EPO预处理对培养心肌细胞缺氧/复氧损伤TNF-α表达的影响及机制

目的 观察促红细胞生成素（erythropoietin，EPO）预处理对培养心肌细胞缺氧复氧前后TNF-α表达的影响，并进一步研究其可能的NF-kB信号机制。方法采用培养乳鼠心肌细胞建立缺氧复氧损伤模型，分为对照组、EPO组[缺氧复氧前24h，培养液中加入终浓度10U/ml的重组人促红素（recombinant human erythropoietin，RHuEPO）]、EPO＋吡咯烷二硫氨基甲酸盐（PDTC）组（缺氧复氧前24h，加入终浓度10U／ml的RHuEPO和5μg/ml的PDTC）和PDTC组（缺氧复氧前24h，加入终浓度5μg/ml的PDTC）。分别于缺氧复氧损伤前后，以RT-PCR和western blot检测各组心肌细胞TNF-α基因表达变化，同时以EMSA检测各组心肌细胞NF-kB活性变化。结果缺氧复氧损伤前，各组心肌细胞TNF-α基因表达水平差异无统计学意义，均较弱。损伤后各组心肌细胞TNF-α基因表达水平较损伤前对照组显著升高（P〈0．01），而EPO组TNF-α基因表达水平低于其他各组（P〈0．01）。缺氧复氧损伤前EPO组NF-kB活性高于其他各组（P〈0．01），损伤后各组NF-kB活性显著高于损伤前对照组（P〈0．01），EPO组NF-kB活性低于其他各组（P〈0．01）。结论EPO预处理抑制缺氧复氧后心肌细胞TNF-α基因表达升高，可能与缺氧复氧后NF-kB活性升高被抑制有关。EPO预处理可能通过NF-kB活化的负反馈机制抑制缺氧复氧后心肌细胞NF-kB活性的升高。     

血红素氧合酶1对大鼠心肌细胞急性损伤的保护作用

目的 了解血红素氧合酶1(HO-1)对脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞损伤的保护作用及其机制. 方法分离培养SD乳鼠心肌细胞,根据细胞悬液中所加刺激物的不同分为对照组(A组):常规培养;LPS组(B组):培养液中加入终浓度为30 μmol/L的LPS,作用1 h;LPS+氯化血红素(heroin)组(C组):加入终浓度为5 μmol/L的heroin,作用1 h后再加入30 μmol/L的LPS作用1 h;LPS+ZnPP组(D组):加入终浓度为3 μmol/L的ZnPPⅨ,作用1 h后再加入30 μmol/L的LPS作用1 h.硫代巴比妥酸比色法及黄嘌呤氧化酶法测定各组心肌细胞乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)含量;检测心肌细胞节律、存活率及凋亡率;用反转录-PCR法检测HO-1 mRNA表达;蛋白质印迹法检测心肌细胞HO-1、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、核因子кB(NF-кB)的表达. 结果 B、C、D组LDH和MDA值分别为(113±15)、(79±13)、(154±22)U/L和(1.88±0.36)、(1.16±0.32)、(2.84±0.44)mmol/L,高于A组[(69±10)U/L、(0.87±0.25)mmol/L,P<0.05],而以上3组的SOD值[(17.8±1.8)、(22.5±2.4)、(13.4±1.5)U/mL]却低于A组[(24.3±3.6)U/mL,P<0.05].B、C、D组心肌细胞节律,凋亡率均高于A组(P<0.05),存活率低于A组(P<0.05).B、C、D组心肌细胞HO-1 mRNA表达均高于A组(P<0.05),其中C组最高.B、C、D组心肌细胞HO-1、TNF-α、NF-кB值均高于A组(P<0.05),其中C组的HO-1值最高,D组TNF-α、NF-кB值最高. 结论 LPS对心肌细胞有明显的损伤作用.HO-1可能通过抗炎性反应、减轻氧化应激以及减少细胞凋亡途径,对心肌细胞产生保护作用.     

