醛固酮介导心肌成纤维细胞增殖的机制研究

目的探讨醛固酮诱导心肌成纤维细胞(FBs)增殖及对诱导型一氧化氮合成酶一氧化氮(iN-OS-NO)活性的影响。方法以培养的FBs为模型,用醛固酮剌激FBs增殖,螺内酯阻断醛固酮的作用,检测FBsNO含量、iNOS活性和iNOSmRNA表达,用3H-胸腺嘧啶掺入量作为反应FBs增殖的指标。结果醛固酮呈浓度依赖性的促FBs核酸合成速率明显增高,降低FBsNO含量、iNOS活性和iNOSmRNA表达;螺内酯能明显抑制醛固酮介导的FBs核酸合成速率增高,与醛固酮剌激组相比差异显著(P<0.01)。同时发现醛固酮剌激组NO含量、iNOS活性和iNOSmRNA表达与对照组相比差异显著(P<0.05或P<0.01)。螺内酯抑制醛固酮介导的FBs的上述作用。醛固酮干预下FBs核酸合成速率与NO含量及iNOS活性呈显著负相关(r分别为-0.932和-0.928,均P<0.01)。结论醛固酮通过降低iNOS-NO剌激FBs增殖,螺内酯能逆转上述作用。     

钙调神经磷酸酶在心肌肥大中的作用

钙调神经磷酸酶在心肌肥大的病理生理过程中发挥着重要作用。钙调神经磷酸酶的结构、功能及抑制剂等各方面的研究对于探讨心肌肥大的发病机制、为心肌肥大的预防和治疗提供了一条新思路。本文就钙调神经磷酸酶在心肌肥大中的研究现状进行综述。     

Ras-MAPK信号转导系统在醛固酮诱导心室成纤维细胞增殖中的作用

目的 探讨醛固酮诱导心肌成纤维细胞(CFs)增殖的信号转导机制.方法 用胰酶消化法分离、培养新生大鼠CFs,采用3H-胸腺嘧淀核苷(3H-TdR)掺入法、Western-blotting技术从DNA合成、蛋白表达等方面观察MAPK活化与醛固酮促CFs增殖的关系.结果 (1)醛固酮剂量依赖性促CFsDNA合成,其作用可被PD98059逆转;(2)醛固酮对MAPK蛋白表达有显著增强作用,此作用可被PD98059阻断.结论 醛固酮能激活CFs的MAPK,MAPK表达及活化参与醛固酮诱导的CFS增殖.     

钙调神经磷酸酶依赖的信号通路在大鼠心肌肥大中的作用

目的：观察钙调神经磷酸酶（ｃａｌｃｉｎｅｕｒｉｎ,ＣａＮ）依赖的信号通路在大鼠心肌肥大中的作用。方法：通过腹主动脉缩窄复制大鼠压力超荷性心肌肥大模型,观察ＣａＮ特异性抑制剂环孢素Ａ（ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎ Ａ,ＣｓＡ）对大鼠心系数以及血浆及心肌组织心钠素（ａｒｉｔｒｉａｌｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅ,ＡＮＰ）水平的影响。同时,在培养的大鼠心肌细胞及心脏成纤维细胞上,观察ＣｓＡ 对血管紧张素Ⅱ（ａｎｇｉｏｔｅｎｓｉｎ Ⅱ, ＡｎｇⅡ） 刺激的３Ｈ亮氨酸及３Ｈ胸腺嘧啶参入的影响。结果：腹主动脉缩窄大鼠心系数较假手术组增高３８％ （ Ｐ＜ ０．０１） 。应用ＣｓＡ 治疗的大鼠心系数下降了８５％ （ Ｐ＜０ ．００１）。同时,观察到腹主动脉缩窄大鼠心肌组织及血浆ＡＮＰ含量较对照组分别增高１３５ ％ 和１１７ ％ （Ｐ＜ ０ ．０１） ,ＣｓＡ 处理后,ＡＮＰ分别下降了１６ ％ 和１４％ 。在培养的大鼠心肌细胞及心脏成纤维细胞上,观察到ＣｓＡ（０ ．１ ～１０μｍｏｌ·Ｌ－１）可以浓度依赖的方式抑制血管紧张素Ⅱ刺激的３Ｈ亮氨酸及３Ｈ胸腺嘧啶参入的增加。结论：ＣａＮ 依赖的信号通路可能参与了压力超负荷及血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心     

