过表达TLR4基因对胃癌细胞自噬的抑制作用及其机制

目的 采用慢病毒过表达胃癌细胞中Toll样受体4（TLR4）基因,探讨其对胃癌细胞自噬的作用,并阐明其作用机制。 方法 处于对数生长期的胃癌BGC-823细胞和SGC-7901细胞分为未感染组、阴性对照病毒组和基因过表达组,分别给予无慢病毒感染、空载体慢病毒和过表达TLR4慢病毒稳定感染。采用Western blotting法检测正常胃黏膜上皮GES-1细胞及胃癌BGC-823细胞、SGC-7901细胞、HGC-27细胞和MGC-803细胞中TLR4蛋白表达水平。采用CCK-8法检测各组细胞增殖活性,实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法分别检测各组细胞中TLR4、Beclin1和微管相关蛋白轻链3（LC3）mRNA表达水平,Western blotting法检测各组细胞中磷脂酰肌醇-3激酶／蛋白激酶B（PI3K／Akt）、磷酸化PI3K／磷酸化Akt（p-PI3K／p-Akt）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）和磷酸化mTOR（p-mTOR）信号通路相关蛋白及细胞自噬相关蛋白（LC3、Beclin1和p62）蛋白表达水平。 结果 BGC-823细胞、HGC-27细胞和MGC-803细胞中TLR4蛋白表达水平高于胃黏膜上皮GES-1细胞。与未感染组和阴性对照病毒组比较,过表达TLR4组BGC-823细胞和SGC-7901细胞中TLR4蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。与未感染组和阴性对照病毒组比较,过表达TLR4组BGC-823细胞和SGC-7901细胞增殖活性明显升高（P<0.05或P<0.01）。与阴性对照病毒组比较,过表达TLR4组BGC-823细胞和SGC-7901细胞中TLR4 mRNA表达水平明显升高（P<0.01）,BGC-823细胞中Beclin1 mRNA表达水平降低（P<0.05）,SGC-7901细胞中LC3和Beclin1 mRNA表达水平降低（P<0.05）。与未感染组和阴性对照病毒组比较,过表达TLR4组BGC-823细胞和SGC-7901细胞中LC3和Beclin1蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,p62、p-PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。 结论 过表达TLR4基因可以通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路明显抑制胃癌细胞的自噬活性。     

RNAi沉默survivin和HIF-1α基因对胃癌BGC-823细胞体外增殖和凋亡的影响

目的：应用RNA干扰（RNAi）技术抑制胃癌BGC-823细胞中survivin和HIF-1α基因的表达,探讨其对胃癌BGC-823细胞增殖和凋亡的影响。方法：分别设计并合成经过化学修饰的靶向survivin和HIF1α mRNA的小干扰RNA （siRNAs）,同时合成错义RNA （SCR）,采用HifectinⅡ真核体外转染胃癌BGC-823细胞,将转染siRNA-survivin、siRNA-HIF-1α和SCR的各组细胞分别命名为sis组、siH组和SCR组,同时设空白对照组（无血清培养基）,RT-PCR法检测各组细胞中survivin和HIF-1αmRNA表达水平。将胃癌BGC-823细胞分为单干扰组（survivin-siRNA,sis组）、联合干扰组（survivin-siRNA+HIF1α-siRNA,sis+siH组）、非靶向特异性组（SCR组）和空白对照组（无血清培养基）,MTT法检测各组细胞增殖活性,Western blotting法检测各组细胞中survivin和HIF-1α蛋白表达水平,流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果：与空白对照组比较,sis组细胞中survivin mRNA表达水平和siH组细胞中HIF-1αmRNA表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）。与空白对照组比较,SCR组细胞增殖活性无明显变化（P>0.05）,sis组和sis+siH组细胞增殖活性明显降低（P<0.05）;与sis组比较,sis+siH组细胞增殖活性明显降低（P<0.05）。与空白对照组比较,sis+siH组细胞中surviving和HIF-1α蛋白表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）,细胞凋亡率明显升高（P<0.01）。结论：联合靶向沉默survivin和HIF-1α基因可下调靶基因的表达,抑制胃癌BGC-823细胞增殖,促进细胞凋亡,RNAi基因沉默技术有望成为治疗胃癌的新方法。     

