猴内皮细胞连续细胞株低密度脂蛋白受体的结合特性

本文用细胞-生物素-亲和素-酶联测定法(细胞-BA-ELSA)和生物素-亲和素-酶联免疫测定法(BA-ELISA)研究了RF/6A细胞(猴内皮细胞连续培养株)的低密度脂蛋白(LDL)受体结合特性.结果显示:这一内皮细胞株的LDL受体的离解常数(Kd)为9.6μg/ml,最大高亲和性结合量(Bmax)为211ng/mg细胞蛋白.当细胞生长至融合状态时,其LDL受体活性只有未融合时的三分之二.细胞在高脂培养液(254μg胆固醇/ml)、普通培养液(49μg胆固醇/ml)和无脂培养液中,其LDL受体活性分别是119±8ng/mg细胞蛋白、155±13ng/mg细胞蛋白和280±25ng/mg细胞蛋白,三组相互比较P<0.01,显然受体活性受培养液中胆固醇浓度的调节.     

发育晚期胎鼠肝脏抗氧化酶活性的变化

目的:探讨发育晚期胎鼠肝脏中超氧化物岐化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性的变化。方法:成年雌性Wistar大鼠交配后并在妊娠母鼠第17、19、20和22天取出10只胎鼠肝脏。采用pyrogallol氧化法,Aebi法和间接法分别检查超氧化物岐化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性的变化。结果:发育晚期过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性明显升高,CAT活性从第17天的1.8单位/mg蛋白升高到第22天的12单位/mg蛋白(P<0.05)。同时,GPx活性也从第17天的0.035单位/mg蛋白升高到第22天的0.13单位/mg蛋白(P<0.05)。此时总SOD活性则从52单位/mg蛋白下降到32单位/mg蛋白(P<0.05),CuZnSOD活性从35单位/mg蛋白下降到16单位/mg蛋白,MnSOD活性未见变化。结论:胎儿过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性的增加可能有助于胎儿适应出生后体外的高氧环境,但是,没有超氧化物岐化酶活性的增加,过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶是很难完成抗氧化功能。     

FOXP3调控非小细胞肺癌A549细胞对阿霉素敏感性的作用及其机制

目的：探讨叉头蛋白3 (FOXP3)基因沉默后非小细胞肺癌(NSCLC) A549细胞对阿霉素(Dox)敏感性的变化,阐明其参与Dox耐药的机制。方法：采用脂质体法将FOXP3小干扰RNA(siRNA)片段转染至人NSCLC A549细胞,细胞分为空白对照组(不转染)、si-NC组(转染对照siRNA)和si-FOXP3组(转染FOXP3-siRNA)。采用Westernblotting法和免疫荧光法检测各组A549细胞中FOXP3蛋白表达水平,CCK-8法检测各组A549细胞增殖活性和半数抑制浓度(IC50)值。各组A549细胞中分别加入0、10和20μmol·L^-1 DAPT,作为0、10和20μmol·L^-1 DAPT组;另取A549细胞,分别加入0μmol·L^-1DAPT、 1.0mg·L^-1Dox和1.0mg·L^-1Dox联合10μmol·L^-1DAPT,作为0μmol·L^-1 DAPT组、1.0 mg·L^-1     

