小西葫芦黄花叶病毒(ZYMV)的RT-PCR检测

小西葫芦黄花叶病毒（Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV）是葫芦科作物上的一种重要病毒,近几年来已成了我国葫芦科作物上的一种重要病原物。根据已知的ZYMV基因组序列分别设计了2对特异性引物,在优化RT—PCR条件的基础上,成功建立了ZYMV的RT—PCR检测方法。引物ZYM1／ZYM2用于扩增整个CP基因序列（片段长度949bp）,而引物ZYM3／ZYM4用于扩增部分CP基因序列（片段长度449bp）,其中,引物ZYM3／ZYM4的检测灵敏度比引物ZYM1／ZYM2的检测灵敏度高。把所建立的方法用于南瓜（Cucurbita moschata）、丝瓜（如如cylindrica）病叶的检测,结果在这些病叶中也检出ZYMV。因此,该方法可用于ZYMV的快速、灵敏检测及分子流行病学的调查研究。     

小西葫芦黄花叶病毒在广西瓜类作物上的发生情况初报

用DAC—ELISA对广西各地瓜类作物病毒病样品448份进行小西葫芦黄花叶病毒(ZYMV)检测，结果表明：该病毒在广西瓜类作物上普遍发生，ZYMV阳性检出率为77．68％，西瓜、甜瓜、南瓜、西葫芦、黄瓜、苦瓜、瓠瓜和蛇瓜样品的阳性检出率在58．33％～100％之间，冬瓜、丝瓜样品的阳性检出率分别为20％和28．57％。ZYMV是侵染广西瓜类作物的主要病毒之一。     

小西葫芦黄花叶病毒辽宁分离物的鉴定与序列分析

从辽宁省沈阳市和盖州市分别采集表现花叶的南瓜样品,经透射电镜负染色实验,观察到典型的马铃薯Y病毒属(Potyvirus)线状病毒粒子.利用Potyvirus通用引物Legpoty F/LegpotyR分别对3个沈阳样品和3个盖州样品进行RT-PCR扩增,得到预期片段,克隆并测序.Blast显示6个病毒样本与小西葫芦黄花叶病毒(ZYMV)同源性最高,均大于99%.利用已经报道的特异引物ZYMV-F/ZYMV-R,从6个样本中扩增到约1.2 kb的ZYMV片段,片段包含完整的外壳蛋白(CP)基因.基于CP的核苷酸序列同源性分析,发现2个ZYMV辽宁分离物与山西分离物ZYMV-[CN:SX:Chrysanthemum:14](KP742962)同源性最高,达99.1%和99.4%.系统进化树分析表明,2个ZYMV辽宁分离物与山西分离物ZYMV-[CN:SX:Chrysanthemum:14]聚集在一个分支,推测ZYMV辽宁分离物与山西分离物亲缘关系最近.     

西瓜抗小西葫芦黄花叶病毒中国株系遗传规律的研究

利用起源于非洲物高抗小西葫芦黄花叶病毒中国株系（ZYMV－CH）的西瓜野生种纯合自交系Egun为试材,对Egun与感病普通西瓜自交系9811,98R杂交的F1,F2和BC1等群体的抗病性接种鉴定与抗血清反应分析,发现抗ZYMVCH是由隐性单基因控制,这与Provvidenti在PI482261得出的抗小西葫芦黄花叶病毒佛罗里达株系（ZYMV－FL）的结果是一致的,但这两者是否是同一个基因还有待证实,现暂命名为zym-CH。     

西瓜幼苗叶片对小西葫芦黄花叶病毒侵染的生理响应

为探明西瓜叶片对小西葫芦黄花叶病毒(ZYMV)侵染的生理响应机制。以感病品种18-025为材料,采用苗期常规汁液摩擦法接种ZYMV,比较分析了接种后2、4、6、8、10 d接与未接种叶片等生理指标的差异。结果表明,接种ZYMV后,叶片叶绿素、可溶性蛋白质含量均低于对照,其中,叶绿素a、叶绿素b和总叶绿素含量在6～10 d时与对照差异达显著水平,可溶性蛋白质含量2～10 d时均与对照差异不显著;叶片脯氨酸、可溶性糖含量及3种保护酶活性均高于对照,其中脯氨酸含量在6、8、10 d时分别比对照显著提高21.92%、36.69%、58.01%,可溶性糖含量在4 d时比对照显著提高25.02%,超氧化物歧化酶活性在2～10 d时均与对照差异不显著;过氧化物酶活性在2、4、6、8 d时分别比对照显著提高46.76%、81.59%、48.74%、31.55%,过氧化氢酶活性在4、6、8 d时分别比对照显著提高23.93%、48.91%、46.15%;叶片丙二醛含量在2～6 d时高于对照,在8、10 d时低于对照,其中在6 d时比对照显著提高12.38%。综上说明,西瓜叶片叶绿素、脯氨酸、可溶性糖和丙...     