肾上腺髓质素对醛固酮促心肌成纤维细胞增殖的影响

目的:探讨肾上腺髓质素(ADM)对醛固酮(ALDO)促心肌成纤维细胞增殖的影响及丝裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号转导途径的作用。方法:分离培养SD乳鼠心肌成纤维细胞,将细胞分成对照组、不同浓度ALDO组、ALDO+不同浓度ADM组、ALDO+ADM受体拮抗剂组,用3H-胸腺嘧啶([3H]-TdR)掺入和MAPK活性反映心肌成纤维细胞增殖。结果:ALDO呈浓度依赖性增加心肌成纤维细胞3H-TdR掺入,ALDO强烈刺激成纤维细胞ADM分泌和ADMmRNA表达,亦呈浓度依赖性,加入ADM(10-9～10-7mol/L)呈浓度依赖性抑制ALDO促心肌成纤维细胞增殖作用,其[3H]-TdR掺入量减低,抑制率分别为16.8%-37.4%(P<0.01),其MAPK活性明显减低,抑制率为7.4%-33.6%(P<0.05或P<0.01)。ADM22-52明显增强ALDO的促心肌成纤维细胞3H-TdR掺入效应,而CGRP8-37对ALDO的促细胞增殖效应无明显影响。结论:ADM对ALDO促心肌成纤维细胞增殖具有抑制作用,同时具有下调MAPK活性的作用,ADM对心肌成纤维细胞增殖的抑制效应可能由MAPK信号途径所介导。     

血管紧张素II和醛固酮对大鼠心成纤维细胞增殖的影响

目的: 探讨血管紧张素(angiotensin,ang) II、醛固酮及其拮抗剂干预对大鼠心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)活性和胶原蛋白表达的影响。方法: 采用胶原酶 II消化法、差速贴壁法、差速脱壁法获取并纯化SD乳鼠CFs,将3,4代CFs分为：ang II组、醛固酮组、ang II+醛固酮组、ang II+氯沙坦组、醛固酮+螺内酯组、对照组。采用CCK-8活细胞计数试剂盒检测细胞活性; RT-PCR检测细胞中I型胶原前胶原A1(collagen,type I,alpha 1,COL1A1)、III型胶原前胶原A1(collagen,type III,alpha 1,COL3A1)以及MMP1,基质金属蛋白酶的组织抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinases,TIMP1)mRNA的变化; Western印迹检测COL1A1,COL3A1,MMP1,TIMP1蛋白表达的变化。结果: 与对照组比较,ang II、醛固酮可明显促进CFs增殖(增殖率分别为38.5%,28.5%; P<0.05),ang II+醛固酮组的增殖率较ang II、醛固酮单独干预组更高(增殖率54.4%,P<0.05),氯沙坦、螺内酯可显著抑制ang II、醛固酮诱导的细胞增殖效应(P<0.05); 与对照组比较,ang II,醛固酮可显著促进COL1A1,COL3A1,MMP1 mRNA和蛋白表达(P<0.05),同时抑制TIMP1 mRNA和蛋白表达(P<0.05),氯沙坦、螺内酯可显著抑制ang II、醛固酮诱导的COL1A1,COL3A1,MMP1 mRNA和蛋白表达的增加(P<0.05),同时升高TIMP1 mRNA和蛋白表达(P<0.05)。结论: Ang II、醛固酮可促进体外培养CFs增殖和增加I,III型胶原表达; Ang II、醛固酮同时干预时具有协同和叠加效应,而氯沙坦、螺内酯可抑制这一效应; 其作用机制可能通过影响MMPs/TIMPs的平衡,使心胶原代谢紊乱,增加CFs活性,促进心纤维化。     