miR-149-5P调控β-catenin/MMP2/E-cadherin介导胃癌BGC-823和MKN28的细胞迁移

目的 观察miR-149-5P对胃癌细胞BGC-823和MKN28迁移的影响。方法 采用qRT-PCR方法检测miR-149-5P在胃粘膜上皮细胞(GES-1)与BGC-823和MKN28细胞中的表达。分别转染miR-149-5P mimics、NC、inhibitor和inhibitor-NC,采用qRT-PCR方法验证转染效率,采用细胞划痕实验和Transwell实验检测过表达或抑制miR-149-5P后胃癌细胞BGC-823和MKN28迁移能力。采用Western Blot检测转染miR-149-5P mimics或inhibitor后BGC-823和MKN28细胞中β-catenin、MMP2、E-cadherin蛋白表达水平。结果 qRT-PCR实验结果显示:与GES-1相比,miR-149-5P在BGC-823和MKN28细胞中表达显著降低;转染mimics后,BGC-823和MKN28细胞中miR-149-5P表达水平显著升高,而转染inhibitor后,BGC-823和MKN28细胞中miR-149-5P表达水平下降。细胞划痕实验和Transwell实验结果显示:转染mimics后可以抑制BGC-823和MKN28细胞迁移,而转染inhibitor后,可以促进BGC-823细胞迁移,MKN28细胞并无明显变化。Western Blot实验结果显示:在BGC-823和MKN28细胞中过表达miR-149-5P可上调E-cadherin的蛋白表达,抑制β-catenin和MMP2蛋白表达,而抑制miR-149-5P的表达可下调E-cadherin的蛋白表达,促进BGC-823细胞中β-catenin和MMP2蛋白表达,但转染inhibitor后MKN28细胞中E-cadherin、β-catenin和MMP2蛋白表达水平并无明显变化。结论 miR-149-5P可以抑制胃癌细胞BGC-823和MKN28迁移。     

