PCR检测结核杆菌DNA的临床应用

聚合酶链反应(PCR)自1989年引入结核病诊断以来,已成为结核病细菌学诊断中关注的焦点.为结核病的早期诊断、治疗、预防开拓了新领域,因此我们采用聚合酶链反应技术检测结核菌特异性DNA片段,现报告如下.     

PCR技术检测活检组织中结核杆菌DNA

ＰＣＲ技术检测活检组织中结核杆菌ＤＮＡ赵跃武银平章刘正国郝远瑞徐纪跃党伟一作者单位：河南省人民医院病理科，郑州４５０００３多聚酶链反应（ＰＣＲ）是一项有效的体外ＤＮＡ扩增技术，尤在病原体检测方面。在一些可疑的活检石蜡切片中，有时也需要借助于该技术来协...     

PCR技术在检测活检组织中结核杆菌的应用

ＰＣＲ技术在检测活检组织中结核杆菌的应用潘美华作者单位：安徽医科大学附属医院病理科，合肥２３００２２在临床诊断结核病中，用ＰＣＲ技术检测痰液、血液、脑脊液、胸腹水等样品中的结核杆菌已得到了广泛的应用，但在病理诊断中所遇到的一些组织内结核病变不典型，而...     

结核杆菌检测基因芯片的制备研究

目的建立结核杆菌检测基因芯片的制备技术.方法靶基因的制备、标记,用点样仪点于玻片介质上,并经过点样后处理制成基因芯片,用扫描仪测定处理前后芯片上荧光强度的变化,计算DNA固定率,分别设计了不同的玻片,不同的点液,不同的点样后处理方法的固定率的测定.结果对结核杆菌检测基因芯片制备的条件和方法优化实验表明,用醛基修饰玻片作为介质,点样液用DMSO溶液作为点样液,点样后芯片处理,以水合1h再干燥30min为佳.结论本研究建立的结核杆菌检测基因芯片的制备技术有较高的效率和可靠的实用性能.     

多聚酶链反应（PCR）检测不典型结核杆菌的DNA

本文采用ＰＣＲ技术检测结核杆菌的ＤＮＡ（ＴＢ－ＤＮＡ），其中临床诊断为结核或可疑结核者９例，肿瘤６例，结节病３例，淋巴结炎４例，共２２例。病理诊断确诊为不典型结核者１４例，不能除外结核者４例，结节病２例，瘤样病变２例。所有病例经抗酸染色均未查到结核杆菌。ＰＣＲ检测结果表明，２２例中１８例呈阳性（占８１．８２％），４例呈阴性。ＰＣＲ技术敏感、特异，对于不典型结核病例检查ＴＢ－ＤＮＡ片段用于辅助诊断颇     

多聚酶链反应(PCR)检测不典型结核杆菌的 DNA

本文采用ＰＣＲ技术检测结核杆菌的ＤＮＡ（ＴＢ－ＤＮＡ），其中临床诊断为结核或可疑结核者９例，肿瘤６例，结节病３例，淋巴结炎４例，共２２例。病理诊断确诊为不典型结核者１４例，不能除外结核者４例，结节病２例，瘤样病变２例。所有病例经抗酸染色均未查到结核杆菌。ＰＣＲ检测结果表明，２２例中１８例呈阳性（占８１．８２％），４例呈阴性。ＰＣＲ技术敏感、特异，对于不典型结核病例检查ＴＢ－ＤＮＡ片段用于辅助诊断颇有实用价值。     

淋巴结非瘤性碎屑坏死与结核杆菌感染的PCR检测

淋巴结非瘤性碎屑坏死常见于多种淋巴结疾病。我们应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术对呈现非瘤性碎屑坏死病变的淋巴结进行结核杆菌ＤＮＡ的检测，探讨该病变与结核杆菌感染的关系，并对单管巢式ＰＣＲ法（ＳＮＰＣＲ）与普通ＰＣＲ法（ＧＰＣＲ）的检测结果进行比较。...     

EDTA修复肉芽肿组织中荧光定量PCR检测结核杆菌的应用

目的观察EDTA热修复炎性肉芽肿组织石蜡切片,能否提高荧光定量PCR结核/非结核分枝杆菌的检出率。方法对125例炎性肉芽肿组织石蜡切片结核/非结核分枝杆菌同时进行常规荧光定量PCR检测和EDTA热修复后荧光定量PCR检测。结果常规荧光定量PCR检测检出分枝杆菌75例(60%)阳性,其中结核杆菌74例(59.2%),非结核分枝杆菌1例(0.8%),阳性病例平均阳性基因拷贝数6.35×105/ml/例;EDTA修复后荧光定量PCR检测检出分枝杆菌88例(70.4%),其中结核杆菌83例(66.4%),非结核分枝杆菌5例(4%),阳性病例平均阳性基因拷贝数7.36×106/ml/例。两组间差异均有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论 EDTA热修复后荧光定量PCR检测可以大幅度提高炎性肉芽肿组织石蜡切片的结核/非结核分枝杆菌的阳性检出率。     