人参皂苷单体Re对大鼠心肌细胞缺氧的作用

目的 观察人参皂苷单体Re对大鼠心肌细胞缺氧的保护作用并探讨其机制.方法 SD大鼠乳鼠心肌细胞原代培养,按照随机数字表法分为5组,每组6个样本.正常对照组细胞常规培养;缺氧对照组细胞常规培养48 h再缺氧培养12 h;另外3组细胞先常规培养48 h,分别用20、40、80 g/L人参皂苷单体Re预处理30 min再缺氧12 h,相对应设为单体Re低、中、高浓度组.采用ELISA法检测心肌细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性,荧光漂白恢复(FRAP)实验观察细胞间连接通讯,以FRAP率表示结果.数据处理行组间或配对t检验.结果 (1)与缺氧对照组细胞LDH活性[(403±22)U/L]比较,单体Re低、中、高浓度组均明显降低,分别为(255±16)、(241±13)、(237±24)U/L(t值分别为5.1、5.2、8.3,P值均小于0.05).(2)细胞经激光淬灭后10 min,正常对照组FRAP率为(74.8±3.6)%;缺氧对照组FRAP率为(13.2±5.6)%;单体Re低、中、高浓度组FRAP率分别为(34.3±3.9)%、(36.2±3.1)%、(39.5±2.9)%,与缺氧对照组比较,差异均有统计学意义(t值分别为18.3、-41.9、-6.6,P值均小于0.05).结论 采用人参皂苷单体Re预处理可降低缺氧大鼠心肌细胞LDH的释放,明显改善细胞间连接通讯,对缺氧心肌细胞有明显的保护作用,剂量尤以20 g/L为适宜.

Abstract：

Objective To investigate the protective effect of ginsenoside Re on myocardial cells of neonatal SD rat with hypoxia injury,and to explore its mechanism. Methods The primary passage of myocardial cells collected from neonatal SD rats were divided into A group (with ordinary treatment),B group[exposed to hypoxia (1% O2,5% CO2,94% N2) for 12 hours after being cultured for 48 hours],C group (pretreated with 80 g/L ginsenoside Re for 30 minutes after 48 hours of ordinary culture,then exposed to hypoxia for 12 hours),D group (received the same treatment as used in C group except for using 40 g/L ginsenoside Re),E group (received the same treatment as used in C group except for using 20 g/L ginsenoside Re) according to the random number table,with 6 samples in each group. Myocardial cell supernatants were collected for determination of content of lactate dehydrogenase (LDH) with enzyme linked immunosorbent assay. Fluorescence recovery after photobleaching technique was used to detect gap junction intercellular communication (GJIC).Result was observed by laser scanning confocal microscope. Data were processed with paired t test. Results (1) Compared with that in B group[(403±22)U/L],contents of LDH in E,D,and C groups were obviously decreased[(255±16),(241±13),(237±24)U/L,with t value respectively 5.1,5.2,8.3,P values all below 0.05]. (2) The fluorescence recovery rate in A group was (74.8±3.6)% 10 min after quenching,which was higher than that in B group[(13.2±5.6)%,t=15.2,P<0.01]. The fluorescence recovery rate in C,D,and E groups was respectively (39.5±2.9)%,(36.2±3.1)%,and (34.3±3.9)% 10 min after quenching,all higher than that in B group (with t value respectively -6.6,-41.9,18.3,P values all below 0.05). Conclusions Ginsenoside Re pretreatment,particularly with a dose of 20 g/L,can protect myocardial cells from hypoxia injury,and the effect may be attributable to inhibition of release of LDH and improvement of the GJIC function.     

