Genistein对人乳腺癌细胞体外侵袭能力的抑制作用

目的:研究金雀异黄素(genistein)对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231体外侵袭能力的影响并探讨其机制.方法:采用细胞体外侵袭实验系统,观察genistein对乳腺癌细胞体外侵袭能力的影响;应用Western Blot检测药物作用后MMP-2,MMP-9蛋白表达的变化,采用明胶酶谱分析法对药物作用前后乳腺癌细胞分泌的MMP-2,MMP-9活性进行分析.结果:在药物作用24,48,72 h后,15 pmol/L组和30μmol/L组侵袭至Matrilgel滤膜下的细胞数分别为(245±12)个,(300±20)个,(378±18)个和(155±20)个,(204±30)个,(256±34)个,较空白对照组显著减少(P＜0.05).WestemBlot结果显示,在药物作用48 h后,0,15,30 μmol/L组的MMP-2蛋白相对值分别为0.71±0.07,0.32±0.06和0.12±0.03;MMP-9的相对值分别为0.92±0.06,0.63±0.04和0.24±0.02.明胶酶谱分析结果显示,15,30 panol/L组基质金属蛋白酶活性显著降低(P＜0.05).结论:genistein有效抑制乳腺癌侵袭和转移,其作用机制可能与降低乳腺癌细胞运动能力,抑制MMP-2,MMP-9表达水平与活性有关.     

Apigenin对人乳腺癌细胞体外侵袭及诱导血管生成能力的影响

目的证实Apigenin可抑制乳腺癌细胞侵袭能力及诱导血管生成的能力,从而达到抑制乳腺癌的作用。方法建立肿瘤细胞体外侵袭模型和体外血管形成模型,观察乳腺癌细胞株ZR-75-30在Apigenin作用下其侵袭能力和诱导血管生成能力的改变;免疫细胞化学染色和RT-PCR检测Apigenin对ZR-75-30细胞MMP-9基因蛋白表达的影响。结果在Apigenin作用下,ZR-75-30细胞的侵袭能力和诱导血管生成的能力明显受到抑制,MMP-9基因和蛋白的表达下降。结论Apigenin可能通过抑制MMP-9表达,进而抑制ZR-75-30细胞侵袭和诱导血管生成能力,达到抗乳腺癌的作用。     

Calphostin C对乳腺癌细胞侵袭能力的影响

目的探讨Calphostin C对高转移乳腺癌MDA-MB-435S细胞侵袭能力的抑制作用。方法高转移乳腺癌MDA-MB-435S细胞系购于中国医学科学院上海细胞库,通过划痕实验、Transwell迁移实验、Transwell侵袭实验及细胞黏附实验观察Calphostin C对MDA-MB-435S细胞侵袭能力的影响。结果划痕实验结果显示,与对照组比较,实验组MDA-MB-435S细胞伤口愈合显著减慢,对照组细胞伤口24 h基本愈合,而实验组细胞伤口24 h仍未愈合。Transwell迁移和侵袭实验结果显示,实验组MDA-MB-435S细胞迁移、侵袭并穿过Transwell小室底膜的细胞数显著少于对照组(P<0.05)。细胞黏附实验结果显示,与对照组比较,实验组MDA-MB-435S细胞与纤维连接蛋白的黏附性显著降低(P<0.05)。结论 Calphostin C可显著抑制高转移乳腺癌MDA-MB-435S细胞的侵袭能力。     

槲皮素对人肝癌高转移细胞生长及侵袭能力的影响

目的 探讨槲皮素对肝癌高转移细胞增殖和侵袭能力的影响.方法 以人高转移肝细胞癌细胞系HCCLM6为研究对象,倒置显微镜观察槲皮素对肝癌细胞HCCLM6细胞形态的影响,MTT法检测槲皮素对细胞增殖的影响,Transwell小室侵袭实验检测槲皮素对肝癌细胞侵袭能力的影响.结果 倒置显微镜下槲皮素组细胞密度降低,悬浮细胞增多;槲皮素组较对照组HCCLM6细胞存活率减低;槲皮素能抑制肝癌细胞在Transwell小室中的侵袭作用.结论 槲皮素能抑制肝癌高转移细胞HCCLM6的增殖和侵袭能力.     

