miR-140-3p通过靶向趋化因子受体4和抑制JAK2/STAT3通路减轻缺氧复氧诱导的心肌细胞损伤

目的]探讨miR-140-3p对缺氧复氧(H/R)诱导的心肌细胞损伤的影响及其机制。[方法]构建体外心肌细胞H/R模型,使用miR-140-3p mimics、趋化因子受体4(CXCR4)过表达质粒转染H9c2细胞。噻唑蓝法检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;反转录聚合酶链反应和Western blot检测细胞中miR-140-3p、CXCR4、Janus蛋白酪氨酸激酶2(JAK2)/信号转导和转录激活因子3(STAT3)通路的激活以及凋亡相关蛋白的表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-140-3p与CXCR4的靶向关系。相应试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)的活性和炎症因子、活性氧(ROS)的水平。[结果]体外H/R可抑制miR-140-3p的表达,上调CXCR4表达和JAK2/STAT3通路的磷酸化,诱导H9c2细胞凋亡而抑制H9c2细胞增殖,促进炎症因子和ROS的释放并上调LDH的活性。miR-140-3p可以通过靶向CXCR4 3′UTR抑制CXCR4表达,从而抑制JAK2/STAT3通路的磷酸化激活,抑制炎症因子和ROS的释放,下调LDH的活性,促进H9c2细胞增殖而抑制其凋亡。[结论]miR-140-3p可能通过靶向抑制CXCR4而抑制JAK2/STAT3通路,从而减轻缺血再灌注诱导的心肌细胞损伤。     

微小核糖核酸-125b-5p抑制Caspase 2蛋白酶活性缓解脂多糖诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激的研究

目的:MicroRNAs是一种转录后调控靶基因的非编码小RNA,被认为是心脏功能和疾病的重要调节剂,心脏损伤伴随着MicroRNAs表达的动态变化。本研究以脂多糖(LPS)诱导损伤制备H9c2心肌细胞氧化应激性损伤模型,探究miR-125b-5p对Caspase 2蛋白酶活性和LPS诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激的影响。方法:采用LPS诱导损伤制备H9c2心肌细胞氧化应激性损伤模型,将miR-125b-5p转染于LPS诱导的H9c2心肌细胞中。RT-PCR检测miR-125b-5p和Caspase 2的表达水平;荧光素酶报告实验确定miR-125b-5p和Caspase 2的靶向关系;流式细胞术检测细胞凋亡;免疫印迹检测Caspase-2,Caspase-3,Caspase-9,Survivin,Bax/Bcl-2的蛋白表达;试剂盒检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)活性以及丙二醛(MDA)含量。结果:用LPS诱导处理能显著降低miR-125b-5p的表达水平(P0.05),促进Caspase 2表达(P0.05)。荧光素酶报告实验表明Caspase 2上存在miR-125b-5p的结合位点,miR-125b-5p能靶向抑制Caspase 2活性(P0.05)。miR-125b-5p可显著抑制Caspase 2蛋白表达水平(P0.05)。miR-125b-5p能明显促进H9c2心肌细胞增殖(P0.05)。miR-125b-5p能显著抑制H9c2心肌细胞凋亡(P0.05)。同时,miR-125b-5p还能显著抑制裂解的caspase-3、caspase-9和Bax/Bcl-2蛋白水平(P0.05),促进Survivin的蛋白表达(P0.05)。miR-125b-5p可明显降低培养液中LDH活性和细胞内MDA、GSH含量、增加胞内SOD活性(P0.05)。结论:miR-125b-5p通过抑制Caspase 2蛋白酶活性,促进心肌细胞增殖,降低心肌细胞凋亡率,缓解了LPS诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激,表明miR-125b-5p对LPS造成的心肌细胞损伤具有保护作用。     