长沙地区南瓜的小西葫芦黄花叶病毒检测及其分子进化分析

对长沙地区160份南瓜疑似病毒病样品进行小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)检测,检出率达46.9%。为进一步明确长沙地区ZYMV分离物的分类地位和分子进化特征,克隆获得了1个长沙地区ZYMV外壳蛋白基因,与Gen Bank已报道的ZYMV外壳蛋白基因比对,并进行基因重组、系统发生、遗传差异、选择压力、种群结构和基因漂流分析。结果显示:长沙地区ZYMV外壳蛋白基因没有发生明显的重组,突变与负选择作用是其进化的主要驱动力,种群结构相对稳定,但正处于扩张的趋势中;ZYMV不同分离物外壳蛋白基因形成3个有明显地理相关性的美洲、欧洲和亚洲种群,美洲和欧洲种群与亚洲种群之间基因交流不频繁,可能受到遗传漂变的影响,而欧洲种群与亚洲种群之间基因交流较频繁。     

小西葫芦黄化花叶病毒流行特征及防治策略

小西葫芦黄化花叶病毒（ZYMV）主要通过蚜虫以非持久性方式传播，能侵染葫芦科、豆科等9科植物，近年来发现该病毒的发生危害有加重的趋势。通过对杭州地区该病毒的调查，描述了ZYMV的发生和流行特征，介绍了依靠农业措施及化学，生物等手段控制病害的防治策略。     

小西葫芦黄花叶病毒dsRNA的原核表达及其对ZYMV的防治效果

【目的】小西葫芦黄花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)是危害西瓜最为普遍的病毒,在西瓜上利用外源喷施病毒基因dsRNA的方法实现对ZYMV的预防和治疗。【方法】首先以实验室已有的ZYMV病毒序列为依据,针对其不同的基因片段,利用NCBI数据库找出与其相似的序列。随后利用软件DNAMAN8对序列进行多重比对分析,找出其保守区域,根据分析结果选择长度介于200—350 bp的ZYMV 3′UTR、6K2、HC-Pro、P3、NIb 5个基因片段,同时选择长度为190 bp的GUS基因片段作为对照。PCR扩增得到这6个片段后,利用同源重组的方法将它们插入到含有双T7启动子的L4440载体中,并利用RNAⅢ酶缺陷型大肠杆菌HT115建立原核表达系统生产dsRNA,采用超声波破碎的方法释放dsRNA,利用TE(10 mmol·L^-1 Tris-HCl和1 mmol·L^-1 EDTA)缓冲液溶解dsRNA,最后比较和分析IPTG使用浓度、诱导时间以及超声波破碎时间对dsRNA表达和释放的影响。在西瓜植株上采用喷施...     

侵染南瓜的小西葫芦黄化花叶病毒的分离与鉴定

1999年秋在杭州一株表现典型黄化花叶的南瓜(Cucuribita moschata)上分离获得一株线状病毒HZ00s1.该病毒分离物在葫芦科作物(Cucuribitaceae)上引起系统症状.经寄主反应测定、病毒形态学和寄主组织病变观察, 初步确定该病毒为小西葫芦黄化花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus, ZYMV).对ZYMV杭州分离物(HZ00s1)的外壳蛋白序列及3 端非编码区进行了克隆及序列测定,并与ZYMV Conneticut分离物、Florida分离物、California分离物以及WMV2 Tonga分离物进行了同源性分析.结果显示:HZ00s1分离物与其它3种ZYMV分离物CP基因核酸序列同源性为93%～94%,而与WMV2 Tonga分离物的同源性仅为67%,来自美国的3种ZYMV分离物之间的同源性高达95%～99%.HZ00s1分离物与其它3个ZYMV分离物CP氨基酸序列同源性在95%～98%之间.因此确定在杭州地区葫芦科作物上有ZYMV的发生.     

新疆小西葫芦黄化花叶病毒的分子鉴定与序列分析

在新疆石河子地区采集具有黄化、花叶和疱斑等症状的多种葫芦科作物,分别提取总RNA,利用小西葫芦黄化花叶病毒(Zucchini yellow mosaic virus,ZYMV)特异性引物进行RT-PCR扩增,其中来自黄瓜、甜瓜和丝瓜的模板RNA上可以得到1185bp片段。将扩增得到的片段克隆到pMD18-T上,序列分析结果表明:该片段含有1185个核苷酸,包含完整CP基因。与ZYMV Florida分离物、California、韩国KR-PA分离物、新加坡S及中国北京CH-BJ等GenBank报道的7个不同地域、不同种寄主植物上的分离物序列进行同源性分析的结果显示:ZYMV新疆分离物的CP基因核苷酸与其它11种ZYMV分离物的同源性高达99.42%,氨基酸序列同源性高达98.48%;新疆5个来源于不同寄主植物的ZYMV,不存在明显的遗传变异性,同源性高达97%,而与北京CH-BJ,Reunion和Singapore分离物相比存在较大差异,说明ZYMV地域的相关性要大于寄主上相关性。     