中药陵水暗罗提取物暗罗素逆转卵巢癌细胞顺铂耐药研究

目的:探讨陵水暗罗提取物暗罗素(ZPT)对耐药卵巢癌细胞株顺铂(DDP)敏感性的影响。方法:MTS法检测暗罗素和顺铂对卵巢癌细胞株A2780和耐药株A2780/DDP的增殖抑制效应。Western Blot法检测A2780和A2780/DDP细胞株p65蛋白表达水平,荧光素酶法检测A2780和A2780/DDP细胞株NF-κB活性。结果:暗罗素可以显著抑制人卵巢癌细胞株A2780和耐药株A2780/DDP的增殖活性[A2780和A2780/DDP的半数抑制浓度(IC50)值分别为1.498μmol/L和1.516μmol/L];联合组(0.5μmol/L暗罗素+5μmol/L顺铂)相对于顺铂单药组,显著下调A2780/DDP的增殖活性(80.80%vs 35.63%,P<0.01)。荧光素酶法检测A2780和A2780/DDP细胞株的NF-κB活性显示,A2780/DDP组NF-κB活性是A2780组的1.92倍(P<0.01);Western Blot法检测p65蛋白表达水平,提示A2780/DDP组p65蛋白表达显著高于A2780组。相对于对照组,0.5μmol/L暗罗素可以显著下调NF-κB活性(100%vs 39.69%,P<0.01)。Western Blot法检查0.5μmol/L暗罗素对A2780/DDP抗凋亡蛋白Bcl-2的影响,发现暗罗素可以显著抑制Bcl-2蛋白表达。结论:陵水暗罗提取物暗罗素可以增加顺铂耐药细胞株A2780/DDP对顺铂的敏感性,暗罗素下调NF-κB-Bcl-2途径活性可能是其逆转顺铂耐药机制。     

NF-κB介导ADMA上调大鼠腹腔巨噬细胞LOX-1的表达

目的 探讨非对称性二甲基精氨酸(ADMA)上调大鼠腹腔巨噬细胞的氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)表达是否受核因子-κB(NF-κB)的调控.方法 分离培养大鼠腹腔巨噬细胞.实验分组:正常对照组,以含10%胎牛血清(FBS)DMEM培养液与巨噬细胞共孵育;氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)组,在培养液中加oxLDL(50 mg/L);A+O组,在培养液中加ADMA(15 μmol/L)和oxLDL(50 mg/L);P+A+O组,在培养液中加吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC,25 μmol/L)、ADMA(15 μmol/L)、oxLDL(50 mg/L).以实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和Western blot分别检测LOX-1 mRNA和蛋白表达,以电泳迁移率变动分析(EMSA)和增强化学发光法(ECL)检测NF-κB活性.结果 oxLDL组与A+O组LOX-1 mRNA和蛋白表达比对照组明显增强,以A+O组尤为明显(均 P ＜0.05);P+A+O组LOX-1 mRNA和蛋白表达较A+O组降低(P ＜0.05).与对照组相比,oxLDL组与A+O组NF-κB活性明显增强,以A+O组尤为明显(均 P ＜0.05);P+A+O组NF-κB活性较A+O组降低(P ＜0.05).相关分析:NF-κB活性与LOX-1 mRNA和蛋白表达量呈正相关(均为 r =0.82,P ＜0.05).结论 ADMA可能通过NF-κB途径增强LOX-1表达而促进巨噬细胞转化为泡沫细胞,促进动脉粥样硬化的发生发展.     

依他尼酸联合顺铂化疗促肺癌A549细胞凋亡的作用及机制研究

目的 探讨依他尼酸(ethacrynic acid,EA)杀伤肺癌A549细胞球的作用及机制研究.方法 无血清培养基中培养A549细胞球,应用Western blot检测CD133、SOX2、EpCAM和ABCG2的蛋白表达水平.应用l、2、5、10、20 mg/mL的浓度顺铂(cisplatin,DDP)分别处理A549及细胞球48 h,用MTT检测48 h内细胞的存活率.应用比色法检测10、50、100、200 μmol/L EA对A549细胞球中谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase,GST)活性的抑制作用.应用流式细胞术、Western blot、Real-time-PCR、相差显微镜观察检测200 μmol/L EA处理A549细胞球前后ROS水平、细胞成球能力、β-catenin、Sox2和ABCG2 mRNA和蛋白以及β-catenin启动子活性的变化情况.应用β-catenin腺病毒感染A549细胞球后,再用200 μmol/L EA的处理A549细胞球,利用Real-time PCR和Western blot检测β-catenin S、Sox2和ABCG2 mRNA和蛋白的变化,并用MTT检测A549细胞球增殖的抑制作用.结果 成功培养出悬浮的A549细胞球,其高表达肿瘤干细胞标志物CD133、SOX2、EpCAM以及耐药相关蛋白ABCG2,并可耐受不同浓度DDP的杀伤作用.200 μmol/L EA处理A549细胞球后ROS水平明显升高,而GST活性、β-catenin、Sox2和ABCG2 mRNA和蛋白的表达、β-catenin的启动子活性、A549细胞球的成球能力显著下降,并且200 μmol/L EA联合5 mg/mL DDP可增强对抑制A549细胞球增殖的作用和增加细胞凋亡的水平(P＜0.05).过表达β-catenin后,200 μmol/L EA对β-catenin、Sox2和ABCG2 mRNA和蛋白的抑制作用较空载体组显著减弱.此外,过表达β-catenin可显著缓解200 μmol/L EA联合5 mg/mLDDP对A549细胞球的增殖抑制作用.结论 EA通过抑制GST活性和β-catenin水平,发挥抑制A549细胞球增殖和干性,促进其凋亡的作用.EA可望成为治疗肺癌及肺癌干细胞的药物.     

