西尼地平与人血清白蛋白相互作用的荧光光谱法研究

本文采用荧光分光光度法研究了西尼地平与人血清白蛋白(HSA)间的相互作用。根据Stern-Volmer方程确定了西尼地平对人血清白蛋白的猝灭类型为静态猝灭。通过计算求得生理条件下(pH=7.4)西尼地平与HSA的结合常数为3.3×105,结合位点数为1.24。实验考察了pH及微量金属离子对药物与HSA相互作用的影响。最后根据热力学方法确定了该药物与人血清白蛋白之间的作用力类型为静电作用力。     

阿霉素与人血清白蛋白相互作用分析

目的 采用荧光光谱法探讨阿霉素（ADR）与人血清白蛋白（HSA）相互作用.方法采用荧光光谱法分析pH、温度、缓冲液对ADR与HAS相互作用的影响.结果 pH对ADR与HAS相互作用影响较小;pH 4.97下不同温度对两者相互作用的影响较pH 7.41小;相同的缓冲液中,随着pH值的增大KSV值也呈现增大的趋势,3种缓冲液中,Na2HPO4-KH2PO4缓冲液更有利于两者的相互作用.结论 温度、缓冲液对ADR与HAS相互作用会产生不同程度的影响.     

17α—羟基孕酮—丁二酸—牛血清白蛋白—异硫氰酸荧光素络合物的合成

以１７α－羟基孕酮为原料，通过酰化反应，得１７α－羟基孕酮丁二酸半酯，与其氯代甲酸异丁酯作用后再与牛血清白蛋白结合，然后接上异硫氰酸荧光素即得到１７α－羟基孕酮－丁二酸－牛血清白蛋白－异硫氰酸荧光素结合物。该物作为雌、孕激素受体的检测试剂，制备方法较简便。     

荧光光谱法研究昂丹司琼与人血清白蛋白的相互作用

目的利用荧光光谱法研究昂丹司琼(OND)与人血清白蛋白(HSA)的相互作用。方法采用荧光光谱法。结果在296K和310K时OND与HSA的结合常数分别为3.24×104L/mol,4.68×104L/mol,热力学参数ΔH为20.08kJ/mol。结论 OND对HSA的荧光猝灭机制主要为静态猝灭,二者有一个结合位点,其作用力类型以疏水作用力为主。     

荧光光谱法研究肼黄与人血清白蛋白的结合性质

目的 研究肼黄与人血清白蛋白（HSA）间的结合性质。方法 采用荧光猝灭法对肼黄与人血清白蛋白间相互作用进行研究。结果 肼黄可以使HSA的内源荧光发生猝灭现象。肼黄与HSA相互作用的热力学参数计算结果为ΔG⁰<0、ΔH⁰<0、ΔS⁰>0。华法林的加入可使HSA-肼黄体系的荧光强度明显降低。结论 肼黄以形成HSA-肼黄复合物的静态猝灭机制与HSA发生相互作用。二者形成HSA-肼黄复合物的过程是自发进行的,疏水作用力和氢键在形成HSA-肼黄复合物的过程中发挥主要作用。肼黄在HSA上的结合位点是与华法林相同的siteⅠ位。     

棉酚与人血清白蛋白相互作用及其分子模拟研究

摘 要 目的： 探讨棉酚与人血清白蛋白(HSA)的相互作用。方法: 采用荧光光谱方法研究在生理条件下,棉酚与人血清白蛋白（HSA）的相互作用,并采用分子对接软件模拟棉酚与人血清白蛋相互作用。结果:棉酚与HSA的结合常数为2.390 6×10⁵ L·mol^-1 (293K) 和3.576 8×10³ L·mol^-1（303K）, 具有一个结合位点,结合反应的主要作用力为氢键和范德华力,结合位置更接近于人血清白蛋白的酪氨酸残基,分子模拟分析也证实此结果。结论: 棉酚对人血清白蛋白的荧光猝灭机制属于静态荧光猝灭。     

