阿托伐他汀对高胆固醇血症大鼠侧支血管中LOX-1和eNOS表达的影响

目的探讨阿托伐他汀对高胆固醇血症大鼠侧支血管中LOX-1 和eNOS表达的影响。方法将雄性SD大鼠随机分为4组,即股动脉结扎组（L组）、高胆固醇血症+股动脉结扎组（HL组）、高胆固醇血症+阿托伐他汀+股动脉结扎组（AL组）、高胆固醇血症+生理盐水+股动脉结扎组（NL组）。HL组、AL组和NL组大鼠均喂食可致动脉粥样硬化饲料8周。AL组股动脉结扎后10 mg/kg 阿托伐他汀腹腔注射2 周。采用免疫荧光法观察后肢侧支血管LOX-1 和eNOS的表达。体外实验中,转染LOX-1-siRNA的内皮细胞经oxLDL和阿托伐他汀单独或共同处理后,RT-PCR和Western blotting检测LOX-1和eNOS的表达,Griess法检测NO的产生。结果LOX-1表达于大鼠正常侧支血管中,在高胆固醇血症大鼠中其表达则明显升高,在阿托伐他汀治疗后明显降低。eNOS在正常生长的侧支血管中呈强阳性表达,在高胆固醇血症血管中表达下调,经阿托伐他汀治疗后其表达上调。体外实验中,oxLDL处理使内皮细胞LOX-1 表达升高,eNOS表达降低,而阿托伐他汀处理后细胞中LOX-1 表达下调,eNOS表达上调。此外,在细胞中使用LOX-1 siRNA 干预可消除oxLDL刺激对eNOS表达的影响。结论高胆固醇血症或oxLDL可能通过LOX-1/eNOS通路诱导内皮功能障碍,阿托伐他汀可以改善这一状态,表明阿托伐他汀可作为缺血性疾病诱导侧支血管损害的潜在治疗药物。     

鼻粘膜中一氧化氮合酶表达及其意义

目的了解正常鼻粘膜中一氧化氮合酶(NOS)的分布特点及活性并分析其在鼻腔中的生理作用。方法用免疫组化法对eNOS、iNOS在20例正常鼻粘膜中表达情况进行对比研究,并用分光光度计法检测NOS活性。结果正常鼻粘膜组中eNOS有表达并分布在粘膜上皮、腺体和血管内皮细胞中,iNOS偶见细胞表达,二者之间差异有显著性(P<0.01)。NOS活性1.526±0.310U/mgPro。结论鼻粘膜中主要表达eNOS,分布在粘膜上皮、腺体和血管内皮细胞中,由其产生的一氧化氮(NO)在鼻腔的正常生理功能中可能起着重要的作用。     

一氧化氮合酶在喉鳞癌的表达及其与血管形成的关系

目的 :研究诱导型、内皮型一氧化氮合酶 (iNOS、eNOS)在喉鳞癌中的表达及其与肿瘤血管形成的关系。方法 :应用免疫组化方法检测 4 5例喉鳞癌患者手术切除石蜡包埋标本的iNOS、eNOS、血管内皮生长因子 (VEGF)的表达 ,应用Ⅷ因子相关抗原 (F8)显示血管内皮细胞。根据F8阳性的血管内皮细胞计数来测定肿瘤微血管密度 (MVD)。以 11例喉乳头状瘤、5例正常喉黏膜作为对照。结果 :①iNOS和eNOS在喉鳞癌中的阳性表达率分别为 5 7. 8%、6 6 . 7% ,而喉乳头状瘤呈低表达 ,正常喉黏膜无表达 ;②两型NOS的表达强度与喉鳞癌病理分级有显著相关性 (P <0 . 0 1) ,即iNOS和eNOS的表达随着喉鳞癌恶性程度的加深而增强 ;③在eNOS不同表达强度之间MVD的差异有极显著性 (P <0. 0 1)即随eNOS表达强度增加MVD值也增加 ,而在iNOS不同表达强度之间MVD没有显著差异 (P >0. 0 5 ) ;④VEGF在喉鳞癌中的阳性表达率为 4 8. 9% ,显著高于喉良性肿瘤 ,正常喉黏膜不表达 ;eNOS表达与VEGF表达之间有极显著相关性 (P <0 . 0 1) ,iNOS表达与VEGF表达之间无相关性 (P >0 . 0 5 )。结论 :NO在喉鳞癌的生长分化和血管生成中起到促进作用 ,eNOS的催化作用在肿瘤血管形成过程中占优势。     