miR-20a-5p通过靶向MRTFA缓解ox-LDL诱导的内皮细胞损伤

目的探讨miR-20a-5p是否可通过靶向心肌素相关转录因子A(MRTFA)缓解氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤。方法 RT-qPCR检测miR-20a-5p在不同剂量不同时间oxLDL诱导的HUVEC中的表达; MTT法、流式细胞术和Western blot检测过表达miR-20a-5p和MRTFA对ox-LDL诱导HUVEC增殖和凋亡的影响;乳酸脱氢酶(LDH)测试盒测定过表达miR-20a-5p对ox-LDL诱导HUVEC中LDH释放的影响; ELISA法检测过表达miR-20a-5p和MRTFA对ox-LDL处理的HUVEC中氧化应激指标超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)、内皮型一氧化氮合酶(e NOS)和丙二醛(MDA)的影响;荧光素酶报告和Western blot实验验证miR-20a-5p与MRTFA的靶向关系。结果 miR-20a-5p的表达随着ox-LDL诱导时间和剂量的增加而逐渐下降;过表达miR-20a-5p可部分逆转ox-LDL诱导对HUVEC增殖和凋亡的影响;上调miR-20a-5p可部分修复ox-LDL诱导对HUVEC氧化应激损伤; MRTFA是miR-20a-5p的靶基因;在ox-LDL诱导HUVEC中,MRTFA过表达可逆转miR-20a-5p对ox-LDL诱导HUVEC细胞增殖和凋亡、氧化应激损伤指标的影响。结论 miR-20a-5p靶向MRTFA修复ox-LDL诱导的HUVEC损伤。     

沉默CDKN2B-AS1调控miR-98-5p、STAT3对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的影响

目的]探讨细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B反义RNA 1(CDKN2B-AS1)是否通过靶向miR-98-5p影响高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤。 [方法]将HUVEC分为对照组(含5 mmol/L葡萄糖的DMEM培养)、模型组(含33.5 mmol/L葡萄糖的DMEM培养)、模型＋si-NC组、模型＋si-CDKN2B-AS1组、模型＋miR-NC组、模型＋miR-98-5p模拟物组、模型＋si-CDKN2B-AS1＋anti-miR-NC组、模型＋si-CDKN2B-AS1＋anti-miR-98-5p组。运用实时定量聚合酶链反应检测HUVEC的CDKN2B-AS1、miR-98-5p表达;Western blot检测信号转导及转录激活因子3(STAT3)蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)试剂盒检测SOD、LDH、MDA水平。双荧光素酶报告实验分析miR-98-5p与CDKN2B-AS1、STAT3的靶向结合。 [结果]高糖使HUVEC中CDKN2B-AS1、STAT3表达、凋亡率、LDH、MDA水平升高,miR-98-5p表达、SOD水平降低(P＜0.05)。沉默CDKN2B-AS1或过表达miR-98-5p后,高糖诱导的HUVEC中CDKN2B-AS1、STAT3表达、凋亡率、LDH、MDA水平降低,miR-98-5p表达、SOD水平升高(P＜0.05)。双荧光素酶报告实验显示,CDKN2B-AS1靶向miR-98-5p,miR-98-5p靶向STAT3。抑制miR-98-5p逆转了沉默CDKN2B-AS1对高糖诱导的HUVEC凋亡、氧化应激、STAT3蛋白表达的抑制作用。 [结论]沉默CDKN2B-AS1通过调节miR-98-5p/STAT3轴抑制高糖诱导的HUVEC氧化应激和凋亡,CDKN2B-AS1可作为糖尿病相关血管并发症的候选治疗靶标。     

miR-499a-5p通过靶向APC减轻氧化应激对心肌细胞的损伤

目的研究miR-499a-5p对过氧化氢(H_2O_2)诱导的心肌细胞H9c2增殖、凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测不同浓度H_2O_2(100、200、400、800μmol/L)处理6 h的H9c2细胞的存活率,筛选400μmol/L H_2O_2处理的H9c2细胞作为模型组。将模型组细胞分为miR-NC组、miR-499a-5p组、si-NC组、si-APC组、miR-499a-5p+pcDNA组、miR-499a-5p+pcDNA-APC组,用流式细胞术、免疫印迹(Western blot)、酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞的存活率、凋亡率、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及增殖凋亡相关蛋白增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白依靠性激酶抑制剂(P21)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关的X基因(Bax)的表达。结果 H_2O_2(100、200、400、800μmol/L)呈浓度依赖性抑制H9c2细胞的存活,最适浓度为400μmol/L。模型组细胞中miR-499a-5p表达显著降低,APC表达显著升高;过表达miR-499a-5p、抑制APC均可明显减轻H_2O_2诱导的H9c2细胞的增殖抑制、凋亡促进和氧化应激作用,并且miR-499a-5p还可靶向抑制APC。过表达APC逆转了miR-499a-5p对H_2O_2诱导的心肌细胞损伤。结论 miR-499a-5p可调控H_2O_2诱导的心肌细胞增殖、凋亡和氧化应激,其机制与靶向抑制APC有关,将可为氧化应激引起的心肌细胞损伤的治疗提供新靶点。     

