心肌肥厚大鼠左室心肌CaMKⅣ改变的意义

目的探讨钙调素激酶Ⅳ在心肌肥厚发生中的作用及可能存在的信号转导途径.方法将100只健康雄性SD大鼠(体重150～180g)随机分为对照组(n=50)和心肌肥厚组(n=50),制备腹主动脉缩窄大鼠心肌肥厚模型,模型复制成功后4周以免疫组化法观察左室心肌钙调素激酶Ⅳ(CaMKⅣ)及磷酸化核转录因子CREB(pCREB)蛋白表达及分布,RT-PCR法检测心肌组织c-fos的mRNA含量.结果 CaMKⅣ及pCREB主要分布于细胞核,心肌肥厚组CaMKⅣ高于对照组(21.63 VS 15.56,P<0.05),pCREB也高于对照组(16.39 VS 11.03,P<0.05);心肌肥厚组心肌组织c-fos的mRNA表达较对照组明显增加(0.58 VS 0.33,P<0.05).结论压力超负荷时CaMKⅣ激活,同时核转录因子CREB磷酸化增加,并引起细胞核内早期基因c-fos表达增加,可能在介导心肌肥厚发生中起重要作用.     

KN-93抑制脊髓背角C-纤维诱发电位LTP的诱导和早期维持

[目的]探讨钙-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)在脊髓背角C-纤维诱发电位长时程增强(LTP)的诱导和维持中的作用。[方法]用钨丝微电极在脊髓腰膨大部背角浅层神经元细胞外记录C-纤维诱发电位,强直刺激坐骨神经诱导背角C-纤维诱发电位的LTP。在LTP诱导前后,在暴露的脊髓表面局部给予CaMKⅡ的选择性抑制剂KN-93,观察C-纤维诱发电位的变化。[结果]50μmol/L的KN-93不影响脊髓背角C-纤维诱发电位的幅度,但可完全阻断脊髓背角LTP的诱导(n=6)。KN-93呈时间依赖性翻转脊髓背角LTP。在LTP诱导后30min,50μmol/L的KN-93对LTP的早期表达无影响(n=4),而100μmol/L的KN-93在用药后,LTP逐渐降低,于3h降至对照水平(n=6);在LTP诱导后1h脊髓局部给予100μmol/L的KN-93,7例动物中有5例LTP被抑制;但同样浓度的KN-93,在LTP诱导后3h,不能翻转业已建立的LTP(n=5),且增加KN-93的浓度至200μmol/L也不能抑制脊髓背角LTP。[结论]CaMKⅡ参与脊髓背角C纤维诱发电位LTP的诱导和早期维持,但KN-93对晚期LTP无抑制作用。     

KN－93抑制脊髓背角C－纤维诱发电位LTP的诱导和早期维持

【目的】探讨钙-钙调蛋白依赖性蛋白激酶Ⅱ(caMKⅡ)在脊髓背角C-纤维诱发电位长时程增强(LTP)的诱导和维持中的作用。【方法】用钨丝微电极在脊髓腰膨大部背角浅层神经元细胞外记录C-纤维诱发电位，强直刺激坐骨神经诱导背角C-纤维诱发电位的LTP。在LTP诱导前后，在暴露的脊髓表面局部给予CaMKⅡ的选择性抑制剂KN-93，观察C-纤维诱发电位的变化。【结果】50μmol／L的KN-93不影响脊髓背角C-纤维诱发电位的幅度，但可完全阻断脊髓背角LTP的诱导(n=6)。KN-93呈时间依赖性翻转脊髓背角LTP。在LTP诱导后30min，50μmol／L的KN-93对LTP的早期表达无影响(n=4)，而100μmol／L的KN-93在用药后，LTP逐渐降低，于3h降至对照水平(n=6)；在LTP诱导后1h脊髓局部给予100μmol／L的KN-93，7例动物中有5例LTP被抑制；但同样浓度的KN-93，在LTP诱导后3h，不能翻转业已建立的LTP(n=5)，且增加KN-93的浓度至200μmol／L也不能抑制脊髓背角LTP。【结论】CaMKⅡ参与脊髓背角C纤维诱发电位LTP的诱导和早期维持，但KN-93对晚期LTP无抑制作用。     

The effects of KN-93 on β-MHC and ANF in cardiomyocytes hypertrophy.

