨艾灸防治肉瘤的作用机制.方法:将接种S180肉瘤细胞形成移植瘤的C57BL/6J小鼠分为模型组、顺铂组和艾灸组,每组10只.艾灸组直接灸移植瘤,距离3 cm,10 min/次,每日1次,治疗14 d...     

芳樟精油通过调控Nrf2/HO-1通路和抑制炎症因子改善小鼠抑郁样行为的机制研究

为探讨芳樟精油的抗抑郁作用及其对炎症因子和核转录因子E2相关因子2 (Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)通路的调控机制,采用腹腔注射脂多糖(LPS)建立小鼠抑郁模型,利用旷场实验、高架十字迷宫实验和强迫游泳实验进行行为学测试;通过Western blot和qRT-PCR方法检测小鼠海马组织中Nrf2/HO-1通路蛋白及基因表达水平变化,用酶联免疫吸附检测(ELISA)法检测血清中炎症因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6和IL-1β的含量变化,并通过Tunel染色检测小鼠脑组织细胞凋亡情况的变化;结果表明,与空白对照组相比,模型组小鼠旷场中心区运动距离、旷场中心的停留时间和中心区域的进入次数显著减少,高架十字迷宫实验中小鼠进入开臂的时间百分比(OT%)和进入开臂的次数百分比(OE%)显著减少,强迫游泳实验小鼠不动时间显著延长;而相较模型组,给予芳樟精油治疗后,小鼠在旷场实验中心区域运动距离显著增加,在旷场中心区域的停留时间显著增加,旷场中心区域的进入次数显著增加,高架十字迷宫小鼠进入开臂的OT%和OE%显著增加,强迫游泳实验中小鼠不动时间显著减少;此外,模型组...     

益肺汤调控TGF-β1/Smad2通路抗肺纤维化机制研究

目的:研究益肺汤含药血清对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的肺成纤维细胞(NIH-3T3)的影响,探讨其抑制肺纤维化的作用机制。方法:采用SPF级C57小鼠灌胃益肺汤,1次/d,连续给药3 d制备含药血清。实验分为正常对照组、模型组、模型+正常血清组、模型+含药血清组,给药48 h后0.1%FBS的培养基饥饿处理24 h, 100 ng/μl的AngⅡ诱导造模24 h。免疫组化检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA);免疫荧光检测Smad2;Western blot检测Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、α-SMA、纤维连接蛋白(FN)、Smad2;ELISA检测细胞上清转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达情况。结果:Western blot和免疫荧光显示,造模后,α-SMA、FN、ColⅠ、Smad2的蛋白相对表达显著升高,差异具有统计学意义(均P<0.05)。益肺汤含药血清干预48 h后造模,α-SMA、FN、Smad2、ColⅠ的相对量较模型组下降(均P<0.05)。ELISA结果显示,造模后,TGF-β1的相对表达显著升高(P<0.05),益肺汤含药血清干预48 h后,TG...     

胃癌组织中Hpa、bFGF及FGFR-2表达水平的研究

目的探讨胃癌组织中Hpa、bFGF及FGFR-2表达水平与胃癌发生、发展的关系。方法对55例胃癌、癌旁组织及正常胃组织应用免疫组化方法检测Hpa、bFGF及FGFR-2的表达水平并进行分析。结果对照组的bFGF、FGFR-2表达低于其余2组(P均<0.05);Hpa在胃癌组表达显著高于其他2组(P<0.01);bFGF、FGFR-2及Hpa的表达与胃癌浸润深度、淋巴结转移、远处转移及TNM分期有关(P均<0.01)。结论bFGF、FGFR-2及Hpa可能在胃癌的浸润和转移中起重要作用,可作为胃癌生物学行为的重要指标。     

糖耐康对TGF-β1诱导的HK-2细胞Smads通路的影响

目的:探讨糖耐康(TNK)含药血清对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化Smad信号通路的影响。方法:将HK-2细胞用含10%胎牛血清的DMEM/F12(1∶1)培养基培养;实验分为6组:空白对照组、单纯TGF-β1诱导组(TGF-β110μg·L-1)、空白血清对照组(TGF-β110μg·L-1+10%空白血清)、TNK高浓度组(TGF-β110μg·L-1+20%糖耐康含药血清)、TNK中浓度组(TGF-β110μg·L-1+10%糖耐康含药血清)、TNK低浓度组(TGF-β110μg·L-1+5%糖耐康含药血清)。药物干预24 h后,荧光定量PCR检测TGF-β1及其Ⅰ,Ⅱ受体(TβRI,TβRⅡ)的mRNA表达,Western blot检测Smad 2、Smad 3的蛋白表达。结果:HK-2细胞经TGF-β1诱导后,TβRⅠ,TβRⅡ的mRNA表达和Smad 2,Smad 3的蛋白表达显著上升,与空白对照组相比有显著性差异(P<0.05),但经TNK含药血清干预后,其表达逐步下降,与单纯TGF-β1诱导组及TGF-β1+空白血清对照组相比有显著性差异(P<0.05)。而空白血清无此作用。结论:TNK能够调控TGF-β1诱导的人肾小管上皮细胞转分化Smad信号通路,在一定程度上具有抑制肾间质纤维化的作用。     

