双氢青蒿素和顺铂对人肺腺癌A549细胞及其耐顺铂细胞株A549/CDDP的体外作用

目的:观察双氢青蒿素和顺铂在体外对A549及A549/CDDP细胞的作用,分析双氢青蒿素抗肺癌和逆转耐药效果。方法:①实验于2003-01/2003-09在解放军第四军医大学口腔医院临床药理基地实验室完成。②人肺腺癌A549细胞系亲代及耐顺铂细胞系A549/CDDP在含100g/L小牛血清,含青链霉素各1×105U/L的RPMI-1640培养液中,37℃,体积分数0.05CO2饱和湿度条件下培养,2.5g/L胰蛋白酶消化传代。③细胞增殖及增殖抑制实验采用四甲基偶氮唑盐检测法:取对数生长期A549和A549/CDDP细胞接种于96孔培养板中,每孔细胞数2×103培养12h后加入适当浓度药物,顺铂浓度0.032～10.000mg/L,单药组双氢青蒿素浓度3.2～1000nmol/L,联用组双氢青蒿素取100,320nmol/L2个浓度与顺铂联用,序贯治疗组先用双氢青蒿素100nmol/L处理24h后换液加顺铂,每组样本5个复孔,对照组加入等体积磷酸盐缓冲溶液,每孔中加入四甲基偶氮唑盐溶液(5g/L)20μL,在酶联免疫检测仪上测定各孔吸光度(A值),采用直线回归法计算药物的半数抑制浓度。④计量资料差异性比较采用方差分析。结果:①双氢青蒿素对A549细胞和A549/CDDP细胞的药物半数抑制浓度分别为(0.230±0.011)和(0.321±0.018)μmol/L;顺铂对A549细胞和A549/CDDP细胞药物半数抑制浓度分别为(0.270±0.014),(5.703±0.026)mg/L。②双氢青蒿素100,300nmol/L联合用药组顺铂对A549/CDDP细胞的顺铂半数抑制浓度明显低于对照组犤(2.255±0.114),(5.703±0.126)mg/L,P<0.01犦。③序贯治疗组对A549/CDDP细胞的顺铂半数抑制浓度明显低于对照组犤(2.523±0.115),(5.703±0.126)mg/L,P<0.01犦。结论:①双氢青蒿素具有抗癌作用,并与顺铂有协同作用。②体外实验条件下,双氢青蒿素可抑制肺癌细胞生长,并且逆转A549/CDDP细胞对顺铂的耐药。     

托瑞米芬对人肺腺癌细胞A549/DDP耐顺铂的逆转作用

【目的】研究托瑞米芬对人肺腺癌细胞系A549／DDP耐顺铂的逆转作用,探讨其与多药耐药蛋白表达之间的关系。【方法】以MTT法检测托瑞米芬及与顺铂联合对A549／DDP细胞的细胞毒性作用,以免疫细胞化学法检测A549／DDP细胞MRP的表达情况。【结果】15μmol／L、2．5μmol／L托瑞米芬对A549／DDP细胞的抑制率分别为5．39％、1．43％,与无药对照组比较无显著性差异（P〉0．05）。≥10μmol／L托瑞米芬可抑制A549／DDP细胞生长（P〈0．01）。2．5μmol／L、5μmol／L托瑞米芬可使顺铂对A549／DDP细胞的IC50从1．764μg／ml分别降至1．047μg／ml、0．588μg／ml,逆转A549／DDP细胞对顺铂的耐药（P〈0．01）,逆转倍数分别为1．686、3．001。A549／DDP细胞MRP呈强阳性表达。5μmol／L、2．5μmol／L托瑞米芬与顺铂联用可以下调MRP表达,与无药组及单用顺铂组比较,具有显著性差异（P〈0．01）。【结论】托瑞米芬能抑制A549／DDP细胞增殖和逆转A549／DDP细胞对顺铂的耐药;其耐药逆转可能与下调MRP表达有关。     