miR-149对人乳腺癌MCF-7细胞迁移和侵袭能力的影响

目的探讨miR-149对乳腺癌细胞侵袭和转移能力的影响及其可能作用机制。方法应用miRanda,Tar Base v.5c靶基因预测网站分析miR-149与FOXM1 miRNA的可能结合位点,分别将miR-149模拟物(mimics),拮抗物(inhibitors)和无关序列转染到MCF-7细胞株,以空白转染组为阴性对照,用Western blot的方法比较各组细胞FOXM1蛋白的表达,用Transwell侵袭小室检测各组细胞侵袭能力的变化。结果Western blot结果显示,miR-149 mimics转染组的MCF-7细胞中FOXM1蛋白表达较其余各组显著降低(均P<0.05),Transwell侵袭小室检测结果表明,miR-149 mimics转染组的细胞侵袭细胞数明显多于其余各组(均P<0.05)。结论 miR-149能促进乳腺癌细胞侵袭和转移,其机制可能与抑制FOXM1的表达有关。     

氨氯地平对人乳腺癌细胞株MDA-MB-231侵袭影响的体外实验

目的 探讨氨氯地平对人乳腺癌高转移细胞株MDA-MB-231体外侵袭的影响及其相关机制.方法 用8.34 μmol/L氨氯地平处理肿瘤细胞,以人工重组基底膜侵袭小室(Transwell)观察氨氯地平对MDA-MB-231细胞侵袭的影响;免疫细胞化学方法检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和基质金属蛋白酶-9(matrix met-allo-proteinaae,MMP-9)的表达.结果 8.34 μmol/L的氨氯地平可显著抑制MDA-MB-231细胞的侵袭能力,侵袭抑制率为36.27%;免疫细胞化学检测结果显示,MMP-9和VEGF蛋白的表达在MDA-MB-231细胞中亦明显降低.结论 氨氯地平对MDA-MB-231细胞体外侵袭具有明显的抑制作用,此作用与降低肿瘤细胞的MMP-9和VEGF的表达有关.     

miRNA-191对人乳腺癌细胞增殖、侵袭的影响

目的探讨miR-191在人乳腺癌细胞中的表达情况,研究其对乳腺癌细胞的增殖、侵袭的影响。方法 real-time PCR检测乳腺癌细胞[MDA-MB-231(雌激素受体阴性,ER-)、MCF-7(雌激素受体阳性,ER+)]和正常乳腺上皮细胞(HBL-100)中miR-191表达水平的差异;利用Lipofectamine2000将miR-191抑制体瞬时转染乳腺癌MCF-7,并用real-time PCR检测转染效果;分别用CCK-8法检测MCF-7细胞增殖,流式细胞术检测MCF-7细胞的细胞周期,Transwell法检测MCF-7细胞的侵袭能力。结果与正常乳腺细胞相比,miR-191在乳腺癌细胞中高表达(P<0.01),且在ER(+)乳腺癌细胞MCF-7中的表达水平高于ER(-)乳腺癌细胞MDA-MB-231(P<0.01),转染miR-191抑制体后,MCF-7细胞增殖能力(0.65±0.04)较阴性对照组(1.18±0.05)明显受到抑制(F=122.238,P<0.01),侵袭能力(56.67±2.58)较阴性对照组(82.5±5.79)减弱(F=18.734,P<0.01),G0/G1期的细胞比例(73.39±1.10)%较阴性对照组(69.28±2.11)%增加(F=61.060,P<0.01),S期细胞比例(20.9±1.17)%较阴性对照组(25.48±1.19)%减少(F=46.937,P<0.01)。结论 miR-191在人乳腺癌细胞中,特别是ER(+)乳腺癌中高表达,转染miR-191抑制体后,MCF-7细胞增殖、侵袭能力明显受到抑制。     