钙调神经磷酸酶依赖的信号通路在大鼠心肌肥大中的作用

目的：观察钙调神经磷酸酶（ｃａｌｃｉｎｅｕｒｉｎ，ＣａＮ）信赖的信号通路在大鼠心肌肥大中的作用。方法：通过腹主动脉缩窄复制大鼠压力超荷性心肌肥大模型，观察ＣａＮ特异性抑制剂－环孢素Ａ（ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎ Ａ，ＣｓＡ）对大鼠心系数以及血浆及心肌组织心钠素（ａｒｉｔｒｉａｌ ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅ，ＡＮＰ）水平的影响。     

心肌营养素-1在高静水压刺激心肌成纤维细胞增殖中的作用

目的 探讨心肌营养素-1（CT-1）在高静水压刺激心肌成纤维细胞增殖中的作用。方法 用160mmHg的高静水压刺激原代培养的心肌成纤维细胞，同时以CT-1的反义寡核苷酸进行干预。分别用MTT法检测心肌成纤维细胞的增殖，放免法检测血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）的浓度，Western blotting检测CT-1蛋白的表达。结果 高静水压能明显促使心肌成纤维细胞增殖，AngⅡ分泌增加，CT-1合成上调，而CT-1的反义寡核苷酸能抑制高静水压诱导的细胞增殖和AngⅡ分泌。结论 CT-1参与高静水压的促心肌成纤维细胞增殖作用，且这一作用与肾素血管紧张素系统（RAS）有关。     

二苯乙烯苷通过降低钙调神经磷酸酶的活性抑制心肌成纤维细胞的增殖

目的:研究二苯乙烯苷(2,3,4’,5-tetrahydroxystilbene-2-O-β-D-glucoside,TSG)对精氨酸加压素(argininevasopressin,AVP)引起的心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖的抑制作用及其相关信号通路。方法:采用MTT法观察TSG对AVP引起的CFs增殖的抑制作用。定磷法检测细胞内钙调神经磷酸酶(calcineurin,CaN)的活性,WesternBlot测定其蛋白表达。结果:30μmol/L、100μmol/L的TSG明显抑制100 nmol/L AVP引起的CFs的增殖(P<0.01),而3μmol/L、10μmol/L的TSG则对CFs的增殖无明显影响。CaN的活性在100 nmol/L AVP刺激30 min后达到最高(P<0.05),而30μmol/L TSG能抑制CaN活性的增高(P<0.05);CaN蛋白水平在AVP刺激48 h后明显升高(P<0.05),而这种升高作用能被30μmol/L TSG抑制(P<0.05)。结论:TSG可以抑制AVP诱导的CFs的增殖。TSG可能是通过减少CaN活化和蛋白表达抑制CFs的增殖。     

钙调神经磷酸酶信号通路在心肌中的作用

钙调神经磷酸酶（Calcineurin,CaN）属丝氨酸-苏氨酸蛋白磷酸酶家族成员（又称蛋白磷酸酶2B,PP2B）,是一种受Ca^2＋／钙调素（Calmodulin）调节的丝氨酸／苏氨酸蛋白磷酸酶,在细胞信号传递过程中直接接受Ca^2＋的调节,然后发挥去磷酸化作用。CaN广泛分布于脑、心肌、骨骼肌、T淋巴细胞、血管平滑肌和心血管内皮等组织细胞中,目前认为它是一种参与多种细胞功能调节的多功能信号酶^[1]。在心血管方面的研究表明,CaN介导的信号通路除了在心血管的形态发生中起重要作用外,也参与心肌肥大的调节。本文就CaN的一般概况及其信号通路在心肌肥厚的发生发展过程中的作用进行简要综述。     