胰岛素样生长因子-1对rhBMP-2诱导下成纤维细胞增殖及成骨转化的影响

目的探讨胰岛素样生长因子-1(IGF-1)在重组人骨形态蛋白2(rhBMP-2)诱导成纤维细胞(Fb)转化为成骨细胞过程中是否具有促进作用。方法从成年新西兰大白兔背部皮肤中分离、纯化提取成纤维细胞,然后培养。将细胞分为空白对照组、rhBMP-2干预组和IGF-1+rhBMP-2干预组。空白对照组:常规培养液培养,不加入任何诱导剂及干预因子;rhBMP-2干预组:常规培养液中加入100μg/L的rhBMP-2;IGF-1+rhBMP-2干预组:常规培养液中加入100μg/L的rhBMP-2与终浓度为50μg/L的IGF-1。定期在倒置显微镜下观察Fb生长状况,并采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖情况,同时行碱性磷酸酶(ALP)活性检测、茜素红染色及钙钴染色评价其成骨分化的能力。结果与其他2组相比,IGF-1+rhBMP-2组细胞增殖速度快,周期短,MTT法检测示细胞生长旺盛,而空白对照组与rhBMP-2干预组之间无显著性差异。rhBMP-2干预组ALP表达高于空白对照组;而IGF-1+rhBMP-2组ALP表达明显高于其他2组。茜素红染色空白对照组未见明显钙化结节,rhBMP-2干预组细胞可见红色钙化结节,而IGF-1+rhBMP-2组钙化结节数目明显较rhBMP-2干预组多,面积增大。钙钴染色:rhBMP-2干预组和IGF-1+rhBMP-2干预组细胞胞浆中均可见浅棕色至棕黑色的细胞颗粒,但以IGF-1+rhBMP-2干预组棕黑色颗粒较多。空白对照组未见明显阳性细胞。结论 Fb在体外一定条件下经过诱导剂诱导后,可向成骨细胞方向转化。IGF-1可以促进Fb在rhBMP-2诱导下的增殖及成骨表型表达。     

香砂六君子汤调控RhoA/ROCK2/MYPT1信号通路改善功能性消化不良大鼠胃动力的机制

目的：基于RAS同源基因家族成员A(RhoA)/Rho关联卷曲螺旋蛋白激酶2(ROCK2)/肌球蛋白轻链磷酸酶靶向亚基1(MYPT1)信号通路探讨香砂六君子汤对功能性消化不良(FD)大鼠胃动力障碍的干预机制。方法：将60只SPF级雄性SD乳鼠随机分为正常组(n=10)和造模组(n=50),造模组大鼠采用综合造模法复制FD大鼠模型。模型复制成功后将造模组大鼠随机分为模型组、莫沙必利组和香砂六君子汤高、中、低剂量组,共5组,每组10只。正常组和模型组大鼠给予10 mL·kg^-1·d^-1生理盐水灌胃,莫沙必利组给予1.35 mg·kg^-1·d^-1莫沙必利灌胃,香砂六君子汤高、中、低剂量组分别给予12、6、3 g·kg^-1·d^-1香砂六君子汤汤剂灌胃,持续干预14 d。造模和给药前后观察大鼠一般生存状况,测定大鼠体质量、3 h平均进食量。给药干预结束后,测定大鼠肠推进率,采用苏木素-伊红(HE)染色观察胃组织病理改变,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定各组大...     

活血通络方调控PI3K/Akt信号通路改善大鼠糖尿病视网膜病变的作用机制研究

目的：探讨活血通络方调控磷酸肌醇3激酶/蛋白激酶B (PI3K/Akt)信号通路改善大鼠糖尿病视网膜病变的作用机制。方法：选取清洁级健康雄性SD大鼠72只,采用随机数字表法分为对照组、模型组及药物组,每组24只。建模成功后,药物组大鼠给予活血通络方10 mL/（kg·d）灌胃,对照组与模型组大鼠给予等剂量0.9%氯化钠注射液灌胃。3组均连续灌胃3个月。比较3组血糖、血脂、氧化应激指标、炎症因子水平及伊文思蓝渗透量;比较3组大鼠视网膜组织紧密连接蛋白-1 (ZO-1)、闭合蛋白（Occludin）、血管内皮钙黏蛋白（VE-Cadherin）、磷酸化磷酸肌醇3激酶（p-PI3K）、磷酸化蛋白激酶B (p-Akt)表达水平;观察大鼠视网膜组织病理学改变。结果：与对照组比较,模型组空腹血糖（FBG）、糖化血红蛋白（HbA1c）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白（LDL）、活性氧簇（ROS）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、白细胞介素-6 (IL-6)、白细胞介素-1β (IL-1β)、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)水平均升高（P<0.05）,高密度...     

