蝙蝠葛酚性碱对胰腺癌BxPC-3细胞增殖抑制作用及其对Hh信号通路影响

目的:探讨蝙蝠葛酚性碱(PAMD)对人胰腺癌BxPC-3细胞的增殖抑制作用,以及通过观察PAMD对胰腺癌BxPC-3细胞Hedgehog信号通路中Shh、Ptch1 mRNA和蛋白表达的影响,进一步讨论PAMD抗胰腺癌的作用机制及其作用靶点。方法:对人胰腺癌BxPC-3细胞进行体外培养,以不同终浓度的PAMD培养液进行干预,对照组用正常培养液培养,进行以下实验:(1)利用台盼蓝染色测定各组中BxPC-3细胞生长周期;(2)运用MTT法检测各组BxPC-3细胞增殖情况;(3)利用RT-PCR、Western Blot技术检测各组BxPC-3细胞中Shh、Ptch1mRNA及蛋白的表达。结果:(1)各给药组与对照组相比,癌细胞生长缓慢;(2)PAMD高、低剂量组及5-FU组细胞的增殖抑制率分别为72.35%、44.62%、56.07%;(3)与对照组相比,Shh、Ptch1 mRNA的表达均下降,差异显著(P0.01),具有统计学意义。结论:PAMD对人胰腺癌BxPC-3细胞有增殖抑制作用,对Hedgehog信号通路关键位点的表达有一定的抑制作用。由此推断,PAMD对胰腺癌的抗癌作用机制可能与Hedgehog信号通路有关。     

丁酸钠对胰腺癌BxPC-3细胞凋亡机制的影响

目的:探讨丁酸钠对胰腺癌BxPC-3细胞凋亡的影响及其作用机制。方法:采用MTT法观察不同浓度丁酸钠对BxPC-3细胞增殖的抑制作用;应用流式细胞仪检测丁酸钠作用于BxPC-3细胞后的凋亡情况;TRAP-ELISA法检测细胞端粒酶活性的变化;RT-PCR技术分析人端粒酶逆转录酶(hTERT)、bcl-2 mRNA的表达水平。结果:丁酸钠作用BxPC-3细胞能明显抑制细胞增殖,其作用具有时间和剂量依赖性。丁酸钠处理72 h的BxPC-3细胞凋亡率明显提高(P<0.01),S期细胞比例显著下降(P<0.05),G0/G1期细胞比例显著升高(P<0.05)。经丁酸钠处理的实验组端粒酶活性为0.96±0.12,未经丁酸钠处理的对照组端粒酶活性为4.18±0.34,二者之间差异有显著性(P<0.05)。丁酸钠处理的实验组hTERT mRNA水平为0.168±0.045,与对照组0.685±0.141比较差异有统计学意义(P<0.01),bcl-2实验组水平为0.138±0.034,与对照组0.715±0.026比较有统计学差异。结论:丁酸钠具有强烈诱导胰腺癌BxPC-3细胞凋亡的作用,其发生机制与丁酸钠下调hTERT Bcl-2 mRNA表达水平直接相关。     

蝙蝠葛酚性碱对BxPC-3裸鼠的抑瘤作用及对bFGF表达的影响

目的 研究蝙蝠葛酚性碱（PAMD）对BxPC-3裸鼠的抑瘤作用及对肿瘤新生血管bFGF表达的影响,进一步探讨其作用机制。方法建立BxPC-3裸鼠的动物模型,检测蝙蝠葛酚性碱对转移瘤的抑制率,同时应用SP免疫组织化学方法检测各组BxPC-3裸鼠肿瘤组织bFGF的表达水平。结果蝙蝠葛酚性碱对BxPC-3裸鼠瘤组织具有抑制作用,高、中、低剂量组抑瘤率分别为34．91％、52．83％、41．51％,与模型对照组比较具有统计学意义（P〈0．01）;各剂量均能明显降低BXPC-3裸鼠瘤组织bFGF的表达水平。结论蝙蝠葛酚性碱对BxPC-3裸鼠肿瘤具有明显的抑制作用,其机制可能是通过改善裸鼠免疫功能,抑制肿瘤新生血管形成来实现的。     