高游离脂肪酸致内皮细胞eNOS活性降低与PKC通路的关系

目的 研究游离脂肪酸(FFA)水平升高导致的内皮一氧化氮合酶(eNOS)活性降低是否与蛋白激酶C(PKC)通路激活有关.方法 传代培养的人脐静脉内皮细胞分为4组:对照组,油酸组(10、50、100、150、200 μmol/L),PKC抑制剂(GFX)组,油酸+GFX组.分别检测各组eNOS活性,检测对照组和油酸组PKC的表达和活性,以及各组eNOS磷酸化(p-eNOS)的表达.结果 与对照组相比,油酸组eNOS活性呈剂量依赖性降低,p-eNOS(1177)的表达降低(0.0854±0.017 vs. 0.0134±0.023, P<0.05);PKC的表达出现转位,由胞浆转向胞膜,胞浆表达活性降低,胞膜表达活性增高,总活性增加.加入GFX后对正常内皮细胞eNOS活性无明显影响,但能部分改善油酸所致的内皮细胞eNOS活性的降低.结论 油酸可损害内皮细胞eNOS的表达及磷酸化,其机理与PKC通路的激活有关.     

人静脉移植物eNOS和P-eNOS的表达

目的检测人静脉移植物中eNOS的表达及其活性。方法应用免疫荧光组织化学技术对30个静脉移植物再狭窄标本中eNOS的表达进行了检测，用抗磷酸化的eNOS抗体（P—eNOS）检测eNOS的活性。用激光共聚焦显微镜拍片，图片用Silicon Graphics Octane进行处理。结果在正常静脉血管中，eNOS在内皮细胞不表达；在病变静脉血管，在内膜增生早期，eNOS在管腔面内皮细胞的表达明显上调，在外膜小血管的表达也增加，随着内膜增生的不断发展，eNOS在管腔面内皮细胞的表达明显下降，外膜小血管逐渐从外膜向中膜延伸。免疫双重染色证实eNOS和p-eNOS的表达共同定位于内皮细胞。结论eNOS在静脉移植物中的表达模式提示其可能参与了中膜毛细血管的生成以及新内膜的形成．     

慢性鼻炎鼻黏膜中一氧化氮合酶的表达

目的 :比较正常鼻黏膜和慢性鼻炎鼻黏膜中一氧化氮合酶 (NOS)的分布 ,探讨NOS与慢性鼻炎的关系。方法 :应用还原型尼克酰胺嘌呤二核苷酸磷酸 -黄递酶 (NADPH -d)组织化学染色与免疫组织化学技术 ,测定内皮型NOS(eNOS)和诱导型NOS (iNOS)在正常组和慢性鼻炎组鼻黏膜中的分布和表达。结果 :eNOS免疫组化显示正常鼻黏膜和慢性鼻炎鼻黏膜NOS均呈阳性反应 ,主要分布于表层上皮细胞 ,血管内皮细胞胞浆 ;iNOS免疫组化则显示慢性鼻炎表层上皮细胞 ,血管内皮细胞胞浆NOS阳性 ,部分炎性细胞亦呈阳性反应 ;而正常鼻黏膜NOS呈阴性。酶组织化学染色显示 ,NOS有同样的分布部位。结论 :正常鼻黏膜存在NOS分布 ,慢性鼻炎鼻黏膜中iNOS活性明显高于正常 ,由iNOS产生的NO和慢性鼻炎的鼻分泌物增多和黏膜水肿有关     

miRNA-31在高糖诱导内皮细胞功能障碍中的作用

目的 探讨miRNA-31在高糖诱导的内皮细胞功能障碍中的作用机制.方法 体外培养人冠状动脉内皮细胞系,不同浓度高糖刺激24h后检测细胞内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达及培养上清液NO含量;Real-time PCR检测高糖刺激后miRNA-31表达变化;microRNA在线分析软件预测并应用双荧光素酶报告基因系统和Western blot验证eNOS是否为miRNA-31的直接靶基因;通过转染miRNA-31 antagomir观察miR-NA-31对内皮细胞功能障碍的影响.结果 不同浓度的高糖刺激内皮细胞24h后,eNOS蛋白表达和培养液NO含量呈剂量依赖性下降.高糖刺激内皮细胞miRNA-31表达明显增加.microRNA在线分析软件及双荧光素酶报告基因实验提示eNOS的翻译水平受miRNA-31直接调控.转染miRNA-31 antagomir明显上调高糖刺激后内皮细胞eNOS蛋白和培养液NO含量.结论 miRNA-31上调进而抑制eNOS表达可能是高糖诱导内皮细胞功能障碍的作用机制之一.     