hs-CRP、Lp-PLA2、Hcy及SAA在老年急性缺血性脑卒中患者中的临床研究

目的：探讨血清超敏C-反应蛋白(hs-CRP)、脂蛋白磷脂酶A2(Lp-PLA2)、同型半胱氨酸(Hcy)及血清淀粉样蛋白A(SAA)在老年急性缺血性脑卒中(ACIS)患者中的诊断价值。方法：选取佛山市复星禅诚医院120例ACIS患者为观察组,根据美国国立卫生研究院脑卒中量表(NIHSS)评分将观察组分为轻度组(<4分,n=50)、中度组(4～15分,n=35);重度组(>15分,n=35)。选择同期体检健康者45例作为对照组,检测血清hs-CRP、Lp-PLA2、Hcy、SAA水平,分析四者浓度与ACIS神经功能损伤严重程度的相关性,并比较四项单独及联合检测的诊断效能。结果：观察组血清hs-CRP[(12.2±3.5)mg/L]、Lp-PLA2[(284.45±40.32)ng/ml]、Hcy[(25.34±10.87)μmol/L]和SAA[(14.3±6.1)mg/L]水平高于对照组hs-CRP[(1.4±0.63)mg/L]、Lp-PLA2[(115.23±27.39)ng/ml]、Hcy[(12.86±4.12)μmol/L]和SAA[(4.9±2.8)mg/L]...     

PPARγ在绒毛组织中的表达与早期自然流产的关系

目的：研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ( PPARγ)蛋白在正常早孕及早期自然流产患者绒毛组织中的差异表达,探讨PPARγ与早期自然流产的关系。方法应用免疫组化PV两步法、Western blot法检测PPARγ蛋白在正常早孕妇女(对照组,n=40)和早期自然流产患者(实验组,n=40)绒毛组织中的表达。结果免疫组化显示PPARγ蛋白主要在两组绒毛组织中细胞滋养层细胞及绒毛外滋养层细胞中表达;Western blot法显示PPARγ蛋白在实验组绒毛组织中的表达较对照组高,差异有统计学意义(P<0．01)。结论 PPARγ对妊娠早期滋养细胞浸润起负性调节作用,PPARγ蛋白表达水平增高,可能与自然流产的发生有关。     

地塞米松和阿斯匹林对猪肺血管内巨噬细胞环氧合酶Ⅱ型的作用

目的：探讨地塞米松(DEX)和阿斯匹林(ASA)对脂多糖(LPS)致猪肺血管内巨噬细胞(PIM) 环氧合酶-Ⅱ(COX-Ⅱ)表达及活性的影响。方法：改良法分离、培养猪PIM。分为：①对照组;②LPS组：予 LPS(10μg/m1)刺激;③DEX组和④ASA组：分别以2 pmol/L DEX和500 μmol/L ASA预处理2 h,再以 LPS刺激。以反转录聚合酶链反应和免疫组化染色法检测COX-ⅡMrna及酶蛋白的改变;放射免疫分析 法测定细胞上清PGE2浓度,间接表示COX活性。结果：LPS组PIM COX-ⅡMrna和酶蛋白表达及PGE2 浓度较对照组升高,DEX组则降低(P＜0.01);ASA组COX-ⅡMrna和酶蛋白表达与LPS组相似,但 PGE2浓度却降低(P＜0.01)。结论：DEX能抑制LPS诱导的P1M COX-ⅡMrna及酶蛋白的表达;ASA 可通过抑制COX的活性而减少前列腺素的产生;二者对急性呼吸窘迫综合征等急性炎症性疾病的治疗可 能有一定作用。     