IL-2和α-IFN逆转人肺腺癌细胞A549／CDDP耐药性的研究

目的观察人重组白细胞介素2（IL-2）和α-干扰素（α-IFN）对人肺腺癌细胞A549／顺铂（CDDP）多药耐药（MDR）的逆转作用,并探讨其机制。方法四氮甲唑兰比色法（MTT法）检测IL-2、α-IFN及IL-2＋α-IFN处理前后A549／CDDP细胞对药物CDDP的敏感性．荧光分光光度法测定IL-2、α-IFN及IL～2＋α-IFN处理前后A549／CDDP细胞内罗丹明聚集量。流式细胞仪检测处理前后A549／CDDP细胞P-糖蛋白（P—gP）的表达。结果经IL-2、α-IFN及IL-2＋α-IFN处理48h后：①化疗药物CDDP对A549／CDDP细胞的半数抑制浓度（IC50）依次是（1．75±0．18）,（2．95±0．30）,（0．45±0．06）,同对照组（8．10±0．72）相比,差异有显著性（P〈0．05）,药物敏感性提高;②A549／CDDP细胞内罗丹明平均荧光强度依次为：（4．82±1．03）,（4．25±1．38）（9．13±1．86）,同对照组（2．38±0．26）相比,差异均有显著性（P〈0．05）;③A549／CDDP细胞P—gp平均荧光强度依次为（5．98±1．13）,（8．90±1．59）,（3．03±0．51）,同对照组（15．23±2．69）相比,差异均有显著性（P〈0．05）。结论IL-2、α-IFN及IL-2＋α-IFN能增加A549／CDDP细胞对CDDP的敏感性,可能机制为抑制P—gP表达,增加细胞膜的通透性,最终逆转了肿瘤细胞的多药耐药性。     

山莨菪碱对兔心室肌细胞离子通道电流的影响

目的研究山莨菪碱对兔正常离体心室彤睫田胞离子通道电流的影响,探讨其抗心律失常的细胞学离子机制。方法以酶解的方法分离兔心室肌外膜单个心室肌细胞,采用全细胞膜片钳技术,研究不同浓度山莨菪碱对兔正常心室肌细胞跨膜钠离子通道电流（INa）、L-钙通道电流（ICa-L）及瞬间外向钾通道电流（Ito）的影响。结果山莨菪碱浓度为10nmol／L时,对INa无明显影响（P〉0．05）。山莨菪碱浓度为100nmol／L时,INa电流密度减少到（-33．25&#177;4．46）pA／pF,1000nmol／L时INa电流密度减少到（-29．32&#177;3．55）pA／pF,抑制率分别为22．3％和31．5％,与基础值比较,差异均有统计学意义（P〈0．01）。山莨菪碱浓度为10nmol／L时,对ICa-L无明显影响（P〉0．05）。山莨菪碱浓度为100nmol／L时,ICa-L．电流密度减少到（-2．15&#177;1．02）pA／pF,1000nmol／L时ICa-L电流密度减少到（-1．82&#177;0．86）pA／pF,抑制率分别为31．3％和41．8％,与基础值比较,差异均有统计学意义（P〈0．01）。山莨菪碱浓度为10nmol／L时,Ito电流密度由（17．41&#177;3．13）pA／pF减少到（16．13&#177;2．93）pA／pF,100nmol／L时减少到（15．11&#177;2．88）pA／pF,1000nmol／L时减少到（14．96&#177;2．82）pA／pF,抑制率分别为7．3％、13．2％和14．1％,均无统计学差异（P〉0．05）。结论山莨若碱对离体正常单个心室肌细胞INa和ICa-L具有剂量依赖性抑制作用。     