一氧化氮合酶在小鼠耳蜗的表达

目的：本实验用亲合免疫组织化学技术,研究了小鼠耳蜗内nNOS与eNOS的表达。方法：4％多聚甲醛心脏灌注固定后,取耳蜗、经脱钙,作10μm厚冰冻切片,进行nNOS和eNOS免疫组织化学染色,结果：小鼠耳蜗内、外毛细胸、内外柱细胞、螺旋神经节细胞nNOS、eNOS的表达呈强阳性。血管纹的基底和中间细胞、螺旋突起、螺旋韧带细胞处有阳性nNOS、eNOS的表达,耳蜗小球的内皮细胞无nNOS与的表达,但eNOS的表达呈阳性。结论：由nNOS和eNOS合成的NO在维持耳蜗正常神经传导及耳蜗正常血液供应中起着重要作用。     

糖基化终产物对人脐静脉内皮细胞eNOS活性和表达的影响

目的　研究糖基化终产物 (AGEs)对内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)的活性及蛋白表达的影响。方法　用糖孵育法制备糖基化修饰的牛血清白蛋白 (AGE BSA) ,用胶原酶法分离培养人脐静脉内皮细胞 (HUVECs)。将内皮细胞与不同浓度的AGE BSA在体外分别培养 3 ,6,12 ,2 4,48h ,用同位素二步色谱法检测基础状态下与组胺刺激后的eNOS活性 ,用蛋白免疫印迹法 (Western blotting)检测eNOS蛋白表达水平。结果　基础状态下 ,HUVECs的eNOS有部分激活 ,组胺刺激后eNOS活性明显增加 (P <0 .0 0 1)。AGE BSA明显抑制基础状态下的eNOS活性和组胺刺激后的eNOS活性增高(P <0 .0 0 1) ,这种抑制作用呈时间、浓度依赖性。AGE BSA与HUVECs共同孵育 2 4h后的eNOS表达水平明显降低 (P <0 .0 0 1) ,且随着孵育时间的延长 ,eNOS表达水平进一步降低 (P <0 .0 5 ,48hvs 2 4h) ,这种抑制作用与AGE BSA的浓度有关。结论　AGE BSA明显抑制eNOS基础状态和组胺刺激后的活性增高 ,AGE BSA明显抑制HUVECs的eNOS表达 ,AGE BSA对eNOS活性的抑制作用可能与降低eNOS表达有关。     

切应力对内皮细胞一氧化氮合酶及细胞凋亡的影响

目的探讨切应力作用对体外培养的牛胸主动脉内皮细胞一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达和细胞凋亡的影响。方法体外培养牛胸主动脉内皮细胞，采用平行平板流动腔装置模拟体内血流切应力(5dynes／cm^2和25dynes/cm^2)作用于内皮细胞12h，采用Western blot分析和DNA片段凝胶电泳，观察不同切应力对体外培养的血管内皮细胞eNOS蛋白表达和细胞凋亡的影响。结果静息状态下，体外培养的牛胸主动脉内皮细胞呈多角形“铺路石”状排列，形态大小均匀。不同切应力(5，25dyne／cm^2)作用12h后，血管内皮细胞形态学未见明显改变。但与静止状态细胞的基础水平相比，Western blot分析发现，牛胸主动脉血管内皮细胞eNOS蛋白表达在低切应力时降低；低切应力还可诱导血管内皮细胞发生凋亡，凝胶电泳检测出现明显的DNA梯形带；但在高切应力(25dynes／cm^2)作用下，内皮细胞eNOS表达水平与未处理组接近，而且DNA片段凝胶电泳也未见明显凋亡现象。结论低切应力可降低内皮细胞eNOS蛋白表达和诱导内皮细胞凋亡，提示低切应力可能是导致血管内皮细胞eNOS表达降低和细胞凋亡的重要因素。     

