瑞替普酶融合蛋白在大肠杆菌中表达条件的优化及其复性

目的:为优化瑞替普酶(reteplase,r-PA)在大肠杆菌中的高效融合表达的条件,并提高其复性率.方法:通过改变诱导时间和温度、诱导剂浓度、培养基pH值及氨苄青霉素(Amp)浓度等条件,利用SDS-PAGE分析以上条件的改变对表达产物产量的影响.运用金属螯合层析对融合蛋白进行纯化和复性.结果与结论:LB培养基pH值为6,Amp浓度为100μg/mL,乳糖浓度为5 mmol/L的条件下39℃诱导4 h可获得高效表达的r-PA融合蛋白,其表达量占全菌蛋白的70%,其产物主要以包涵体形式存在.融合蛋白运用金属螯合层析一步纯化复性,其复性率可达10%,比活为55.7 U/μL.     

芳香硝基化合物可降解性研究

经过驯育得到具有降解芳香硝基化合物能力的混合菌群及6种单一菌株。在好氧条件下,芳香硝基化合物浓度为600mg/L肘,混合菌群对其降解率,24h为77.6％,48h为88.2％以上。而6种单一菌株对芳香硝基化合物的降解率,48h均在20.0％～21.6％间。该驯育菌群降解芳香硝基化合物的适宜条件为:好氧.温度25～30℃,不加外源碳、氮营养,只加少量磷酸盐及镁盐。     

应用大孔吸附树脂分离纯化葶苈子总黄酮的研究

目的考察6种大孔树脂对葶苈子总黄酮成分的分离纯化性能,确定最佳工艺条件。方法以总黄酮吸附量、洗脱率、洗脱物总黄酮含量为指标,采用紫外-可见分光光度法进行含量测定。结果NKA-Ⅱ型树脂对葶苈子总黄酮具有较好的纯化分离能力,其最佳工艺条件为:葶苈子提取物浓度4g/mL(生药量),最大吸附量12.92mg/g,装柱径高比1∶12,吸附流速3mL/min,洗脱剂80%乙醇,洗脱量5倍柱体积,洗脱流速3mL/min。结论NKA-Ⅱ型树脂纯化分离葶苈子总黄酮的最佳工艺稳定高效,可推广用于生产。     

尿酸酶产生菌的筛选、基因克隆及表达

目的:构建表达尿酸酶的重组基因工程菌,提高尿酸酶的表达量.方法:从12株酵母菌中筛选得到1株产尿酸酶的产朊假丝酵母Cu2357菌株,应用DNA重组技术,将野生菌尿酸酶基因克隆到表达载体pKA中,获得重组尿酸酶基因工程菌 E.coli pKU/JM109.结果:构建的表达载体中的目的基因序列正确.经SDS-PAGE检测表明,表达的蛋白质相对分子质量约为34 kDa,含量占细胞可溶性蛋白的49%. 优化培养条件后,发酵液尿酸酶活力可达16 U/mL,是野生菌产尿酸酶量的240多倍.结论:尿酸酶基因在E.coli pKU/JM109中实现了高效表达.     

富铬酵母的制备及最佳工艺条件研究

目的:研究设计制备富铬酵母的最佳工艺条件.方法:对5株啤酒酵母和三种培养基进行比较,选出富铬能力相对较强的菌株和培养基,确定其最佳培养条件.结果:富铬酵母的最佳培养条件为:天然南瓜汁作为培养基,铬浓度为300μg/mL,pH为5.0,接种量为10%,培养时间为24 h,培养温度为28℃,转速为200 rpm.在此条件下,富铬酵母的生物量为0.867 3 g/100 mL,有机铬含量为516.25μg/g.结论:该生物制品安全无毒,生产成本低,很具有市场前景.     