PI3K/Akt信号通路在乳化异氟醚预先给药减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用

目的 评价磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/Akt)信号通路在乳化异氟醚预先给药减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤中的作用.方法 Wistar乳鼠60只,乳鼠心肌细胞于24孔培养板原代培养后,采用缺氧2 h复氧2 h建立缺氧复氧模型.乳鼠心肌细胞随机分为6组,每组8孔,正常对照组(C组):按正常条件继续培养4 h;A/R组:制备缺氧复氧模型;EI组:于细胞缺氧前即刻在培养液中加入乳化异氟醚,终浓度为1.68 mmol/L;EI+wortmannin(PI3K特异性抑制剂)组(EIW组):于细胞缺氧前即刻在培养液中加入乳化异氟醚和wortmannin,终浓度分别为1.68 mmol/L和100 nmol/L;wortmannin组(W组):于细胞缺氧前即刻在培养液中加入wortmannin,终浓度为100 nmol/L;脂肪乳组(F组):与细胞缺氧前即刻在培养液中加入30%脂肪乳,终浓度为0.05%.复氧2 h时,取细胞培养上清液测定乳酸脱氢酶(LDH)活性、肌钙蛋白I(cTnI)浓度,心肌细胞匀浆后测定超氧化物歧化酶(SOD)活性与丙二醛(MDA)含量,并测定心肌细胞磷酸化Akt(p-Akt)的表达水平.结果 与C组比较,其余5组上清液LDH活性、cTnI浓度和心肌细胞MDA含量升高,心肌细胞SOD活性降低(P<0.05);与A/R组比较,EI组和EIW组上清液LDH活性、cTnI浓度和心肌细胞MDA含量降低,心肌细胞SOD活性升高,F组除心肌细胞SOD活性升高外(P<0.05),其余指标差异均无统计学意义(P>0.05),W组上述指标差异无统计学意义(P>0.05);与EI组比较,EIW组、W组和F组上清液LDH活性、cTnI浓度和心肌细胞MDA含量升高,心肌细胞SOD活性降低(P<0.05).C组、EIW组、H/R组、F组和EI组心肌细胞p-Akt表达水平依次升高(P<0.05).结论 乳化异氟醚预先给药减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤可能与进一步激活PI3K/Akt信号通路有关.     

P物质预先给药对去甲肾上腺素诱导大鼠离体心肌细胞β1受体表达的影响

目的 探讨P物质(SP)预先给药对去甲肾上腺素(NE)诱导大鼠离体心肌细胞β1受体表达的影响.方法 出生1～3 d SD大鼠,分离心肌细胞后培养72 h.取15孔心肌细胞随机分为5组:C1组不加任何药物,NE1-4组分别给予10-9、10-8、10-7、10-6 mol/L NE,每组3孔.另取12孔心肌细胞随机分为C2组、NE组、SN组和NSN组,每组3孔,NE组加入10-7 mol/LNE,SN组加入10-6 mol/LSP后30 min加入10-7 mol/L NE,NSN组加入NK-1受体拮抗剂S3144后30 min加入10-6 mol/L SP,30min后加入10-7 mol/L NE.加入NE后3 h时采用流式细胞仪检测心肌细胞β1受体表达.结果 与C1组比较,NE1～3组心肌细胞β1受体表达上调,NE3组β1受体表达上调最明显(P＜0.05);与C2组比较,NE组心肌细胞β1受体表达上调(P＜0.05);与NE组比较,SN.组心肌细胞β1受体表达下调(P＜0.05).结论 SP预先给药可抑制NE诱导的大鼠离体心肌细胞β1受体表达上调,其机制可能与NK-1受体激活有关.     

促红细胞生成素预先给药对大鼠内毒素性急性肺损伤的影响

目的 探讨促红细胞生成素(EPO)预先给药对大鼠内毒素性急性肺损伤的影响.方法 成年雄性SD大鼠32只,体重180～220 g,随机分为4组(n=8),C组腹腔注射生理盐水4 ml/kg(EPO溶剂对照),30 min后静脉注射生理盐水2 ml/kg[脂多糖(LP3)溶剂对照];EPO组腹腔注射EPO3 000 U/kg,30 min后静脉注射生理盐水2 ml/kg;LPS组腹腔注射生理盐水4 ml/kg,30 min后静脉注射LPS 6 mg/kg;EPO+LPS组腹腔注射EPO 3 000 U/kg,30 min后静脉注射LPS 6 mg/kg.于静脉注射LPS后4 h时处死大鼠,观察肺组织病理学结果 ,计算肺组织湿/干重(W/D)比;测定肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性和丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量;采用Western blot法测定肺组织诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和硝基酪氨酸(NT)的表达.结果 与C组相比,LPS组和EPO+LPs组肺组织W/D比、MPO活性、MDA和NO含量升高,iNOS和NT表达上调(P<0.01);与LPS组相比,EPO+LPS组肺组织W/D比、MPO活性、MDA和NO含量降低,iNOS和NT表达下调(P<0.01).结论 EPO预先给药可减轻大鼠内毒素性急性肺损伤,与其下调iNOS表达,减少NO生成有关.     