miR-181a-5p靶向PIAS1对雨蛙肽诱导的急性胰腺炎腺泡细胞损伤的影响

背景急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)引起的急性炎症对人们健康的危害性极大,严重时会危及生命.其发病机制复杂,尚未完全清楚,研究发现miRNA参与了AP的发病过程.研究发现miR-181a-5p可抑制癌细胞迁移、侵袭和血管生成; miR-181a-5p还能抑制胃癌细胞增殖、侵袭,转移和上皮间充质转化.抑制miR-181a-5p表达可通过负向靶向INPP5A抑制细胞增殖和侵袭,增强宫颈癌细胞凋亡. miR-181a可抑制胰腺癌细胞系的生长、减少迁移,增加凋亡.但miR-181a-5p在AP的增殖凋亡中的影响及作用机制尚不清楚.目的研究miR-181a-5p对AP腺泡细胞损伤的影响及潜在的作用机制.方法用100nmol/L的雨蛙肽处理大鼠胰腺腺泡AR42J和MPC-83构建AP模型,设置Con组、Caerulein组、miR-NC组(转染miR-NC)、miR-181a-5p组(转染miR-181a-5p mimics)、anti-miR-NC组(转染antimiR-NC)、anti-miR-181a-5p组(转染anti-miR-181a-5p)、Caerulein+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC后进行Caerulein处理)、Caerulein+anti-miR-181a-5p组(转染anti-miR-181a-5p后进行Caerulein处)、Caerulein+pcDNA组(转染pcDNA后进行Caerulein处理)、Caerulein+pcDNA-PIAS1组(转染pcDNA-PIAS1后进行Caerulein处理)、Caerulein+anti-miR-181a-5p+si-NC组(anti-miR-181a-5p和si-NC共转染后进行Caerulein处理)、Caerulein+anti-miR-181a-5p+siPIAS1组(anti-miR-181a-5p和si-PIAS1共转染后进行Caerulein处理),用脂质体法转染至AR42J和MPC-83细胞.酶联免疫吸附试验法检测雨蛙肽处理AR42J和MPC-83细胞的TNF-α和IL-6的表达;qRT-PCR检测AR42J和MPC-83细胞中miR-181a-5p、PIAS1mRNA的表达水平; Western Blot检测蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性.结果雨蛙肽处理AR42J和MPC-83细胞后, TNF-α和IL-6的表达显著升高; miR-181a-5p的表达水平显著升高;PIAS1 mRNA和蛋白的表达水平显著降低. miR-181a-5p抑制表达和PIAS1过表达抑制TNF-α和IL-6的表达,抑制细胞凋亡. miR-181a-5p靶向负调控PIAS1;抑制PIAS1表达逆转了抑制miR-181a-5p对雨蛙肽处理AR42J和MPC-83细胞的凋亡抑制作用.结论抑制miR-181a-5p表达可以抑制雨蛙肽诱导的AP腺泡细胞损伤,其机制可能与靶向调控PIAS1有关.可为AP诊断和治疗提供新靶点和新思路.     

miR-376b-3p通过靶向FGF21加重缺氧复氧心肌细胞的损伤

目的 探讨miR-376b-3p对缺氧复氧(H/R)心肌细胞增殖、凋亡的影响及机制。方法 培养心肌细胞H9c2,缺氧复氧法体外模拟H/R细胞损伤,建立心肌细胞损伤模型。用流式细胞术、免疫印迹(Western blot)、酶联免疫吸附(ELISA)检测正常对照组、H/R组、anti-miR-NC组、anti-miR-376b-3p组、anti-miR-376b-3p+si-NC组、anti-miR-376b-3p+si-成纤维细胞生长因子21(FGF21)组细胞凋亡率、凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达和肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素17(IL-17)情况。双荧光素酶报告基因实验检测细胞的荧光活性。结果 成功建立缺氧复氧损伤的细胞模型;模型组细胞中miR-376b-3p表达显著升高,FGF21表达显著降低,并且抑制miR-376b-3p可以减轻损伤细胞的凋亡和TNF-α、IL-6、IL-17的含量,以及上调Bcl-2,下调Bax。此外,miR-376b-3p还可靶向FGF21 mRNA。抑制FGF21后,抑制miR-376b-3p对缺氧复氧损伤的H9c2细胞的保护作用被减弱。结论 miR-376b-3p可促进缺氧复氧心肌细胞的凋亡和炎性反应,其机制与靶向FGF21 mRNA相关。     