三磷酸肌醇剌激心肌成纤维细胞的增殖

目的　探讨钙调神经磷酸酶 (CaN)依赖的信号通路在三磷酸肌醇 (IP3)剌激的乳鼠心肌成纤维细胞 (FBs)增殖中的作用。方法　以培养的FBs为模型 ,用IP3剌激FBs内Ca2 +释放 ,环孢素A(CsA)阻断CaN ,维拉帕米 (Ver)阻断FBs钙通道 ,检测FBs的CaN、丝裂素活化蛋白激酶 (MAPK)、蛋白激酶C(PKC)活性 ,用3H 亮氨酸及3H 胸腺嘧啶掺入量作为反应FBs增殖的指标。结果　IP3剌激组FBs蛋白核酸合成速率明显增高 ,与对照组相比差异显著 (P <0 .0 1 ) ;CsA及Ver能明显抑制IP3介导的FBs蛋白核酸合成速率增高 ,与IP3剌激组相比差异显著 (P <0 .0 1 )。同时发现IP3剌激组CaN、PKC活性与对照FBs相比差异显著 (P <0 .0 5,P <0 .0 1 )。CsA和Ver抑制IP3介导的FBs的CaN活性增高 ,Ver抑制IP3介导的FBs的PKC活性增高。结论　CaN在IP3剌激的FBs增殖中起重要作用 ,但CaN信号通路不是IP3剌激FBs增殖的唯一信号通路 ,其它信号通路也可能参与了IP3剌激的FBs增殖。     

依那普利拉对新生大鼠心肌成纤维细胞增殖及NOS/NO系统的影响

目的：观察血管紧张素Ⅰ转换酶抑制剂（ACEI）依那普利拉（Ena）对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞（CFb）增殖及其对一氧化氮合酶/一氧化氮系统（NOS/NO）的影响，探讨Ena抑制心肌成纤维细胞增殖的初步机制。方法：培养的新生Wistar大鼠CFb，分为对照组、模型组和3个剂量Ena给药组，采用胰酶消化、差速贴壁法培养CFb，四氮唑盐（MTT）比色法检测细胞增殖；流式细胞仪测定细胞周期；硝酸还原酶法和分光光度法分别测定不同干预条件下CFb培养液中NOS/NO活性。结果：Ena能够显著抑制AngⅡ诱导的CFb增殖，Ena 3个剂量组作用24、48和72 h时间点的MTT值与模型组比较，差异具有显著性（P<0.05或P<0.01）；与模型组比较，Ena能提高细胞周期G₀/G₁百分率，降低S期百分率，差异具有显著性（P<0.05或P<0.01）；与模型组比较， Ena能够提高CFb上清液中NOS/NO 水平，且随着用药剂量和作用时间增加，NOS活性和NO含量明显升高（P<0.05或P<0.01）。结论：Ena抗CFb增殖的作用与提高CFb NOS/NO 系统活性，拮抗AngⅡ的生物效应有关。     

醛固酮介导的肾性高血压相关靶器官组织钙调神经磷酸酶活性的变化

目的研究醛固酮介导一肾一夹肾性高血压大鼠脑、肾、脾、肺、主动脉和肝脏组织钙调神经磷酸酶(CaN)活性的变化.方法取20只Wistar大鼠随机分为3组:假手术组(sham op,n=6),一肾一夹手术组(op,n=7)和螺内酯干预组(spiro,n=7).以PNPP为底物测定术后4周大鼠各组织器官CaN活性.结果肾性高血压大鼠脾、肾脏、肺、脑CaN活性较假手术组分别上升90%,84%,57%和43%(均P＜0.05),螺内酯干预组上述组织器官CaN活性较手术组明显下降(P＜0.05).肾性高血压大鼠组肝脏CaN活性较假手术组下降27%(P＜0.05),螺内酯干预组肝细胞CaN活性较手术组有下降趋势,但差异无显著意义.各组大鼠主动脉中CaN活性无明显变化.结论醛固酮对肾性高血压相关靶器官-脑、肾、脾、肺组织细胞内信号分子CaN的激活具有重要作用.     