Protective effect of erythropoietin pretreatment in testicular ischemia-reperfusion injury in rats

Background/Purpose

This study was designed to investigate the effects of recombinant erythropoietin (EPO), a hormone widely used for treatment of uremic anemia, in rats subjected to testicular ischemia and reperfusion (I/R).

Methods

Thirty-five male rats were divided into the following: control, sham operated, ischemia (I), I/R, and I/R + EPO groups. In the I group, 2 hours of left unilateral testicular torsion were performed, and in the I/R and I/R + EPO groups, an additional 2 hours of testicular detorsions were performed. The I/R + EPO group was pretreated intraperitoneally with EPO (500 IU/kg) before reperfusion. Testicular tissue samples were examined for biochemical and histopathologic parameters. Apoptotic cells in all testes were detected by terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end-labeling technique and caspase 3 immunohistochemistry.

Results

At histopathologic examination, ischemic changes in primary spermatocytes were noted in all torted testes. Cellular damage and apoptosis were more severe in ischemic groups than the EPO-pretreated group. There were statistically significant differences in tissue biochemical parameters in the I and I/R groups compared with the I/R + EPO group.

Conclusions

The results of the present study suggest that EPO exerts protective effects against I/R injury via the modulation of free radical scavenger's activities, which decreases lipid peroxidation levels and attenuation of apoptosis.     

血红素加氧酶-1对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的影响

目的 探讨血红素加氧酶-1(HO-1)对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的影响.方法 新生SD大鼠8只,日龄1～3 d,原代培养心肌细胞,随机分为4组:正常对照组(C组)常规培养8 h;缺氧复氧组(HR组)采用缺氧2 h,复氧6 h的方法制备心肌细胞缺氧复氧模型;血晶素组(Hemin组)缺氧前24 h及缺氧即刻,培养基中加入Hemin,终浓度为20 μmol/L;血晶素+锌原卟啉组(Hemin+ZnPP组)缺氧前24 h及缺氧即刻培养基中同时加入Hemin及ZnPP,终浓度均为20 μmol/L.各组细胞均接种于35 mm培养皿(2 ml/皿)或50 ml培养瓶(3 ml/瓶),每组45皿和3瓶.于复氧结束后采用蛋白印迹法测定心肌细胞HO-1表达,台盼蓝染色法测定心肌细胞存活率,应用全自动生化分析仪测定细胞培养液乳酸脱氧酶(LDH)活性,超声破碎细胞离心后取上清,采用硫代巴比妥酸法测定细胞MDA水平,黄嘌呤氧化酶法测定细胞SOD活性.结果 与C组比较,其余3组培养液LDH活性、心肌细胞MDA水平及HO-1表达升高,心肌细胞存活率及SOD活性降低(P＜0.05).与HR组比较,Hemin组培养液LDH活性、心肌细胞MDA水平降低,HO-1表达、心肌细胞存活率及SOD活性升高(P＜0.05),Hemin+ZnPP组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).HR组和Hemin+ZnPP组细胞缺氧复氧损伤明显,Hemin组细胞缺氧复氧损伤减轻.结论 HO-1可减轻乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤.     

七氟烷对阿霉素诱导新生大鼠原代心肌细胞损伤的影响

目的 评价七氟烷对阿霉素诱导大鼠原代心肌细胞损伤的影响.方法 出生24 h内的SD大鼠10只,雌雄不拘,培养原代心肌细胞,调整细胞浓度为5×104个/ml,将心肌细胞接种于96孔细胞培养板(200 μl/孔)或6孔细胞培养板(2 ml/孔)中,采用随机数字表法,将细胞随机分为4组(n=15):正常对照组(C组)、阿霉素组(A组)、七氟烷组(S组)和阿霉素+七氟烷组(AS组).A组和AS组加入1 μmol/L阿霉素孵育,C组和S组加入等容量PBS,孵育24 h时,S组和AS组暴露于2.4％七氟烷2h.于停止给予七氟烷后2h时测定细胞活力和培养液cTnI和氨基末端B型利钠肽前体(NT-proBNP)的浓度,并测定Bax和Bcl-2表达,计算Bax和Bcl-2的比值(Bax/Bcl-2).结果 与C组比较,A组细胞活力和Bcl-2表达降低,培养液cTnI和NT-proBNP浓度、Bax表达和Bax/Bcl-2升高(P＜0.05),AS组细胞活力下降,其他指标差异无统计学意义,S组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与 A组比较,AS组Bcl-2表达升高,培养液cTnI和NT-proBNP浓度、Bax表达和Bax/Bcl-2降低(P＜0.05).结论 七氟烷可减轻阿霉素诱导新生大鼠原代心肌细胞损伤,其机制与抑制细胞凋亡有关.     

