两种分离脐血间充质干细胞的方法比较

背景:目前分离脐血间充质干细胞的方法很多,尚没有确定一种为最有效的方法。目的:寻找一种最为可靠的脐血间充质干细胞分离方法。方法:应用Percoll分离液法和羟乙基淀粉沉降法对脐血进行分离得到单核细胞,在含体积分数15%新生牛血清的DMEM/F12培养基中进行培养并传代。观察不同分离方法脐血单核细胞的回收率,每次传代的时间和细胞增值速度,培养过程中间充质干细胞形态的变化情况,并用流式细胞仪检测第3代细胞表面标志物CD90、CD44、CD34的表达。结果与结论:与Percoll分离液法相比羟乙基淀粉沉降法获得的单核细胞多,单核细胞回收率高(P<0.01),第1次传代时间短(P<0.01)。然而两种方法获得的细胞经培养在形态的变化和表面标志物CD90、CD44、CD34的表达上差异并无显著性意义(P>0.05)。所以羟乙基淀粉沉降法的分离效率较高,培养时间短,但是并不能获得质量较高的脐血间充质干细胞。     

脐血干细胞的分离方法比较

目的:为合理选择脐血干细胞的分离方法提供参考.方法:采用改良HES(羟乙基淀粉)沉降分离法和Ficoll分离法分离脐血干细胞,比较两种方法分离前后的有核细胞数、分离后的CD34 细胞数、分离后的有核细胞回收率及台盼蓝拒染率.结果:改良HES沉降分离法和Ficoll分离法分离前的脐血量、有核细胞浓度和细胞数差异无统计学意义(P＞0.05);分离后改良HES法有核细胞数、CD34 细胞数、有核细胞回收率高于Ficoll 分离法(P＜0.05),而显示有核细胞活力的台盼蓝拒染率两种方法比较差异无统计学意义 (P＞0.05).结论:改良HES分离法的有核细胞回收率高,分离速度快、污染机会小、终体积小,是脐血干细胞分离较好的方法.     

两种分离脐血间充质干细胞的方法比较

背景：目前分离脐血间充质干细胞的方法很多,尚没有确定一种为最有效的方法。目的：寻找一种最为可靠的脐血间充质干细胞分离方法。方法：应用Percoll分离液法和羟乙基淀粉沉降法对脐血进行分离得到单核细胞,在含体积分数15%新生牛血清的DMEM/F12培养基中进行培养并传代。观察不同分离方法脐血单核细胞的回收率,每次传代的时间和细胞增值速度,培养过程中间充质干细胞形态的变化情况,并用流式细胞仪检测第3代细胞表面标志物CD90、CD44、CD34的表达。结果与结论：与Percoll分离液法相比羟乙基淀粉沉降法获得的单核细胞多,单核细胞回收率高（P〈0.01）,第1次传代时间短（P〈0.01）。然而两种方法获得的细胞经培养在形态的变化和表面标志物CD90、CD44、CD34的表达上差异并无显著性意义（P〉0.05）。所以羟乙基淀粉沉降法的分离效率较高,培养时间短,但是并不能获得质量较高的脐血间充质干细胞。     

干细胞分离仪与手工分离法分离脐带血的效果对比分析

在产妇同意知情的情况下,选取40份我库收集的脐带作为研究对象,且按随机分组法分成观察组和对照组各20份,观察组采用干细胞分离仪进行脐带血分离,对照组采用手工分离法分离,分析对比两组分离效果。结果观察组有核细胞回收率、CD34+回收率高于对照组(P<0.05);观察组红细胞去除率高于对照组(P<0.05);观察组有核细胞回收标准差、CD34+回收标准差低于对照组(P<0.05)。干细胞分离仪分离脐带血的效果要优于手工分离,且干细胞分离仪的标准误更小,数据更稳定可靠。     

两步法分离人脐血单个核细胞的最佳条件

背景:如何获得较为纯化、高活性的干细胞,目前未见深入研究报告,也未见一个标准化操作流程方案。目的:探讨两步法分离人脐血单个核细胞最佳分离条件。方法:观察羟乙基淀粉在20,30,40,50,60,70min不同时间沉淀脐血中红细胞的效果;使用人淋巴细胞分离液,分别在800,700,600,500,400g/min,离心30,25,20min的条件下分离人脐血单个核细胞。结果与结论:6%羟乙基淀粉沉淀脐血60min效果最好;使用密度为(1.0770±0.0001)g/mL人淋巴细胞分离液,在4℃条件下以700g/min离心力,离心30min,洗涤3次,这样获得的人脐血单个核细胞效果最好,所得细胞沉淀中混杂细胞如红细胞及其他细胞碎片较少,人脐血单个核细胞的细胞得率及活力比较高。提示应用羟乙基淀粉沉淀和人淋巴细胞分离液分离两步法,在最佳时间条件下可提高脐血干细胞的回收率。     