蝙蝠葛酚性碱对脑缺血大鼠细胞凋亡相关蛋白PKB表达的影响

目的:探讨蝙蝠葛酚性碱(phenolic alkaloids fromMenispermum dauricum,PAMD)预处理对脑缺血后大脑皮质细胞凋亡蛋白激酶B(protein kinase B,PKB)表达的影响。方法:采用线栓阻塞大脑中动脉方法制备大鼠脑缺血模型,并用受试药物术前连续预处理模型大鼠7 d。采用免疫组织化学方法测定假手术组,模型组,PAMD高、中、低剂量组,尼莫地平、银杏叶片预处理组大鼠缺血后24,48,72 h大脑皮质中细胞凋亡相关蛋白PKB表达变化。结果:行大脑中动脉闭塞后大鼠大脑皮质PKB均被诱导表达,PAMD预处理7 d后,缺血后各时间点大鼠大脑皮质PKB表达明显升高。结论:PAMD能明显促进缺血脑损伤后抑制细胞凋亡相关蛋白PKB表达水平,从而在缺血性脑损伤中起到神经保护作用。     

双自杀基因CD+TK对胰腺癌BxPC-3细胞的影响

目的探讨逆转录病毒介导的双自杀基因对胰腺癌BxPC-3细胞的杀伤作用及胰腺癌的基因治疗方法。方法通过脂质体将含有双自杀基因的逆转录病毒载体MMLV—CD＋TK导入包装细胞PA317，经G418筛选后大量培养产病毒的阳性克隆PA317／CD＋TK细胞株，收集病毒上清液，浓缩后转染胰腺癌BxPG3细胞系，再次经G418筛选，获得稳定表达双自杀基因的BxPC-3／CD＋TK细胞株。用RT—PCR检测双自杀基因的表达。给予前体药物5-氟胞嘧啶（5-flourocytosine，5-FC）和（或）无环鸟苷（Ganciciovir，GCV）后，MTT法测定转基因组及未转基因组胰腺癌BxPC-3系细胞的存活率。结果双自杀基因在胰腺癌BxPC-3系细胞中可稳定表达，联合使用5-FC和GCV对细胞增殖的杀伤作用及旁杀伤效应效果明显。结论逆转录病毒介导自杀基因可有效杀死胰腺癌Bx-PC-3系细胞，双自杀基因具有更强的抗肿瘤作用。     

p73β基因对胰腺癌BxPC-3细胞的抑制作用

目的将p73β基因转染胰腺癌BxPC-3细胞,观察其对胰腺癌细胞生物活性的影响。方法将pcDNA3.1-N0和pcDNA3.1-p73β基因转染胰腺癌BxPC-3细胞,用MTT法进行细胞凋亡检测。结果该扩增片段经限制性核酸内切酶酶切鉴定,p73β基因相对表达量明显高于BxPC-3细胞和空载质粒转染细胞BxPC-3-pcDNA3.1-N0两对照组（P〈0.05）。与两对照组相比,重组质粒转染细胞pcDNA3.1-p73β实验组细胞增殖明显减弱（P〈0.05）。结论包含人类p73基因TAp73β转录本蛋白编码区的cDNA片段被成功扩增,其末端带有限制性核酸内切酶XbaⅠ、KpnⅠ识别序列,且对胰腺癌细胞有抑制作用。     

蝙蝠葛碱对人膀胱癌T-24细胞株生长增殖的抑制作用

目的 探讨中药北豆根提取物蝙蝠葛碱(dauricine,Dau)对人膀胱癌T-24细胞株的增殖抑制作用及其作用机制.方法 应用MTT法测定了蝙蝠葛碱对泌尿系肿瘤细胞增殖反应的影响;采用流式细胞技术、荧光染色法、琼脂糖凝胶电泳等技术测定和观察了蝙蝠葛碱对诱导肿瘤细胞凋亡的影响.结果 蝙蝠葛碱对膀胱癌T-24细胞株的增殖有较强的抑制作用,具有浓度依赖性特点.T-24细胞DNA琼脂糖凝胶电泳呈现凋亡特征性梯形条带.流式细胞分析,浓度为5～30μg/ml的蝙蝠葛碱具有诱导人膀胱癌细胞凋亡的作用,且随着药物作用时间延长凋亡率逐渐增加,随药物浓度的增高细胞周期被阻滞在G0/G1期.T-24细胞的bcl-2基因表达受抑,而bax基因的表达上调.结论 蝙蝠葛碱可有效抑制人膀胱癌T-24细胞株的生长增殖,阻滞细胞周期及诱导细胞凋亡可能起重要作用.     

