柑橘叶片蛋白质高效提取与溃疡病PthA蛋白质Western blot分析

利用三氯乙酸-丙酮法、Tris-HCl提取法、改良PBS法提取柑橘叶片蛋白质,对提取蛋白质进行SDS-PAGE电泳、质谱鉴定和Western blot分析,结果表明,用改良PBS法提取的蛋白质质量浓度达30μg/μL,其SDS-PAGE电泳条带清晰,无杂质干扰,能达到质谱对样品的要求.Western blot分析结果表明,与抗柑橘溃疡病相关的PthA蛋白质在转pthA-nls基因糖橙和转pthA-nls基因冰糖橙中成功表达,pthA-nls基因已整合进甜橙基因组,表达蛋白质具有免疫反应活性.     

茶树叶片抗寒相关蛋白提取方法比较研究

对茶树叶片采用3种蛋白质提取方法,并对SDS-PAGE电泳结果进行了比较分析。结果表明,发现利用改良丙酮沉降法提取蛋白,不仅提取效率高,而且杂质干扰少。电泳结果显示,蛋白条带清晰,数量多。利用这一方法对冷驯化下不同品种茶树叶片抗寒相关蛋白进行了研究,在云抗43和舒茶早中分别发现了与抗寒相关的23 ku下调蛋白和51 ku上调蛋白,获得了满意的蛋白SDS-PAGE分析结果。     

NaHCO3胁迫下刚毛柽柳叶片蛋白质差异表达谱的建立

目的为了研究刚毛柽柳响应盐胁迫的作用机制, 本研究以刚毛柽柳叶片为材料, 对叶片总蛋白质的提取方法进行优化, 探究出适用于双向电泳的刚毛柽柳叶片总蛋白质的提取方法, 并建立NaHCO₃胁迫下刚毛柽柳叶片差异蛋白质的表达谱。方法本研究比较了改良Tris-三氯乙酸, 改良Tris-三氯乙酸+PVP40, 改良Tris-三氯乙酸+丙酮和植物蛋白提取试剂盒法4种提取植物蛋白质的方法提取刚毛柽柳叶片总蛋白质的差异, 并利用蛋白质双向电泳用技术研究NaHCO₃胁迫后刚毛柽柳叶片蛋白质表达变化, 建立了盐胁迫下刚毛柽柳叶片差异蛋白表达谱。结果采用改良Tris-三氯乙酸法提取刚毛柽柳叶片蛋白质, 利用该方法可获得高质量的蛋白质样品, 所得到的双向电泳凝胶图谱中蛋白质分离效果好、图谱分辨率高, 通过ImageMaster 2D Platinum 7.0凝胶分析软件对NaHCO₃处理0和12 h的双向电泳凝胶图谱进行分析, 获得了25个响应盐胁迫的差异表达蛋白质, 并分析了差异表达蛋白量的变化。结论研究结果表明, 利用改良Tris-三氯乙酸法提取刚毛柽柳叶片蛋白质适用于双向电泳体系, 该方法可以用于对刚毛柽柳叶片蛋白质组学的研究。本研究建立了NaHCO₃胁迫下刚毛柽柳叶片差异蛋白质的表达谱, 为进一步分析刚毛柽柳耐盐分子机制奠定了基础。      

3种早春植物叶片蛋白质SDS-PAGE分析

[目的]通过对4种蛋白质提取方法对比分析,筛选出适于早春植物叶片蛋白质的提取方法。对3种蔷薇科植物不同时期叶片中蛋白质含量及组分进行测定分析,揭示叶片中蛋白质含量和组分的变化规律,为后期开展相应的蛋白组学研究提供理论基础。[方法]4种蛋白质提取方法:酚提取法,改良酚提取法,改良Tris-HCl法和TCA-丙酮法。通过考马斯亮蓝(G-250)染色法和SDS-PAGE法对3种早春植物叶片的蛋白质含量和组分进行测定。[结果]与其他3种蛋白质提取方法相比,利用TCA-丙酮法提取叶片中蛋白质,后期所得蛋白图谱效果最好,蛋白质条带多且清晰。4月初至6月初5个时期叶片中蛋白质含量整体呈"先增长后下降"的变化趋势,不同生长时期华北珍珠梅叶片蛋白质含量均明显低于日本晚樱和西府海棠。SDS-PAGE电泳表明:3种早春植物叶片蛋白质组分丰富,变化多样。花期为4-5月的日本晚樱和西府海棠叶片蛋白质表达的种类相对较多,条带也较清晰;花期为6-7月的华北珍珠梅叶片蛋白质条带和发生明显变化的蛋白质种类都比较少。[结论]TCA-丙酮法是针对3种蔷薇科植物最优蛋白质提取方法。早春蔷薇科植物花期与叶片蛋白质含量相关,开花前蛋白质含量持续增长,在花期达到最高;且花期较早的日本晚樱和西府海棠比花期晚的华北珍珠梅叶片蛋白质含量和蛋白组分高。     