利用基因芯片技术快速检测结核杆菌耐药性的初步研究

目的:探讨利用基因芯片技术检测结核杆菌的耐药性。方法:结核杆菌耐药性检测基因芯片的制备;临床分离株结核杆菌培养和药敏检测;结核杆菌基因组DNA的制备和结核杆菌耐药基因的聚和酶链反应;基因芯片的杂交、洗涤、检测与分析。结果:临床分离株结核杆菌培养和药敏检测结果:1株为药物敏感株结核杆菌(对异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇4种药物均敏感);4株为多耐药株结核杆菌(对异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇4种药物均耐药);药敏检测结果与5位患者临床的诊断性治疗的结果完全一致;进一步利用基因芯片技术进行检测, 检测结果与上述结果相符合。结论:利用基因芯片技术检测结核杆菌的耐药性, 准确、快速、高效。     

利用基因芯片技术快速检测结核杆菌耐药性的初步研究

目的：探讨利用基因芯片技术检测结核杆菌的耐药性。方法：结核杆菌耐药性检测基因芯片的制备；临床分离株结核杆菌培养和药敏检测；结核杆菌基因组DNA的制备和结核杆菌耐药基因的聚和酶链反应；基因芯片的杂交、洗涤、检测与分析。结果：临床分离株结核杆菌培养和药敏检测结果：1株为药物敏感株结核杆菌(对异烟肼、利福平、链霉素、乙肤丁醇4种药物均敏感)；4株为多耐药株结核杆菌(对异烟肼、利福平、链霉素、乙肤丁醇4种药物均耐药)；药敏检测结果与5位患者临床的诊断性治疗的结果完全一致；进一步利用基因芯片技术进行检测，检测结果与上述结果相符合。结论：利用基因芯片技术检测结核杆菌的耐药性，准确、快速、高效。     

被动血凝试验检测结核杆菌抗体的标准化

被动血凝(PHA)试验是较早用于检测结核杆菌抗体的方法之一,但由于不够标准化,所得结果各异。目前不少发展中国家需要能大规模应用的简便而敏感的血清学方法来诊断结核。为此,本文作者标准化了一种检测结核菌免疫动物抗结核抗体的微量PHA试验。他们对以往的方法稍加改进,试验中所用的致敏红细胞是先经丙酮乙醛和戊二醛二次醛化固定(DAS),再经结核杆菌可溶性抗原(MSA)致敏的羊红细胞。试验时,用在制备MSA过程中的沉淀抗原加福氏完     

聚合酶链反应技术快速检测肺组织中结核杆菌的研究

聚合酶链反应技术快速检测肺组织中结核杆菌的研究庄玉辉，李宁，张小刚，李国利，吴雪琼，张玉芝有些结核病例在病理组织学上往往缺乏典型的结核肉芽肿和干酪样坏死，与结节病肉芽肿、肺部圆形病灶等组织切片不易鉴别，常常依赖于病原学检查。传统的病原学诊断方法敏感性...     

结核杆菌Pup-蛋白酶体系统与耐药结核杆菌耐药性的相关性研究

目的:检测不同耐药的结核杆菌临床分离株原核类泛素蛋白-蛋白酶体系统(以下简称:Pup-蛋白酶体系统)相关的Pup、Dop、PafA、Mpa基因的表达水平,探讨研究结核杆菌Pup-蛋白酶体系统与新疆地区广泛流行的耐药结核杆菌临床分离株耐药性的相关性。方法:以培养对数生长期的新疆地区广泛流行的耐药结核杆菌临床分离株为研究对象,分别提取结核杆菌临床分离的药物敏感菌株、单纯耐异烟肼的结核杆菌临床分离株(INH-MTB)、单纯耐利福平的结核杆菌临床分离株(RFP-MTB)、单纯耐链霉素的结核杆菌临床分离株(SM-MTB)、单纯耐乙胺丁醇的结核杆菌临床分离株(EB-MTB)、耐多药结核杆菌临床分离株(MDR)等各组菌株的总RNA,经纯度鉴定后,利用SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,检测各组结核杆菌菌株的Pup、Dop、PafA、Mpa基因的表达水平,分析各组耐药结核杆菌临床分离株Pup-蛋白酶体系统相关的Pup、Dop、PafA、Mpa基因的表达与新疆地区广泛流行的耐药结核杆菌临床分离株耐药性的相关性。结果:与药物敏感菌株相比,Pup、Mpa基因在单一耐药菌株和耐多药菌株中表达有不同程度的下调,Dop、PafA基因在单一耐药菌株和耐多药菌株中表达有不同程度的上调,差异有统计学意义(P<0.05)。与MDR相比,Pup、Dop、Mpa基因在单一耐药菌株中表达有不同程度的上调,PafA基因在单一耐药菌株中表达有不同程度的下调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在结核杆菌临床分离的药物敏感菌株、INH-MTB组、RFP-MTB组、SM-MTB组、EB-MTB组和MDR组中,结核杆菌Pup、Dop、PafA、Mpa基因的表达差异,与新疆地区广泛流行的耐药结核杆菌临床分离株耐药性有相关性。     

