雷公藤内酯醇对IgA肾病大鼠蛋白尿和nephrin、podocin蛋白及mRNA表达的影响

目的:观察雷公藤内酯醇(TP)对IgA肾病(IgAN)大鼠尿蛋白和足细胞nephrin、podocin蛋白及mRNA表达的影响。方法:采用牛血清白蛋白+四氯化碳+脂多糖的方法建立IgAN大鼠模型。将60只大鼠随机分为正常组、模型组、洛丁新组、TP剂量组、TP中剂量组、TP高剂量组,每组10只。于0,10,14周收集血尿标本,并处死大鼠留取肾组织标本。检测24 h尿蛋白定量,血生化指标,分别采用实时定量PCR及ELISA法检测肾组织nephrin、podocin mRNA和蛋白表达。结果:(1)实验前各组大鼠尿蛋白差异无统计学意义(P>0.05),第10周末各造模组蛋白尿均明显高于正常组(P<0.01),第14周末TP各剂量组及洛丁新组蛋白尿均较模型组明显减少(P<0.01),TP高剂量组Alt值高于其余各组(P<0.05);(2)与正常组相比,模型组nephrin、podocin蛋白、mRNA表达明显降低(P<0.01);TP各剂量组及洛丁新组nephrin、podocin蛋白、mRNA表达均较模型组明显增高(P<0.05);TP中、高剂量组较洛丁新组nephrin、podocin蛋白浓度显著增高(P<0.05);TP各剂量组与洛丁新组及TP各剂量组间nephrin、podocin mRNA表达均差异无统计学意义(P>0.05)。结论:TP能够明显减轻IgAN大鼠的蛋白尿,且能明显提高肾组织nephrin、podocin mRNA及蛋白的表达。提示TP能调节IgAN足细胞相关分子nephrin、podocin基因及蛋白的表达,减少足细胞损害,减少尿蛋白。     

罗格列酮对糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin和podocin表达的影响

本研究采用糖尿病肾病（DN）大鼠模型，通过观察肾组织足细胞超微结构及其相关分子表达的变化，以及罗格列酮对其的影响，进一步揭示足细胞相关分子在实验性DN发病中的作用及脂质过氧化物增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂治疗DN的分子机制．为DN的预防和治疗提供理论依据。     

萆薢分清颗粒对阿霉素肾病大鼠蛋白尿及肾小球滤过屏障相关蛋白HSPG、α-actinin-4、nephrin的影响

目的:通过实验研究观察萆薢分清颗粒对阿霉素肾病大鼠肾小球滤过屏障相关蛋白HSPG、α-actinin-4、nephrin表达的影响,探讨萆薢分清颗粒修复阿霉素肾病大鼠足细胞损伤,保护肾小球滤过屏障的作用机制。方法:本研究选用60只SPF级SD大鼠,适应性喂养1周后随机分为空白组、造模组,造模组分为阿霉素肾病模型组(模型组)、萆薢分清颗粒干预组(中药组)、泼尼松干预组(泼尼松组)、萆薢分清颗粒+泼尼松干预组(结合组),每组12只。造模成功后各组大鼠开始药物干预治疗4周,治疗期间记录24 h尿蛋白(24-hour urine protein, 24 h-UPr),4周后收集大鼠肾脏标本进行检测。借助免疫组化法及Western blot检测HSPG、α-actinin-4、nephrin蛋白在阿霉素肾病大鼠肾脏中的表达水平。结果:(1)24 h尿蛋白定量测定示：造模后,与空白组比较,模型组24 h尿蛋白定量显著升高(P<0.05);给药后,各治疗组比同期模型组24 h尿蛋白不同程度减少(P<0.05)。(2)免疫组化及Western blot检测结果示：(1)与模型组比较,各治疗...     