miR-216a-5p调控XIAP对急性胰腺炎腺泡细胞增殖、凋亡的影响

背景重症急性胰腺炎(acute pancreatitis, AP)是消化系统常见的危重急症,临床救治难度大,病死率高,严重危及患者生命.近几年来多种miRNA在AP中的差异表达,与其发生发展及诊断和预后密切相关,进一步探索其在AP发生发展、并发症等各环节的作用有助于为AP的诊断和治疗提供新的思路和方法.研究发现miR-216a-5p通过下调MMP16可抑制肺癌细胞的侵袭; miR-216a-5p通过靶向抑制PAK2基因可抑制膀胱癌细胞的增殖能力,促进细胞凋亡. miR-216a-5p可抑制小细胞肺癌的恶性进展,影响前列腺癌细胞的增殖、迁移和宫颈癌细胞的肿瘤发生.仅发现miR-216a在AP患者外周血中高表达,但miR-216a-5p在AP的增殖凋亡中的影响及作用机制尚不清楚.目的研究miR-216a-5p对AP腺泡细胞增殖、凋亡的影响及潜在的作用机制.方法用雨蛙素(caerulein, CAE)处理大鼠胰腺腺泡AR42J构建AP模型,设置miR-NC组(转染miR-NC)、miR-216a-5p组(miR-216a-5pmimics)、anti-miR-NC组(转染antimiR-NC)、anti-miR-216a-5p组(转染anti-miR-216a-5p)、pcDNA3.1组(转染pc DNA3.1)、pcDNA3.1-XIAP组(转染pcDNA3.1-XIAP)、anti-miR-216a-5p+si-NC组(共转染anti-miR-216a-5p和si-NC)、anti-miR-216a-5p+si-XIAP(共转染anti-miR-216a-5p和si-XIAP)组,均用脂质体法转染. qRT-PCR检测AR42J细胞中miR-216a-5p的表达水平; Western Blot检测蛋白表达; MTT法检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性.结果CAE处理AR42J细胞后,miR-216a-5p的表达水平显著升高(P0.05).抑制表达miR-216a-5p和过表达XIAP细胞活性显著升高,细胞凋亡率显著降低, Cyclin D1、Bcl-2蛋白的表达水平显著升高,P21、Bax蛋白的表达水平显著下降(P0.05). miR-216a-5p靶向负调控XIAP;抑制XIAP表达逆转了抑制miR-216a-5p对CAE处理的AR42J细胞增殖促进、凋亡抑制的作用.结论抑制miR-216a-5p表达可以抑制胰腺炎腺泡细胞凋亡,促进细胞增殖,其机制可能与靶向调控XIAP有关.可为AP诊断和治疗提供新靶点和新思路.     

miR-145-5p对肾缺血/再灌注损伤大鼠的肾脏保护作用及其机制

目的 观察miR-145-5p对肾缺血/再灌注(I/R)损伤大鼠肾损伤的影响,并探讨其肾脏保护作用是否与通过蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白(AKT/mTOR)信号通路而调控自噬水平有关。方法 将40只SD大鼠随机分成Sham组、I/R组、I/R+agomir组、I/R+agomir+LY组,每组10只;除Sham组外均建立肾I/R模型,I/R+agomir组和I/R+agomir+LY组在建模操作前3 d经尾静脉注射miR-145-5p agomir 10 nmol/L,I/R+agomir+LY组同时腹腔注射AKT特异性抑制剂TLY294002 50 mg/kg,Sham组和I/R组经尾静脉注射等量PBS溶液。各组分组处理2 d,比较血清尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)水平及肾组织损伤评分,肾组织miR-145-5p表达,肾组织细胞凋亡率及促凋亡蛋白Bax、抗凋亡蛋白Bcl-2表达,肾组织自噬相关蛋白LC3B荧光表达强度、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、肌球蛋白样Bcl-2结合蛋白(Beclin1)、自噬相关蛋白5(Atg5)表达,肾组织AKT/mTOR通路相关蛋白p-AKT/AKT、p-mTOR/...     