电穿孔结合苦参素注射液对胰腺癌裸鼠BxPC-3细胞凋亡的影响

目的观察电穿孔结合苦参素对胰腺癌裸鼠BxPC-3细胞凋亡的影响。方法2008年3月至2008年9月．用胰腺癌BxPC-3细胞系建立胰腺癌裸鼠移植瘤模型,随机分为电穿孔结合苦参素组（B＋E＋）、苦参素组（B＋E-）、电穿孔组（B—E＋）和阴性对照组（B—E-）,采用原位末端标记法分别观察各组胰腺癌裸鼠的细胞凋亡率。结果在电穿孔和苦参素的共同作用下,胰腺癌裸鼠的细胞呈凋亡改变,且电穿孔结合苦参素组的细胞凋亡率明显高于其他3组。结论电穿孔结合苦参素可以有效抑制胰腺癌细胞的增殖,提高胰腺癌细胞的凋亡率。     

蝙蝠葛酚性碱对BXPC-3裸鼠抑瘤作用及对VEGF表达的影响

目的研究蝙蝠葛酚性碱（PAMD）对BXPC-3裸鼠抑瘤作用及对肿瘤新生血管内皮因子（VEGF）表达的影响,并进一步探讨其作用机制。方法建立BXPC-3裸鼠的动物模型,检测蝙蝠葛酚性碱对转移瘤的抑瘤率,采用免疫组织化学方法检测各组BXPC3小鼠肿瘤组织VEGF的表达水平。结果蝙蝠葛酚性碱对BXPC-3胰腺癌裸鼠瘤组织具有一定的抑制作用,与模型对照组比较具有统计学意义（P〈0．01）。PAMD各剂量均能明显降低BXPC-3胰腺癌裸鼠瘤组织VEGF的表达水平。结论蝙蝠葛酚性碱对BXPC-3裸鼠胰腺癌具有明显的抑制作用。其机制可能是通过改善裸鼠免疫功能,抑制肿瘤新生血管形成来实现的。     

蝙蝠葛酚性碱与胰腺癌研究

主要分析中药成分蝙蝠葛酚性碱对胰腺癌的作用研究,分别从中药成分蝙蝠葛酚性碱的来源、药理作用及其对胰腺癌的抗肿瘤分子机制进行总结,为寻求中医药防治恶性肿瘤的新途径和研制新药提供实验和理论依据。     

PAMD对人胰腺癌Hh信号通路中Smo、Gli-1mRNA和蛋白表达的影响

目的:探讨蝙蝠葛酚性碱(PAMD)对人胰腺癌BxPC-3细胞的增殖抑制作用,以及通过观察PAMD对胰腺癌BxPC-3细胞Hedgehog信号传导通路中Smo、Gli-1mRNA和蛋白表达的影响,进一步讨论PAMD对胰腺癌Hh信号通路的作用机制及其作用靶点。方法:对人胰腺癌BxPC-3细胞进行体外培养,以终浓度为80、40μg/mL的PAMD培养液以及5-FU终浓度为50μg/mL进行干预,进行以下实验:(1)利用台盼蓝染色测定各组中BxPC-3细胞不同时间点的活细胞数;(2)运用MTT法检测各给药组对BxPC-3细胞增殖抑制情况;(3)利用RT-PCR、Western Blot技术检测各组BxPC-3细胞中Smo、Gli-1mRNA及蛋白的表达。结果:(1)与对照组相比,BxPC-3细胞生长缓慢;(2)PAMD高、低及5-FU组细胞的增殖抑制率分别为71.15%、43.44%、55.38%;(3)PAMD高、低剂量组及5-FU组BxPC-3细胞中的Smo、Gli-1mRNA及蛋白表达降低,差异具有统计学意义(P0.01)。结论:PAMD对人胰腺癌BxPC-3细胞有增殖抑制作用,对Hedgehog信号通路中相关蛋白的表达有抑制作用。因此我们推断,PAMD对胰腺癌的增殖抑制作用机制可能与Hedgehog信号通路有关。     