环状RNA hsa_circ_0009735对胃癌细胞上皮间质转化、细胞周期和自噬的影响

目的 探讨环状RNA hsa_circ_0009735在胃癌组织和细胞中的表达,阐明其对胃癌细胞上皮间质转化（EMT）、迁移、细胞周期和自噬的影响。 方法 取正常胃黏膜GES-1细胞、胃癌MGC-803细胞、MKN-45细胞和HGC-27细胞。将hsa_circ_0009735小干扰RNA和阴性对照转染MGC-803细胞,将胃癌MGC-803细胞分为si-hsa_circ_0009735组和阴性对照组;将对照质粒和hsa_circ_0009735过表达质粒转染入HGC-27细胞,将胃癌HGC-27细胞分为OE-hsa_circ_0009735组和对照质粒组;MGC-803细胞转染细胞自噬质粒pcDNA-eGFP-LC3后分为空白组和不同浓度（0.25、0.50、1.00和2.00 mg·L^－1）雷帕霉素组。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法检测胃癌组织和细胞中hsa_circ_0009735表达水平,激光共聚焦显微镜观察各组MGC-803细胞形态表现和细胞中自噬小体数,Transwell小室实验检测各组迁移细胞数,流式细胞术检测不同细胞周期各组细胞百分率,Western blotting法检测各组细胞中微管相关蛋白轻链3Ⅱ（LC3Ⅱ）、微管相关蛋白轻链3Ⅰ（LC3Ⅰ）、E-钙黏蛋白、Cyclin D1、Vimentin和N-钙黏蛋白表达水平。 结果 PCR产物经测序发现存在环化位点,与hsa_circ_0009735序列匹配。与癌旁组织比较,胃癌组织中hsa_circ_0009735表达水平升高（P<0.05）;与GES-1细胞比较, MGC-803细胞中hsa_circ_0009735表达水平升高（P<0.05）。与空白组比较,0.25和0.50 mg·L^－1雷帕霉素组MGC-803细胞形态无明显改变,1.00 mg·L^－1雷帕霉素组MGC-803细胞中颗粒增多,边界不清;2.00 mg·L^－1雷帕霉素组死亡MGC-803细胞较多。激光共聚焦显微镜下1.00 mg·L^－1雷帕霉素组MGC-803细胞中自噬小体数与2.00 mg·L^－1雷帕霉素组比较差异无统计学意义（P>0.05）。与空白组比较,不同浓度雷帕霉素组MGC-803细胞中LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高（P<0.05）,hsa_circ_0009735表达水平降低（P<0.01）。与阴性对照组比较,si-hsa_circ_0009735组MGC-803细胞中hsa_circ_0009735表达水平降低（P<0.01）,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值升高（P<0.01）,迁移细胞数减少（P<0.01）,G₁期细胞百分率升高（P<0.05）,S期细胞百分率降低（P<0.01）,G₂期细胞百分率降低（P<0.05）,细胞中Cyclin D1、Vimentin和N-钙黏蛋白表达水平均降低（P<0.05）;与对照质粒组比较,OE-hsa_circ-0009735组HGC-27细胞中hsa_circ_0009735表达水平明显升高（P<0.01）,LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值降低（P<0.01）,迁移细胞数减少（P<0.01）,G₁期细胞百分率降低（P<0.01）,S期细胞百分率升高（P<0.05）,G₂期细胞百分率升高（P<0.05）,E-钙黏蛋白表达水平降低（P<0.05）,Cyclin D1、Vimentin和N-钙黏蛋白表达水平均升高（P<0.05）。 结论 胃癌细胞中高表达hsa_circ_0009735可能促进EMT进程,影响细胞迁移和细胞周期,并抑制细胞自噬过程。     

miR-449a/b负反馈调节E2F1抑制胃癌细胞增殖

摘要：目的 探讨miR-449a/b在胃癌发生中的可能作用机制。方法 采用qRT-PCR方法检测了miR-449a/b和E2F1基因在胃癌细胞BGC-823和胃粘膜细胞GES-1表达情况;采用瞬时转染技术将miR-449a/b模拟物(mimic)以及mimic阴性对照分别转入胃癌细胞BGC-823中,qRT-PCR验证转染成功后,通过CCK-8法检测胃癌细胞的增殖能力,流式细胞术检测胃癌细胞凋亡的变化,细胞划痕实验检测胃癌细胞的迁移能力,Western blot方法检测miR-449a/b上调后其靶基因蛋白的表达水平;并通过转染E2F1过表达质粒和空质粒对照入胃癌细胞BGC-823,Western blot确定转染效率后,分别用qRT-PCR和数字PCR检测miR-449a/b的表达水平。结果 相比于正常胃粘膜细胞株GES-1,miR-449a/b在胃癌细胞株BGC-823中表达均下调（P<0.01）;过表达miR-449a/b可抑制胃癌细胞BGC-823增殖和迁移,并促进其凋亡（P<0.05）;过表达的E2F1可上调miR-449a/b的表达（P<0.001）,而上调miR-449a/b的表达,其直接靶基因CDK4、CDK6表达下调,并可通过CDKs-pRb-E2F1信号通路,间接下调E2F1蛋白的表达（P<0.01）。结论 miR-449a/b的低表达和E2F1的高表达均参与了胃癌的发生、发展,并且miR-449a/b能负反馈调节E2F1抑制胃癌细胞增殖。     