HCV RNA的PCR检测研究与分析

应用ＰＣＲ技术检测ＨＣＶ ＲＮＡ，输血后肝炎且抗－Ｃ１００－３阳性者阳性率为９５％（１９／２０）；输血后肝炎而抗－Ｃ１００－３阴性者阳性率为８６．７％（１３／１５）；非输血后肝炎而抗－Ｃ１００－３阳性者阳性率仅２０％（１／５）；非输血后肝炎而抗－Ｃ１００－３阴性者阳性率仅１８．２％（２／１１）。对克隆的５＇－ＮＣ端片段的核苷酸序列分析显示，中国株与已公布的美、日、台湾等序列的同源性都很高，可达９８     

PCR技术用于检测白色念珠菌的研究

ＰＣＲ技术用于检测白色念珠菌的研究牟兆钦，陈建魁，胡斌，马立人白色念珠菌所致感染日趋增多，特别是在免疫力低下的血液病和肿瘤患者中，白色念珠菌感染也是造成死亡的原因之一。因此，念珠菌感染的早期发现、早期治疗是提高免疫力低下患者治愈率和生存率的重要手段。...     

肠道致病菌PCR检测与鉴定研究

目的 为了实现对腹泻等病原菌的快速、准确检测与鉴定，对引起感染性腹泻的暴发与流行的常见肠道致病菌进行检测与鉴定方法研究。方法 将常规ＰＣＲ与半套式ＰＣＲ及随机引物扩增ＤＮＡ多态性分析（ＲＡＰＤ）等技术相结合，对常见肠道致病菌，如志贺菌、沙门菌和致病性大肠杆菌Ｏ１５７：Ｈ７等进行检测与鉴定。结果 ｕｉｄＡ引物可特异扩增沙门菌、志贺菌及大肠杆菌，而３种特异性引物则只扩增相应的致病菌；第一次ＰＣＲ敏感性     

霍乱弧菌PCR快速检测及应用研究

霍乱弧菌快速、准确的检定是控制霍乱流行的重要手段。本研究建立了ｃｔｘＡ－ＰＣＲ快速检测鉴定方法，并用于新疆霍乱弧菌Ｏ１３９腹泻暴发的病人诊断和环境水体的污染状况评价，取得了较理想的效果。该方法灵敏度高、特异性好、被扩增样品中含４个以上活菌细胞即可检出，为霍乱防治和分子流行病学研究提供了又一有效手段。     

PCR检测HCMV与HLA的相关性研究

利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）法和微量淋巴细胞毒的ＨＩＮ法分别进行了１５７例骨髓移植供受体的人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）和ＨＬＡ－Ａ，Ｂ位点抗原特异性进行了检测，探讨了ＨＣＭＶ感染和ＨＬＡ之间的相关关系，结果显示，在１５７例被测对象中，８５例ＨＣＭＶ感染阳性，７２例阴性，分别统计ＨＣＭＶ阳性组和阴性组的ＨＬＡ－Ａ，Ｂ位点抗原频率，发现ＨＬＡ－Ｂ５在ＨＣＭＶ阳性组中频率较高，而在阴性组中抗原频率较市制是是Ｈ     

孕妇风疹病毒荧光定量PCR检测的研究

目的研究泉州地区孕妇风疹病毒的感染情况,为进一步诊断、预防和治疗提供科学的依据。方法应用实时荧光定量PCR技术对泉州地区800例孕妇血清中风疹病毒RNA（RV-RNA）进行量化的检测。结果检出阳性患者47例,阳性率为5.88%（47/800）。阳性患者的基因拷贝数均大于参考值（2.00%,每毫升拷贝数）,患者每毫升拷贝数范围位于1.31×10^2～9.38×10^8之间。结论荧光定量PCR检测风疹病毒有其众多的优越性,这对正确诊断、判断预后、研究母婴传播、指导临床都具有重要的理论意义和使用价值。