重组人促红细胞生成素预先给药对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌炎性反应的影响

目的探讨重组人促红细胞生成素（rhEPO）预先给药对心肌缺血再灌注损伤大鼠心肌炎性反应的影响及其机制。方法健康雄性SD大鼠138只,体重350～450g,随机分为3组：假手术组（Sham组,n=42）、缺血再灌注组（I/R组,n=48）和rhEPO预先给药组（n=48）。缺血前24h,Sham组和I/R组腹腔注射0．9%NaCl溶液4ml/kg,rhEPO预先给药组腹腔注射rhEPO 5 000IU/kg（溶于0．9% NaCl溶液4ml/kg）。采用阻断左前降支冠状动脉30min、再灌注180min制备心肌缺血再灌注损伤模型,分别于结扎冠状动脉前即刻、缺血即刻、再灌注30、60、120、180min 3组各随机处死6只大鼠,取左心室心肌组织,测定肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、自细胞介素（IL）-6和IL-10的含量,检测心肌细胞核NF-kB和活化蛋白-1（AP-1）的表达；3组随机另取6只大鼠,再灌注结束时观察心肌中性粒细胞浸润情况。I/R组和rhEPO预先给药组再随机取6只大鼠,再灌注结束时测定心肌梗死面积。结果与Sham组比较,I/R组和rhEPO预先给药组NF-kB、AP-1表达及TNF-α、IL-6、IL-10含量升高（P＜0．01）；与I/R组比较,rhEPO预先给药组NF-kB和AP-1表达及TNF-α、IL-6含量降低,IL-10含量升高（P＜0．05或0．01）；rhEPO预先给药组较I/R组心肌梗死面积减小,中性粒细胞浸润程度减轻。结论预先腹腔注射rhEPO 5 000 IU/kg可减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤,其机制与下调NF-kB和AP-1表达,抑制心肌炎性反应有关。     

Protective effect of erythropoietin on torsion/detorsion injury in rat model

Purpose

The aim of the study is to investigate the effects of erythropoietin on torsion/detorsion injury in rats.

Methods

Forty rats were divided randomly into 5 groups: group I (sham, S), sham operation; group II (torsion/detorsion 1, T/D₁), 3 hours ischemia and 1 hour reperfusion; group III (torsion/detorsion 2, T/D₂), 3 hours ischemia and 48 hours reperfusion; group IV (erythropoietin 1, EPO₁), 3 hours ischemia, 1 hour reperfusion, and a single dose of EPO; and group V (erythropoietin 2, EPO₂), 3 hours ischemia, 48 hours reperfusion, and 2 doses of EPO. Malondialdehyde (MDA) and nitric oxide (NO) levels and activities of superoxide dismutase and catalase were measured. Tissue damage to ovarian tissue was scored by histologic examination. Data were compared among groups with parametric tests.

Results

The MDA levels in the S and EPO groups were significantly lower than the T/D groups (P < .001). Catalase and superoxide dismutase activities, and NO levels in the S and EPO groups were significantly higher than in the T/D groups (P < .05). Ovarian tissue damage in the S and EPO groups was significantly less than in the T/D groups (P < .05). Levels of all biochemical markers and ovarian tissue damage scores were similar among the S, EPO₁, and EPO₂ groups (P > .05).

Conclusion

Erythropoietin attenuates ischemia-reperfusion injury when given during the acute phase of ovarian torsion-detorsion in a rat model.     