长链非编码RNA牛磺酸上调基因1靶向miR-34a-5p/沉默信息调节因子2相关酶1对糖尿病肾脏疾病氧化应激损伤调控作用的研究

目的探讨长链非编码RNA牛磺酸上调基因1(lncRNA TUG1)靶向miR-34a-5p/沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)对DKD氧化应激损伤的调控作用。方法采用体外实验,将小鼠肾小球系膜细胞分为正常对照组(Con)、高糖组(HG)、过表达空白对照组(pcDNA-NC)、过表达TUG1组(pcDNA-TUG1)、沉默空白对照组(si-NC)、沉默TUG1组(si-TUG1),沉默SIRT1组(si-SIRT1)、模拟物空白对照组(mimics NC)、miR-34a-5p模拟物组(miR-34a-5p mimics)、抑制空白对照组(inhibitor NC)、miR-34a-5p抑制组(miR-34a-5p inhibitor)、过表达TUG1联合miR-34a-5p模拟物组(pcDNA-TUG1+miR-34a-5p mimics)、过表达TUG1联合沉默SIRT1组(pcDNA-TUG1+si-SIRT1);体内实验将小鼠分为假手术组(S)、模型组(DKD)、慢病毒载体(LV)空白对照组(LV-NC)、LV-TUG1组、LV-TUG1+miR-34a-5p组和LV-TUG1+LV-si-SIRT1组。采用qRT-PCR检测TUG1、miR-34a-5p、SIRT1 mRNA水平,ELISA法检测丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS)含量,HE染色观察肾组织病理学改变。结果与Con组比较,HG组TUG1表达水平降低(P0.01)。与S组比较,DKD组TUG1表达水平降低(P0.01)。过表达TUG1后,肾组织和肾小球系膜细胞ROS、MDA表达水平降低(P0.01),SOD表达水平升高(P0.01)。沉默SIRT1或过表达miR-34a-5p均可逆转过表达TUG1对氧化应激损伤的抑制作用。结论 TUG1靶向miR-34a-5p/SIRT1调控DKD氧化应激损伤。     

微小RNA-124-3p通过靶向抑制RIPK1的表达对缺氧/复氧心肌细胞损伤中的保护作用及其机制研究

目的探讨微小RNA-124-3p(miR-124-3p)调控受体相互作用蛋白激酶1(RIPK1)对心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用。方法大鼠心肌细胞随机分为Con组、H/R组、H/R+miR-124-3p组、H/R+miR-NC组、H/R+si-RIPK1组、H/R+siNC组、H/R+miR-124-3p+pcDNA组、H/R+miR-124-3p+pcDNA-RIPK1组。采用qRT-PCR法检测miR-124-3p与RIPK1 mRNA表达水平,Western blot法检测RIPK1蛋白表达情况,双荧光素酶报告基因检测验证miR-124-3p与RIPK1的靶向关系。流式细胞术检测细胞凋亡能力变化,Western blot法检测Bcl-2、Bax蛋白表达情况。检测乳酸脱氢酶(LDH)活性及丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量。结果 H/R组心肌细胞miR-124-3p表达水平显著低于Con组(P0.05),而RIPK1 mRNA及蛋白水平均显著升高(P0.05);H/R组心肌细胞LDH活性、MDA水平及Bax蛋白水平均显著高于Con组(P0.05),细胞凋亡率显著升高(P0.05),而SOD水平及Bcl-2蛋白水平均显著低于Con组(P0.05);miR-124-3p过表达与抑制RIPK1表达可降低细胞凋亡率、LDH活性、MDA水平及Bax蛋白水平,而提高SOD水平及Bcl-2蛋白水平;双荧光素酶基因检测结果证实RIPK1是miR-124-3p的靶基因;RIPK1过表达逆转了miR-124-3p过表达对H/R心肌细胞损伤的作用。结论MiR-124-3p过表达可通过下调RIPK1表达进而减轻心肌细胞H/R损伤进而对心肌细胞发挥保护作用。     

miR-92a-3p靶向GPR124调控糖尿病肾病足细胞损伤的机制

目的研究miR-92a-3p对糖尿病肾病足细胞损伤的影响及其机制。方法构建高糖(30 mmol/L)诱导的小鼠足细胞损伤模型;将高糖+anti-miR-92a-3p组(转染anti-miR-92a-3p)、高糖+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、高糖+pcDNA组(转染pcDNA)、高糖+pcDNA-GPR124组(转染pcDNA-GPR124)、高糖+anti-miR-92a-3p+si-con组(共转染pcDNA-GPR124和si-con)、高糖+anti-miR-92a-3p+si-GPR124组(共转染pcDNA-GPR124和si-GPR124)至小鼠足细胞,用30 mmol/L高糖处理48 h。Western印迹检测各组细胞中结蛋白(Desmin)、G蛋白耦联受体(GPR)124的蛋白表达;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;qRT-PCR检测各组细胞中miR-92a-3p、GPR124的表达;双荧光素酶报告基因检测实验检测各组细胞荧光活性。结果与对照组相比,高糖处理组小鼠足细胞中Desmin蛋白表达和细胞凋亡率均显著升高,miR-92a-3p表达明显升高,GPR124表达明显降低(P<0.05);抑制miR-92a-3p、过表达GPR124均可下调Desmin蛋白表达和细胞凋亡率;miR-92a-3p可抑制WT-GPR124足细胞的荧光活性,且负调控GPR124的蛋白表达;敲减GPR124可逆转抑制miR-92a-3p对高糖诱导的小鼠足细胞的保护作用。结论抑制miR-92a-3p可保护高糖诱导的小鼠足细胞损伤,其机制可能与靶向GPR124有关,将可为糖尿病肾病的治疗提供新方向。     