HSP90表达对乳腺癌细胞侵袭转移能力的影响

目的研究HSP90的表达与乳腺癌细胞侵袭转移能力的相关性.方法采用RT-PCR和Western blot检测HSP90在MDA-MB-435s和MDA-MB-231细胞中mRNA水平和蛋白质水平的表达差异.Transwell小室人工重组基底膜侵袭迁移实验检测经HSP90抑制剂Geldanamycin(GA)处理前后两株细胞侵袭迁移能力的改变.结果MDA-MB-435s细胞中HSP90α的mRNA表达水平明显高于MDA-MB-231细胞(P＜0.01),MDA-MB-435s和MDA-MB-231细胞中HSP90β的mRNA表达水平没有明显差异(P＞0.05),MDA-MB-435s细胞中HSP90的蛋白质表达水平明显高于MDA-MB-231细胞(P＜0.01).两株细胞用药前侵袭迁移能力无明显差异(P＞0.05),HSP90的抑制剂GA对MDA-MB-435s和MDA-MB-231细胞的侵袭迁移能力均呈现明显抑制作用(P＜0.01,P＜0.05),对MDA-MB-435s细胞的抑制作用更明显(P＜0.01).结论HSP90的表达影响乳腺癌细胞侵袭转移能力.     

Pokemon对乳腺癌MCF-7细胞侵袭迁移能力的影响

目的 建立稳定表达pokemon乳腺癌细胞系,并观察pokemon对乳腺癌细胞系MCF-7侵袭转移能力的影响. 方法 构建表达pokemon慢病毒载体,将Pokemon表达慢病毒载体转染MCF-7细胞,通过Westernblot方法检测稳定性表达pokemon MCF-7细胞中Pokemon-GFP融合蛋白的表达情况,应用Transwell试验及划痕实验观察pokemon的高表达对MCF-7细胞侵袭迁移能力的影响. 结果 成功建立稳定表达pokemon的MCF-7细胞系,pokemon可抑制MCF-7细胞侵袭能力. 结论 Pokemon可抑制MCF-7细胞侵袭能力.     

基质细胞衍生因子-1对乳腺癌细胞体外增殖和侵袭的影响

目的 探讨SDF-1对乳腺癌细胞细胞体外生长和侵袭的影响.方法 分别用0.25、0.50、1.00、2.00和5.00μM的SDF-1处理人乳腺癌细胞株MCF-7,采用MTT比色法检测SDF-1对MCF-7细胞增殖的影响;采用软琼脂克隆法检测SDF-1对MCF-7细胞克隆形成的影响;采用侵袭小室法检测SDF-1对MCF-7细胞侵袭能力的影响.结果 MTT比色法显示0.25～5.00μM的SDF-1在体外对人乳腺癌MCF-7细胞有促进增殖的作用,与空白组比较差异有显著性(P<0.05),该作用呈浓度依赖性;软琼脂克隆实验显示0.25～5.00μM的SDF-1在体外对人乳腺癌MCF-7细胞有促进克隆形成的作用,与空白组比较差异有显著性(P<0.05),该作用呈浓度依赖性;侵袭小室实验发现:0.25～5.00μM的SDF-1在体外对人乳腺癌MCF-7细胞有促进侵袭转移作用,与空白组比较差异有显著性(P<0.05),该作用呈浓度依赖性.结论 SDF-1可以明显增强乳腺癌细胞体外增殖能力和侵袭转移能力.     