抗肿瘤坏死因子α抗体对体外循环肺损伤的保护作用

目的探讨气管内给予抗肿瘤坏死因子α(TNF-α)抗体对体外循环(CPB)中肺损伤的保护作用和机制.方法选择心瓣膜置换术患者20例,用随机抽样法分成两组,每组10例.用药组:于术前和主动脉开放后经气管内插管注入抗TNF-α抗体(1.2μg/kg)2次;对照组:常规CPB手术.测定两组围术期肺动态顺应性和氧合指数,气管内插管时间,同时测定左右心房血液中中性粒细胞计数,TNF-α和丙二醛(MDA)的含量.结果 CPB结束和CPB后各时点肺动态顺应性和氧合指数用药组显著高于对照组(P＜0.01),用药组气管内插管时间比对照组短(P＜0.01),抗TNF-α抗体明显抑制中性粒细胞在肺内的聚集,抑制肺源性TNF -α的释放,减少MDA产生.结论气管内应用抗TNF-α抗体能减轻CPB导致的肺损伤.     

Effect of Shenfu injection on nuclear factor-kB during myocardial ischemia/reperfusion injury in rats

Objective: To investigate effects of Shenfu injection on the concentrations of plasma tumor necrosis factor-alpha (TNF-α) and interleukin-6 (IL-6), activity of Nuclear Factor kappa B (NF-κB) and heart tissue ultrastructure during myocardial ischemia/reperfusion (I/R) injury in rats and its potential mechanism.Methods: Myocardial ischemia/reperfusion (I/R) was produced by ligation and release of the left anterior descending coronary artery. Ischemia lasted for 30 min and reperfusion for 60 min. Twenty-four healthy male SD rats weighing 230-280 g were randomly divided into three groups (n=8, each): Group I (Sham-operation group); Group II (I/R group); Group III (Shenfu group), in which Shenfu injection (10 ml/kg) was intraperitoneally injected 30 min before ischemia in animals with I/R. The plasma concentrations of IL-6 and TNF-α were measured by ELISA, and the heart was harvested for determination of NF-κB levels by Ecl-western blot analysis. Electron microscopy was used to study its ultrastructure.Results: After reperfusion, NF-κB binding activity in myocardial nuclei and the plasma concentrations of IL-6 and TNF-α were significantly increased in Group II, compared with Group I (P<0.01), and they were markedly reduced in Group III, compared with Group II (P<0.01). In addition, electron microscopic examination showed more serious injury of the myocardium ultrastructure in Group II, while in Group III the myocardial ultrastructure was similar to normal state.Conclusions: Shenfu injection inhibits NF-κB activity in I/R myocardium and leads to down-regulation of proinflammatory cytokine expression, which might be one of the molecular mechanisms of Shenfu injection in cardioprotection.     

缬沙坦预处理对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

目的:探讨缬沙坦预处理对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用及其机制.方法:常规方法培养心肌细胞,培养72小时后,分为三组:正常对照组、心肌细胞缺氧/复氧损伤组、缬沙坦预处理后心肌细胞缺氧/复氧损伤组.分别观察心肌细胞结构,测定心肌细胞存活率、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)水平.结果:与对照组比心肌细胞缺氧/复氧损伤组细胞存活率明显下降、培养液中LDH、MDA含量明显增高,SOD含量明显下降;与心肌细胞缺氧/复氧损伤组比,缬沙坦预处理组心肌细胞存活率明显提高,培养液中LDH、MDA含量明显下降、S0D含量明显上升.结论缬沙坦通过抗氧化、抗脂质过氧化反应,清除氧自由基对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤有保护作用.     

谷氨酰胺对内毒素性急性肺损伤大鼠肺组织肿瘤坏死因子-α表达的影响

目的评价谷氨酰胺对内毒索性急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法静脉注射脂多糖(LPS)5 mg·kg-1复制大鼠ALI模型。雄性SD大鼠50只随机分为5组(n=10):A组为对照组;B组为LPS组;C组、D组、E组为谷氨酰胺+LPS组,分别于LPS注射前1h时、LPS注射同时、LPS注射后1 h静脉注射谷氨酰胺0．75 g／kg。所有动物于注射LPS或生理盐水后4 h颈动脉放血处死,采用逆转录聚合酶链反应方法检测肺组织TNF-αmRNA表达,免疫组织化学方法检测肺组织TNF-α蛋白表达,HE染色,光镜下观察肺组织病理学变化。结果与A组相比,B组TNF-αmRNA表达上调(P<0．01),肺泡巨噬细胞、中性粒细胞、上皮细胞表达增强(P<0．01);与B组相比,C组和D组肺组织TNF-αmRNA及TNF-α蛋白水平均降低(P<0．01),肺组织的炎症反应减轻。结论在静脉注射LPS前或同时给予谷氨酰胺可通过抑制ALI大鼠肺组织TNF-α的过度生成,减轻肺损伤。     