姜黄素改善肺癌A549细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体抵抗的机制

目的：观察中药提取物姜黄素联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对肺癌细胞株A549生长抑制率和对细胞凋亡相关因子表达的影响，探索姜黄素改善肺癌A549细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体抵抗的机制。方法：实验于2003—10／2004-10在上海东方医院中心实验室完成。用购于中科院上海细胞所肺腺癌细胞株A549，将培养的A549细胞暴露于姜黄素、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及两者联合中，分4组，每组6孔，姜黄素组（40μmol／L姜黄素）、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体组（25μg／L肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体）、联合组（40μmol／L姜黄素与25μg／L肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体联合）、对照组（RPMI1640细胞培养液）。①用四氮唑蓝法测定姜黄素组、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体组以及联合组的吸光值，根据吸光度值计算肺癌细胞株A549细胞生长抑制率。②应用ApoAlert半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶系列比色法凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3，半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8表达。③反转录聚合酶链反应测定凋亡调控蛋白bel-2／bax的表达。结果：①抑制率：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对肺腺癌A549细胞的抑制明显低于姜黄素，25μg／L肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体作用24h细胞抑制率仅有（2．65&;#177;1．416）％；两药联合对肺腺癌A549细胞的抑制作用明显增加[高达（30．97&;#177;1．318）％，P〈0.011。②凋亡相关因子：联合组半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8表达明显高于姜黄素组、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体组、对照组[联合组：（50．77&;#177;0．812），（73．31&;#177;0.730）μmol／L；姜黄素组：（23．61&;#177;0.398），（26．84&;#177;1．511）μmol／L；肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体组：（9．63&;#177;1．024），（14．21&;#177;0．138）μmol／L；对照组：（3．69&;#177;0．486），（2．87&;#177;0．633）μmol／L，P〈0.011；联合组、姜黄素组的bel-2／bax明显高于肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体组（2．55&;#177;0．138，2．24&;#177;0．197，0．58&;#177;0．046，P〈0．01）。结论：肺癌A549细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体细胞耐受，姜黄素可能通过调整bcl-2／bax的表达，进而激活半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶家族，增加肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的敏感性。     

双氢青蒿素对人肺腺癌细胞株A549抑制作用的实验研究

目的观察双氢青蒿素对人肺腺癌细胞株A549的作用。方法采用四唑氮蓝（MTT）法测定不同浓度和时间双氢青蒿素对A549细胞的生长抑制作用;应用流式细胞术检测双氢青蒿素对A549细胞增殖和细胞周期的影响;应用透射电镜分析法检测双氢青蒿素对A549细胞凋亡的影响。结果双氢青蒿素对A549细胞有明显的体外增殖抑制作用,72 h的IC50值为580 nmol/L,且有明显的时间和剂量依赖关系;双氢青蒿素作用后G0/G1期细胞数增加;双氢青蒿素作用A549细胞后可以出现凋亡的形态学改变。结论双氢青蒿素对人肺腺癌A549细胞有生长抑制作用,其机制可能与诱导A549细胞周期阻滞和凋亡有关。     

反义T-STAR基因对A549细胞的调节作用

目的：观察反义T-STAR基因对肺腺癌细胞A549的T-STAR蛋白表达的调节作用。 方法：实验于2002-09／2004-03在西南医院中心实验室完成。①用双酶切定向克隆法．构建T-STAR反义核酸真核表达载体pneo-STAR。②A549细胞分4组用脂质体介导转染法分别转染：A549-STAR细胞组转入正义T-STAR基因真核表达载体pEGFP-C1／T-STAR，A549-asSTAR细胞组转入反义T-STAR基因真核表达载体pneo-STAR，A549-neo细胞组转入空载体质粒pcl-neo，A549细胞组为相同处理下不加任何载体的A549细胞。③用反转录-聚合酶链反应和western blot联合检测以上各组细胞的T-STAR表达情况。 结果：①A549-STAR细胞组的T-STAR蛋白和RNA表达量显著高于A549细胞组[（19434&;#177;219）和（1．280&;#177;0．018），（6922&;#177;113）和（0．323&;#177;0．015），P〈0．05]。②A549-asSTAR细胞组的T-STAR蛋白和RNA表达量[（1122&;#177;97），（0．133&;#177;0．005）]显著低于A549细胞组（P〈0．05）。③A549-neo细胞组的T-STAR蛋白和RNA表达量[（6295&;#177;143），（0．625&;#177;0．085）]与A549细胞组差异无显著性意义（P〉0．05）。 结论：导入正义T-STAR基因后的A549细胞中，T-STAR蛋白及RNA表达增加，导入反义T-STAR基因后的A5．9细胞中，T-STAR蛋白及RNA表达减少，说明反义核酸真核表达载体pneo-STAR可以特异性降低A549细胞中T-STAR基因的表达．为进一步研究T-STAR基因的功能奠定了基础。     