蝙蝠葛酚性碱对脑缺血大鼠海马CA3区诱发电位的影响

目的 探讨蝙蝠葛酚性碱(PAMd)对脑缺血大鼠海马CA3区神经元突触传递功能的影响。方法 在体记录正常大鼠海马CA3区诱发的群峰电位(PS)；结扎大鼠双侧颈总动脉，造成急性不完全性脑缺血，观察PS幅度的变化；缺血前给予PAMd(5、10、20mg／kg)，观察其对缺血后PS幅度的影响；并观察不同剂量谷氨酸(Glu)对诱发电位的影响。结果 ①急性不完全性脑缺血后，PS的幅度显著降低。②5、10、20mmol／l，Glu注入后，PS的幅度均升高；当给予50mmol／L，Glu时PS幅度则显著降低。③20mg／kg PAMd能部分改善脑缺血引起的PS幅度降低，并能减弱50mmol／L Glu降低PS幅度的作用。结论 预先给予20mg／kg PAMd对高浓度Glu和急性脑缺血所致CA3区突触传递功能减弱有明显的改善作用。     

紫杉醇诱导人胰腺癌细胞Bxpc-3细胞凋亡的实验研究

目的 观察紫杉醇(PA)对体外培养的Bxpc-3细胞凋亡的影响. 方法 体外培养Bxpc-3人胰腺癌细胞,采用MTT法检测不同浓度PA对Bxpc-3细胞的抑制情况,采用流式细胞术检测Bxpc-3细胞的周期及凋亡率.加入正常的培养液作为对照. 结果 与对照相比,不同浓度PA(100,50,25mg/ml)作用24 h可使Bxpc-3细胞生长明显抑制,抑制率呈浓度依赖关系;Bxpc-3细胞在PA 100,50 mg/ml作用下,G0/G1期细胞比例增加,S期细胞比例和增殖指数(PI)下降;PA 100,50 mg/ml作用48 h后凋亡指数(AI)增高,AI/PI比例分别是对照组的6倍和2.5倍. 结论 PA对Bxpc-3细胞生长有抑制作用,可诱导人胰腺癌细胞Bxpc-3细胞凋亡.     

蝙蝠葛酚性碱对K562、BXPC-3增殖的影响

目的观察蝙蝠葛酚性碱（PAMD）在体外的广谱抗肿瘤作用。方法采用MTT比色法测定不同质量浓度的蝙蝠葛酚性碱对体外处理白血病细胞株（K562）、人胰腺癌细胞株（BXPC-3）24h的存活率,同时测定药物处理不同细胞株的细胞增殖抑制率和IC50及IC90。实验设立阴性空白对照组和氟尿嘧啶阳性对照组。结果不同质量浓度蝙蝠葛酚性碱对K562、BXPC-3细胞株的细胞增殖具有抑制作用,抑制作用均与质量浓度呈梯度关系。结论蝙蝠葛酚性碱对体外培养人肿瘤细胞株的增殖有明显的抑制和杀伤作用,揭示其具有细胞毒效应,蝙蝠葛酚性碱产生抗肿瘤生物学效应的机理有待进一步研究。     

丁酸钠对Hep-2细胞生长、凋亡及细胞周期的影响

目的:观察丁酸钠(SB)对人喉癌Hep-2细胞的生长抑制作用,探讨其对细胞凋亡及细胞周期的影响.方法:以MTT法检测0.625～10.000 mmol/L SB对Hep-2细胞生长的抑制作用;以TUNEL法检测1.250～5.000 mmol/L SB作用24 h、48 h、72 h后的细胞凋亡情况;以琼脂糖凝胶电泳法检测2.500 mmol/L SB作用24 h、48 h、72 h后的细胞DNA片段;应用流式细胞仪分析1.250 mmol/L、2.500 mmol/L、5.000 mmol/L SB作用24 h后细胞凋亡率和细胞周期变化;采用免疫组织化学SP法检测2.500 mmol/L SB作用24 h、48 h、72 h后细胞抗凋亡蛋白Survivin表达的变化.结果:SB对Hep-2细胞的生长抑制作用具有时间和剂量关系(不同时间组、不同剂量组间比较,P均＜0.01);细胞凋亡指数随SB剂量升高、作用时间延长而增加(P均＜0.01);琼脂糖凝胶电泳可见特征性的凋亡细胞DNA梯状条带;流式细胞术显示细胞凋亡率随SB剂量升高而增加(P＜0.01),细胞周期阻滞于G0/G1期;2.500 mmol/L SB作用72 h,Survivin表达阳性细胞的光密度值由作用前的0.164±0.009下降至0.045±0.006(P＜0.01).结论:SB能有效抑制 Hep-2细胞的生长,其机制可能与抑制细胞Survivin蛋白表达进而诱导细胞凋亡以及参与细胞周期调控有关.     