SHH在GES-1和其他胃癌细胞中表达差异性的比较

目的探讨SHH在GES-1、AGS、SGC-7901和BGC-823中的表达差异性。方法采用real time RT-PCR技术和Western blot方法研究SHH在GES-1、AGS、SGC-7901和BGC-823细胞mRNA和蛋白质水平上的表达。结果与GES-1相比较,SHH mRNA和SHH蛋白在AGS、SGC-7901和BGC-823中的表达明显减少,差异均具有显著性（P〈0.01）。结论 SHH信号通路在胃癌的发生中具有重要的作用。     

上调Mg2+/Mn2+依赖性蛋白磷酸酶1F表达对鼻咽癌HONE-1细胞增殖和迁移的影响

目的 探讨上调Mg²⁺/Mn²⁺依赖性蛋白磷酸酶1F（PPM1F）对鼻咽癌HONE-1细胞增殖、迁移的影响,并阐明其作用机制。 方法 鼻咽癌HONE-1细胞分为pcDNA3.1组（转染pcDNA3.1质粒）和pcDNA3.1-Flag-PPM1F组（转染pcDNA3.1-Flag-PPM1F质粒）。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）法和Western blotting法检测2组细胞中PPM1F和E-钙黏蛋白（E-cadherin）mRNA及蛋白表达水平,CCK-8法和克隆形成实验检测2组细胞增殖活性和克隆形成率,细胞划痕实验检测2组细胞划痕愈合率,Transwell实验检测2组细胞中迁移细胞数。 结果 与pcDNA3.1组比较,pcDNA3.1-Flag-PPM1F 组细胞中PPM1F mRNA表达水平明显升高（P<0.01）,且PPM1F蛋白表达量明显增加,细胞中E-cadherin mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,细胞增殖活性、克隆形成率和划痕愈合率明显降低（P<0.05或P<0.01）,迁移细胞数明显减少（P<0.05）。 结论 上调PPM1F表达能够抑制鼻咽癌HONE-1 细胞增殖和迁移,其机制可能与细胞间的黏附作用有关。     

下调ADAR1表达对人肺癌细胞增殖、迁移和上皮间质转化的影响

目的：探讨下调作用于RNA的腺苷酸脱氢酶1（ADAR1）对肺癌H1299和H520细胞增殖、迁移和上皮间质转化（EMT）的影响,并阐明其作用机制。方法：H1299和H520细胞系分为对照组（转染negative shRNA）和shADAR1组（转染shADAR1）。实时荧光定量PCR法和Western blotting法检测各组细胞中ADAR1 mRNA和蛋白表达水平,CCK-8法和克隆形成实验检测各组细胞增殖活性和克隆形成数,细胞划痕实验检测各组细胞划痕愈合率,Western blotting法检测各组细胞中E钙黏附蛋白（E-cadherin）和波形蛋白（vimentin）蛋白表达水平。结果：与对照组比较,shADAR1组的H1299和H520细胞中ADAR1 mRNA及蛋白表达水平均明显降低（P<0.05或P<0.01）。与对照组比较,shADAR1组H1299和H520细胞增殖活性、克隆形成数量和细胞划痕愈合率均明显降低（P<0.05或P<0.01）,H1299和H520细胞中E-cadherin蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,vimentin蛋白表达水平明显降低（P<0.01）。结论：下调ADAR1表达能够抑制肺癌细胞的增殖、迁移及EMT。     