超声增强顺铂对耐药性卵巢癌细胞的DNA损伤效应

目的探讨超声能否增强顺铂对耐药性卵巢癌细胞的DNA损伤效应。方法人卵巢癌顺铂耐药细胞COC1/DDP以顺铂处理,同时在给予药物后加以超声辐照。以单细胞凝胶电泳（彗星实验）检测DNA损伤。结果对照组、DDP组、US组及DDP＋US组的慧星长度（像素）分别为26.9&#177;2.86、48.4&#177;14.29、31.3&#177;3.42、71.7&#177;8.90。DDP组、DDP＋US组对细胞DNA的损伤均较对照组高（P〈0.05、P〈0.05）。结论增强顺铂对DNA的损伤是超声逆转卵巢癌细胞顺铂耐药性的机制     

DNA修复相关基因甲基化与肺癌A549细胞顺铂化疗耐药的相关性研究

目的探讨5-氮杂-2’脱氧胞苷（5-Aza-2’deoxycytidine,5-Aza—Cde）对顺铂耐药株肺癌A549／DDP细胞DNA修复相关基因hMLH1、MGMT基因启动子区DNA甲基化状态及其表达的影响。方法A549细胞（A549细胞组）、A549／DDP细胞（A549／DDP组）、A549／DDP细胞5、10、20μmol／L5-Aza—Cde组,分别采用甲基化特异性PCR检测细胞hMLHl、MGMT基因甲基化状态,反转录一PCR法检测用药前、后细胞hMLHlmRNA、MGMTmRNA表达情况。结果A549细胞组hMLHl基因呈非甲基化状态且高表达,MGMT呈部分甲基化状态且高表达,A549一DDP细胞组hMLHl、MGMT基因均呈高甲基化状态,mRNA表达下调,10、20μmol／L5-Aza—Cde组hMLHl和MGMT均呈非甲基化状态;A549／DDP细胞组、5μmol／L5-Aza—Cde组hMLHlmRNA与MGMTmRNA表达量均低于A549细胞组（P〈0．05）,20μmol／L5-Aza—Cde组与A549细胞组比较差异无统计学意义（P〉0．05）;10μmol／L5-Aza—Cde组MGMTmRNA表达量低于A549细胞组（P〈0．05）,hMLH1mRNA表达量与A549细胞组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论hMLHl、MGMT基因甲基化修饰程度与mRNA表达有一定相关性,hMLH1、MGMT基因甲基化可能是肺癌A549细胞对顺铂耐药的因素之一。     

稀土化合物氯化镧对脂多糖诱导小鼠巨噬细胞分泌-一氧化氮的影响

目的探讨氯化镧（LaCl3）由对脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）刺激小鼠巨噬细胞（RAW264．7）分泌一氧化氮（nitric oxide，N01的影响。方法RAW 264．7细胞随机分成四组：空白对照组（培养基中不含LaCl3和LPS），氯化镧组（含LaCk2．5，5，10，20μmol／L培养24h）、氯化镧＋LPS组（分别以含LaCl3 2．5、5、10、20μmol／L的培养基培养24h后．更换含LPS 1mg／L的培养基继续培养24h）及LPS组（含LPS 1mg／L的培养基培养24h）。采用硝酸还原酶法测定各组细胞培养液上清一氧化氮（NO）的含量。结果LPS组培养上清NO浓度为52．82&#177;12．60μmol／L与空白对照组（2．90&#177;2．36μmol／L）和LaCl3组[（6．50&#177;4．67μmol／L、9．52&#177;4．47μmol／L、11．14&#177;7．42μmol／L、6．74&#177;2．00μmol／L]比较有显著性差异（P〈0．05）；LaCl3＋LPS组NO的浓度分别为26．00&#177;5．83μmol/L（2．5μmol／L LaCl3＋LPS）、29．86&#177;7．26μmol／L（5μmol／L LaCl3＋LPS）、34．62&#177;6．24μmol／L （10μmol／L LaCl3＋LPS），与LPS组相比显著减少（P〈0．05），20μmol／L LaCl3＋LPS）组NO的产生为45．61&#177;6．68μmol／L与LPS组比较无显著性差异。结论一定浓度的LaCl3可抑制LPS诱导小鼠巨噬细胞产生NO的水平。     