α-辅肌动蛋白4在糖尿病肾病大鼠蛋白尿产生中的作用

糖尿病肾病蛋白尿的形成有多种因素，足细胞病变在其中起着重要的作用。α-辅肌动蛋白（actinin）．4是足细胞上一种辅肌动蛋白，对于维持足细胞的正常结构及功能起关键作用。本研究利用糖尿病肾病大鼠模型在蛋白尿的发生、发展过程中动态观察α-actinin．4表达的变化，并初步探讨导致其变化的可能机制。     

中药合剂对早期糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin和podocin表达的影响

也页目的：观察中药合剂（ TCM mixture）对糖尿病肾病（ DKD）大鼠足细胞裂孔隔膜蛋白分子（ nephrin和podocin）表达的影响,探讨其对DKD的防治作用。方法：高脂高糖喂养8周联合小剂量STZ（30 mg/kg）建立T2DM大鼠模型,将DM模型大鼠随机分为中药合剂治疗组（B）及T2DM模型对照组（A）;另设正常对照组（NC）。各组于治疗前及干预后4、8、12周末检测大鼠血糖浓度及尿微量白蛋白;第12周末称大鼠体重（ BW）、肾重（ KW）,计算肾肥大指数（ KW/BW）,观察血清尿素氮（ BUN）、肌酐（ Scr）、总胆固醇（ TC）、三酰甘油（ TG）变化;光镜观察肾脏病理改变;应用免疫组化技术观察足细胞相关蛋白Nephrin、Podocin肾组织分布与表达;采用Western blot技术测定肾皮质Nephrin、Podocin 蛋白的表达。结果：应用中药合剂干预后与T2DM模型对照组相比,大鼠的尿微量白蛋白总量、肾肥大指数、血糖、尿素氮、血肌酐较T2DM模型组明显降低（ P〈0.05）,体重增加（P〈0.05）,病理改变减轻,nephrin和podocin蛋白表达增加（P〈0.05）。结论：中药合剂能提高nephrin和podocin的表达,促进足细胞损伤修复,减少尿微量白蛋白的排泄,减缓糖尿病肾病的进展。     

podocin基因敲低对小鼠足细胞nephrin和α-actinin表达与分布的影响

目的 研究足细胞分子podocin、nephrin和α-actinin之间的相互作用和联系。方法 将针对podocin分子设计的特异RNA干扰(RNAi)质粒导人体外培养的小鼠足细胞系(MPC5)；应用免疫荧光染色及双标记在共聚焦显微镜下观察nephrin、podocin和α-actinin的分布方式；半定量RT-PCR和免疫蛋白印迹检测podocin、nephrin，α-actinin-4及内参照GAPDH／β-actin在mRNA水平和蛋白水平的表达量。结果 (1)干扰组podocin的荧光强度显著低于对照组，其mRNA和蛋白的表达量分别下降了65％和89％。免疫双标记显示podocin的分布发生了明显变化：对照组podocin不但分布在胞核的周围，而且在胞浆呈放射性沿着细胞骨架分布，以及主要在胞膜上呈连续性的线状分布；干扰组podocin呈点状分布在胞核周围。(2)干扰组nephrin的荧光强度亦明显减低，其mRNA及蛋白的表达量分别减少了70％和78％。免疫双标记显示nephrin的分布也发生了显著变化：干扰组nephfin亦呈点状分布在胞核周围；在对照组，nephrin和podocin的分布方式相同。(3)干扰组和对照组α-actinin的分布及在mRNA和蛋白水平上的表达量无明显差异，呈细丝状均匀分布于胞质内，亦呈放射性分布于足细胞伸出的突起中。结论 通过RNAi成功地使MPC5的podocin表达下调。Podocin和nephrin分子关系紧密，可能存在着直接的分子间反应；podocin与α-actinin无直接的作用和联系。     

黏着斑分子α-parvin在大鼠嘌呤霉素肾病模型中的表达及其意义

目的研究大鼠嘌呤霉素肾病模型中α-parvin的表达变化,探讨其在蛋白尿发生中的作用。方法通过建立嘌呤霉素肾病模型,应用光镜、电镜观察肾脏病理改变,免疫组织化学法检测α-parvin在肾脏的表达与分布。结果（1）嘌呤霉素肾病4d组大鼠24h尿蛋白含量较对照组即已升高（P〈0．01）,嘌呤霉素肾病7d组达高峰（P〈0．001）。（2）透射电镜显示嘌呤霉素肾病4d组大鼠足突部分融合,嘌呤霉素肾病7d组大鼠足突广泛融合,嘌呤霉素肾病28d组大鼠足突形态有所恢复。（3）免疫组织化学显示随着α-parvin于肾小球的表达,嘌呤霉素肾病4d组α-parvin的表达较对照组即已升高（P〈0．05）。嘌呤霉素肾病7d组表达明显高于对照组（P〈0．01）。嘌呤霉素肾病28d组α-parvin的表达明显低于嘌呤霉素肾病7d组（P〈0．01）。结论大鼠嘌呤霉素肾病模型中,盯parvin的表达增加可引起足突融合,并与蛋白尿产生密切相关。     