阿司匹林预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的 观察阿司匹林(aspirin/acetylsalicylic acid,ASA)预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤(I/R)的保护作用,并对其作用机制进行探讨.方法 健康雄性SD大鼠,随机分为假手术组、模型 溶酶组、ASA 100 mg/kg预处理组,以线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,24 h后进行神经功能评分并断头取脑分别测定脑梗死体积、脑组织匀浆诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性和一氧化氮(NO)含量.结果 与模型 溶酶组相比,ASA预处理组的脑梗死体积明显减小(P＜0.05),神经功能缺损评分获不同程度改善(P＜0.05),脑组织中iNOS活性、NO含量明显下降(P＜0.01).结论 ASA对大鼠脑缺血再灌注损伤有一定保护作用,其作用机制与抑制脑组织中iNOS活性,降低NO含量有关.     

C反应蛋白指导胎膜早破患者合理预防性应用抗生素的可行性研究

目的:探讨C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)指导胎膜早破患者合理预防性应用抗生素的可行性。方法:选取138例入院时未临产且距破膜时间<12 h的胎膜早破患者,检测血清中CRP水平,CRP>8 mg/L的患者,随机分为A组(n=34)、B组(n=36),CRP<8 mg/L的患者,随机分为C组(n=42)、D组(n=26)。A、C组预防性使用抗生素,B、D组不予预防性抗生素治疗,各组均在破膜24 h内分娩。观察4组孕妇胎盘组织学绒毛膜羊膜炎发生率,入院时、分娩后血CRP、降钙素原(PCT)水平、白细胞计数(WBC)数量、血白介素(IL)-6、IL-8水平变化。结果:B组胎盘组织学绒毛膜羊膜炎发生率为94.44%(34/36),高于D组的26.92%(7/26)及A组的41.18%(14/34),差异有统计学意义(P<0.01);C组胎盘组织学绒毛膜羊膜炎发生率与D组比较无统计学差异(P>0.05)。4组分娩后血CRP、PCT水平及WBC数量均高于入院时,差异有统计学意义(P<0.05)。B组分娩后血CRP、PCT水平及WBC数量高于A组、C组、D组,差异有统计学意义(P<0.01)。A、C组分娩后血清IL-6、IL-8水平均较入院时降低,差异有统计学意义(P<0.01),B组较入院时增高,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:CRP水平升高与绒毛膜羊膜炎的发生明显相关,CRP正常者是否抗生素治疗对胎盘组织学绒毛膜羊膜炎发生率、产后血CRP、PCT、WBC水平变化无明显影响,对于CRP升高者经抗生素抗感染治疗后能有效降低胎盘组织学绒毛膜羊膜炎发生率,并在一定程度上抑制分娩后血CRP、PCT、WBC水平升高及抗炎性细胞因子IL-6、IL-8水平的升高。     

中国内江猪与中国人肝微粒体酶的比较研究

目的 比较中国内江猪与中国人肝微粒体酶的差异,以期从药物代谢角度评价内江猪作为异种移植供体的可能性.方法 通过Ca2+沉淀法分离肝微粒体,测定4月龄中国内江猪和中国正常成人肝微粒体中细胞色素P450(CYP450)、b5(CYb5)的含量及氨基比林N-脱甲基酶(ADM)的活性.结果 4月龄中国内江猪肝CYP450为(0.473±0.109) nmol/mg蛋白,CYb5为(0.403±0.107) nmol/mg蛋白,ADM的活性为(1.662±0.083) nmol/(mg蛋白·min);均与中国正常人[分别为(0.349±0.089) nmol/mg蛋白,(0.275±0.083) nmol/mg蛋白,(1.269±0.215) nmol/(mg蛋白·min)]存在差异(P<0.05),分别高出正常人35.5%、46.5%、31.0%.结论 中国内江猪肝脏中CYP450、CYb5含量及ADM活性较中国正常人高,药物的代谢可能较正常成人快,因此,中国内江猪肝脏代替人的肝脏代谢药物是可行的.     