文多灵碱键合人血清白蛋白位点的表征

本文利用荧光增敏光谱法及紫外吸收光谱法结合计算机模拟技术研究了模拟生理条件下文多灵碱的光谱特征及它与人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)的键合作用。同步荧光及紫外光谱图的信息表明文多灵碱对蛋白微环境有影响。荧光光谱表明文多灵碱对HSA有较强的荧光增敏作用,根据荧光滴定的数据求得不同温度下(303、310和317K)药物与蛋白相互作用的结合常数及结合位点数。分子模拟的结果显示了文多灵碱与HSA的键合模式和键合机制,表明药物与蛋白有较强的键合作用,维持药物与蛋白的相互作用力主要是疏水作用,兼有4个氢键(位于氨基酸残基Arg218、Lys195、Arg222和Ala291位)。位点竞争实验显示文多灵碱键合在HSA的siteII区。通过计算得到的热力学参数(依据范德霍夫公式计算得ΔH0与ΔS0的值分别为-10.30kJ·mol-1和79.98J·mol-1·K-1)确定了药物与蛋白的相互作用力类型主要为疏水兼静电作用。     

阿司匹林与人血清白蛋白的相互作用研究

目的以光谱技术研究阿司匹林分子与人血清白蛋白(HSA)间结合作用机制。方法通过荧光光谱法确定阿司匹林对HSA的荧光猝灭机制。由Lineweaver-Burk双倒数作图法确定反应的解离常数。根据热力学方程讨论两者间主要的作用力类型。结合同步荧光技术考察阿司匹林对人血清白蛋白构象的影响。结果阿司匹林对HSA的荧光猝灭机制为静态猝灭。在37℃和25℃时阿司匹林与HSA的解离常数分别为KD37=1.44×10-3mol.L-1,KD25=1.96×10-3mol.L-1。结合反应热力学参数为ΔH=-19.73kJ.mol-1,△G=-16.21kJ.mol-1,ΔS=-11.77kJ.mol-1。结论两者结合的主要作用力类型是范德华力。阿司匹林与白蛋白结合后使蛋白质构象发生变化。     

咪达唑仑与人血清白蛋白结合的荧光光谱研究

目的:研究咪达唑仑与人血清白蛋白(HSA)的结合作用。方法:分析咪达唑仑与HSA结合的荧光猝灭光谱和同步荧光光谱(激发波长和发射波长的间距(Δλ)分别为15nm和60nm);由Stern-Volmer方程确定咪达唑仑对HSA17℃和37℃时的荧光猝灭速率常数(Kq)及机制,Lineweaver-Burk双对数方程确定17℃和37℃时猝灭反应结合常数(KA)和结合位点数(n);根据反应前后的焓变ΔH和熵变ΔS的相对大小判断咪达唑仑与HSA之间的主要作用力类型。结果:荧光猝灭光谱显示咪达唑仑与HSA有荧光猝灭作用,Δλ=15nm波长的同步荧光光谱显示咪达唑仑对酪氨酸残基发生作用,未对色氨酸残基发生作用;在17℃和37℃时的Kq分别为5.0246×1011和4.757×1011L·mol-1·s-1;17℃和37℃时猝灭反应KA和n分别为2.1717×104、8.7438×103mol·L-1,1.1895、1.0769个;反应前后的ΔH和ΔS均<0。结论:咪达唑仑对人血清白蛋白的猝灭过程为静态猝灭,咪达唑仑与HSA间的作用力主要为范德华力或者氢键作用力。     