柴芩肾安方对IgA肾病大鼠肾小球足细胞nephrin表达的影响

目的：探讨柴芩肾安方对IgA肾病（IgAN）大鼠肾小球足细胞nephrin表达的影响。方法：通过切除单侧肾并反复静脉注射葡萄球菌肠毒素B（SEB）复制大鼠IgAN模型,分为正常组、切肾组、IgAN组、柴芩肾安方组和氯沙坦组。第12周末,检测各组大鼠24h尿蛋白量（Upr）,观察肾小球形态学和超微结构变化,并采用免疫组化和实时定量PCR法检测肾小球足细胞nephrin蛋白及mRNA的表达。结果：与正常组相比,IgAN组大鼠Upr显著升高（P〈0.01）,肾小球系膜增生,足突融合明显,足细胞nephrin蛋白及mRNA表达均明显下调（P〈0.01）。经柴芩肾安方治疗后上述指标均明显改善,与IgAN组比较差异有统计学意义（P〈0.01或P〈0.05）。结论：柴芩肾安方能减轻IgAN大鼠蛋白尿及肾小球病变,这可能与其恢复肾小球足细胞nephrin表达有关。     

nephrin、血管内皮生长因子及其受体表达与先兆子痫大鼠蛋白尿的关系

目的 研究nephrin、血管内皮生长因子（VEGF）及其受体（VEGFR）在先兆子痫大鼠肾组织的表达与蛋白尿的关系。 方法 采用一氧化氮合酶抑制剂（L-NAME）制备大鼠先兆子痫模型（n=8）,分别与正常雌性组（n=6）、正常妊娠组（n=8）、未孕L-NAME对照组（n=6）大鼠比较动脉收缩压（SBP）、尿蛋白量（24 h）。各组大鼠肾组织分别行光镜和电镜检查。Western印迹法、实时定量PCR检测nephrin在各组大鼠肾脏局部的表达;免疫荧光法检测各组大鼠肾小球内wilms肿瘤蛋白WT1的表达。Western印迹法检测VEGF及VEGFR（Flt-1、Flk-1）在各组大鼠肾脏局部的表达。 结果 先兆子痫模型组大鼠nephrin蛋白的表达（0.0726±0.0074）显著低于正常雌性组（0.3795±0.0509）、正常妊娠组（0.2361±0.0437）及未孕L-NAME对照组大鼠（0.7265±0.0503）（均P < 0.01）;而nephrin mRNA在各组大鼠间差异无统计学意义。各组大鼠足细胞数目差异无统计学意义。先兆子痫大鼠组VEGF的表达（1.5429±0.0898）显著高于正常雌性组（1.1870±0.1160）、正常妊娠组（1.3741±0.1165）、未孕L-NAME对照组大鼠（1.0155±0.0742）（均P < 0.01）;先兆子痫组大鼠VEGFR（Flt-1、Flk-1）的表达均显著高于其他各对照组大鼠（均P < 0.05）。 结论 先兆子痫大鼠中,nephrin蛋白水平表达明显降低,肾脏局部VEGF-VEGFR表达显著增强,可能参与了先兆子痫蛋白尿的生成,其具体机制有待进一步研究。     