菊花转抗虫基因植株的PCR快速鉴定

对经过卡那霉素抗性筛选所得到的菊花转苏云金芽胞杆菌毒蛋白Bt基因和转雪花莲外源凝集素GNA基因所得的抗性植株 ,利用改良SDS法提取菊花DNA ,然后利用NPTII引物对 6个菊花品种的抗性植株所提DNA进行PCR扩增 ,发现了符合NPTII基因片段大小的亮带 ,初步证实获得了转Bt基因和转GNA基因的菊花植株。     

cNHX1基因转化草莓的研究

[目的]探讨将完整的含柑橘cNHX1基因转化为草莓植株。[方法]以弗吉尼亚草莓品种为试材构建了含柑橘cNHX1基因的植物表达载体,并进行了酶切鉴定,然后将表达载体导入农杆菌EHA105中,获得了工程菌株;利用农杆菌转化法,把cNHX1基因转化成草莓植株,并利用PCR方法鉴定了转化植株。[结果]利用农杆菌转化法获得了转cNHX1基因,通过进一步利用含Kam的平板进行筛选,获得了纯合的转基因植株;对获得的转基因草莓植株提取叶片DNA,利用引物F01和R02进行扩增,结果在草莓基因组中可以扩增出1.63kb的目的条带,证明cNHX1基因已经整合到草莓基因组。[结论]为获得耐盐程度显著提高的转基因草莓奠定了初步基础。     

三色堇叶片DNA不同提取方法比较

以三色堇(Viola tricolor L.)叶片为材料,采用SDS法、CTAB法及改良CTAB法分别对三色堇叶片DNA进行了提取,并用琼脂糖凝胶电泳和紫外光谱对DNA提取质量和浓度进行检测.结果表明,改良CTAB法提取的DNA纯度最高,提取效率较高;SDS法提取的DNA含有较多的蛋白质或糖类杂质;CTAB法虽然能够除去蛋白质等杂质,但是DNA浓度低于改良CTAB法.     

提取玫瑰基因组DNA几种方法的比较

为了找到一种方便、快捷且经济高效的玫瑰叶片基因组DNA提取方法,为玫瑰后期的分子生物学研究奠定良好基础,以不同品种的玫瑰幼嫩叶片为材料,分别利用CTAB法、SDS法、改良CTAB法、试剂盒法4种方法提取玫瑰基因组DNA,经过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法对所提DNA的质量和产量进行检测比较。结果表明：4种方法均可从玫瑰叶片中提取到DNA,改良CTAB法作为对常规方法的改进,在保证经济实用的前提下提取到的DNA质量最好,浓度最高;而试剂盒法作为一种快速提取植物基因组DNA的新兴方法,虽然产量略低,费用略高,但操作步骤简单,耗时短,毒害小,高效快捷。各实验室可根据实际情况选择适宜的方法。     

分蘖洋葱叶片总蛋白提取与双向电泳条件优化

以分蘖洋葱叶片为试验材料,比较3种不同蛋白质提取方法对2-DE蛋白质双向电泳结果的影响,并对其中的蛋白上样量、SDS-PAGE凝胶浓度及双向电泳重复性进行筛选与优化。结果表明,与酚提取法和改良的酚提取法相比,TCA-丙酮提取法提取分蘖洋葱叶片总蛋白的操作简便,所得双向电泳图谱背景清晰,蛋白质点圆滑,数量及质量均较好,是一种切实可行的提取分蘖洋葱叶片总蛋白方法。应用Image Master 2D Platinum 7.0软件对图谱进行分析,凝胶上检测到超过650多个蛋白质点,不同凝胶之间蛋白质的匹配率达92.5%,具有较高的分辨率和重复性,建立一套适用于分蘖洋葱叶片总蛋白质组分析的双向电泳(2-DE)方法。     