人骨髓间充质干细胞分离方法的比较

目的:探讨人骨髓间充质干细胞原代培养过程中最佳的分离方法。方法:留取暨南大学第一附属医院骨科2004-10/2005-06健康供者的骨髓10份,分别采用羟乙基淀粉沉淀法,淋巴细胞分层液分离法,氯化铵裂解红细胞法,全骨髓法四种方法分离骨髓有核细胞,观察四种方法在细胞出现伸展的时间,原代培养的时间方面的差异,流式细胞仪对培养得到的间充质干细胞进行表面标志检测。结果:①在其他条件相同的情况下,羟乙基淀粉沉淀法10份标本全部培养成功,淋巴细胞分层液分离法10份中有9份得到间充质干细胞,氯化铵裂解红细胞法10份中仅1份得到间充质干细胞,全骨髓培养法10份中有3份得到间充质干细胞。②羟乙基淀粉沉淀法细胞出现伸展和原代培养的时间短于淋巴细胞分层液分离法犤乙基淀粉沉淀法:羟(54.0±3.0h,(12.4±1.4)d;淋巴细胞分层液分离法:(74.0±5.2)h,(14.6±0.9)d,)P<0.01犦③流式细胞仪检测骨髓间充质干细胞表面表达CD13,CD29,。CD44,不表达造血细胞的标志CD45,CD34。结论:经比较羟乙基淀粉沉淀法明显优于其他分离方法,在人骨髓间充质干细胞的培养过程中建议使用此种物理沉降方法分离骨髓有核细胞。     

两步法分离人脐血单个核细胞的最佳条件

背景：如何获得较为纯化、高活性的干细胞,目前未见深入研究报告,也未见一个标准化操作流程方案。目的：探讨两步法分离人脐血单个核细胞最佳分离条件。方法：观察羟乙基淀粉在20,30,40,50,60,70min不同时间沉淀脐血中红细胞的效果;使用人淋巴细胞分离液,分别在800,700,600,500,400g/min,离心30,25,20min的条件下分离人脐血单个核细胞。结果与结论：6%羟乙基淀粉沉淀脐血60min效果最好;使用密度为（1.0770±0.0001）g/mL人淋巴细胞分离液,在4℃条件下以700g/min离心力,离心30min,洗涤3次,这样获得的人脐血单个核细胞效果最好,所得细胞沉淀中混杂细胞如红细胞及其他细胞碎片较少,人脐血单个核细胞的细胞得率及活力比较高。提示应用羟乙基淀粉沉淀和人淋巴细胞分离液分离两步法,在最佳时间条件下可提高脐血干细胞的回收率。     

人骨髓间充质干细胞分离方法的比较

目的：探讨人骨髓间充质干细胞原代培养过程中最佳的分离方法。方法：留取暨南大学第一附属医院骨科2004-10／2005-06健康供者的骨髓10份，分别采用羟乙基淀粉沉淀法，淋巴细胞分层液分离法，氯化铵裂解红细胞法，全骨髓法四种方法分离骨髓有核细胞，观察四种方法在细胞出现伸展的时间，原代培养的时间方面的差异，流式细胞仪对培养得到的间充质干细胞进行表面标志检测。结果：①在其他条件相同的情况下，羟乙基淀粉沉淀法10份标本全部培养成功，淋巴细胞分层液分离法10份中有9份得到间充质干细胞，氯化铵裂解红细胞法10份中仅1份得到间充质干细胞，全骨髓培养法10份中有3份得到间充质干细胞。②羟乙基淀粉沉淀法细胞出现伸展和原代培养的时间短于淋巴细胞分层液分离法[羟乙基淀粉沉淀法：（54．0&;#177;3．0）h，（12．4&;#177;1．4）d；淋巴细胞分层液分离法：（74．0&;#177;5．2）h,（14．6&;#177;0．9）d，P〈0．01]。③流式细胞仪检测骨髓间充质干细胞表面表达CD13，CD29，CD44．不表达造血细胞的标志CD45，CD34。结论：经比较羟乙基淀粉沉淀法明显优于其他分离方法，在人骨髓间充质干细胞的培养过程中建议使用此种物理沉降方法分离骨髓有核细胞。     

两种分离人骨髓单个核细胞方法的比较

目的:探讨外周动脉性疾病患者自体骨髓移植治疗骨髓单个核细胞最佳的分离方法.方法:行自体骨髓移植外周动脉性疾病患者39例,分别采取羟乙基淀粉沉淀法和密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞,观察骨髓丢失的单个核计数及CD34+细胞比率的差异.结果:羟乙基淀粉沉淀法得到的分离物的单个核细胞及CD34+细胞丢失率低于密度梯度离心法[羟乙基淀粉沉淀法为(55.08±6.00)%,(54.71±7.58)%;密度梯度离心法为(82.38±4.79)%,(73.30±3.68)%,P<0.01].结论:经比较,羟乙基淀粉沉淀法明显优于密度梯度离心法,在外周动脉性疾病患者自体骨髓移植治疗中建议使用羟乙基淀粉沉淀法分离骨髓单个核细胞.     