微生物全细胞转化液中L-哌啶甲酸的分离提纯

目的:筛选适用于分离提纯微生物全细胞转化液中L-哌啶甲酸的树脂,并且确定L-哌啶甲酸分离提纯的工艺条件。方法:首先采用静态吸附法比较六种树脂对L-哌啶甲酸和L-赖氨酸的吸附量、选择性分离系数,以及考察温度对吸附量和回收率的影响,然后考察L-哌啶甲酸的动态吸附—洗脱条件。结果:在六种树脂中,D103-MTBE催化树脂可以获得最高的L-赖氨酸/L-哌啶甲酸选择性分离系数;在20×380 mm层析柱,1 mL/min上样流速,0.04%(v/v)氨水洗脱液,0.4 mL/min洗脱液流速的条件下,L-哌啶甲酸的回收率为96.33%。结论:该分离提纯方法操作简单,对环境无污染,同时可以获得较高的产品纯度和回收率,适合应用于放大生产。     

溶藻菌N25的筛选及溶藻效果观察

目的筛选高效溶藻菌,初步观察其对铜绿微囊藻的溶藻效果。方法从处理生活污水的活性污泥中分离菌株,将其接种至微囊藻培养液中,通过观察培养液颜色和藻细胞数量的变化,初步筛选出溶藻菌。重复上述过程3次,并用溶藻率来初步评价其溶藻效果,获得较为高效的溶藻菌。用PCR的方法,对高效菌株的16S rDNA进行测序并与GeneBank对比,鉴定其种属。运用透射电子显微镜观察藻类在溶藻菌作用下48 h内发生的形态学变化,证实溶藻效果。结果从活性污泥中分离得到一株高效溶藻菌,命名为N25-2(以下简称为N25)。经过16S rDNA鉴定,该菌与芽孢杆菌(Bacillus SP.)或纺缍形赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus fusiformis)的匹配度均为99%。当培养液中藻的数量达到1×106个/mL,细菌的数量达到1×106 cfu/mL时,在48 h内,该菌的溶藻率达到72%以上。透射电子显微镜观察发现,经过N25处理后,微囊藻出现空泡增加,多面体深染,藻胆体增加,质壁分离和内部结构破坏等形态学改变。结论 N25具有较好的溶藻效果,能诱导微囊藻出现多种形态学改变,其溶藻机制可能是细菌分泌物导致藻类细胞死亡所致,但...     

花椒油的超临界CO2萃取与微胶囊的直接制备

研究了超临界CO2萃取花椒油,并直接采用同轴喷嘴喷雾干燥制备微胶囊。考察了相同的萃取压力、温度、时间和壁材浓度下,壁材流量、CO2流量和干燥温度对包埋率的影响,对不同干燥条件下获得的微胶囊形态的电镜扫描结果进行了比较。结果表明:花椒油微胶囊制备的最佳工艺条件为:壁材进样量为1mL/min,CO2气体流量为2 L/min,进风温度为80℃。在此基础上得到的微胶囊包埋率达57.8%,相对包埋率达77.4%。     

一株聚丙烯酰胺降解菌的分离鉴定及其生物降解

应用厌氧Hungate技术,从大庆油田常规污水回注工艺采油的采出液中分离到一株聚丙烯酰胺降解菌株A9。对该菌株进行形态、生理生化、分子生物学鉴定结果表明:菌株为革兰氏阳性(G ),短杆状,具有硫酸盐还原功能,产H2S,兼性厌氧,通过核糖体16S rDNA基因序列鉴定,菌株与Anaerofilum pentosovorans(AP716816S)的相似性为98%,暂时命名为Anaerofilum pen-tosovoransA9。扫描电镜和红外光谱分析结果表明:菌株以聚丙烯酰胺为唯一碳源,菌株作用前后表面结构发生变化,分子链上的酰胺基水解成羧基,侧链降解,部分官能团发生改变,浓度为500mg/L时,20 d菌株生物降解率为61.2%,其溶液粘度下降显著。气质联机(GC-MS)初步分析表明:聚合物发生断链生成的低分子量化合物除含双键、环氧和羰基的聚丙烯酰胺碎片外,大多属于一般丙烯酰胺低聚体的衍生物。     

氯氰菊酯降解菌的分离鉴定及其降解特性研究

目的 分离得到能高效降解氯氰菊酯的菌株.方法 采用选择性培养基从农药厂的污泥中进行富集和分离筛选高效菌株,并且用16S rDNA序列分析法和其生理生化特征对其进行鉴定.结果 该菌株鉴定为克雷伯氏菌属(Klebsiella sp.),命名为Klebsiella sp.J-2(登录号为AY989899),菌株J-2能以氯氰菊酯为唯一碳源进行生长,降解氯氰菊酯的最适温度是35 ℃,最佳pH是7.0.结论 菌株J-2是一株能高效降解氯氰菊酯的菌株.     