米非司酮逆转K562/A02细胞多药耐药的研究

目的研究孕激素拮抗剂米非司酮对白血病多药耐药细胞K562／A02的逆转作用及其机制。方法MTT法检测米非司酮作用72h后K562／A02细胞增殖及其对阿霉素杀伤敏感性的变化；流式细胞术检测米非司酮作用前后K562／A02细胞表面P糖蛋白的表达和细胞内柔红霉素的浓度；免疫组化法观察米非司酮作用前后K562／A02细胞凋亡相关蛋白bcl-2、Bax、caspase-3的表达；RT—PCR检测米非司酮作用后对K562／A02细胞内葡萄糖神经酰胺合成酶（GcS）mRNA表达的影响。结果2．5、5．0和10．0μmol／L米非司酮不抑制K562／A02细胞的增殖，但上述浓度的米非司酮作用后K562／A02细胞对阿霉素的敏感性较前分别增强了1．68、4．17和10．71倍。K562／A02细胞表面P糖蛋白的表达为（49．03±5．32）％，10μmol／L米非司酮作用72h后降低到（28．60±2．13）％（P〈0．01）；K562／A02细胞内柔红霉素的浓度为（61．07±8．61）％，而10μmol／L米非司酮作用后升高到（92．72±3．48）％（P〈0．01）。经10μmol／L米非司酮作用后，bcl-2蛋白表达由（56±9）％降低到（37±6）％（P〈0．05）；Bax蛋白由（40±5）％升高到（87±10）％（P〈0．01）；caspase-3蛋白则由（36±7）％升高到（89±6）％（P〈0．01）。RT—PCR结果显示K562／A02细胞GcS mRNA的表达较K562细胞明显升高，10μmol／L米非司酮能明显降低K562／A02细胞内GcS mRNA的表达。结论米非司酮可逆转白血病K562／A02细胞的多药耐药，且具有剂量依赖性。10μmol／L米非司酮能明显逆转白血病K562／A02细胞的多药耐药，其机制与降低P糖蛋白的水平，调节凋亡相关蛋白bcl-2、Bax、caspase-3的表达，降低GcS mRNA有关。     

中国成人肝微粒体P450酶活性研究

目的观察中国成人肝微粒体细胞色素P450（CYP450）、细胞色素b5（CYb5）的含量及常见几种药物代谢酶活性水平及在性别、民族间的分布差异。方法肝组织匀浆10000&#215;g离心去除沉淀，再以100000&#215;g超速离心60min，取沉淀加PBS甘油缓冲液，充分溶解制成微粒体悬液，用Lowry法测定蛋白含量；用双光道紫外分光光度计测定CYP450和CYb5的含量及P450酶活性。结果48例成人肝微粒体CYP450和CYb5含量分别为（0．46&#177;0．07）nmol／mg和（0．44&#177;0．04）nmol／mg；男性组CYP450和CYb5含量分别为0．49&#177;0．05）nmol／mg和（0．46&#177;0．06）nmol／mg，均高于女性组的（O．41&#177;0．08）nmol／mg、（O．42&#177;0．05）nmol／mg，P〈0．05；汉族、回族和壮族3个民族P450和CYb5含量作q检验进行两两比较，各组间差异均无统计学意义（P〉0．05）。药物代谢酶NADPH细胞色素C还原酶（NR）、乙基吗啡N-脱甲基酶（EDM）、氨基比林N-脱甲基酶（ADM）、苯并芘羟化酶（BPH）和戊巴比妥侧链羟化酶（PSCH）等酶活性水平分别为（0．71&#177;0．13）nmol／（mg&#183;min），（0．89&#177;0．18）nmol／（mg&#183;min），（0．99&#177;0．17）nmol／（mg&#183;min），（0．07&#177;0．01）nmol／（mg&#183;min），（4．15土0．65）μmol／（mg&#183;min），其中EDM活性水平女性组高于男性组（P〈0．05），PSCH活性水平男性组高于女性组（P〈0．05），其他各种酶活性男女之间无显著性差异；上述5种酶活性水平经q检验，汉族、回族和壮族3个民族之间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论测定了中国成人肝微粒体CYP450、CYb5含量及NR，EDM，ADM，BPH，PSCH等酶活性水平，男性组CYP450、CYb5含量及PSCH活性高于女性组，而EDM活性水平女性组高于男性组，上述7种指标在汉族、回族和壮族之间差异均无统计学意义。     