目的 探讨钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)特异性抑制剂KN-93对大鼠心肌细胞肥大β-肌球蛋白重链(β-MHC) mRNA和心钠素(ANF) mRNA表达的影响.方法 原代培养SD乳鼠心肌细胞,分为对照组(不加任何处理)、神经肽Y(NPY)组(100 nmol/L NPY)、KN-93组(100 nmol/L NPY+10 μmol/L KN-93),分别作用心肌细胞24 h后,采用激光共聚焦显微镜记录心肌细胞核钙离子浓度的变化,Western blot检测CaMKⅡδ蛋白表达及荧光定量PCR检测心肌细胞β-MHC mRNA和ANF mRNA的表达.结果 NPY刺激心肌细胞24 h后核钙离子浓度、CaMKⅡδ蛋白表达及β-MHC mRNA和ANF mRNA表达明显增加.KN-93可抑制上述效应.结论 CaMKⅡ特异性抑制剂KN-93可抑制NPY诱导β-MHC mRNA、ANF mRNA表达.     

不同游泳训练后大鼠齿状回c-fos的表达

目的 探讨不同游泳训练方式对大鼠齿状回(dentate gyrus,DG)c-fos表达的影响. 方法 雄性SD大鼠55只,随机分为对照组(A组,n=5)、持续游泳训练组(B组,n=25)、间歇游泳训练组(C组,n=25).游泳训练6周后建立模型,选取即刻(0 h),0.5 h,1 h,2 h,4 h五个时间点,开颅取脑,采用免疫组化SABC法检测c-fos的表达,计数海马结构齿状回c-fos阳性细胞,进行统计学分析. 结果 ①持续游泳训练和间歇游泳训练后大鼠齿状回c-fos的表达在各时点均较对照组显著增加(P<0.05).②B组c-fos的表达在0.5 h达到峰值,C组c-fos的表达在2 h到达峰值.两组各个时间点之间进行比较,c-fos表达差异有统计学意义(P<0.05). 结论 不同的游泳训练方式对c-fos表达的影响不同.     

硝酸甘油偏头痛模型对大脑即早基因表达的影响及盐酸氟桂利嗪的干预作用

目的探讨硝酸甘油偏头痛模型对脑即早基因表达的影响及盐酸氟桂利嗪的干预作用。方法健康Wistar大鼠30只,随机分为对照组、偏头痛模型组、治疗组,各组均灌胃给予盐酸氟桂利嗪或等量生理盐水,每日1次,连续7 d,末次给药20 min后,皮下注射生理盐水或硝酸甘油复制实验性偏头痛大鼠模型,于3 h后取材。随机选取大鼠脑片5个视野,进行c-fos和c-jun阳性细胞计数,分析每张切片上每个视野的平均灰度。结果偏头痛模型组脑组织切片c-fos和c-jun阳性细胞数[（30.60±3.78）、（26.50±6.56）]较对照组[（9.10±1.66）、（8.02±2.05）]明显增多（P〈0.01）,盐酸氟桂利嗪治疗组c-fos和c-jun阳性细胞数[（13.40±3.45）、（14.30±2.88）]较模型组显著减少（P〈0.05）;偏头痛模型组脑组织切片c-fos和c-jun阳性细胞灰度[（104.50±13.73）、（84.34±16.92）]较对照组[（157.05±37.16）、（177.65±34.36）]显著减弱（P〈0.01）;盐酸氟桂利嗪治疗组c-fos和c-jun阳性细胞灰度[（129.18±37.2）、（151.44±43.29）]较模型组明显增强（P〈0.05）。结论硝酸甘油偏头痛动物模型可显著提高c-fos和c-jun阳性细胞数,减弱c-fos和c-jun阳性细胞灰度,而盐酸氟桂利嗪可抑制实验性偏头痛动物模型脑内c-fos和c-jun的阳性表达,增强c-fos和c-jun阳性细胞灰度。     