血管钠肽抑制低氧诱导的心肌成纤维细胞的增殖和胶原合成

目的　观察血管钠肽 (Vasonatrin peptide,VNP)对低氧状态下大鼠心肌成纤维细胞 (CFs)增殖及胶原合成的影响 ,探讨其防治低氧所致心肌间质结构重建的作用机制 .方法　培养新生大鼠 CFs,应用流式细胞仪分析细胞周期 ,以 3H- proline掺入率反映胶原合成速率 .结果　单纯低氧不改变 CFs的细胞周期 ,但增加低浓度血清 (2 5 m L· L- 1 )作用基础上的细胞增殖指数 PI(S+G2 / M) / (S+G2 / M+G0 / G1 )(P<0 .0 1) ,10 - 6 m ol· L- 1的 VNP抑制低氧诱导的 PI增加(P<0 .0 1) .低氧可以增加基础胶原合成 (增加 19.6 % ,P<0 .0 5 ) ,也增加低浓度血清 (2 5 m L· L- 1 )诱导的胶原合成速率 (增加 37.2 % ,P<0 .0 1) . 10 - 8～ 10 - 6 mol· L- 1 的 VNP浓度依赖性抑制低氧诱导的胶原合成速率 (P<0 .0 1) .结论　低氧增加胶原合成以及血清刺激的 CFs的增殖反应 ,VNP抑制上述作用 ,从而抑制低氧引起的心肌纤维化     

牛磺酸对原代培养新生大鼠乳鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞的作用

目的：探讨牛磺酸（Tau）对原代培养的新生大鼠乳鼠心肌细胞的保护作用及对心肌成纤维细胞的生长抑制作用。方法：将心肌细胞分为对照组、H₂O₂损伤模型组以及H₂O₂损伤加药物治疗组：阳性药川芎嗪（Lig）组及Tau大、中、小（80、40及20 mmol·L^-1）剂量组，预先24 h给予治疗药物后使用0.5 mmol·L^-1 H₂O₂损伤心肌细胞6 h，观察Tau对心肌细胞形态学的影响，MTT法测定反映心肌细胞存活力的A值以及测量乳酸脱氢酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）含量的变化；将心肌成纤维细胞随机分为7组，分别给予0、10、20、40、80、160及320 mmol·L^-1 Tau，MTT法测定不同浓度Tau对心肌成纤维细胞生长的影响。结果：H₂O₂损伤心肌细胞6 h后，Tau（80、40及20 mmol·L^-1）剂量组A值分别为0.479±0.055、0.437±0.052及0.421±0.062，与H₂O₂组（0.304±0.050）比较，差异均具有显著性（P<0.001或P<0.01）；Tau（80及40 mmol·L^-1）剂量组使H₂O₂损伤的心肌细胞LDH释放减少、SOD含量增加、MDA含量降低，与H₂O₂损伤组比较差异均具有显著性（P<0.01或P<0.05）；40～320 mmol·L^-1 Tau抑制心肌成纤维细胞的生长，与空白对照组比较差异具有显著性（P<0.05，P<0.01或P<0.001）。结论：Tau可通过减轻自由基对心肌细胞的损伤，抑制心肌成纤维细胞生长，达到心脏保护作用。     