脑得生丸中红花提取物纯化工艺研究

目的：研究大孔吸附树脂分离纯化脑得生丸中红花的工艺,确定最佳工艺条件和参数。方法：红花水提取液浓缩后过大孔吸附树脂柱,以羟基红花黄色素A的含量为考察指标,对影响羟基红花黄色素A分离纯化的工艺参数进行考察。结果：HPD-100型树脂为红花最佳分离纯化树脂,其分离纯化红花的最佳工艺条件：吸附流速1mL·min-1,最大上样量为5倍树脂柱体积,洗脱剂为30%乙醇,洗脱流速为3mL·min-1等。结论：HPD-100型树脂在所确定的工艺条件下能很好地分离纯化羟基红花黄色素A,为纯化红花的最佳工艺。     

HPLC法测定注射用胸腺肽α1的含量

目的:改进注射用胸腺肽α1含量测定的方法。方法:色谱柱为LunaC18(5μm,4.6mm×250mm);流动相A为0.05mol/L磷酸二氢钾缓冲液(pH5.7)-乙腈(92∶8),流动相B为乙腈,梯度洗脱,流速为1.0mL/min;检测波长为210nm;柱温为室温;进样量20μL。结果:胸腺肽α1在0.05～0.8mg/mL范围内具有良好的线性关系,r=0.9999,平均回收率为99.4%。结论:改进后的方法操作简单,省时,重复性好,进一步完善了产品的质量标准。     

5,6-二甲基-2,3-吡嗪二甲酰胺的抗氧化能力研究

目的:研究5,6-二甲基-2,3-吡嗪二甲酰胺的抗氧化能力.方法:采用鲁米诺化学发光法测定5,6-二甲基-2,3-吡嗪二甲酰胺清除羟自由基的能力;邻苯三酚自氧化法研究5,6-二甲基-2,3-吡嗪二甲酰胺清除超氧阴离子自由基的能力.结果:5,6-二甲基-2,3-吡嗪二甲酰胺对·OH有清除作用,且呈现量效关系,其IC50为...     

D101型大孔树脂分离纯化连翘酯苷的工艺研究

目的：开发一种高效实用的分离纯化连翘酯苷的技术，使分离纯化工艺达到最优化。方法：以连翘酯苷含量为指标，考察D101型大孔树脂分离纯化连翘酯苷的最佳吸附及洗脱条件。结果：D101型大孔树脂分离纯化连翘酯苷的最佳工艺为上样液浓度为含连翘生药1．2g／mL，用6BV的30％乙醇液进行洗脱，二次洗脱后，连翘酯苷的含量可达60％以上。结论：该技术能显著提高连翘酯苷的纯度，具有吸附量大，洗脱容易，经济环保等优点，适合于规模化生产。     

GC法测定盐酸特比萘芬乳膏中防腐剂苯甲醇的含量

目的：建立气相色谱法测定盐酸特比萘芬乳膏中防腐剂苯甲醇的含量分析方法。方法：样品经无水乙醇提取后,采用SE-54毛细管色谱柱（30 m×0.32 mm,0.25μm）,程序升温,FID检测器;载气为高纯N2,流速1.0 mL/min;进样口温度为200℃,检测器温度为250℃;苯甲酸甲酯为内标物;进样方式为分流进样,分流比30∶1;进样量为1μL。结果：苯甲醇在0.10013-1.0013 mg/mL（r=1）浓度范围内线性良好;在高、中、低平均加样回收率分别为99.45%、99.52%、99.67%,RSD分别为0.59%、0.36%、0.43%（n=3）。测定了三批不同批号的样品,结果苯甲醇的含量比较稳定,分别为2.00%、2.02%、1.99%,与处方投样量（2%）保持一致。结论：本方法简便,结果准确,稳定性好,精密度高,适用于检测盐酸特比萘芬乳膏中苯甲醇的含量。     

氯芬待因片含量测定方法学研究

目的:氯芬待因片含量测定的方法学研究.方法:色谱柱为Symmetry C18(5μm,250 mm×4.6mm);流动相为乙腈-0.4%乙酸铵水溶液-三乙胺(30∶70∶0.2);检测波长250 nm;流速1.0 mL/min.结果:双氯芬酸钠在0.050～2.500 mg/mL浓度范围内线性关系良好(r=0.999 ...     