裘氏内异方对子宫腺肌病模型小鼠MAPK/ERK1/2信号通路的影响及机制研究

目的：探讨裘氏内异方对子宫腺肌病模型小鼠丝裂原活化蛋白激酶/细胞外调节蛋白激酶1/2 (MAPK/ERK1/2)信号通路的影响及作用机制。方法：将60只8周龄未孕ICR雌性小鼠随机分为假手术组、模型组、阳性对照组(3.60 g/kg孕三烯酮)和中药低、中、高剂量组(1.80、3.60、7.20 g/kg裘氏内异方)各10只。采用子宫内膜组织形态学评分评估各组小鼠子宫内膜组织形态学病理改变;酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组小鼠子宫组织雌激素(E₂)、雌激素受体(ER)、细胞凋亡相关蛋白[半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、Bcl相关蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2 (bcl-2)]表达水平;Western Blot法检测各组小鼠子宫组织丝裂原激活化蛋白激酶(MEK-2)、细胞外调节蛋白激酶1/2 (ERK1/2)、核转录因子(NF-κB)、原癌基因(c-jun)、即早基因(c-fos)蛋白表达。结果：与假手术组比较,模型组小鼠子宫内膜组织形态评分升高(P<0.05);与模型组比较,中药低、中、高剂量组小鼠和阳性对照组小鼠的子宫内膜组织形态学评分均降低...     

基于PI3K-AKT-Nrf2/BDNF通路研究逍遥散抗抑郁作用的机制

目的:建立嗅球摘除(Olfactory Bulbectomy,OB)抑郁大鼠模型,从PI3K-AKT-Nrf2/BDNF角度探讨逍遥散抗抑郁作用机制。方法:手术摘除嗅球方法建立OB大鼠抑郁模型,将模型大鼠分为模型对照组、逍遥散15、30 g原生药/kg和盐酸氟西汀0.01 g/kg组,并设假手术组,各组大鼠连续灌胃相应药物或蒸馏水30天。进行大鼠旷场试验和糖水偏好率测定,腹主动脉取血分离血清,取大鼠皮质、海马部位备用。采用分光光度计法检测血清GSH、SOD及皮质MDA活力或含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测OB大鼠皮质和海马部位Nrf2、Keap1、GPX3、HO-1、NQO1、OGG1 mRNA的表达水平,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Nrf2、HO-1、SOD1、PI3K、AKT、p-AKT、TrkB、BDNF蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,模型对照组大鼠血清GSH、SOD水平显著降低,且皮质MDA含量明显升高;皮质、海马部位Nrf2、Keap1、GPX3、HO-1 mRNA表达水平及SOD-1、HO-1、TrkB、BDNF蛋白表达水平显著下调,皮质部位PI3K蛋白表达和p-AKT/AKT比值显著降低。与模型对照组比较,15、30 g/kg逍遥散给药30 d能提高大鼠糖水偏好率,对抗自主活动异常,显著提高血清GSH、SOD水平,并降低皮质MDA含量;能显著上调皮质、海马部位Nrf2、HO-1、皮质Keap1、NQO1及海马GPX3 mRNA的表达水平,显著上调皮质、海马部位SOD1、HO-1、TrkB、BDNF蛋白表达水平及p-AKT/AKT比值,对皮质、海马部位OGG1mRNA及皮质Nrf2、海马PI3K的蛋白表达水平有上调趋势。结论:逍遥散对OB模型大鼠的行为学异常及氧化应激表现有对抗作用,其激活OB大鼠PI3K-AKT-Nrf2信号通路从而改善氧化应激状态、上调BDNF水平可能是其抗抑郁作用机制之一。     

荆防散干预一氧化氮合酶-一氧化氮通路的抗炎机制实验研究

目的 观察荆防散干预炎症模型动物一氧化氮合酶-一氧化氮(NOS/NO)通路的抗炎机制,为其功效和临床应用提供药理学依据.方法 采用角叉菜胶诱导大鼠胸膜炎模型和卵白蛋白致小鼠哮喘模型,测定大鼠胸腔渗出液与小鼠肺组织匀浆中NOS,iNOS活力和NO含量的变化.结果 荆防散各剂量组能不同程度地降低小鼠肺组织匀浆与大鼠胸腔渗出液中NOS、iNOS活力,并减少NO含量,其中以5 g·kg-1剂量作用显著.结论 荆防散能通过抑制NOS活力,尤其是与炎症反应密切相关的iNOS活力,从而减少炎症介质NO的生成来发挥抗炎作用,提示干预NOS/NO通路是其抗炎作用机制之一.     