急性草乌中毒兔血浆毒性成分及组织病理学改变的研究

目的 观察急性草乌中毒时的血浆毒性成分及组织病理学改变。方法 选择日本大耳白兔8只，给予草乌酒灌胃染毒制备急性草乌中毒模型。记录心电及血压变化，并于染毒后0．5、1、2、3和6h采血测定血浆乌头碱、新乌头碱、次乌头碱的浓度；取心室肌、肝脏、大脑皮质，光镜下观察组织病理学改变。结果 染毒后动物迅速出现心律失常、血压下降的进行性加重趋势[染毒前：（121.98&#177;16．77）／（110．66&#177;8.78）mmHg，染毒1h：（102.98&#177;8.34）／（90.22&#177;5.85）mmHg，染毒2h：（66．81&#177;9．13）／（53.40&#177;6．32）mmHg，1mmHg-0.133kPa，P均〈0．013；血浆乌头碱、新乌头碱和次乌头碱浓度均持续升高，以染毒1h和2h的差异最为显著[乌头碱；（4．72&#177;3．26）μg／L比（18．48&#177;12．46）μg／L，新乌头碱：（21.52&#177;10．18）μg／L比（345.12&#177;81.36）μg／L，次乌头碱：（2．33&#177;0．70）μg／L比（23.66&#177;19．30）μg／L，P〈0.05或P〈0．013；两者呈正相关。光镜下观察，心肌、肝、脑组织均可见充血、水肿、细胞浸润等病理学改变。结论草乌毒性剧烈，吸收快，心律失常的严重程度与血浆毒性成分浓度呈正相关，早期清除血浆毒性成分是治疗的关键。     

肿瘤坏死因子α对人肺腺癌细胞耐顺铂的影响

目的研究肿瘤坏死因子OL（TNF-α）对人肺腺癌细胞系A549／顺铂（DDP）耐DDP的逆转作用,探讨其与肺耐药相关蛋白（LRP）表达之间的关系。方法以MTT法检0n,0TNF-α与顺铂联用对A549／DDP细胞的细胞毒性作用,以免疫细胞化学方法检测A549／DDP细胞LRP的表达情况。结果250、1000U／mlTNF-α可使顺铂对A549／DDP细胞的IC50从7．12ng／L分别降至5．02、4．41ng／L,能够逆转A549／DDP对顺铂的耐药,逆转倍数分别为1．42、1．62。A549／DDP细胞LRP呈强阳性表达,250、1000U／mlTN-α与顺铂联用可以下调LRP表达,LRP阳性表达率分别为（60．14-4-6．54）％、（57．234-5．98）％,同无药组和顺铂组LRP表达率（79．63±4．78）％、（75．97±5．32）％比较,差异具有统计学意义（P均〈0．01）。结论TNF-α能够逆转A549／DDP对顺铂的耐药,其机制可能与下调LRP表达有关。     

肺腺癌细胞A549及其顺铂耐药细胞株A549/DDP中GSK-3β蛋白磷酸化水平的差异

目的研究人肺腺癌细胞系A549和其顺铂耐药细胞系A549/DDP中GSK-3β的磷酸化和胞内分布以探讨GSK-3β在顺铂耐药中的作用。方法蛋白质免疫印迹法检测A549/DDP和A549细胞质和细胞核中总GSK-3β、p-GSK-3βser9和p-GSK-3βtyr6的表达。MTT法、流式细胞术分别检测顺铂耐药性、肺癌细胞凋亡率。结果 A549/DDP细胞胞质中p-GSK-3βser9水平明显高于A549细胞（P〈0.01）,顺铂的处理增加了A549/DDP细胞中p-GSK-3βser9的水平（P〈0.01）,相反却减少了A549细胞中p-GSK-3βser9的水平（P〈0.01）。A549/DDP细胞质中p-GSK-3βtyr6水平明显低于A549细胞（P〈0.01）,顺铂的处理减少了A549/DDP细胞中p-GSK-3βtyr6的水平（P〈0.01）,却增加了A549细胞中p-GSK-3βtyr6的水平（P〈0.01）。结论细胞质中GSK-3β活性受抑可能是非小细胞肺癌顺铂耐药的原因。     