益肾活血方对嘌呤霉素氨基核苷诱导的大鼠肾病综合征的治疗作用及其机理研究

目的：探讨益肾活血方对嘌呤霉素氨基核苷（PAN）诱导的大鼠肾病综合征的治疗作用及其作用机制。方法：Wistar大鼠随机分为假手术组、PAN模型组、益肾活血方高剂量组（YHF-H）、益肾活血方中剂量组（YHF-M）、益肾活血方低剂量组（YHF-L）、蒙诺治疗组（FP）。采用颈静脉注射结合尾静脉加强注射PAN的方法制作肾病模型。PAN首次注射后第5、10、15、20、25和30天测定24h尿蛋白定量;31d后处死动物,做血清总蛋白、血清白蛋白、总胆固醇、三酰甘油、血清尿素氮、血清肌酐等血生化学检查、肾脏组织光学显微镜和电子显微镜检查以及逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）分析各组大鼠肾脏骨形态蛋白及其基因表达的情况。结果：益肾活血方能有效抑制由PAN所诱导的尿蛋白排泄增高、血清蛋白降低和血脂升高,减轻肾小管间质病变、抑制BMPRⅡ和Smad1在肾组织内的表达。结论：益肾活血方对PAN诱导的大鼠肾病综合征有治疗作用,其机制可能与调节骨形态蛋白表达有关。     

黄葵胶囊对氨基核苷嘌呤霉素诱导的大鼠慢性肾病的作用研究

目的：观察黄葵胶囊对氨基核苷嘌呤霉素（PAN）诱导的大鼠慢性肾病的作用。方法：Wistar大鼠雄性,40只,130～140g,SPF级,随机分为假手术组、模型组、蒙诺组、黄葵胶囊组。除假手术组外,各组均行颈静脉插管术缓慢推注PAN（40mg/kg体重）后,再进行3次小剂量尾静脉追加（5mg/kg体重）诱导大鼠慢性肾病,假手术组同样行颈静脉插管术和尾静脉追加给等容积0.9%生理盐水,观察56d。颈静脉给药后第5、10、15、20、28、42、56天时检测24h尿蛋白,第57天时处死动物检测血清总蛋白（TP）、血清白蛋白（Alb）、三酰甘油（TG）、胆固醇（TC）、肌酐（Scr）和尿素氮（BUN）水平;对肾组织进行病理学观察并对损害程度进行评分;采用免疫组化法,观察黄葵胶囊对α-SMA蛋白在肾脏组织表达的影响;取脾脏、胸腺和睾丸,取脏器指数观察该药对免疫系统、生殖系统的影响。结果：黄葵胶囊对PAN诱导的尿蛋白大量排泄有降低趋势,对肾功能的损伤有所改善,对肾小球硬化有显著改善作用（P〈0.01）,对α-SMA蛋白在肾脏组织表达有所降低,脾脏、胸腺和睾丸指数没有变化。结论：黄葵胶囊对PAN诱导的大鼠慢性肾病有一定的治疗作用,但对免疫系统、生殖系统未见毒副作用。     

黄芪甲苷联合糖皮质激素治疗嘌呤霉素氨基核苷肾病大鼠的疗效及其机制

目的:观察黄芪甲苷（astragaloside IV,AS-IV）联合糖皮质激素干预治疗嘌呤霉素氨基核苷（puromycin aminonucleoside,PAN）肾病大鼠的疗效,并探讨其相关机制。方法:40只150~180 g无特定病原体级健康雄性Wistar大鼠被随机分为对照组、模型组（PAN组）、黄芪甲苷干预组...     

厄贝沙坦对早期糖尿病肾脏疾病大鼠足细胞nephrin和podocin表达的影响

目的：观察厄贝沙坦（irbesartan）对糖尿病肾脏疾病（diabetic kidney disease,DKD）大鼠足细胞裂孔隔膜蛋白分子（nephrin和 podocin）表达的影响,探讨厄贝沙坦对DKD的防治作用。方法以高脂高糖喂养8周联合小剂量链脲佐菌素（30 mg/kg）建立DKD大鼠模型,将 DKD大鼠模型随机分为2组：厄贝沙坦组及模型对照组;另设正常对照组。厄贝沙坦组给予厄旦沙坦（50 mg·kg-1·d-1）,另外2组每日给予等量0.9%生理盐水灌胃。各组于治疗前及药物干预后第4、8、12周周末检测大鼠血糖浓度和尿微量白蛋白量;观察大鼠体质量、肾重、肾肥大指数、血清尿素氮、肌酐、总胆固醇、三酰甘油变化;光镜观察肾脏病理改变;应用免疫组化技术观察足细胞相关蛋白 nephrin、podocin肾组织分布与表达;采用 Western blot技术测定肾皮质 nephrin、podocin 蛋白的表达。结果应用厄贝沙坦干预后与DKD对照组相比,大鼠的尿微量白蛋白总量、肾肥大指数、血糖、尿素氮、血肌酐较模型对照组明显降低（P〈0.05）,体质量增加（P〈0.05）,病理改变减轻,nephrin和 podocin蛋白表达增加（P〈0.05）。结论厄贝沙坦能上调 nephrin和 podocin的表达水平,降低尿微量白蛋白排泄,延缓DKD的进展。     