母体表达基因3通过miR-125a-5p/TET2途径抑制HepG2细胞载脂蛋白(a)的表达

目的研究发现母体表达基因3(MEG3)对HepG2细胞载脂蛋白(a)[Apo(a)]表达的调控作用及其机制。方法用荧光素酶报告系统分析MEG3与miR-125a-5p的靶向性结合。采用实时定量PCR(qRT-PCR)检测高表达Apo(a)的HepG2细胞和低表达Apo(a)的SMMC7721细胞中MEG3的表达情况;向HepG2细胞转染MEG3,Western blot和qRT-PCR检测Apo(a)、TET2表达情况;采用小干扰RNA技术沉默TET2的表达。结果 (1)MEG3与hsa-miR-125a-5p能互补性结合,荧光素酶报告基因系统分析结果证实了MEG3与hsa-miR-125a-5p结合的存在。(2)miR芯片结果表明,在HepG2细胞中,hsa-miR-125a-5p表达水平升高,是对照组的近1.5倍,MEG3在HepG2细胞和SMMC7721细胞中均有表达,但前者MEG3的表达水平显著低于后者。(3)MEG3抑制Apo(a)表达。(4)MEG3下调miR-125a-5p的表达,上调TET2的表达; miR-125a-5p的mimics可逆转MEG3对Apo(a)的下调作用及TET2的表达,但可被miR-125a-5p的抑制剂逆转; TET2沉默可逆转MEG3对Apo(a)的下调作用。结论 MEG3通过miR-125a-5p/TET2途径下调HepG2细胞Apo(a)的表达。     

miR-155靶向SIRT1调控缺氧/复氧心肌细胞的活力、凋亡和氧化应激

目的研究miR-155对缺氧/复氧(H/R)心肌细胞的活力、凋亡和氧化应激的影响,并探讨其机制。方法运用RT-qPCR检测细胞中miR-155、组蛋白去乙酰化酶(SIRT)1表达;H/R+miR-NC inhibitors组(转染miR-NC inhibitors)、H/R组(未转染H/R H9C2细胞)和Control组(未转染H9C2细胞)、H/R+miR-155 inhibitors+SIRT1 blocker组(miR-155 inhibitors和SIRT1 blocker共转染)、H/R+miR-155 inhibitors组(转染miR-155 inhibitors),均采用脂质体转染H/R H9C2细胞;Western印迹检测裂解的半胱天冬酶半胱天冬酶(cleaved-caspase)-3、B细胞淋巴瘤/白血病蛋白(Bcl)-2、SIRT1的蛋白水平;噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;酶联免疫吸附试验(ELISA)实验检测细胞中乳酸盐脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)的含量;双荧光素酶报告基因检测实验检测细胞的荧光素酶活性。结果与Control组相比,H/R组细胞的miR-155表达显著升高(P<0.05),且敲减miR-155表达增加大鼠原代心肌细胞活力,抑制H9C2细胞凋亡,促进H9C2细胞的氧化应激。SIRT1为miR-155的靶标,且敲减SIRT1表达可逆转敲减miR-155对细胞的促生长,抑凋亡和促氧化作用。结论 miR-155可抑制大鼠原代心肌细胞的活力、促进H9C2细胞凋亡及抑制氧化应激,可能与靶向SIRT1有关,将为miR-155靶向治疗心脏病提供依据。     

普鲁卡因通过miR-15a-5p/PI3K-AKT3途径调控乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制