热化疗联合对人肺腺癌耐药细胞株A549／DDP作用及其机制的实验研究

目的 观察热化疗联合对人肺腺癌耐药细胞株A549／DDP的影响及其机制，为临床上应用热化疗联合治疗非小细胞肺癌提供理论依据。方法 CCK-8法检测A549、不同温度下A549／DDP细胞对顺铂的敏感性；流式细胞仪分析热疗对A549／DDP细胞周期分布的影响；RT-PCR检测热疗对A549／DDP细胞ERCC1表达的影响。结果 亲代人肺腺癌细胞株A549对顺铂的敏感性明显高于耐药细胞株ASg9／DDP，不同温度加热后A549／DDP细胞对顺铂的敏感性均有提高；热疗尤其是热化疗后G2／M期细胞明显增多，G0／G1期细胞明显减少（P〈0．01）；热疗后A549／DDP细胞ERCC1mRNA表达未见明显改变。结论 热疗能提高人肺腺癌耐药细胞株A549／DDP对顺铂的敏感性，热化疗具有协同作用。热化疗协同作用机制可能主要是诱导细胞周期阻滞，抑制细胞增殖，和DNA修复基因ERCC无直接相关性。     

C-myc 参与β-Catenin 介导的肺腺癌 A549／DDP细胞的化疗耐药的实验研究

目的探讨C-myc与β-Catenin介导的肺腺癌A549/DDP的耐药相关性。方法 MTT细胞毒实验比较A549与A549/DDP细胞对顺铂的敏感性;Western blot检测在顺铂作用前、后β-catenin及C-myc在肺腺癌A549及A549/DDP中的蛋白表达及免疫荧光定位;流式细胞仪检测不同剂量的顺铂作用下两株细胞以及A549/DDP转染C-myc siRNA前后的凋亡和周期变化。结果 MTT细胞毒实验结果显示顺铂对A549和A549/DDP细胞的IC50值分别为（5.769±0.24）μmol/L和（28.373±0.96）μmol/L,与A549细胞比较． A549/DDP顺铂耐药4.92倍。 Western blot 结果显示β-Catenin 及C-myc蛋白在A549/DDP细胞的表达较A549高,顺铂作用48 h后A549细胞的β-catenin及C-myc表达较顺铂作用前下调（ P＝0.007）, A549/DDP细胞的β-catenin及C-myc表达较顺铂作用前上调（ P＝0.006）;免疫荧光定位结果显示顺铂作用48 h后A549及A549/DDP细胞的β-Catenin由膜/质/核表达转为质/核表达,C-myc表达由浆/核表达转为核表达。流式结果显示随着顺铂剂量的增加,细胞凋亡率成剂量依赖性增加。 A549/DDP中转染C-myc siRNA 48 h后引起细胞S期阻滞,G0/G1期细胞积聚,凋亡率增加（P＝0.013）,IC50值明显下降（P＝0.009）。结论β-catenin的下游靶基因C-myc在调节A549/DDP的耐药性中起到一定作用,C-myc siRNA可以提高A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。     