细胞外基质降解在猪后肢侧支血管生长过程中的作用

目的探讨细胞外基质降解在猪后肢侧支血管生长过程中的作用。方法成年家猪6只，单侧股动脉结扎，诱导侧支血管生长，用共聚焦免疫荧光术研究基质金属蛋白质酶-2（MMP-2）和组织Ⅰ型基质金属蛋白质抑物（TIMP-1）在侧支血管的表达。同时用Van Gieson弹性染色观察了血管组织中弹性成分的变化。结果在正常血管，血管的管腔侧可以观察到一层完整的内弹性膜，而在生长的侧支血管，内弹性膜发生降解，片断化，可观察到有新内膜形成；在正常血管MMP-2表达水平很低，而在生长血管MMP-2高水平表达，尤其在新内膜区域，是正常血管的9倍。TIMP-1的表达在内膜为低水平，但在中膜是高水平的表达。结论该研究首次报道猪后肢侧支血管生长过程中细胞外基质的降解十分活跃，对侧支血管的生长具有重要的作用。     

低氧对肺动脉内皮细胞一氧化氮合酶及细胞间黏附因子-1表达的影响

目的通过检测低氧状态血管内皮细胞一氧化氮合酶（eNOs）及细胞间黏附因子（ICAM1）表达的变化．探讨低氧对血管内皮细胞功能的影响。方法采用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）及Western blot测定低氧条件下不同时间点大鼠动脉内皮细胞中eNOS、ICAM-1 mRNA及蛋白质的表达变化情况。结果同常氧组相比，低氧1h时eNOS、IcAM-1 mRNA及蛋白表达无变化．而6、12、24h时eNOS、ICAM-1mRNA及蛋白表达明显升高（P〈0.05），但eNOS mRNA与ICAM-1mRNA的表达变化在同一时间点并不一致。结论低氧状态下血管内皮细胞eNOS与ICAM-1表达升高，可能参与了低氧性肺血管疾病的发病机制。     

Vascular endothelial growth factor up-regulates the expression of intracellular adhesion molecule-1 in retinal endothelial cells via reactive oxygen species, but not nitric oxide

Background The vascular endothelial growth factor （VEGF） is involved in the initiation of retinal vascular leakage and nonperfusion in diabetes. The intracellular adhesion molecule-1 （ICAM-1） is the key mediator of the effect of VEGFs on retinal leukostasis. Although the VEGF is expressed in an early-stage diabetic retina, whether it directly up-regulates ICAM-1 in retinal endothelial cells （ECs） is unknown. In this study, we provided a new mechanism to explain that VEGF does up-regulate the expression of ICAM-1 in retinal ECs. Methods Bovine retinal ECs （BRECs） were isolated and cultured. Immunohistochemical staining was performed to identify BRECs. The cultured cells were divided into corresponding groups. Then, VEGF （100 ng/ml） and other inhibitors were used to treat the cells. Cell lysate and the cultured supernatant were collected, and then, the protein level of ICAM-1 and phosphorylation of the endothelial nitric oxide synthase （eNOS） were detected using Western blotting. Griess reaction was used to detect nitric oxide （NO）. Results Western blotting showed that the VEGF up-regulated the expression of ICAM-1 protein and increased phosphorylation of the eNOS in retinal ECs. Neither the block of NO nor protein kinase C （PKC） altered the expression of ICAM-1 or the phosphorylation of eNOS. The result of the Western blotting also showed that inhibition of phosphatidylinositol 3-kinase （PI3K） or reactive oxygen species （ROS） significantly reduced the expression of ICAM-1. Inhibition of PI3K also reduced phosphorylation of eNOS. Griess reaction showed that VEGF significantly increased during NO production. When eNOS was blocked by L-NAME or PI3K was blocked by LY294002, the basal level of NO production and the increment of NO caused by VEGF could be significantly decreased. Conclusion ROS-NO coupling in the retinal endothelium may be a new mechanism that could help to explain why VEGF induces ICAM-1 expression and the resulting leukostasis in diabetic retinopathy.     