小西葫芦花叶病毒(ZYMV)抗血清制备及检测技术研究

从小西葫芦黄化花叶病毒(ZYMV)免疫的母鸡蛋卵黄和兔抗血清中分别提取免疫球蛋白IgY和IgG,用多种血清学方法进行检测。结果表明,免疫鸡和兔25d后,鸡蛋卵黄IgY和兔抗血清的效价分别达到1/64和1/512。在琼脂扩散试验中,当抗体稀释28倍时,与抗原反应无明显沉淀线。在胶乳凝集试验中,抗体稀释210倍时,与抗原反应无明显凝集物。ELISA法以辣根过氧化酶标记抗体IgY和IgG,用双抗夹心法成功地检测出了ZYMV,当抗体稀释106倍时,与抗原反应仍呈阳性。免疫电镜方法检测ZYMV,较一般血清学方法可多捕捉50倍的病毒颗粒。     

黄瓜花叶病毒研究进展

综述了黄瓜花叶病毒(CMV)的生物学特性、基因组、病害防控等方面的研究进展,并对国内外当前研究中存在的问题作了相关探讨。     

烟草花叶病毒的检测方法研究进展

烟草花叶病毒(TMV)的寄主范围相当广泛,给农业生产带来重大损失,加强对该病毒的检测具有重要意义。在查阅近年来国内外文献的基础上,总结了对烟草花叶病毒的检测方法如直接观测法、电子显微镜检测法、生物学测定法、血清学检测和分子生物学检测法等的研究进展。随着植物种质资源的引进和生态条件的改变,对检测TMV方法提出了更高的要求,因此在实际应用中要综合运用各种检测方法提高检测的准确性。     

小麦黄花叶病毒的血清学检测

利用间接ELISA对感染WYMV的小麦病叶检测,通过比较分析影响ELISA测定结果的包被缓冲液、抗血清及酶标抗体的浓度和种类,确立了较为稳定的反应体系.利用此ELISA检测体系并结合RT-PCR方法对从四川采集的田间小麦中WYMV进行检测,确定了有较高的检测灵敏度的检测系统,为田间大量小麦病样的检测提供有效、方便的方法.     

烟草花叶病毒病发生及防治研究进展

综述了烟草花叶病的病原、发生规律、症状和危害以及近几年的防治现状,并探讨了该病害防治的发展方向。     

大豆抗花叶病毒病研究进展

对大豆抗花叶病毒病的研究进展进行了分析,发现目前的基础研究集中在抗性遗传、分子标记和抗花叶病毒的生理、生化机制方面,同时在育种方面提出了应加强分子标记辅助选择、转基因等生物技术的建议。     

媒介昆虫和西瓜病毒病发生关系的研究

测定了棉蚜、桃蚜、菜蚜和麦蚜对胡瓜花叶病毒 (ZYMV)的传播效率 ,通过随机区组安排蚜虫种类和虫口密度以及饥饿时间和传毒时间两因素实验处理 ,并采用Ducan新复极差测验比较相互之间的差异显著性。结果表明 :①不同蚜虫种类的传毒能力存在显著差异 ,表现为桃蚜 >菜蚜 >棉蚜、麦蚜 ;蚜虫密度以 3～ 5头传毒较好。②桃蚜不同饥饿时间的传毒效率差异显著 ,表现为饥饿时间从 0min延长到 5min可提高传毒效率 ,长于 5min(如 10min)与 5min无显著差异。③传毒时间从 0 .5h到 3h的传毒效率差异不显著     

美人蕉黄瓜花叶病毒和菜豆黄花叶病毒研究

本文是对美人蕉上表现花叶，褪绿条纹和坏死线等症状的两个分离物进行的系统研究，分离物Ｃｌ系统侵染心叶烟，普通烟，蔓陀罗产生明显花叶症，在蚕豆，昆诺上产生局部枯斑，其ＴＩＰ为６０～６５℃，ＤＥＰ为１０＾－３～１０＾－４，ＬＩＶ为５～５ｄ，提纯病毒Ａ２６０／Ａ２８０＝１．１９，病毒粒子球形，直径３０ｎｍ，它与黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）抗血清呈阳性反应，为此，确证Ｃｌ病毒粒子球形，直径３０ｎｍ。它与黄瓜花叶病     

大豆花叶病毒病抗性基因的分子标记研究进展

大豆花叶病毒病是为害大豆生产的世界性病害,严重影响大豆产量和品质。对大豆花叶病毒病的研究进展从抗性遗传、抗性基因的分子标记及定位、抗病品种的分子标记辅助选择育种3个方面进行了阐述。