不同妊娠期妇女血微量元素水平变化分析

目的探讨不同妊娠期妇女血液微量元素变化情况。方法用原子吸收光谱分析法分别测定294例孕妇和47例健康妇女（对照组）Se、Mn、Fe、Cu、Zn水平。结果Se,与对照组（79．524&#177;10．55μg／L）比较,早孕组（72．16&#177;9．48μg／L）、中孕组（72．40&#177;11.58μg／L）,P〉0．05,晚孕组（56．76&#177;13．85μg／L）,P〈0．01;Mn,与对照组（15．00&#177;3．25μg／L）比较,早孕组（14．10&#177;3．73μg／L）、中孕组（15．57&#177;3．49μg／L）,P〉0．05,晚孕组（24．24&#177;5．43μg／L）,P〈0．01;Fe,与对照组（18．64&#177;3．76μmol／L）比较,早孕组（22．20&#177;4．68μmol／L）、晚孕组（12．68&#177;4．31μmol／L）,P〈0．01,中孕组（17．76&#177;6．13μmol／L）,P〉0．05;Cu,与对照组（16．28&#177;2．69μmol／L）比较,早孕组（23．28&#177;5．62μmol／L）、中孕组（25．48&#177;3．45μmol／L）、晚孕组（28．82&#177;4．36μmol／L）,P〈0．01;Zn,与对照组（12．83&#177;1．16μmol／L）比较,早孕组（10．85&#177;2．17μmol／L）、中孕组（9．71&#177;1.70μmol／L）、晚孕组（7．81&#177;1．36μmol／L）;P〈0．01。结论健康孕妇微量元素水平反映了微量元素之间协同、拮抗作用。随着妊娠期的推移,Fe的下降导致Mn的水平上升,Se的水平下降;而Cu的水平不断上升导致Zn水平不断下降,妊娠晚期各元素水平上升或下降尤为显著。     

酶法与Jaffe速率法检测肌酐结果的探讨

目的探讨肌酐测定中酶法与Jaffe速率法的关系。方法选择该院住院患者血清和尿液标本200例，用日本TMS-1024i自动生化分析仪检测肌酐，然后对测定结果进行统计学分析。结果肌酐浓度小于200μmot／L时，酶法和Jaffe速率法测定肌酐的结果分别为（83．88&#177;34．74）μmol／L、（84．38&#177;34．44）μmol／L，2种方法测定肌酐的结果差异无统计学意义（P〉0．05）；而肌酐浓度大于200μmol／L时，酶法和Jaffe速率法测定肌酐的结果分别为（1721．89&#177;1897．76）μmol／L、（1666．70&#177;1824．07）μmol／L，2种方法测定肌酐的结果差异有统计学意义（P〈0．05）。结论酶法检测肌酐的灵敏度高，干扰因素少，线性浓度高，是比较理想的测定方法。     

慢性再生障碍性贫血患者T淋巴细胞亚群和粒-单核细胞集落形成单位的检测

目的探讨慢性再生障碍性贫血（CAA）发病的免疫因素，为CAA的临床治疗提供依据。方法采用骨髓细胞半固体集落培养法检测粒一单核细胞集落形成单位（GM—CFU），同时用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群。结果CAA骨髓细胞培养GM—CFU产率明显少于正常对照组，（7．9&#177;0．5）个／ml vs （88．7&#177;2．7）个／ml（P〈0．01）；CAA骨髓细胞加正常血清培养GM-CFU的产率与正常对照组比较差异无统计学意义，（82．4&#177;2．6）个／ml vs （88．7&#177;2．7）个／ml（P〈0．05），其中有21例的GM-CFU的产率（60．1&#177;2．1）个／ml与对照相比较明显减少；CAA血清与正常骨髓细胞培养的GM—CFU为（105．6&#177;3．2）个／ml，显著高于正常组。CAA组的CD3^＋、CD4^＋和CD4^＋／CD8^＋均比对照组降低，分别为（49．8&#177;0．6）％ vs （64．3&#177;0．9）％、（29．7&#177;0．4）％ vs （38．6&#177;0．3）％和（1．2&#177;0．1）％ vs （1．7&#177;0．1）％（均P〈0．01）；CD8^＋细胞明显高于正常，（28．9&#177;0．3）％ vs （24．5&#177;0．3）％（P〈0．01）。结论CAA患者普遍存在着T细胞亚群失衡的免疫异常；CAA患者骨髓细胞中可能有抑制患者GM—CFU形成的因素，而血清中存在着升高的粒一单核细胞集落刺激因子等，其临床意义尚需进一步观察。GM-CFU体外培养联合T细胞亚群检测，可作为CAA异常免疫机制的诊断指标。