氟伐他汀抑制Rho激酶信号通路减少HK-2细胞纤维连接蛋白表达

目的:探讨Rho激酶信号通路在糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)肾间质纤维化中的作用,以及氟伐他汀在防治DN肾间质纤维化中的作用机制?方法:体外培养人近端肾小管上皮细胞(HK-2细胞),Rho激酶底物肌球蛋白磷酸酶目标亚单位-1(MYPT-1)的磷酸化作为Rho激酶活化的标志?高糖刺激HK-2细胞0?6?12?24 h,不同浓度(10-7?10-6?10-5 mol/L)氟伐他汀干预12 h,Western blot检测p-MYPT-1和纤维连接蛋白(fibronectin,FN)的表达?后续实验中Western blot检测Rho激酶选择性激动剂(lysophosphatidic acid,LPA)对氟伐他汀调节HK-2细胞p-MYPT-1和FN表达的影响?结果:相对于0 h,高糖刺激HK-2细胞6?12?24 h均可以激活p-MYPT-1,其中12 h到达高峰?高糖刺激FN的表达呈时间依赖性,氟伐他汀抑制高糖诱导的HK-2细胞p-MYPT-1的活化并抑制FN的表达,并呈浓度依赖性?LPA可以拮抗氟伐他汀的作用?结论:Rho激酶信号通路可能是DN肾间质纤维化发生的始动信号之一?氟伐他汀可能通过抑制Rho激酶磷酸化进而抑制FN的表达,从而起到一定的防治DN肾间质纤维化的作用?     

磷酸化钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ在胫骨癌痛大鼠脊髓背角中的表达变化

目的观察胫骨癌痛模型大鼠脊髓背角磷酸化钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ（pCaMKⅡ）的表达变化,探讨CaMKⅡ在骨癌痛中的作用。方法选择雌性SD大鼠54只,随机分为3组（n=18）：空白组（N）,不作任何处理;对照组（C）,左侧胫骨上段骨髓腔注入5μlHank’s液;模型组（M）,左侧胫骨上段骨髓腔注入5μlWalker256细胞（2×107/ml）。分别于建模前及建模后6d、12d、18d测定大鼠机械缩足反射阈值和双后肢负重差值（n=6）,并在相应时间点随机取6只大鼠脊髓L4～5段,采用免疫组织化学法检测pCaMKⅡ的表达。结果与N组、C组比较,建模后6～18dM组大鼠出现进行性加重的疼痛行为学改变,脊髓背角pCaMKⅡ表达逐渐升高（P〈0.05）。结论脊髓pCaMKⅡ表达上调可能参与了大鼠骨癌痛的产生和维持。     

预防性应用盐酸氟桂利嗪对高血糖SD大鼠局部脑缺血再灌注模型ICAM-1表达的影响

[目的]探讨预防性应用盐酸氟桂利嗪对高血糖条件下SD大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤是否有保护作用及其可能机制.[方法]雄性健康SD大鼠36只,建立高血糖模型后随机分为两组:高血糖组(n=18)与盐酸氟桂利嗪+高血糖组(简称氟桂利嗪组,n=18),各组按脑缺血90 min再灌注3 h(n=6)、6h(n=6)、24 h(n =6)分为3个亚组.比较氟桂利嗪组与高血糖组各再灌注时间点脑组织病理形态改变及ICAM -l表达的动态变化.[结果]脑组织病理形态观察:氟桂利嗪组随着再灌注时间的延长,脑组织受损程度逐渐加重,但与高血糖组各时间点比较,变性、坏死的神经元较少,组织间水肿较轻.ICAM -1表达:氟桂利嗪组于再灌注3h可见IAM -1阳性表达,24h内逐渐增高(P＜0.05).氟桂利嗪组与高血糖组比较各时间点缺血区ICAM -1表达均减少(P＜0.01).[结论]预防性应用盐酸氟桂利嗪能减轻高血糖条件下的局灶性脑缺血再灌注损伤.     