缺氧诱导因子1α过表达对人前列腺癌细胞体外侵袭能力的影响

目的观察转染缺氧诱导因子1α(HIF-1α)能否增强人前列腺癌细胞的体外侵袭能力,并探讨其分子机制。方法用脂质体Lipofectamine2000包装重组真核表达载体pCDNA3．1(-)／HIF1α后转染人前列腺癌细胞LNCaP,600μg／ml G418筛选稳定表达HIF-1α的抗性克隆。免疫荧光及Western印迹法鉴定HIF-1α过表达,Western印迹法检测侵袭相关蛋白E-钙黏素、波形纤维蛋白(vimentin)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、组织蛋白酶D(cathepsin D)及尿激酶型纤溶酶原激活因子受体(uPAR)的表达,Transwell验证细胞侵袭能力。结果与未转染细胞LNCaP相比,转染细胞LNCaP／HIF1α中出现明显的HIF-1α蛋白条带,并激发出较强荧光,E-钙黏素表达缺失,而vimentin、MMP-2、cathepsin D及uPAR表达增加。Transwell试验进一步证实,LNCaP／HIF1α穿透Matrisel滤膜的细胞数比LNCaP细胞显著增多(4．6±0．4 vs 3．2±0．3,P<0．05)。结论HIF-1α过表达能够诱导人前列腺癌LNCaP细胞的侵袭相关蛋白表达增多,进而显著增强其体外侵袭能力。     

高糖对体外培养的足细胞自噬的影响

目的:研究不同葡萄糖浓度?不同作用时间对体外培养的足细胞自噬的影响?方法:体外培养小鼠永生性足细胞系,给予不同浓度的葡萄糖(5.6?11.0?20.0?30.0 mmol/L)刺激,作用时间分别为6?12?24?36 h?Western blot检测足细胞自噬标记蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)Ⅱ的表达;透射电镜观察足细胞自噬小体的形成;荧光显微镜观察足细胞转染GFP-LC3荧光蛋白后绿色荧光蛋白颗粒的变化?结果:①与0 h相比,30 mmol/L葡萄糖刺激后足细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达随着作用时间的延长逐渐增加,到24 h时增加最明显,差异有显著性(P < 0.05)?24 h时,透射电镜下足细胞自噬小体形成最多;荧光显微镜下足细胞转染GFP-LC3绿色荧光蛋白颗粒最多?②与对照组5.6 mmol/L相比,随着葡萄糖刺激浓度的增加足细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达明显增加,30 mmol/L浓度时最明显,差异有显著性(P < 0.05)?结论:高糖呈浓度和时间依赖性增加体外培养的足细胞LC3-Ⅱ蛋白的表达?诱导足细胞自噬体的形成?     

瞬时受体电位通道蛋白6在人乳腺癌细胞中的表达及其对乳腺癌细胞侵袭能力的影响

目的：探讨瞬时受体电位通道蛋白6（TRPC6）在人乳腺癌细胞中的表达,阐明TRPC6与乳腺癌细胞侵袭能力的关联性。方法：常规培养的不同侵袭能力乳腺癌细胞株分为MCF-7（低侵袭组）和MDA-MB-231（高侵袭组）,采用Western blotting法和RT-PCR法检测2组中TRPC6蛋白和mRNA的表达;将MDA-MB-231细胞分为空白对照组和SKF96365组,不同浓度SKF96365（5、25和40 μmol/L）预处理MDA-MB-231细胞,阻滞TRPC6通道,采用Transwell实验和细胞划痕实验检测细胞侵袭能力。结果：Western blotting和RT-PCR法检测,高侵袭组MDA-MB-231细胞中TRPC6蛋白及mRNA表达水平均高于低侵袭组MCF-7细胞（P<0.05);划痕实验, 5、25和40　 μmol/LSKF96365组迁移细胞数(76.24±7.54、45.33±4.50和25.12±1.57)均少于空白对照组(130.48±9.55)（P<0.05);Transwell体外侵袭实验,不同浓度SKF96365（5、25和40 μmol/L）组迁移细胞数明显低于对照组(P<0.05)。 结论：高侵袭乳腺癌细胞MDA-MB-231可通过上调TRPC6表达提高乳腺癌细胞的侵袭能力,提示TRPC6在乳腺癌转移中可能起作用。     