白藜芦醇对胶质瘤U87细胞上皮-间质转化的抑制作用

目的：探讨白藜芦醇（Res）对胶质瘤U87细胞上皮-间质转化（EMT）、迁移和侵袭能力的调控作用,阐明Res对胶质瘤细胞EMT的抑制作用。方法：将胶质瘤U87细胞分为对照组（不做处理）、EMT组（TGF-β1诱导EMT）和Res处理组（Res处理EMT）。应用Western blotting法检测各组细胞中间质标志物（N-钙黏蛋白、β-连环蛋白和波形蛋白）、诱导EMT的转录因子（Snail、Slug和Twist1）以及基质金属蛋白酶（MMP）-2和MMP-9的蛋白表达水平。划痕愈合实验检测细胞迁移能力,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力。结果：与对照组比较,EMT组胶质瘤U87细胞的间质标志物（N-钙黏蛋白、β-连环蛋白和波形蛋白）、诱导EMT的转录因子（Snail、Slug和Twist1）和MMP-2、MMP-9蛋白表达水平均明显升高（P<0.05）;与EMT组比较,Res处理组上述蛋白表达水平明显下调（P<0.05和P<0.01）;40 μmol·L^-1 Res处理组效果较20 μmol·L^-1 Res处理组更明显（P<0.05）。EMT组细胞迁移率和侵袭率明显高于对照组（P<0.01）,而Res处理组胶质瘤细胞迁移率和侵袭率明显低于EMT组（P<0.01）。结论：Res能抑制胶质瘤U87细胞EMT,降低细胞的迁移和侵袭能力。     

沉默ZEB1基因对胶质瘤U87细胞上皮-间质转化的影响

目的：探讨沉默锌指E盒结合同源框1（ZEB1）基因对胶质瘤U87细胞间质标志物表达和细胞迁移的作用,阐明ZEB1对胶质瘤细胞上皮-间质转化（EMT）的影响。方法：将构建的ZEB1短发夹RNA（shRNA）干扰质粒（shZEB1#1和shZEB1#2）和对照质粒（shCtrl）转染至胶质瘤U87细胞,Western blotting法检测干扰效果。将胶质瘤U87细胞分为对照组（转染shCtrl的胶质瘤U87细胞）、EMT组[转染shCtrl的胶质瘤U87细胞用转化生长因子β1（TGF-β1）诱导EMT]和ZEB1基因沉默组（转染shZEB1的胶质瘤U87细胞用TGF-β1诱导EMT）。Western blotting法检测各组细胞中间质标志物（N-钙黏蛋白和波形蛋白）及基质金属蛋白酶9（MMP-9）的蛋白表达水平,划痕愈合实验检测各组细胞的迁移率。结果： Western blotting法检测,转染shZEB1#1和shZEB1#2的胶质瘤U87细胞中ZEB1蛋白表达水平较转染shCtrl的细胞明显降低（P<0.05或P<0.01）,shZEB1#2对ZEB1表达的抑制效果更明显,表明ZEB1已稳定转染到U87细胞。与对照组比较,EMT组胶质瘤U87细胞中N-钙黏蛋白、波形蛋白和MMP-9蛋白表达水平均明显升高（P<0.05或P<0.01）;与EMT组比较,ZEB1基因沉默组N-钙黏蛋白、波形蛋白和MMP-9蛋白表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）。EMT组细胞迁移率明显高于对照组（P<0.01）,而ZEB1基因沉默组细胞迁移率明显低于EMT组（P<0.01）。结论：沉默ZEB1基因表达可抑制胶质瘤U87细胞EMT,并降低细胞迁移能力,提示ZEB1可作为侵袭性胶质瘤治疗的重要靶标。     