KN-93对肥大心肌细胞β-肌球蛋白重链及心钠素表达的影响

目的探讨钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)特异性抑制剂KN-93对大鼠心肌细胞肥大β-肌球蛋白重链(β-MHC)mRNA和心钠素(ANF)mRNA表达的影响。方法原代培养SD乳鼠心肌细胞,分为对照组(不加任何处理)、神经肽Y(NPY)组(100 nmol/L NPY)、KN-93组(100 nmol/L NPY+10μmol/L KN-93),分别作用心肌细胞24 h后,采用激光共聚焦显微镜记录心肌细胞核钙离子浓度的变化,Western blot检测CaMKⅡδ蛋白表达及荧光定量PCR检测心肌细胞β-MHC mRNA和ANF mRNA的表达。结果 NPY刺激心肌细胞24 h后核钙离子浓度、CaMKⅡδ蛋白表达及β-MHC mRNA和ANF mRNA表达明显增加。KN-93可抑制上述效应。结论 CaMKⅡ特异性抑制剂KN-93可抑制NPY诱导β-MHC mRNA、ANF mRNA表达。     

脊髓损伤早期神经细胞C-fos基因表达及其意义

目的：从分子水平探讨脊髓损伤发病机制，为临床治疗脊髓损伤寻求有效手段。方法：选用Wistar大鼠30只，制造脊髓压迫性损伤模型，以免疫组织化学方法，动态观察大鼠脊髓损伤早期神经细胞C-fos基因表达变化。结果：脊髓损伤后2h，损伤区胶质细胞中C-fos基因表达已明显，伤后6，8，24h更为显著。结论：脊髓损伤后C-fos基因表达的情况可能与脊髓原发性损伤和继发性损伤机制有关。     

鞘内注射新斯的明和吗啡对大鼠脊髓背角c-fos表达的影响

目的 研究鞘内注射新斯的明和吗啡对大鼠脊髓背角c-fos表达的影响。方法 在大鼠切口疼痛模型上结合鞘内置管技术,采用累积疼痛评分法评定大鼠疼痛行为,运用免疫组织化学法观察术前或术后鞘内注射新斯的明和吗啡对脊髓背角c-fos表达的影响。结果 手术组大鼠累积疼痛评分明显高于假手术组,术前或术后鞘内注射新斯的明及吗啡均可明显降低手术切口引起的累积疼痛评分升高,各用药组间无明显差别。手术组大鼠脊髓背角Fos-LI神经元明显多于假手术组(P<0.01)。术前或术后鞘内注射吗啡、新斯的明和吗啡分别可使切口疼痛引起的Fos-LI减少69％和48％,76％和55％,术前和术后两用药组间比较差异亦有统计学意义。新斯的明两用药组的Fos-LI表达均未见明显减少(P>0.05)。结论 鞘内注射新斯的明和吗啡可减少术后疼痛大鼠脊髓背角c-fos的表达,尤以术前用药为甚。     

阿仑膦酸钠对破骨细胞分化中c—fos基因表达的影响

目的探讨阿仑膦酸钠对破骨细胞分化中c—fos基因的作用机制。方法将不同浓度的阿仑膦酸钠作用于小鼠破骨细胞,采用Western blot检测小鼠破骨细胞分化中c—fos基因的表达情况。结果阿仑膦酸钠组TRAP阳性破骨细胞数目和c—fbs基因的表达显著低于空白对照组;且加入10^-4mol／L、10^-6mol／L、10^-8mol／L浓度阿仑膦酸钠后,c—fos表达受抑制程度依次增强;而在10^-8mol／L、10^-10mol／L、10^-12mol／L浓度中,c—fos表达受抑制程度依次减弱。结论阿仑膦酸钠可使破骨细胞分化中的c—fos基因受到抑制,其抑制程度与阿仑膦酸钠的浓度有关,10^-8mol／L浓度时抑制作用最强。     