微管解聚剂在缺氧早期大鼠心肌细胞线粒体损害中的作用

目的了解微管解聚剂在缺氧早期大鼠心肌细胞线粒体损害中的作用。方法常规方法分离培养Wistar乳鼠心肌细胞，分为正常组、微管解聚组（培养液中加入4μmol／L秋水仙碱）、缺氧组、缺氧解聚组（4μmol／L秋水仙碱联合缺氧处理）。分别采用激光共聚焦显微镜检测4组细胞线粒体分布情况，透射电镜观察线粒体形态变化，生物氧耗呼吸仪检测呼吸调节比（RCR），高效液相色谱仪检测腺苷三磷酸（ATP）含量。缺氧组及缺氧解聚组所设时相点为缺氧后10、20、30、60min。结果正常组线粒体呈粒状、排列规则，微管解聚组较之发生轻微改变：缺氧20、30、60min，缺氧解聚组线粒体分布的无规律性及形态结构损害均较缺氧组严重；细胞RCR分别为1．58±0．37、1．51±0．32、1．12±0．11，明显低于缺氧组3．85±0．56、2．98±0．44、1．79±0．73（P〈0．01）；ATP含量分别为（419±83）、（326±73）、（295±58）ng／mg，亦明显低于缺氧组（475±68）、（397±59）、（336±67）ng／mg（P〈0．01）。结论微管解聚剂可加重缺氧引起的心肌细胞线粒体分布紊乱和形态结构损害，以及线粒体呼吸功能和能量代谢障碍，它在线粒体缺氧损害机制中具有重要作用。     

溴环己胺醇预先给药对大鼠盐酸吸入性肺损伤的作用

目的 观察溴环己胺醇预先给药对大鼠盐酸吸入性肺损伤是否具有保护作用，并探讨其可能机制。方法30只健康 SD 大鼠，随机分成3组，A 组：生理盐水吸入组；B组：稀盐酸吸入组；C组：稀盐酸吸入 溴环己胺醇处理组，每组10只。C 组腹腔注射溴环己胺醇，1次/d，连续3d，A、B 组以等体积生理盐水代替。第3天注药后30min，B、C 组气管注入pH 值为1.25的稀盐酸1.2ml/kg，制成盐酸吸入性肺损伤模型，A 组气管注入生理盐水1.2ml/kg。观察注药后5h 动脉血气、氧合指数(PaO_2/FiO_2)、肺湿/干重比(W/D)、肺组织及血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-8(IL-8)水平。结果 与 A 组比较，B、C 组 PaO_2、PaO_2/FiO_2降低(P<0.01)，B、C 组W/D、B 组肺组织 TNF-α、IL-8含量、血清 IL-8浓度升高(P<0.01)。与 B 组比较，C 组 PaO_2、PaO_2/FiO_2升高(P<0.01)，C 组W/D、肺组织TNF-α、IL-8含量及血清 IL-8浓度降低(P<0.01)。结论 溴环己胺醇可能通过抑制 TNF-α、IL-8炎症因子的产生和释放机制对盐酸吸入性损伤肺产生保护作用。     