芦荟苷通过下调HMGB1的表达抑制乳酸诱导的胃癌细胞增殖和迁移

目的 探讨芦荟苷对乳酸诱导胃癌细胞增殖和迁移的抑制作用及可能的分子机制。方法 胃癌BGC-823细胞常规培养,实验分为对照组、乳酸组、不同浓度芦荟苷和乳酸联合组,分组处理后的BGC-823细胞,EdU实验检测胃癌细胞的增殖;克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;划痕实验和tranwell 实验检测细胞迁移能力;Western blot检测CyclinD1、CyclinE1、PCNA、N-cadherin、E-cadherin、MMP-2、MMP-9和HMGB1的表达;ELISA检测HMGB1的释放。HMGB1干扰质粒和阴性对照质粒分别转染BGC-823细胞,转染48 h后用乳酸刺激细胞24 h,EdU和划痕实验分别检测细胞的增殖和迁移能力。结果 EdU结果表明,芦荟苷明显抑制乳酸诱导的胃癌细胞增殖;克隆形成结果表明,芦荟苷和乳酸联合处理的胃癌细胞,细胞克隆数目显著少于乳酸处理组（P<0.05）;划痕和transwell结果均表明,芦荟苷能够抑制乳酸诱导的胃癌细胞迁移（P<0.05）;Western blot结果表明,芦荟苷能够下调乳酸诱导的Cyclin D1,E1,PCNA,N-cadherin,MMP-2,MMP-9和HMGB1的表达;逆转乳酸对E-cadherin表达的抑制作用;ELISA结果发现,芦荟苷有效阻止了乳酸诱导的HMGB1释放（P<0.05）。EdU和划痕结果表明,敲除HMGB1的BGC-823细胞,乳酸诱导的增殖和迁移与阴性质粒转染组相比明显下降。结论 芦荟苷通过下调乳酸诱导的HMGB1表达、释放以及增殖和迁移相关蛋白的表达,抑制乳酸诱导的胃癌细胞的增殖和迁移。     

Hsa_circ_0001947对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

［摘要］目的: 探讨环状RNA hsa_circ_0001947(circ_0001947)在胃腺癌细胞和组织中的表达及其对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法: 通过高通量测序筛选出5例临床胃腺癌、癌旁组织标本中差异表达的5种环状RNA,挑选升高表达最明显的circ_0001947继续研究。实时荧光定量PCR检测circ_0001947在75例临床胃腺癌、癌旁组织以及胃癌BGC-823,HGC-27,MGC-803,SGC-7901细胞株、正常人胃黏膜上皮GES-1细胞株中的表达。将细胞株BGC 823、SGC 7901各分为两组,设si circ_0001947组(转染si RNA)和si NC组(转染无关序列)。细胞培养0、12、24、48、72 h后,采用CCK 8实验测定细胞活力。采用克隆形成实验测定细胞增殖能力;流式细胞术测定细胞凋亡率,蛋白印迹测定凋亡相关蛋白Cleaved-caspase-3,Bcl-2和Bax表达水平。结果： 高通量测序筛选出的胃腺癌组织中差异表达的环状RNA为hsa_circ_0000033,hsa_circ_0000038,hsa_circ_0004916,hsa_circ_0058092,hsa_circ_0001947。circ_0001947在胃腺癌组织中的表达明显高于癌旁组织(P<0.01),在胃癌BGC-823,HGC-27,MGC-803,SGC-7901细胞株中表达量明显高于正常胃黏膜上皮GES-1细胞株(P均<0.05)。si RNA能够明显抑制BGC 823、SGC-7901细胞中circ_0001947表达。si-circ_0001947组BGC 823,SGC-7901细胞光密度值明显低于si-NC组(P均<0.01);si circ_0001947组BGC 823,SGC-7901细胞克隆形成率和细胞凋亡率明显低于si NC组(P均<0.01)。与si-NC组相比,si-circ_0001947组BGC 823,SGC 7901细胞中Cleaved caspase-3 及Bax表达明显上调,Bcl 2表达明显下调(P均<0.05)。结论： circ_0001947在胃癌细胞和组织中呈高表达,干扰circ_0001947表达可抑制胃癌细胞增殖并诱导其凋亡。     