尼莫地平对下丘脑神经元内c-fos表达的影响

将尼莫地平用做钙通道阻断剂，Ｎ 甲基天门冬氨酸做为受体激活剂，诱导ｃ ｆｏｓ基因表达，探讨尼莫地平对ｃ ｆｏｓ基因表达的影响．结果发现，Ｎ 甲基天门冬氨酸受体能诱导下丘脑视上核及室旁核神经元中ｃ ｆｏｓ基因的表达，且ｆｏｓ阳性细胞占细胞总数的多数．Ｎ 甲基天门冬氨酸诱导的ｃ ｆｏｓ有自己的时程，３０ｍｉｎ开始表达，１～２ｈ达高峰，４～８ｈ消失．     

椎管注射PPADS对内脏痛大鼠行为学及胸髓P2X7受体表达的影响

目的观察预先椎管注射嘌呤能受体阻滞剂磷酸吡哆醛(PPADS)后,对腹腔注射乙酸致内脏痛大鼠行为学及脊髓P2X7受体和fos免疫组化反应的影响。方法 32只雄性SD大鼠分为空白组、模型组、PPADS组和NS组,每组8只。NS组:先向大鼠鞘内注射20μl NS,注射90 min后再做内脏痛模型。模型组:将0.6%乙酸注射入大鼠腹腔内造成内脏痛模型。PPADS组:先向大鼠椎管鞘内注射10μl PPADS(10 nmol/μl),90 min后按前述方法再做内脏痛模型。实验结束后先记录60min各组动物的腹部收缩试验,然后对各组动物脊髓胸段内P2X7受体和fos进行免疫组织化学染色。结果除空白组,各实验组大鼠均出现明显的腹部收缩试验,其中PPADS组内脏痛指数较模型组明显减轻(P<0.01)。免疫组化染色发现各实验组P2X7和fos阳性表达产物主要表达于胸髓后角浅层内,有明显的定位特点。其中各实验组P2X7阳性表达没有明显变化;而PPADS组的fos阳性数目较模型组明显减少(P<0.01)。模型组与NS组之间P2X7受体和fos表达没有统计学差异。结论脊髓P2X7受体参与腹腔注射乙酸致内脏痛大鼠的痛觉信息传递,其作用与影响其周围的神经元功能活动有关。     

甲状旁腺素氨基端1-34片段不同作用方式对人成骨样细胞SaoS-2的影响

目的观察人甲状旁腺素氨基端1-34片段(hPTH1-34)不同作用方式对人成骨样细胞(SaoS-2细胞)功能的影响,探讨hPTH1-34促进骨合成代谢的分子生物学机制.方法以48 h为一个周期,每个周期分别采用50 ng/ml的hPTH1-34进行连续刺激(刺激48 h/周期)或间歇刺激(分别刺激1、3、6、12、24 h/周期)SaoS-2细胞.采用"金氏"化学法、放射免疫法和竞争蛋白结合法测定碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素(BGP)和环磷酸腺苷(cAMP)浓度;c-fos基因表达水平采用逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR)进行半定量分析.结果hPTH1-34每周期间歇刺激3、6 h呈时间依赖性显著增加ALP产生(与对照比,P＜0.01;与连续刺激比,P＜0.05或P＜0.01)和cAMP浓度(与对照和连续刺激比,均P＜0.05),并迅速促进c-fos基因表达.未观察到BGP对hPTH1-34刺激的明显反应.结论hPTH1-34对骨合成代谢的促进作用取决于间歇刺激方式,以每48小时间歇刺激3、6 h作用最显著.蛋白激酶A信号途径是hPTH1-34发挥作用的主要途径,c-fos基因可能是重要的细胞内第三信使.     