目的探讨普鲁卡因对乳腺癌细胞MCF-7增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法以不同浓度(0.5、1.0、2.5、5.0、10.0 mmol/L)普鲁卡因处理MCF-7细胞,噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖;5.0 mmol/L普鲁卡因处理MCF-7细胞48 h后,Transwell法检测迁移和侵袭,实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-15a-5p的表达。转染miR-15a-5p mimic至MCF-7细胞,检测细胞增殖、迁移和侵袭。靶基因预测软件预测miR-15a-5p和AKT3靶向结合位点,双荧光素酶报告基因实验检测二者靶向关系。转染miR-15a-5p inhibitor至MCF-7细胞,并用5.0 mmol/L普鲁卡因处理48 h,检测细胞增殖、迁移和侵袭,Western印迹检测蛋白激酶B(AKT)3的表达。结果与Con组相比,普鲁卡因能明显抑制MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.001),促进细胞中miR-15a-5p的表达(P<0.01)。过表达miR-15a-5p可抑制MCF-7细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.001,P<0.01,P<0.05)。双荧光素酶报告基因实验证实miR-15a-5p和AKT3的靶向结合有关。抑制miR-15a-5p表达减弱了普鲁卡因对MCF-7细胞增殖、迁移、侵袭及AKT3表达的抑制作用(P<0.05)。结论普鲁卡因能够抑制乳腺癌细胞MCF-7的增殖、迁移和侵袭能力,其机制可能与调控miR-15a-5p/磷脂酰肌激-3-激酶(PI3K)-AKT3途径有关。     

MiR-193a-3p通过调控S100A4表达对oxLDL诱导的血管内皮细胞损伤影响

目的 探讨miR-193a-3p对氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的血管内皮细胞损伤的影响及其作用机制。方法 体外培养人脐静脉血管内皮细胞株(EVC-304),使用oxLDL处理EVC-304细胞。采用qRT-PCR与Western blot分别检测miR-193a-3p、S100钙结合蛋白A4(S100A4)的表达水平。分别将miR-NC、miR-193a-3p mimics、si-NC、si-S100A4、miR-193a-3p mimics与pcDNA、miR-193a-3p mimics与pcDNA-S100A4转染至oxLDL诱导的EVC-304细胞。采用硫代巴比妥酸法检测MDA含量,采用黄嘌呤氧化酶法检测SOD活性,检测GSH-Px活性;流式细胞术检测各组细胞凋亡率;双荧光素酶报告实验验证miR-193a-3p与S100A4的靶向关系;Western blot检测细胞中B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白表达量。结果 OxLDL处理后miR-193a-3p的表达水平降低(P0.05),S100A4的表达水平升高(P0.05),MDA的含量升高(P0.05),SOD、GSH-Px的活性降低(P0.05),Bcl-2蛋白水平降低(P0.05),细胞凋亡率升高(P0.05),Bax蛋白水平升高(P0.05);转染miR-193a-3p mimics后可降低MDA含量、细胞凋亡率及Bax蛋白水平(P0.05),提高SOD、GSH-Px活性及Bcl-2蛋白水平(P0.05),而转染si-S100A4与其作用相似;双荧光素酶报告实验证实miR-193a-3p能够靶向结合S100A4;S100A4过表达能够明显减弱miR-193a-3p过表达对oxLDL诱导的血管内皮细胞损伤的作用。结论 MiR-193a-3p可能通过靶向调控S100A4表达而减轻oxLDL诱导的血管内皮细胞氧化损伤,并抑制细胞凋亡。     

长链非编码RNA NORA影响脂多糖诱导的心肌细胞炎症反应及细胞凋亡损伤的机制研究

目的：探讨长链非编码RNA NORAD(LncRNA NORAD)是否通过调控微小RNA-378a-3p(miR-378a-3p)表达影响脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞炎症反应及细胞凋亡。方法：体外培养大鼠心肌细胞H9C2,并将细胞分为6组：对照组、LPS组(10μg/mL LPS)、LPS+阴性序列组(10μg/mL LPS+转染阴性序列si-NC)、LPS+干扰NORAD组(10μg/mL LPS+转染干扰NORAD)、LPS+干扰NORAD+miR阴性对照组(10 g/mL LPS+共转染干扰NORAD和miR阴性对照)、LPS+干扰NORAD+miR-378a-3p抑制剂组(10μg/mL LPS+共转染干扰NORAD和miR-378a-3p抑制剂),除对照组细胞外，其余组细胞LPS刺激24 h。用实时荧光定量聚合酶链反应检测各组NORAD、miR-378a-3p相对表达量；用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白介素(IL)-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平；以流式细胞术检测细胞凋亡率；以双荧光素酶报告实验验证NORAD与miR-378a-3p靶向结合关系。结果：与对照组比较...     