基于NLRP3/Caspase-1信号通路探讨黄连温胆汤改善HepG2细胞胰岛素抵抗的作用机制

目的 探究黄连温胆汤含药血清对胰岛素抵抗体外模型细胞焦亡的作用及机制。方法 设置黄连温胆汤含药血清组和空白血清组,将SD大鼠随机分为2组,按照体表面积换算分别予7.8 g·kg^-1·d^-1的黄连温胆汤药液和同体积的生理盐水灌胃,提取并配制空白血清及不同浓度的含药血清;采用棕榈酸钠处理HepG2细胞构建胰岛素抵抗模型,随机分为空白组、模型组、盐酸二甲双胍组、空白血清组、黄连温胆汤含药血清高剂量组、黄连温胆汤含药血清中剂量组、黄连温胆汤含药血清低剂量组,培养24 h后应用1×10^-7 mol·L^-1胰岛素处理各组细胞15 min,收集细胞上清,采用葡萄糖氧化酶（GOD-POD）法测定各组细胞葡萄糖的含量,并计算葡萄糖消耗量及抑制率,噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖情况,筛选黄连温胆汤含药血清最佳剂量。将HepG2细胞随机分为空白组、模型组、黄连温胆汤含药血清组,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组细胞白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-18（IL-18）的含量,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）、蛋白免疫印迹法（Western blot）检测各组NOD样受体蛋白3（NLRP3） mRNA和蛋白的表达情况。机制部分将HepG2细胞随机分为空白组、空载体组、NLRP3过表达组、空载体+IR组、空载体+IR+黄连温胆汤含药血清组、NLRP3过表达+IR组、NLRP3过表达+IR+黄连温胆汤含药血清组,GOD-POD法测定各组细胞葡萄糖的含量,并计算葡萄糖消耗量。ELISA检测各组细胞IL-1β、IL-18释放水平;Real-time PCR、Western blot技术检测各组细胞胱天蛋白酶-1（Caspase-1）、消皮素D（GSDMD）及NLRP3 mRNA及蛋白的表达;免疫荧光技术检测NLRP3、GSDMD和Caspase-1的表达。结果 与空白组比较,模型组葡萄糖消耗量显著下降（P<0.01）;与模型组比较,黄连温胆汤含药血清高剂量组葡萄糖消耗量升高最为显著（P<0.01）。与空白组比较,IR-HepG2细胞IL-1β、IL-18释放水平和NLRP3 mRNA与蛋白表达明显升高（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,黄连温胆汤含药血清可明显降低IR-HepG2细胞上清IL-1β、IL-18、NLRP3 mRNA与蛋白的表达（P<0.05,P<0.01）。与空白组、空载体组比较,NLRP3过表达可显著降低细胞葡萄糖消耗量（P<0.01）;与空载体+IR组比较,NLRP3过表达可明显上调IL-1β、IL-18水平和NLRP3、Caspase-1、GSDMD的mRNA及蛋白水平（P<0.05,P<0.01）;与NLRP3+IR组比较,黄连温胆汤含药血清可明显逆转上述指标（P<0.05,P<0.01）。结论 高脂诱导IR-HepG2细胞的胰岛素敏感性与炎症及NLRP3表达密切相关。黄连温胆汤含药血清通过靶向抑制NLRP3/Caspase-1信号通路改善IR-HepG2细胞焦亡,为胰岛素抵抗及2型糖尿病的预防与治疗提供新靶点。     

胰高血糖素样肽-1在中医振腹疗法治疗2型糖尿病中的机制探讨

目的:探究中医振腹疗法在治疗2型糖尿病(Type 2 Diabetes Mellitus,T2DM)中对胰高血糖素样肽-1(Glucagon-Like Peptide-1,GLP-1)及大鼠糖代谢的影响及机制。方法:采用长期高糖高脂饲料饲养加小剂量链脲佐菌素(STZ,30 mg·kg-1,腹腔注射)诱导2型糖尿病大鼠模型,动物随机分为空白对照组、模型组、西药组、振腹组、西药加振腹组。结果:与模型组比较,振腹组体重变化量明显减小(P0.05),西药加振腹组体重变化量与西药组比较明显减小(P0.05)。治疗后振腹组大鼠血糖值较模型组显著降低(P0.05)。振腹组和西药加振腹组GLP-1含量较模型组显著升高(P0.05),西药加振腹组GLP-1含量较西药组升高(P0.05)。各组病理结果显示:西药加振腹组的大鼠胰腺破坏的程度最低,其次是振腹组、西药组、模型组。结论:振腹疗法可以降低血糖,改善糖尿病症状,减轻或减缓胰岛细胞破坏,其降糖作用可能与GLP-1途径有关。