钙激活蛋白酶Ⅰ在风湿性心脏病心房颤动中的作用

目的:阐明风湿性心脏病中钙激活蛋白酶Ⅰ(Calpain Ⅰ)与心房颤动(AF)关系及Calpain Ⅰ在风湿性心脏病不同类型心房颤动时的变化特点.方法:选择心脏手术患者55例,共分为4组,A组(n=12):非风湿性心脏病窦性心律组;B组 (n=13):风湿性心脏病窦性心律组;C组 (n=14):风湿性心脏病阵发性AF组;D组 (n=16):风湿性心脏病持续性AF组.在患者右房侧壁组织蛋白提取液不加钙离子或加钙离子(10-3mol/L)的条件下,采用比色法,对非选择性蛋白酶抑制剂E-64、Calpain Ⅰ抑制剂、Calpain Ⅱ抑制剂、溶酶体抑制剂Lactocystin作用于心房肌组织后的蛋白裂解活性进行检测比较.结果:A组、B组在相同试验条件下蛋白裂解活性未见明显差异;不给予蛋白酶抑制剂时, C组、D组的蛋白裂解活性明显高于B组 (P<0.01);给予蛋白酶抑制剂,Calpain Ⅰ抑制剂可抑制4组患者心肌组织蛋白裂解活性,而CalpainⅡ抑制剂则不能充分抑制4组患者心肌组织蛋白裂解活性.结论:风心病心房颤动患者心肌组织蛋白裂解活性是升高的,其活性升高与Calpain Ⅰ的作用有密切关系.     

五味子醇甲通过Aβ25-35诱导PC12细胞损伤对氧化应激及炎症因子的影响

目的 探讨五味子醇甲(SCH A)通过Aβ_25-35诱导PC12细胞损伤对氧化应激及炎症因子的影响。方法 CCK8、流式细胞仪联合检测，设立20μmol/L Aβ_25-35诱导PC12建立细胞损伤模型。MTT、流式细胞仪确立10μg/mL SCH A为本次实验药物剂量。实验分为空白组、模型组(20μmol/L Aβ_25-35)和SCH A组(10μg/mL SCH A+20μmol/L Aβ_25-35)。试剂盒检测超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)表达水平；Western blot检测白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白水平。结果 10μg/mL SCH A能显著提高SOD[(17.12±0.33)μ/mg比(10.02±0.12)μ/mg,P<0.01]、GSH[(12.32±0.73)μmol/g比(6.83±0.73)μmol/g,P<0.01]水平，降低MDA[(3.73±0.25)μmol/mg比(6...     