VEGF单抗对人肺癌细胞A549生长及侵袭能力影响的体外研究

目的 研究VEGF单抗(血管内皮生长因子单克隆抗体,Bevacizumab)对人肺癌细胞(A549)生长及侵袭能力的直接影响,并探讨其可能的内在机制.方法 采用MTT法测定Bevacizumab对A549细胞生长活性的影响,Transwell小室法检测其对细胞侵袭的影响.结果 与空白对照组相比,10μg/mL及100μg/mL的Bevacizumab能够促进A549细胞增殖,10 μg/mL药物的促增殖作用持续到48 h,而100μg/mL药物的作用可持续到72 h(P＜0.05)；24 h内各浓度Bevacizumab均能抑制靶细胞侵袭,5μg/mL实验组抑制能力最强.＜5μg/mL时,随药物浓度增加抑制能力增强；＞5μg/mL时,随药物浓度增加抑制能力反而下降(P＜0.05).结论 较高浓度Bevacizumab能够促进肿瘤细胞增殖,但是各浓度Bevacizumab均具有抑制肿瘤细胞侵袭的作用,该药物抑制肿瘤细胞侵袭与影响其生长无关.     

白术提取物对人肺癌PG细胞体外侵袭作用的影响

目的:观察白术提取物对恶性肿瘤增殖、黏附及侵袭的影响。方法:采用克隆形成实验、细胞黏附分析实验和细胞侵袭分析实验研究白术提取物对细胞增殖、黏附及侵袭能力的影响。结果:白术挥发油处理的PG细胞的单个细胞增殖的能力下降,白术挥发油和白术多糖处理的PG细胞的黏附能力及侵袭能力明显降低。结论:白术挥发油和白术多糖可降低PG细胞的侵袭能力。     

YB-1表达对乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的影响

目的:观察Y-盒结合蛋白-1(YB-1)对肿瘤细胞迁移和侵袭能力的影响.方法:通过脂质体介导的方法将YB-1 shRNA重组载体转染入人类乳腺癌MCF-7细胞,经G418筛选及克隆化培养后获得稳定转染株.运用RT-PCR和蛋白质印迹方法检测MCF-7细胞中YB-1 mRNA和YB-1蛋白的表达水平,运用划痕实验和Transwell小室法检测细胞运动、迁移和侵袭能力的变化,同时运用RT-PCR和蛋白质印迹方法检测细胞中MMP-2的表达水平,并用明胶酶谱法检测MMP-2蛋白的活性.结果:稳定转染YB-1 shRNA的细胞中YB-1的表达明显低于转染随机片段的细胞和未转染组细胞,且细胞的运动、迁移和侵袭能力以及MMP-2的表达及活性也较后两组细胞明显下降.转染随机片段的细胞和未转染组细胞间无明显差异.结论:YB-1 shRNA可以沉默乳腺癌MCF-7细胞中YB-1的表达,并降低细胞的迁移和侵袭能力以及MMP-2的表达及活性.     

导入hLIGHT-Fc基因对人乳腺癌细胞体外增值的影响

目的探讨hLIGHT-Fc基因对人乳腺癌细胞的体外抑制效应.方法以DOTAP脂质体介导hLIGHT-Fc基因转染人乳腺癌细胞株MCF-7,通过绘制细胞生长曲线、MTT比色法以及流式细胞仪检测观察hLIGHT-Fc转染对MCF-7细胞生长的影响.结果hLIGHT-Fc基因的表达可以抑制MCF-7细胞的体外生长.在5%血清培养时,MCF-7/LIGHT细胞的生长曲线较对照组明显降低;MTT比色显示MCF-7/LIGHT的细胞活力与对照组相比有显著性差异(P＜0.05);流式细胞检测显示,在IFN-γ协同下基因转染使瘤细胞的生长滞留在G0 G1期,S期细胞明显减少,并观察到部分瘤细胞的凋亡.结论hLIGHT-Fc基因转染对MCF-7细胞具有体外抑制作用,但全面评价有待进一步的研究.     

注射用磷酸肌酸钠对体外培养人卵巢癌细胞SKOV3侵袭能力的影响及其机制

目的:观察注射用磷酸肌酸钠(CP)对人卵巢癌细胞SKOV3体外侵袭能力的影响,并探讨其作用机制.方法:体外培养人卵巢癌细胞SKOV3,随机分为空白对照组(生理盐水)及药物处理组(1、6和12 mmol·L-1CP );分别用生理盐水、CP处理细胞72 h后,采用MTT比色法和Transwell小室法观察细胞黏附和迁移侵...