阿霉素肾病大鼠肾皮质nephrin mRNA的表达及来氟米特对其表达的影响

目的:观察阿霉素肾病大鼠肾皮质nephrinmRNA的表达及来氟米特对其表达的影响,探讨nephrin在蛋白尿发生发展中的作用以及来氟米特治疗肾脏病的可能机制。方法:建立阿霉素肾病模型,第4周进一步将模型组分为治疗组和非治疗组,治疗组给予来氟米特管饲。应用光镜、电镜观察不同时期(第2、4、6、8周)各组大鼠肾组织的病理改变;BCA法检测尿蛋白排泄量;半定量RT-PCR的方法检测肾皮质中nephrinmRNA的表达。结果:(1)模型组尿蛋白量逐渐增加,而治疗组第6周和第8周的尿蛋白量均低于同时期的非治疗组水平(P=0.02和P<0.01);(2)模型组nephrinmRNA表达量在2、4、6、8周分别为对照组的0.5、1.0、2.0、1.6倍,并与尿蛋白量呈正相关(r=0.699,P<0.001);(3)模型治疗组nephrinmRNA的表达第8周达非治疗组的1.3倍。结论:(1)随着阿霉素肾病大鼠尿蛋白排泄量的增加,肾皮质nephrinmRNA的表达发生了显著变化,并与蛋白尿的发生发展之间具有一定的相关性;(2)来氟米特可减少肾病大鼠尿蛋白量,同时增加肾皮质nephrinmRNA的表达。     

嘌呤霉素氨基核苷诱发肾病综合征大鼠模型的改良制作研究

目的：在嘌呤霉素氨基核苷模型经典制作方法的基础上进行多次尾静脉追加,制作更适合慢性肾脏病药理学研究的实验性大鼠模型。方法：Wistar大鼠42只,6周龄,雄性,随机分为对照组、颈静脉给药组和追加给药组,每组14只,各组分别于造模后第30天和第56天处死动物。颈静脉给药组行颈静脉插管术缓慢推注嘌呤霉素氨基核苷（40 mg/kg）,追加给药组在颈静脉给药（40 mg/kg）后第13、16、19天再进行3次小剂量尾静脉追加（5 mg/kg）。对照组给等容积0.9%生理盐水。造模后第5、10、15、20、28、42、56天时检测24 h尿蛋白。实验结束时对比两组模型的肾脏组织病理改变和血清总蛋白（TP）、白蛋白（Alb）、三酰甘油（TG）、胆固醇（TC）、肌酐（Scr）和尿素氮（BUN）水平。结果：颈静脉给药组在造模后第5天出现蛋白尿,10 d左右尿蛋白达到高峰（均值264.1 mg/24 h）,随后尿蛋白急剧下降,约在第20天降至接近正常水平。追加给药组尿蛋白出现一个持续增高的平台期（均值维持在略高于150 mg/24 h的水平）,末次追加后约10 d（颈静脉给药后第28天）开始缓慢下降,于第56天时接近正常。光镜所见：在30 d和56 d时,追加给药组大鼠的肾小球局灶节段性硬化和间质纤维化、炎性浸润等组织病理学指标较颈静脉给药组改变显著,其中两组之间间质纤维化的差异有统计学意义（P〈0.05）。第30天血清生化结果显示,追加给药组大鼠TG、TC（P〈0.05）、Scr（P〈0.05）升高较明显,而颈静脉给药组变化则不明显。结论：对嘌呤霉素氨基核苷经典模型进行多次小剂量尾静脉追加,可以造成大鼠慢性肾脏病变。改良后的模型能够节约研究时限和研究成本,更适用于开展慢性肾脏病药理学研究。     