ox-Lp(a)通过上调miR-125a-5p靶向抑制0,1-转位酶2增加单层血管内皮细胞通透性

目的 探讨ox-Lp(a)损伤血管内皮细胞的表观遗传调控机制。 方法 生物信息学分析和筛选与0,1-转位酶2(TET2) mRNA 3’-UTR靶向结合的候选miRNA,荧光素酶报告基因系统验证其结合的靶向性;以0 mg/L、25 mg/L、50 mg/L、100 mg/L及200 mg/L的ox-Lp(a)与HUVEC-12内皮细胞孵育24 h,或用100 mg/L ox-Lp(a)与HUVEC-12内皮细胞孵育0 h、6 h、12 h、24 h及48 h,qRT-PCR和Western blot分别检测TET2 mRNA和蛋白的表达水平。qRT-PCR检测hsa-miR-125a-5p表达水平,以5hmc水平分析TET2活性的变化,Transwell检测ox-Lp(a)对单层血管内皮细胞通透性的影响。 结果 生物信息学分析和荧光素酶报告基因验证结果表明TET2为hsa-miR-125a-5p的靶基因,且hsa-miR-125a-5p与TET2 mRNA的3’-UTR结合的自由能值低(－30.1 kcal/mol)。ox-Lp(a)呈剂量和时间依赖性抑制TET2蛋白和mRNA的表达水平,以100 mg/L ox-Lp(a)作用HUVEC-12内皮细胞 24 h的效果最佳;100 mg/L ox-Lp(a)作用HUVEC-12内皮细胞 24 h后,TET2活性显著下降,且显著上调hsa-miR-125a-5p的表达。anti-hsa-miR-125a-5p能逆转ox-Lp(a)对HUVEC-12内皮细胞 TET2蛋白和mRNA表达水平的抑制作用和活性下降。ox-Lp(a)显著增加单层血管内皮细胞通透性,但可被anti-hsa-miR-125a-5p部分逆转。 结论 ox-Lp(a)通过上调hsa-miR-125a-5p并与TET2 mRNA 3’-UTR靶向性结合,抑制TET2蛋白和mRNA的表达水平及活性,从而增加单层血管内皮细胞通透性。     

ox-Lp(a)通过上调miR-125a-5p靶向抑制10,11-转位酶2增加单层血管内皮细胞通透性

目的探讨ox-Lp(a)损伤血管内皮细胞的表观遗传调控机制。方法生物信息学分析和筛选与10,11-转位酶2(TET2)mRNA 3’-UTR靶向结合的候选miRNA,荧光素酶报告基因系统验证其结合的靶向性;以0 mg/L、25 mg/L、50 mg/L、100 mg/L及200 mg/L的ox-Lp(a)与HUVEC-12内皮细胞孵育24 h,或用100 mg/L ox-Lp(a)与HUVEC-12内皮细胞孵育0 h、6 h、12 h、24 h及48 h,qRT-PCR和Western blot分别检测TET2 mRNA和蛋白的表达水平。qRT-PCR检测hsa-miR-125a-5p表达水平,以5hmc水平分析TET2活性的变化,Transwell检测ox-Lp(a)对单层血管内皮细胞通透性的影响。结果生物信息学分析和荧光素酶报告基因验证结果表明TET2为hsa-miR-125a-5p的靶基因,且hsa-miR-125a-5p与TET2 mRNA的3’-UTR结合的自由能值低(-30.1 kcal/mol)。ox-Lp(a)呈剂量和时间依赖性抑制TET2蛋白和mRNA的表达水平,以100 mg/L ox-Lp(a)作用HUVEC-12内皮细胞24 h的效果最佳;100 mg/L ox-Lp(a)作用HUVEC-12内皮细胞24 h后,TET2活性显著下降,且显著上调hsamiR-125a-5p的表达。anti-hsa-miR-125a-5p能逆转ox-Lp(a)对HUVEC-12内皮细胞TET2蛋白和mRNA表达水平的抑制作用和活性下降。ox-Lp(a)显著增加单层血管内皮细胞通透性,但可被anti-hsa-miR-125a-5p部分逆转。结论ox-Lp(a)通过上调hsa-miR-125a-5p并与TET2 mRNA 3’-UTR靶向性结合,抑制TET2蛋白和mRNA的表达水平及活性,从而增加单层血管内皮细胞通透性。