PGC-1α在海人酸(KA)诱导培养大鼠海马神经元氧化应激损伤中的作用

 目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活子(peroxisome proliferator activated receptor γ coactivator,PGC)-1α 在海人酸(kainic acid,KA)诱导的培养大鼠海马神经元氧化应激及神经损伤中的作用。方法 离体培养大鼠海马神经元,采用电穿孔基因转染技术分别转染PGC-1α shRNA质粒和空载体质粒。培养7 天后,用KA刺激上述海马神经元24 h,检测转染空载体质粒海马神经元(空白对照组,n=10)、KA刺激的转染PGC-1α shRNA质粒(实验组,n=11)和KA刺激的空载体质粒海马神经元(KA对照组,n=10)的谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量、超氧化物歧化酶(superoxidase dismutase,SOD)和乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)活性变化。FJB染色检测KA刺激24 h后实验组和KA对照组培养大鼠海马神经元神经损伤情况。结果 KA刺激24 h,培养的大鼠海马神经元GSH含量和SOD活性分别为(5.74±0.54) μmol·L-1·μg-1 protein和(10.57±1.25) U/mg protein,较空白对照组显著降低［(9.38±0.72) μmol·L-1·μg-1 protein,P<0.01;(23.12±3.23) U/mg protein,P<0.01］;LDH活性为(2.21±0.18) mmol NADH,H+/min/100 mg protein,较空白对照组海马神经元显著增高［(1.29±0.09) mmol NADH,H+/min/100 mg protein,P<0.01］。转染PGC-1α shRNA质粒组,KA刺激24 h海马神经元GSH含量和SOD活性分别为(3.37±0.42) μmol·L-1·μg-1 protein和(4.54±0.91) U/mg protein,较KA对照组海马神经元明显降低(P均<0.05);LDH活性为(2.74±0.19) mol/NADH+/min/mg protein,较KA对照组海马神经元显著增加(P<0.01)。FJB染色显示转染PGC 1α shRNA质粒组,KA刺激24h培养大鼠海马神经元损伤较KA对照组明显增加(P<0.05)。结论 PGC-1α基因下调加重KA刺激后培养大鼠海马神经元损伤,可能与其加重氧化应激损伤有关。     

乙酰肝素酶反义寡核苷酸对A375细胞增殖及乙酰肝素酶蛋白表达的影响

目的:观察乙酰肝素酶反义寡核苷酸(ASODN)对人恶性黑素瘤A375细胞增殖及乙酰肝素酶蛋白表达的影响.方法:以空白组和无关序列(N-ODN)组为对照,设计、合成4条ASODN链(ASODN-t1,t2,t3和t4,脂质体包埋后分别以10 μmol/L、20 μmol/L、30 μmol/L N-ODN和ASODN转染A375细胞,台盼蓝排斥试验检测细胞增殖情况,免疫组织化学法检测乙酰肝素酶蛋白表达的变化.结果:转染72 h后,各ASODN组A375细胞计数较对照组、N-ODN组均减少(P均=0.000);每条链的10 μmol/L、20 μmol/L、30 μmol/L 3个浓度组相比,差异均有统计学意义(P均=0.000);30 μmol/L ASODN-t2组与其他各组相比,差异均有统计学意义(P均＜0.05).转染48 h后,30 μmol/L ASODN-t2组乙酰肝素酶蛋白的表达较对照组、N-ODN组下调(P均=0.000).结论:乙酰肝素酶ASODN可抑制A375细胞增殖,下调乙酰肝素酶蛋白的表达.     

反复自然流产血清及绒毛组织NO含量绒毛组织p53及bcl-2蛋白的表达

目的 :观察反复自然流产患者 (RSA)与正常妊娠流产者血清及绒毛组织中NO含量和绒毛组织中p5 3蛋白及bcl- 2蛋白表达水平。方法 :33例RSA患者及 30例正常对照组血清和绒毛组织中NO含量采用比色法检测 ,利用硝酸还原酶特异性地将NO3 -还原为NO2 -,间接测定NO含量。应用流式细胞免疫荧光技术检测绒毛组织中p5 3蛋白及bcl - 2蛋白表达。结果 :①RSA组与对照组血清中NO含量分别为 77.2 1± 30 .78μmol /L和 5 1 .78± 2 7.0 4 μmol/L ,二者有显著差异 (p <0 .0 5 )。②绒毛组织中NO含量分别为 5 .86± 1 .84 μmol /L蛋白和 4 .38± 1 .1 2 μmol /L蛋白 ,二者有显著差异 (p <0 .0 1 )。③绒毛组织中p5 3蛋白表达水平 (以荧光指数表示 ) ,分别为 1 .33± 0 .0 6和 1 .1 9± 0 .0 6 ,两者有显著差异 (p <0 .0 0 1 )。④bcl- 2蛋白表达水平 (以荧光指数表示 ) ,分别为 1 .2 7± 0 .1 1和 1 .6 3± 0 .1 5 ,两者有显著差异 (p <0 .0 0 1 )。结论 :RSA组血清和绒毛组织中NO含量升高 ,绒毛组织中p5 3蛋白表达升高 ,bcl- 2蛋白表达降低 ,可能是RSA发病的原因之一。     