药用绞股蓝属植物基因组DNA提取方法比较

从叶片中提取高质量的DNA是进行绞股蓝分子生物学研究的前提。植物基因组DNA的提取方法较多,笔者以安康平利县产绞股蓝属植物幼嫩叶片为材料,通过采用改良的CTAB法、改良SDS法和高盐低pH值法三种方法提取绞股蓝基因组DNA,并通过琼脂糖凝胶电泳对所提取DNA样品进行质量检测。结果显示高盐低pH值法提取的DNA电泳主带较亮且点样孔基本无异物,为绞股蓝叶片DNA提取比较适宜的方法。     

安纳微乳剂防治3种柑橘害虫的效果试验

室内和田间试验结果表明,58%安纳微乳剂500倍液防治橘全爪螨、400倍液防治柑橘黄圆蚧若虫、500倍液防治柑橘潜叶蛾均有较好的效果.安纳微乳剂在柑橘上使用安全,成本低,在生产上的应用前景看好.     

蛋白水解氨基酸肥料对红美人杂柑果实品质的影响

研究蛋白水解氨基酸肥料对红美人杂柑果实品质的影响,为其在柑橘上的应用提供理论依据。以红美人杂柑为研究对象,以大豆蛋白水解氨基酸肥料为试验材料,从柑橘谢花2/3开始,隔20 d喷施一次蛋白水解氨基酸肥料800倍液,每处理开始喷施的时间相差20 d,年生长周期内每处理各喷施3次,用来研究蛋白水解氨基酸对红美人春梢叶片的叶绿素含量、果实色度及品质的影响。结果表明,谢花2/3时和谢花2/3后60 d开始喷施蛋白水解氨基酸肥料可显著增加红美人春梢的叶绿素含量,增加幅度分别为20.6%和22.6%;喷施蛋白水解氨基酸肥料处理果皮的色度L值、色度a值和色度b值均呈正值,谢花2/3时开始喷施处理的L、a、b值显著高于对照,果实橙红色,亮度较好;喷施蛋白水解氨基酸肥料的果实可食率、可溶性固形物和维生素C含量均高于对照,而总酸含量低于对照,果实的品质较好。另外,谢花2/3时开始喷施蛋白水解氨基酸肥料可以增加果皮亮度,促进果实着色,单果质量较大,利于提高产量,果皮较薄,可食率增加,其综合表现最佳。因此, 蛋白水解氨基酸肥料在红美人上使用时,建议在谢花2/3时开始喷施,每20 d喷施1次,连续喷3次的效果较好。     

台州橘区主要柑橘品种的内质状况

通过对台州橘区10个柑橘品种、176个样品的内质指标检测,分析了柑橘果实的内质状况及其品种之间的差异.     

Detection of citrus canker in citrus plants using laser induced fluorescence spectroscopy

Citrus canker is a serious disease caused by Xanthomonas citri subsp. citri bacteria, which infects citrus plants (Citrus spp.) leading to a large economic loss in citrus production worldwide. In Brazil citrus canker control is done by an official eradication campaign, therefore early detection of such disease is important to prevent greater economic losses. However, detection is difficult and so far it has been done by visual inspection of each tree. Suspicious leaves from citrus plants in the field are sent to the laboratory to confirm the infection by laboratory analysis, which is a time consuming. Our goal was to develop a new optical technique to detect and diagnose citrus canker in citrus plants with a portable field spectrometer unit. In this paper, we review two experiments on laser induced fluorescence spectroscopy (LIF) applied to detect citrus canker. We also present new data to show that the length of time a leaf has been detached is an important variable in our studies. Our results show that LIF has the potential to be applied to citrus plants.     

柑橘果实风味组学研究进展

风味是决定柑橘果实整体品质的重要因素,直接影响消费者的购买意愿.风味组学则是解析风味品质物质基础的组学技术.柑橘风味包含甜味、酸味、香味、苦味、质地和异味等多种属性.本文对柑橘风味组学的产生、研究策略、方法以及研究进展进行了综述和展望.文章提出,柑橘风味组学相关研究重点将更注重消费者偏好性,发掘影响柑橘风味的最主要代谢...     