青少年肥胖合并良性黑棘皮病与代谢综合征

目的：总结青少年肥胖合并良性黑棘皮病患者的代谢特点,提高对该类疾病的认识.方法：114例青少年肥胖患者分为合并黑棘皮病组（病例组）及单纯肥胖组（对照组）,在2组人群中进行基本生理、生化指标测定及口服葡萄糖耐量试验.采用新制定的中国儿童青少年人群≥10岁的代谢综合征（MetS）诊断标准（中国标准）计算MetS检出率并进行比较.结果：在114例青少年肥胖患者中合并黑棘皮病组46例（40.4％）及单纯肥胖组68（59.6％）其中合并黑棘皮病组体重指数、腰围等明显升高;空腹胰岛素及胰岛素抵抗指数明显升高.结论：在青少年肥胖人群中,超过1/3患儿合并黑棘皮病,黑棘皮病是严重肥胖及胰岛素抵抗的标志;黑棘皮病的发生与高胰岛素水平明显相关.     

大孔吸附树脂纯化槟榔中总鞣质的研究

目的 以槟榔中的总鞣质为纯化对象,比较8种大孔树脂的静态吸附过程,筛选出适合吸附槟榔总鞣质的树脂,并探索总鞣质在所选树脂上的吸附和解吸工艺条件。方法 采用磷钼钨酸-干酪素比色法测定总鞣质的含量,计算树脂的吸附量、吸附率和解吸率,利用单因素实验研究大孔吸附树脂分离纯化槟榔中总鞣质的最佳工艺条件。结果 选择HPD-826大孔树脂,其对总鞣质的饱和吸附量为46.65 mg/g;HPD-826树脂对槟榔中总鞣质的最佳纯化工艺为：上柱液中总鞣质质量浓度为4.30 mg/mL,上样液体积3.5 BV,上样流速2 BV/h,洗脱液乙醇体积分数70%,洗脱液体积3 BV。结论 HPD-826型大孔树脂表现出较好的吸附性能与解吸效果,能很好地富集纯化槟榔中的总鞣质。     

复方奥美拉唑胶囊质量控制方法的研究

目的：建立复方奥关拉唑胶囊的质量控制方法。方法：紫外分光光度法和高效液相色谱法测定复方奥美拉唑胶囊中奥美拉唑的含量。结果：分光光度法在302Hill波长下测定奥美拉唑的吸光度,在2～17μg／mL的浓度范围内,线性关系良好。回收率试验为100．63％,RSD为1．12％（n=9）;高效液相色谱法,色谱柱：Kromasil—C18柱（200min×4．6mid,5μm）,流动相为甲醇-水-磷酸-三乙胺=60：40：0．12：0．3,流速为0．8mL／min,检测波长为302nm,奥美拉唑在2～30μg／mL的浓度范围内线性良好,回收率试验100．64％,RSD为1．1％,含量为标示量的99．36％,RSD为0．57％。结论：所建立的分析方法可用于复方奥关拉唑胶囊的质量控制。     

双氯芬酸钠滴眼液有关物质检测方法研究

目的：建立双氯芬酸钠滴眼液有关物质高效液相色谱检查法.方法：以十八硅烷键合硅胶为填充剂;以0.03 mol/L磷酸溶液-0.2％醋酸（V/V）甲醇溶液（33∶67）为流动相;流速：1.0mL/min;柱温：室温;检测波长：222 nm;进样量：20μL.结果：该方法中有关物质之间及有关物质与主峰分离良好;检测限为0.1996ng;应在2h内完成测定.结论：该法操作简便、专属,能有效快速地控制产品质量.