阿司匹林抗血栓最佳剂量的探讨分析

目的 观察心血管疾病患者应用不同剂量阿司匹林(ASA)抗血小板聚集作用及对血中血栓素B2(TXB2)的影响.方法 将200例患者随机分为A1组50例(ASA 50 mg/d),A2组50例(ASA 100 mg/d),A3组50例(ASA 300 mg/d),A4组50例(口服安慰剂),于治疗前、治疗2周、4周末清晨空腹抽血测定花生四烯酸(ACA 500 μg/dl)诱导的血小板聚集率及血中TXB2.结果 血小板聚集功能较用药前明显下降,显效率24%~30%,有效率44%~52%,总有效率48%.同时ASA患者治疗前TXB2显著高于正常,但在治疗后TXB2明显下降.ASA患者在50~300 mg/d范围内,低剂量和高剂量在血小板聚集率测定及TXB2含量上比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 阿司匹林抗血栓的疗效与一定范围(50~300mg/d)剂量的递增无显著相关性,强调个体化用药原则.     

细胞色素氧化酶3A4启动子报告基因的构建及其活性检测

目的建立细胞色素氧化酶(cytochrome P-450,CYP)3A4启动子报告基因并在孕烷X受体(pregnane X receptor,PXR)表达阳性的肿瘤细胞中检测其转录活性。方法利用PCR扩增CYP 3A4的启动子区远端调控序列(-7836/-7208)和近端调控序列(-362/+52)序列;将上述序列克隆至p GL3-Promoter载体上;利用萤光素酶报告基因系统检测CYP 3A4报告基因的活性。结果在肝癌细胞系中,PXR的激动剂利福平能够剂量依赖性地诱导远端调控序列荧光素酶报告基因(R2=0.92;P=0.003 4)和近端调控序列荧光素酶报告基因(R2=0.95;P=0.011)的活性,EC50为(5.65±0.58)μmol/L和(8.91±1.12)μmol/L;PXR的拮抗剂酮康唑能够剂量依赖性地抑制利福平诱导的远端调控序列荧光素酶报告基因(R2=0.92;P=0.003 4)和PXRELuc(R2=0.92;P=0.003 4)活性,IC50为(0.55±0.08)μmol/L和(0.94±0.14)μmol/L。此外,多种化疗药物(PXR的潜在配体)能够在PXR阳性的肿瘤细胞系中诱导远端调控序列荧光素酶报告基因和近端调控序列荧光素酶报告基因的活性。结论成功构建了CYP 3A4启动子报告基因,在此基础上建立了在不同肿瘤细胞中检测PXR转录活性的方法。     

虚寒状态下药物代谢酶CYP3A和转运蛋白P-gp变化的体内外实验研究

目的 通过体内外实验探讨虚寒状态下药物代谢酶CYP3A和转运蛋白P-gp变化.方法 连续14 d每天肌注氢化可的松粉针剂(20 mg/kg)制造虚寒大鼠模型,观察正常、虚寒大鼠肝、小肠CYP3A活性和小肠P-gp蛋白水平;选用L02细胞和Caco-2细胞作为细胞模型,分别用正常和虚寒状态大鼠血清对其进行干预,分别观察L02细胞中CYP3A活性和Caco-2细胞中P-gp蛋白水平.结果 虚寒模型大鼠肝和小肠微粒体CYP3A活性显著降低(P＜0.05),小肠P-gp蛋白表达显著降低(P＜0.05).虚寒状态L02细胞中CYP3A活性明显降低(P＜0.05),但虚寒状态Caco-2细胞中P-gp蛋白水平没有显著变化.结论 体内、外实验共同验证了虚寒状态下CYP3A活性处于低下状态,至于Caco-2细胞中P-gp没变化,可能与Caco-2细胞株本身为癌细胞,P-gp高表达有关.