亚低温对急性脊髓损伤后肿瘤坏死因子-α表达及运动功能恢复的影响

目的探讨亚低温对急性脊髓损伤（SCI）患者损伤后血清肿瘤坏死因子-α（TNF-α）表达水平及运动功能恢复的影响。方法回顾性分析南通大学附属医院2006年2月～2011年12月收治人院的脊柱骨折伴脊髓损伤成年患者60例临床资料,随机分为两组常规治疗组30例和亚低温组30例,用放射免疫分析法测定两组脊髓损伤患者伤后12、24、72h外周血血清TNF—α水平。并利用Tarlow评分检测两组治疗方法对运动功能恢复的影响。结果脊髓损伤后患者血清TNF一“水平呈早期水冲样动态变化,在伤后12h快速升至高峰,然后逐渐下降,伤后72h恢复正常;对照组治疗后6、12、24、72h、1周、4周时血清TNF-α水平均低于治疗前（P〈0．05）：亚低温组治疗后6、12、24、72h、1周、4周时血清TNF-α水平均低于治疗前（P〈0．05）。治疗后6、12、24、72h时亚低温组脊髓损伤患者血清TNF-α水平低于对照组（P〈0．05）;亚低温组运动功能评分每个时间点都明显高于对照组,且差异有统计学意义（P〈0．05）。结论亚低温对脊髓损伤后炎症细胞因子TNF-α分泌有一定的抑制作用,并具有良好的恢复运动功能作用。     

碱性成纤维细胞生长因子对大鼠牵张性脊髓损伤后c-fos基因表达的影响

目的观察碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblast growthfactor,bFGF)对牵张性脊髓损伤后c-fos基因表达的影响.方法用特制的脊柱撑开器放置在大鼠脊髓T12～L3椎体横突上纵向牵张,同时皮层体感诱发电位监测,建立大鼠牵张性脊髓损伤模型.用免疫组织化学染色法观察c-fos基因的表达,并用计算机图像分析系统进行定量分析.结果脊髓损伤后神经元C-FOS蛋白D值较正常组显著增加,表达高峰出现在损伤后2 h,而bFGF治疗组在各时相点均低于对照组(P＜0.05,P＜0.01).结论碱性成纤维细胞生长因子能显著抑制脊髓损伤后c-fos基因的表达,这可能是bFGF保护神经元并减轻脊髓损伤的机制之一.     

Thermal injuries induce gene expression of endogenous c-fos, c-myc and bFGF in burned tissues

Objective To investigate the expression sequence and distribution characteristics of the protooncogenes cfos,c-myc and endogenous basic fibroblast growth factor(bFGF) genes in burned tissues,and to explore the possible effects of changes in these genes‘ functions on wound healing.Methods Partial-thickness burns of 30% TBSA were esablished on backs of Wistar rats.In situ hybridization and histological methods were used to detect expression of c-fos,c-myc and bFGF genes in normal and burned tissue at 3h,6h,1d,3d,7d and 14 d postburn. Results Although expression of c-fos and c-myc genes and bFGF gene could be found in normal skin,the expression of all three were markedly induced by burn wounds and the expression models in sequence and distribution were quite different.Expression of c-fos gene increased and peaked at 6h.Signals were mainly localized in both nuclei of dermal fibroblasts and monocytes.The expression of bFGF gene increased at 6h and peaked at 1 d postburn,and was distributed in the cytoplasm of fibroblasts.C-myc gene peaked 3 d postburn and was also distributed in the cytoplasm of fibroblasts.Conclusions These results indicated that thermal injury could induce the expression of c-fos.c-myc and bFGF at gene level,showing phasic control and regional distribution.The phasic expression of these genes suggests that there is an interaction between protooncogenes and bFGF,which may play an important role in wound healing.The different expressions of c-fos and c-myc play an inducing role in regulating bFGF,and in turn affect wound healing.