α3/β1整合素与阿霉素肾病蛋白尿的关系

阿霉素肾病大鼠为常用的肾病综合征模型之一,是由于肾小球滤过膜阴电荷丢失、肾小球足突细胞与基底膜(GBM)分离所致。α3/β1-整合素(integrins)为足突细胞膜受体,与GBM基质相黏附,在将足突固定到GBM上起重要作用[1]。我们检测阿霉素肾病大鼠肾组织内α3/β1-integrin的分布及表达,以探讨其与阿霉素肾病蛋白尿的关系。一、材料和方法1.动物模型建立:SD大鼠随机分成实验组(40只)和对照组(5只)。实验组:尾静脉注入阿霉素6.5mg/kg,对照组为尾静脉注射生理盐水3.25ml/kg。2.标本收集:注射阿霉素前1d(0d)、注后3d、7d、14d、21d及28d收集24h…     

温阳活血利水方对阿霉素肾病大鼠肾小球足细胞podocin表达的影响

目的：观察温阳活血利水法治疗微小病变肾病综合征的疗效并探讨其作用机制。方法：SPF级雄性Wistar大鼠50只,随机分为正常组、模型组、泼尼松组、中药组。正常组尾静脉一次性注射生理盐水1ml,其余各组均采用阿霉素5.5mg/kg一次性尾静脉注射。1周后开始药物干预,持续4周。观察实验大鼠的一般情况;检测大鼠24h尿蛋白定量;检测总蛋白、白蛋白、总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白的水平;采用RT-PCR和免疫荧光染色测定大鼠肾小球podocin的mRNA和蛋白表达水平;光学显微镜观察肾组织形态学变化;电镜下观察足细胞足突的变化。结果：模型组24h尿蛋白定量明显升高（P〈0.01）,血清总蛋白、白蛋白明显降低（P〈0.01）,血清脂质水平升高（P〈0.01）,podocin mRNA与蛋白表达明显减少,足突融合明显。两个治疗组均能降低24h尿蛋白定量,升高血清总蛋白、白蛋白水平（P〈0.01）。温阳活血利水方能降低血清脂质水平（P〈0.01）。两个治疗组均能改善肾组织中podocin mRNA与蛋白的表达的减少,改善其肾组织的病理改变。结论：温阳活血利水方能改善阿霉素肾病大鼠肾小球podocin的表达减少,减轻肾组织的病理改变,这可能是温阳活血利水方减少蛋白尿的重要作用机制。     

温阳活血利水方对阿霉素肾病大鼠肾小球足细胞nephrin表达的影响

目的观察温阳活血利水法治疗微小病变肾病综合征的疗效,并观察对足细胞nephrin表达的影响,以探讨其作用机制。方法用阿霉素（ADR）诱导一种类似人类微小病变肾病模型,一周后用温阳活血方（治疗组）治疗,持续4周。并设空白对照组（正常组）、病理对照组（造模组）。观察实验大鼠的一般情况;检测大鼠24小时尿蛋白定量;检测总蛋白、白蛋白、总胆固醇、甘油三酯、低密度脂蛋白的水平;采用RT-PCR和免疫荧光染色测定大鼠肾小球Nephrin的mRNA和蛋白表达水平;光学显微镜观察肾组织形态学变化;电镜下观察足细胞足突的变化。结果模型组24小时尿蛋白定量明显升高（P〈0．01）,血清总蛋白、白蛋白明显降低（P〈0．01）,血清脂质水平升高（P〈0．01）,NephrinmRNA与蛋白表达明显减少,足突融合明显。两个治疗组均能降低24小时尿蛋白定量,升高血清总蛋白、白蛋白水平（P〈0．01）。温阳活血利水方能降低血清脂质水平（P〈0．01）。两个治疗组均能改善肾组织中NephrinmRNA与蛋白的表达的减少,改善其肾组织的病理改变。结论温阳活血利水方减少蛋白尿,可能与改善阿霉素肾病大鼠肾小球Nephrin的表达减少有关。     

糖尿病肾病中nephrin及其与RAS关系的研究进展

nephrin定位于足突细胞裂隙隔膜，是维持肾小球滤过屏障结构和功能完整性的关键分子。其基因突变导致先天性肾病综合征，人类某些获得性蛋白尿肾脏疾病与其异常表达有关。研究发现糖尿病肾病nephrin异常表达和重分布与蛋白尿／白蛋白尿产生有关联，阻滞肾素．血管紧张素系统(RAS)可恢复nephrin的正常表达。