Trop2过表达对人胃黏膜上皮细胞GES-1迁移能力的影响及机制

目的:观察Trop2过表达对人胃黏膜上皮细胞GES-1迁移能力的影响,并对其作用机制进行初步探讨?方法:real-time PCR和Western blot检测GES-1细胞中Trop2 mRNA和蛋白的表达水平;构建过表达Trop2质粒及空载对照质粒并转染GES-1细胞,检测转染效率;细胞划痕实验和Transwell迁移实验检测过表达Trop2后GES-1细胞迁移能力的变化情况;Western blot检测过表达Trop2后GES-1细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关分子[上皮细胞标志E-钙黏附蛋白(E-cadherin),间皮细胞标志纤维连接蛋白(fibronectin)?波形蛋白(vimentin)]的变化情况?结果:相比胃癌细胞株BGC823和MGC803,Trop2在GES-1细胞中的mRNA和蛋白表达水平均较低;过表达Trop2的质粒转染GES-1后,Trop2的mRNA表达水平与未转染组相比提高(6.18 ± 0.52)倍,而空载对照组和未转染组相比无明显变化,蛋白水平的变化情况和mRNA相似;细胞划痕实验表明,转染72 h后,过表达组细胞迁移率达到95%,空载对照组细胞迁移率为50%,两组相比差异有统计学意义(P﹤0.05);Transwell迁移实验发现,转染24 h后,过表达组穿膜细胞数为(87 ± 6)个,而空载对照组为(41 ± 6)个,两组相比差异有统计学意义(P﹤0.05);Western blot检测过表达Trop2后,随着Trop2蛋白表达量增高,GES-1细胞E-cadherin表达下调,fibronectin和vimentin表达上调?结论:Trop2过表达可以提高胃黏膜上皮细胞的迁移能力,其机制与Trop2促进胃黏膜上皮细胞EMT有关?     

生长抑制因子4在人胃癌中的表达及其意义

目的：探讨多种人胃癌细胞株中及胃癌组织中生长抑制因子4（ING4）的表达及其意义。方法：体外培养3种分化不同的胃癌细胞MKN-1（高分化）、SGC-7901（中分化）、BGC-823（低分化）以及人胃黏膜细胞GES-1,收集绍兴第二医院病理科40例原发胃癌患者的石蜡标本。以RT-PCR、Western Blot法分别检测4种细胞株ING4 mRNA及其蛋白表达水平。免疫组织化学法检测胃癌组织及癌旁组织中ING4蛋白表达情况。结果：SGC-7901、BGC-823组中ING4 mRNA及其蛋白表达水平较MKN-1、GES-1组明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）,BGC-823组中ING4 mRNA及其蛋白表达水平较SGC-7901组明显降低,差异有统计学意义（P＜0.05）,MKN-1组与GES-1组之间差异无统计学意义（P＞0.05）。胃癌组织中ING4表达阳性率明显低于癌旁组织,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：ING4作为抑癌基因参与了胃癌的发生,且与胃癌分化程度有关。     

最小努力(惰性)原则与慢性病预防行为选择

目的:探讨长链非编码RNA MEG3在胃癌组织及细胞系中的表达水平,以及过表达MEG3对胃癌细胞增殖能力的影响,并探索其可能的作用机制?方法:用定量反转录PCR(qRT-PCR)技术检测胃癌组织及细胞系中MEG3的表达水平;通过转染pcDNA-MEG3上调MEG3的表达水平,并通过qRT-PCR检测转染效率?用MTT和克隆形成试验检测上调MEG3的水平对BGC-823细胞和MGC-803细胞的增殖能力的影响,Western blot检测这两种细胞中上调MEG3的水平对p53蛋白的表达水平的影响?结果:相比正常胃组织及细胞,在胃癌组织和细胞中MEG3的表达出现显著下调,SGC7901?MGC-803和BGC-823细胞中MEG3的表达水平分别是正常胃上皮细胞GES-1中的73.6%?42.0%和27.1%(P < 0.05)?BGC-823细胞和MGC-803细胞中转染pcDNA-MEG3能显著上调MEG3的表达,MEG3的表达水平分别为对照组的252倍和311倍(P < 0.05);MTT和克隆形成试验显示,上调MEG3的表达能降低BGC-823细胞和MGC-803细胞的增殖能力?Western blot实验显示,转染了pcDNA-MEG3的MGC-803和BGC-823细胞中p53的表达相较对照组中显著增加?结论:胃癌组织及细胞中MEG3的表达下调,且这可能通过抑制p53蛋白的激活从而促进胃癌细胞增殖,影响胃癌的发生和发展?