长链非编码RNA Beta2.7通过上调eNOS/NO通路影响内皮细胞功能

 目的 探索在内皮细胞中调控内皮型-氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase，eNOS）表达及其磷酸化的长链非编码RNA （long non-coding RNA，LncRNA）分子及其对内皮细胞功能的影响。方法 培养原代小鼠主动脉内皮细胞，构建LncRNA-Beta2.7过表达质粒、LincRNA-p21干扰质粒、LncRNA-ANRIL干扰质粒、LncRNA-H19过表达质粒，通过慢病毒载体实现稳定转染。稳定转染后，收集内皮细胞及其培养基上清，PCR检测eNOS mRNA表达水平，Western blot检测eNOS、p-eNOS表达水平，还原比色法检测细胞内及培养基上清的NO含量；稳定转染的内皮细胞通过划痕实验和小管形成实验验证LncRNA对内皮细胞功能的影响。结果 过表达LncRNA-Beta2.7上调内皮细胞eNOS mRNA与蛋白的表达水平，且p-eNOS/eNOS比值保持不变；过表达LncRNA-Beta2.7后，内皮细胞NO分泌增多，其划痕愈合速率以及在形成血管过程中的分支数和小管总长度均显著升高。而其余3种LncRNA的作用并不显著。结论 LncRNA-Beta2.7在内皮细胞中通过上调eNOS的表达激活eNOS/NO信号通路，增强血管内皮功能。     

HGF对人股动脉内皮细胞中Notch1和Dll4基因转录的调节作用

目的：探讨肝细胞生长因子（HGF）对人股动脉内皮细胞（HFAECs）中Notch1和DIN基因转录的调节作用,为进一步探讨携带HGF基因的重组腺病毒（Ad—HGF）促动脉血管形成机制奠定基础．方法：用不同感染强度（MOI）的携带绿色荧光蛋白基因的重组腺病毒（Ad—GFP）感染HFAECs后,通过流式细胞仪和MTT法选择最佳MOI,再将Ad—HGF以最佳的MOI感染HFAECs,48h后收集细胞上清,用ELISA法检测HGF的表达水平,同时提取总RNA,通过反转录-PCR（RTPCR）来检测Notch1和Dll4基因的转录水平．以上均以感染Ad—GFP的细胞作为对照．结果：与对照组比较,Ad—HGF感染细胞后,上清中明显有HGF表达,并且观察到Notch1和Dll4基因转录水平均上调．结论：Ad—HGF促动脉形成机制可能与Notch信号通路有一定的关联性．     

一氧化氮合酶在人子宫内膜和蜕膜的表达

为探讨一氧化氮(NO)在子宫内膜功能性活动中所发挥的作用,应用免疫组织化学技术检测人增生期、分泌期子宫内膜及早孕期蜕膜内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达模式.结果发现①增生期仅内膜血管内皮细胞表达eNOS,iNOS不表达于内膜的任何组份;②分泌期两种NOS都表达于子宫内膜的腺上皮和腔上皮.子宫内膜间质细胞未检测到NOS.③蜕膜组织蜕膜组织腺上皮和腔上皮eNOS和iNOS的表达明显增强,并且蜕膜间质细胞表达iNOS.分泌期子宫内膜和蜕膜组织表达eNOS和iNOS增加,表明此时NO的产量增多,而NO又可能通过其扩张血管、松弛平滑肌和促凋亡的作用参与胚胎着床的发生和月经的形成.     

糖化LDL对人脐静脉血管内皮细胞SOD活性及基因表达的影响

目的 观察糖化低密度脂蛋白(gly-LDL)对人血管内皮细胞生长及抗氧化相关因子的影响,探讨糖尿病患者血管内皮损伤与gly-LDL的相关性及可能机制。方法 用完全培养基及不同浓度(G1组 0.06mg/L, G2组0.12mg/L, G3组0.24mg/L)的gly-LDL处理人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)24h、48h及72h,设对照组(Ctr),取细胞培养上清液检测SOD和MDA水平,同时用细胞划痕实验观察gly-LDL对内皮细胞迁移功能的影响,用实时半定量PCR(realtime quantitative PCR,RT-qPCR)方法测定Mn-SOD和eNOS的mRNA的表达情况。结果 与对照组相比不同浓度的gly-LDL均可抑制血管内皮细胞的迁移功能。较低或较高浓度的gly-LDL作用于人脐静脉内皮细胞时,随时间的增加SOD的活性及MDA的含量是升高的;中间浓度的gly-LDL作用于人脐静脉内皮细胞时,随时间的增加SOD活性是逐渐下降的,MDA含量是先增高后降低的。各组Mn-SOD的mRNA表达水平48h和72h均下调,eNOS的表达水平于24h和48h均下调,72h时上调。结论 Gly-LDL与糖尿病患者血管并发症可能存在一定的相关性,但不能肯定其是恶化因素之一。