靶向沉默SIRT1对乳鼠心肌成纤维细胞增殖的影响

目的 探究沉默信息调节因子1(SIRT1)对乳鼠心肌成纤维细胞增殖的影响作用.方法 应用转化生长因子-β1处理乳鼠原代心肌成纤维细胞,采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测SIRT1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA表达水平;Western blot法检测SIRT1、α-SMA的蛋白表达水平;MTT法检测心肌成纤维细胞的细胞增殖活性;使用LipofectamineTM 2000 Reagent向乳鼠原代心肌成纤维细胞中转染siRNA-SIRT1.结果 转染siRNA-SIRT1的心肌成纤维细胞,SIRT1蛋白和mRNA 表达下降,同时α-SMA蛋白和mRNA表达下降;转染siRNA-SIRT1明显抑制心肌成纤维细胞的增殖活性.结论 siRNA-SIRT1对心肌成纤维细胞增殖活性有明显抑制作用,SIRT1可能成为心脏结构重构防治的新靶点,其调控剂的应用将为心肌纤维化的防治提供新的思路和方案.     

PYK_2小干扰RNA对成年大鼠心脏成纤维细胞增殖的影响

目的以富含脯氨酸的酪氨酸激酶2(PYK2)为靶基因,设计并构建短发夹状小干扰RNA表达载体,探讨PYK2小干扰RNA表达载体对心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖的影响。方法以pAVU6 27质粒为载体,以PYK2为靶基因,设计并构建短发夹状小干扰RNA表达载体,行酶切和测序鉴定。用PYK2短发夹状小干扰RNA表达载体转染体外培养的成年大鼠心脏成纤维细胞,反转录聚合酶链反应和Westernblot法检测PYK2基因和蛋白表达的改变,四唑盐比色法和3H-TdR掺入率检测转染后细胞的增殖和DNA合成情况。结果酶切鉴定和测序分析表明靶向PYK2的RNA干扰重组体构建成功;重组体转染CFs后,PYK2的mRNA和蛋白水平较空载体转染的对照组显著下降;重组体转染CFs后MTT比色A值和3H-TdR掺入率均明显低于对照组。结论PYK2小干扰RNA表达载体是抑制心脏成纤维细胞增殖和DNA合成的有效手段,有利于深入探讨PYK2在心肌纤维化发生发展中的作用。     

辛伐他汀对血管升压素诱导大鼠心脏成纤维细胞增殖的影响

目的　探讨辛伐他汀 (Simvastatin ,Sim)对血管升压素 (AVP)诱导的新生SD大鼠心脏成纤维细胞 (CFs)增殖的影响 ,为防治高血压心肌纤维化提供理论依据。方法　采用胰酶消化、差速贴壁法培养新生SD大鼠CFs,以3H 胸腺嘧啶核苷 (3H TdR)掺入法测定DNA合成、四氮唑盐 (MTT)比色法测定细胞数目 ,分别观察不同浓度Sim对AVP诱导CFs增殖的作用及甲羟戊酸 (Meval onate,MVA)干预的影响。结果　①CFs(2 0 0个细胞 )的3H TdR掺入率随着Sim干预浓度的增加而降低 ,其中 1 0 - 6mol/LSim和 1 0 - 5mol/LSim组的3H TdR掺入率分别为 (1 1 75± 2 0 2 6 6 )、(771± 1 6 4 86 )cpm ,明显低于对照组 (1 95 5± 3 72 45 )cpm(P <0 0 1 ) ;②MTT比色法A490 值随Sim浓度的增加而降低 ,其中 1 0 - 6、1 0 - 5mol/LSim组的A490 值分别为 0 2 1 5± 0 0 4 1和 0 1 6 3± 0 0 1 8,均较对照组A490值 0 3 93± 0 0 4 8显著降低 (P <0 0 1 ) ;③ 1 0 - 5mol/LSim +1 0 - 3mol/LMVA组的3H TdR掺入率、MTT比色法A490 值分别为 (1 995±3 5 3 83 )cpm和 0 41 8± 0 0 4 5 ,均显著高于 1 0 - 5mol/LSim组 (P <0 0 1 )。结论　辛伐他汀可抑制AVP诱导的CFsDNA的合成和细胞数目增加 ,提示Sim可抑制CFs增殖 ,其机制可能通过甲