青霉素喷施防治柑橘黄龙病试验初报

柑橘黄龙病是世界性分布的柑橘毁灭性病害,严重制约着柑橘产业的发展．为探究青霉素对柑橘黄龙病的防治效果,本试验采用喷施的方式对柑橘黄龙病病树进行处理,同时结合实时荧光定量ＰＣＲ技术对病树内黄龙病菌量进行动态监测,确定青霉素对柑橘黄龙病的相对防效．结果表明连续喷施４次青霉素３个月和７个月后病树中黄龙病菌含量均出现不同程度的上调,相对防效分别为－１７０.１６％和－６３.９６％．以上结果表明喷施的方式进行青霉素处理黄龙病病树对柑橘黄龙病并不能取到防治效果．     

柑桔对黄龙病病原与病毒混合侵染的反应

已知在福建省柑桔产区发生的由嫁接传染的病害有黄龙病、衰退病、裂皮病和碎叶病。由于长期以来柑桔采用无性繁殖的结果,造成这几种病害多以两种或两种以上的混合侵染形式存在。对苗期进行混合接种的试验结果表明,病状表现的严重程度与柑桔对该病原的抗性程度的密切关系,感病的病状明显,抗病的病状不明显或不表现;但各组合接种株与其过氧化物酶同酶的变化则表现出比较复杂的关系。福建省柑桔的主栽品种是芦柑、雪柑和福桔,它们对衰退病、裂皮病和碎叶病具有一定的抗性,所以这３种病原的混合侵染对本砧的柑桔生产没有造成严重的危害。     

低产柑桔园叶片及土壤营养状况分析评价

通过对广西叮当农场低产柑桔园10份柑桔叶片样品的大量、中微量元素和10份土壤样品的土壤pH、有机质及大量、中微量元素进行分析,结果表明:土壤pH偏低,平均为5.26,土壤pH与土壤交换性Ca、Mg之间为极显著正相关;土壤有机质含量丰富,平均为3.02%。土壤有机质与碱解氮之间为显著正相关,土壤与叶片的大量元素N含量适中,但部分样品缺乏P、K而部分超过适量范围;土壤速效N、P、K和植株中的全量N、P、K为负相关关系。土壤和植株叶片中微量元素缺乏较为严重,特别是Zn、B。土壤中的Ca/Mg、K/Mg与植株叶片中全量N、P、K、Ca、Mg、Zn、B都有拮抗作用,说明土壤和植株之间营养元素吸收机理的复杂性,同时也说明了土壤化验和配方施肥的重要性。因此,建议在该农场施用石灰或碱性肥料改善土壤酸碱度,适量增施中微量元素钙、镁、锌肥,特别是应普施硼肥,使柑桔达到优质高产,并为广西低产柑桔园土壤合理配肥提供参考依据。     

柑橘皮渣制备低分子果胶及其抗癌活性的评价

以温州蜜柑、胡柚为原料,分别取其皮及榨汁后的果渣,采用酸提醇沉的方法制备柑橘果胶。将制得的各种柑橘果胶经121℃处理30 min得到低分子柑橘果胶（LMCP）,分别测定其分子质量、半乳糖醛酸含量、酯化度和体外抗人前列腺癌激素不依赖型PC 3细胞活性。结果表明,经过高温处理后4种柑橘果胶的分子质量比处理前下降64%～92%,以温州蜜柑皮的下降最大,胡柚皮的下降最小;半乳糖醛酸含量比处理前上升了6%～14%,以温州蜜柑皮的最大,温州蜜柑果渣和胡柚皮的最小;酯化度比处理前下降了8%～21%,以胡柚皮的最大,温州蜜柑皮和胡柚果渣的最小。高温处理后4种LMCP在高剂量（10 mg·mL-1）下对PC 3细胞的抑制作用均在70%以上,其中以温州蜜柑皮和胡柚果渣为原料制备的LMCP的抑制率高达90%以上。     

柑橘留树保鲜研究进展

从柑橘留树保鲜的管理技术、保鲜药剂处理、留树保鲜果实品质变化及对第2年产量的影响等方面对柑橘留树进行综述,指出了柑橘留树保鲜研究应以品种选择、植物生长调节物质的研究与开发、配套技术措施研究、留树保鲜期内树体生理生化作为研究的发展方向.