胰岛素强化治疗对烫伤大鼠心肌保护作用的研究

目的 了解胰岛素强化治疗对重度烫伤大鼠心肌的保护作用，并探讨其作用机制。方法 将18只SD大鼠分为3组，每组6只。强化组及烫伤组大鼠背部脱毛造成30％TBSA的Ⅲ度烫伤。强化组伤后即输注胰岛素等渗盐水（含胰岛素0．12U／m1）及100g／L葡萄糖，使大鼠血糖水平控制在4．0～6．6 mmol／L之间，补液总量为2ml·kg^-1。·％TBSA^-1·8h^-1；烫伤组伤后仅给予等渗盐水，总量同前。假伤组模拟烫伤，伤后补充生理量的液体。于伤前及伤后1、2、3、4、5、6 h 抽取大鼠静脉血测定其血糖值。各组大鼠伤后均经右颈动脉插管人左心室并连接生理记录仪，观察左心室收缩压（LVSP）及左心室舒张末期压（LVEDP）。伤后6h，处死各组大鼠，留取左心室组织标本用于心肌细胞肌钙蛋白T的检测。结果 烫伤组大鼠伤后1～6h的血糖值为（7．6±1．7）～（8．4±4．7）mmol／L，均高于强化组[（4．5±0．9）～（5．2±1．3）mmol／L，P〈0．01]。伤后1h，烫伤组LVSP[（60±11）mmHg（1mmHg=0．133kPa）]降低、LVEDP[（21．3±11．3）mmHg]升高，与强化组[（72±8）、（11．7±5．2）mmHg]比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。烫伤后各组大鼠肌钙蛋白T在心肌细胞内大量缺失，而强化组缺失程度明显低于烫伤组（P〈0．05）。结论 胰岛素强化治疗对重度烫伤大鼠左心室功能具有明显的保护作用，此作用可能与抑制心肌细胞蛋白的缺失有关。     

门静脉淤血对肝脏缺血再灌注后肺脏和肾脏损伤的影响

目的 探讨门静脉淤血对肝脏缺血再灌注后肺脏和肾脏损伤的影响及机制.方法 对24只新西兰大白兔行肝门阻断,同时经门静脉肝脏原位冷灌注30 min,恢复灌流时按门静脉淤血去除量的不同随机分为3组:A5组去除5 ml、A10组去除10 ml、B组不去除门静脉淤血,每组8只.另取8只作为对照(C组),仅行手术解剖,不做肝门阻断及肝脏灌注.检测去除门静脉淤血对恢复灌流4 h后血清内毒素、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)的影响;取肺脏、肾脏组织观察组织学改变并检测组织匀浆丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及肺湿/干重、肺灌洗液蛋白含量的变化.结果 去除门静脉淤血能降低复流后血清内毒素、TNF-α、BUN、Cr、肺湿/干重、肺灌洗液蛋白含量和肺脏、肾脏组织匀浆中MDA含量.其中A5组血清TNF-α、Cr、肺灌洗液蛋白含量、肾组织匀浆中MDA均明显低于B组(P＜0.05);A10组血清内毒素、TNF-α肺湿/干重及肺组织匀浆中MDA也明显低于B组(P＜0.05).去除门静脉淤血可增加肺脏、肾脏组织匀浆中SOD活性,其中A5组肾组织匀浆中SOD活性明显高于B组(P＜0.05).同时,去除门静脉淤血能明显改善肺脏、肾脏组织学变化.结论 去除门静脉淤血可以减轻肝脏缺血再灌注后肺脏、肾脏功能的损伤,其机制可能与门静脉淤血去除减少内毒素吸收,进而降低了血清TNF-α产生有关.     

异丙酚预先给药对心肌缺血再灌注损伤大鼠炎性反应的影响

目的探讨异丙酚预先给药对心肌缺血再灌注损伤大鼠炎性反应的影响。方法健康雄性SD大鼠48只，随机分为4组（n=12）：假手术组（S组）、缺血再灌注组（I／R组）、低剂量异丙酚组（L组）、高剂量异丙酚组（H组）。结扎左冠状动脉前降支（LAD）30min、再灌注120min，建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。分别于再灌注30min（T1）、120min（T2）时采集股动脉血1ml，ELISA法测定血浆肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-10（IL-10）的浓度，再灌注120min时TTC法测心肌梗死面积，电镜下观察心肌细胞超微结构。结果与S组比较，I／R组、L组、H组在T1、T2时TNF-α、IL-10浓度升高（P〈0．05）；与I／R组比较，L组、H组在T1、T2时TNF-α浓度降低（P〈0.05），IL-10浓度升高（P〈0．05），心肌梗死面积减小（P〈0．05）；L组比较，H组T1、T2时，TNF-α浓度降低，IL-10浓度升高，心肌梗死面积减小（P〈0.05）。电镜下观察I／R组心肌细胞超微结构改变严重，L组、H组心肌细胞超微结构改变程度较I／R组轻。结论异丙酚预先给药通过抑制再灌注诱发的炎性反应减轻了大鼠心肌缺血再灌注损伤。