人胎盘间充质干细胞4种消化分离方法的效果比较

背景:目前已从多种组织器官中分离出间充质干细胞,如何更高效地获取大批量纯度佳的干细胞仍是研究目标之一.目的:对人胎盘间充质干细胞采取4种不同的消化分离方法,比较其分离效果.设计、时间及地点:细胞学体外对比观察,于2007-07/2008-01在暨南大学医学院血液病研究所完成.材料:胎盘标本来源于足月正常剖宫产胎儿,由暨南大学附属第一医院提供.胶原酶Ⅱ、胶原酶Ⅳ为GIBCO产品,羟乙基淀粉为B.BRAUN产品,淋巴细胞分层液为上海试剂二厂产品.方法:胎舷组织剪碎后甲均分为4组:胶原酶Ⅳ+羟乙基淀粉沉淀组、胶原酶Ⅱ+羟乙基淀粉沉淀组、胶原酶Ⅱ+淋巴细胞分层液分离组、胶原酶Ⅱ+氯化铵裂解红细胞组,5份标本/组.将第1组置于1 g/L胶原酶Ⅳ中,另外3组置于1 g/L胶原酶Ⅱ中,37℃消化45 min.过筛后收集各组细胞悬液,按组别对应施以羟乙基淀粉沉淀法、淋巴细胞分层液分离法、氯化铵裂解红细胞法进行分离.主要观察指标:观察4种方法在获取细胞数、培养成功率、细胞出现伸展时间、原代培养时间方面的差异,并对培养得到的细胞进行表面标志检测.结果:与胶原酶Ⅱ+羟乙基淀粉沉淀组比较,其余3组获取的细胞数均明显减少(t=2.92～8.16,P<0.05).在其他条件相同的情况下,胶原酶Ⅱ+羟乙基淀粉沉淀组培养成功率为100%.其余3组分别为80%,80%,20%.胶原酶Ⅱ+羟乙基淀粉沉淀组细胞出现伸展时间及原代培养时间均短于胶原酶Ⅱ+淋巴细胞分层液分离组(t=5.27～5.37,P<0.05).亦短于胶原酶Ⅳ+羟乙沉淀组(2.46～2.50,P<0.05).流式细胞仪检测示第3代人胎盘间充质干细胞强表达透明质酸受体CD44和整合素家族成员CD29,不表达造血干细胞标志CD34和CD45,也不表达内皮细胞标志CD106及HLA-DR.结论:使用胶原酶Ⅱ消化胎盘组织,结合羟乙基淀粉沉淀法能较好地分离人胎盘间充质干细胞.     

Effects of separation and separation with supplemental stroking in BALb/c infant mice

The purpose of this pilot study was to investigate selected stress, immune, and growth consequences of maternal separation and separation with supplemental stroking in neonatal BALB/c infant mice and their dams. Three groups of 5 litters each (7 pups per litter) were studied. Control litters were undisturbed. Separated litters experienced 3 h of daily maternal deprivation on postnatal days 6 to 10. Separated/stroked litters were separated also, but for 2 h, which was then followed by 1 h of stroking with a wet paintbrush to simulate maternal tactile stimulation. After the experimental period, all animals were returned to the nest and left undisturbed for 5 additional days. One pup from each litter was sacrificed on postnatal days 6, 8, 10, and 15. Spleens and thymuses were removed, weighed, and homogenized for cell sorting, cytokine analysis, and proliferation studies. Blood was drawn for corticosterone levels and hematocrit. Hematocrits and thymus weights were lower in separated mice, suggesting decreased growth and protein synthesis. Separated/stroked pups had increased splenic proliferation responses to conconavalin A and phytohemagglutinin at day 15. Separated dams' proliferative response to ConA was lower than control dams at day 15. Day 15 decreases in thymic CD8 cells occurred in pups, with an increased thymic H:S ratio in separated pups. CD90 cells were higher at day 15 in separated/stroked pups as were CD25s at day 10 in spleen and thymus. However, gene expression of cytokines was not measurable in spleen and thymic cells, with the exception of gamma-IFN in separated/stroked animals. Pooled organ homogenates were used in this preliminary work, and further studies are needed to more precisely analyze the stress, immune, and growth effects of these interventions.