磁性免疫微球在人血清白蛋白纯化中的应用

目的为了快速地从人血清中提纯人血清白蛋白，利用磁性免疫微球作为提取手段，再用间接酶联免疫法测定人血清白蛋白的回收率。方法将经过羧基修饰的聚苯乙烯微球作为载体，用EDC(碳化亚胺)活化微球表面的羧基，再将兔抗人血清白蛋白抗体包被于微球上，这种微球-抗体复合物能特异性地捕获人血清白蛋白，磁分离复合物后，通过将兔抗人血清白蛋白抗体作为捕获抗体，将酶联羊抗人血清白蛋白抗体作为检测抗体，建立起间接酶联免疫法，用于检测人血清中和磁性免疫微球上吸附人血清白蛋白的浓度，得到微球从人血清中提纯人血清白蛋白的回收率。结果第1次提纯的回收率为(86±4)%，重复利用微球2次，回收率分别为(69.0±0.6)%和(40.8±0.8)%，而提纯的人血清白蛋白的纯度为90%。结论以上结果表明，免疫磁性微球提纯人血清白蛋白的实验是有效的，为工业上大规模提纯人血清白蛋白提供了一条新的思路。     

高纯度牛血清白蛋白的研制

作者用辛酸钠—离子交换法从牛血清分离和纯化白蛋白。结果表明:用本法制得的白蛋白纯度高,SDS—PAGE呈现单一染色带,优于国内外同类产品。产品的收率提高约50%。本法操作简便、可用于生产制备。     

人血清白蛋白修饰的尿激酶与天然尿激酶的家兔体内过程比较

家兔静注人血清白蛋白修饰的尿激酶(MUK)和天然尿激酶(NUK)40000IU后,MUK 的体内过程符合零级速率过程,NUK 则符合一级速率过程,血纤溶活性 MUK 持续100min,而 NUK 仅20～25min。在“功能性”去除肝肾的家兔,NUK 血浓度半衰期延长3～4倍,而 MUK 血浓度下降与正常家兔相似。MUK 及 NUK 在去除纤溶抑制物的优球蛋白成份中纤溶活性相似,但在血浆中 NUK 仅存24～35%的纤溶活性,MUK 则保留了64～85%的纤溶活性。提示肝肾的摄取、代谢和消除能力降低及对血浆纤溶抑制物抵抗力增强,是 MUK 血纤溶活性长时间维持高水平的主要原因。     

INTERACTION OF HUMAN SERUM ALBUMIN WITH HEMATOPORPHYRIN AND ITS ZN2+-AND FE3+-DERIVATIVES

Human serum albumin at pH values above 6.8 has one strong binding site for hematoporphyrin; the stability constant of the 1:1 complex is about 10⁶ M^-1 as determined by Scatchard plot after estimation of the bound hematoporphyrin-induced quenching of the fluorescence emitted by the single tryptophanyl residue of the protein. Determination of the tryptophan-to-hematoporphyrin energy transfer efficiency yields a Förster parameter R₀ of 6.2–6.9nm, depending on the value chosen to represent the donor-acceptor mutual orientation, and a tryptophan-to-hematoporphyrin distance of about 1.7nm. Zn²⁺- and Fe³⁺- hematoporphyrin also give a 1:1 complex with albumin, probably binding at the same site as hematoporphyrin, as shown by the identity of the energy transfer parameters; however, the metal ions do not appear to be involved in the formation of the albumin-porphyrin complex. The albumin-hematoporphyrin interaction is drastically affected by the pH of the medium; below pH 6.5 we find a large number of binding sites with weak affinity for hematoporphyrin, which disappear upon increasing the pH. The main site, below pH 6.5, has an affinity comparable with that of the secondary sites. Circular dichroism studies show that the pH effect is due to a change in the protein conformation leading to different interactions between bound porphyrin and specific amino acid side chains.     

甲基苯丙胺与蛋白质结合物的合成

目的:利用蛋白质连接法合成甲基苯丙胺人工全抗原。方法:以BSA蛋白做载体蛋白,用碳二亚胺法偶联合成甲基苯丙胺抗原,并用紫外扫描、蛋白电泳以及胶体金免疫层析等方法进行检测。结果:甲基苯丙胺与BSA连接成功,连接产物分子量增加,且每分子牛血清白蛋白连接的甲基苯丙胺分子数为21个;胶体金免疫层析检测结果显示,合成抗原与抗体有特异性反应,具有活性,交叉反应良好。结论:此抗原可作为甲基苯丙胺免疫用抗原。     

大鼠血清白蛋白基因的分离、鉴定和表达以及在急性炎症期间大鼠血清白蛋白mRNA水平的变化

利用表达载体λgT11Amp3以大鼠肝 mRNA 建立了一个 cDNA 文库,从中分离了表达大鼠血清白蛋白抗原决定簇的克隆。内切酶作用图谱和 DNA 顺序测定法表明最大的插入子含有成熟白蛋白的完整编码顺序。聚丙烯酰胺凝胶电泳和免疫检测表明所表达的蛋白质是和细菌β-半乳糖苷酶一起以融合蛋白质的形式存在的。以 DNA-RNA 杂交法用~(32)P 标记的血清白蛋白 cDNA 进行测定,表明在急性炎症期间,大鼠肝中的白蛋白 mRNA 水平大大下降。     

喷雾干燥牛血清白蛋白微球中地塞米松磷酸钠和5-氟尿嘧啶的含量测定

用等吸收双波长紫外分光光度法测定了喷雾干燥牛血清白蛋白微球中地塞米松磷酸钠和 ５氟尿嘧啶的含量。回收率及重现性均好。方法快捷、准确。     

吗啡与蛋白质结合物的合成

目的:利用蛋白质连接法合成吗啡人工全抗原。方法:混合酸酐法和碳二亚胺连接法,用BSA及OVA蛋白做载体蛋白,利用紫外光谱扫描及蛋白质电泳两种方法判断连接是否成功。结果:连接成功,连接产物分子量增加,且每分子牛血清白蛋白连接的吗啡分子数为40-48个,每分子卵清白蛋白(OVA)连接的吗啡分子数为13-16个。结论:此两种方法能成功合成吗啡人工抗原,且该抗原可作为吗啡免疫用抗原以及吗啡免疫检测方法建立所用包被抗原。     

联糖米托蒽醌白蛋白微球的制备及其性质研究

以米托蒽醌为模型药物，用乳化热固化法制备了米托蒽醌白蛋白微球。以Ｄ－半乳糖为原料，经溴代、缩合、转换、加成等反应合成了２－亚氨基－２－甲氧基乙基－１－硫化β－Ｄ半乳吡喃糖苷（ＩＭＥ－ｔｈｉｐｇａｌａｃｔｏｓｅ）。以此为中间体与米托蒽醌白蛋白微球在室温下反应制备了联糖米托蒽醌白蛋白微球及其冻干剂，并对冻干剂的形态，球径及其分布、再分散性、糖精密、载药量、体外释药特性进行了研究，为白蛋白微球与联糖白蛋     

FORMATION OF A TERNARY COMPLEX WITH SERUM ALBUMIN: AN EXPLANATION FOR THE EFFECT OF α-MERCAPTO-β-(2-FURAN) ACRYLIC ACID ON RAT PLASMA ZINC CLEARANCE

1. Four, six and eight hours after gavage of rats with α-mercapto-β-(2-furan) acrylic acid (MFA) (25 mg/kg) serum zinc concentration was increased ten-fold over control levels and a mean molar ratio of 1 albumin:0.4 zinc:0.8 MFA was found for seventeen sera. 2. At pH 7.5 a maximum of 1 mole of MFA could be bound per mole of metal-free bovine serum albumin. 3. In the presence of zinc ion, albumin-zinc-MFA complexes formed, since for each mole of albumin-zinc complex an additional mole of MFA could be bound to albumin. Complexes up to a molar stoichiometry of 1 albumin:2 zinc:3 MFA were prepared. 4. MFA stabilized the albumin-zinc complex against dissociation. 5. Formation of similar complexes in vivo may account for the markedly delayed clearance of plasma zinc seen in rats administered β-aryl derivatives of α-mercaptoacrylic acid.