蝙蝠葛酚性碱对人肿瘤细胞PC-3、BT5637增殖的影响

目的 观察蝙蝠葛酚性碱(PAMD)体外抗肿瘤作用.方法 采用MTT比色法测定不同浓度的蝙蝠葛酚性碱对体外处理PC-3(前列腺癌)和BT5637(膀胱癌)细胞株24h的存活率.同时测定药物处理不同细胞株的细胞增殖抑制率和IC50及IC90.实验设立阴性空白对照组和氟尿嘧啶阳性对照组.结果 不同浓度蝙蝠葛酚性碱对PC-3和BT5637细胞株的细胞增殖具有抑制作用,抑制作用呈浓度依赖关系,与空白对照组比较具有统计学意义.结论 蝙蝠葛酚性碱对体外培养人肿瘤细胞株的增殖有明显的抑制和杀伤作用,显示其具有细胞毒效应.     

细胞分裂周期相关因子3对乳腺癌细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响

目的 探讨细胞分裂周期相关因子3(CDCA3)对乳腺癌细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡的影响。方法 (1)选取4种人乳腺癌细胞MDA-MB-361、CAMA-1、MCF-7、SKBR-3,采用Western blot及实时荧光定量PCR分别检测各细胞中CDCA3蛋白及mRNA的表达水平,选取CDCA3表达水平较高的人乳腺癌细胞进行后续实验。(2)将筛选出的人乳腺癌细胞分为空白组、si-NC组、si-CDCA3组,空白组不给予干预,si-NC组、si-CDCA3组分别给予si-NC、si-CDCA3转染。转染3 d后,检测各组细胞增殖抑制率、细胞周期及细胞凋亡率。结果 (1)MCF-7细胞和MDA-MB-361细胞的CDCA3蛋白及mRNA表达水平均高于CAMA-1细胞和SKBR-3细胞(均P<0.05),故选取前两种细胞进行后续实验。(2)无论是MCF-7细胞还是MDA-MB-361细胞,空白组、si-NC组、si-CDCA3组细胞的增殖抑制率、G₀/G₁期比例、凋亡率均依次升高(均P<0.05)。结论 CDCA3在人乳腺癌细胞MCF...     

薏苡仁油对人原位胰腺癌BxPC-3细胞生长及VEGF和bFGF表达的影响

目的 研究薏苡仁油（康莱特注射液）体外对人原位胰腺癌BxPC-3细胞生长和血管生长因子的影响,探讨薏苡仁油抗肿瘤作用机制。方法 薏苡仁油作用BxPC-3细胞后,经瑞氏染色观察细胞形态,Hoechst 33258荧光染色、DNA梯度电泳观察细胞凋亡;流式细胞仪检测细胞周期的变化;ELISA法检测血管内皮生长因子（VEGF）、成纤维细胞生长因子（bFGF）的变化。结果 薏苡仁油（2 mg/mL,20 μL/mL）作用于BxPC-3细胞后,瑞氏染色可见细胞出现典型的凋亡小体,Hoechst 33258荧光染色可见BxPC-3细胞出现特征性凋亡变化,琼脂糖电泳观察到明显的细胞凋亡特征性DNA梯形条带;细胞周期阻滞在G₀/G₁期;细胞上清液中VEGF、bFGF的表达水平明显下调。结论 薏苡仁油能影响BxPC-3细胞生长周期,导致细胞周期阻滞,下调VEGF和bFGF的表达水平,可能对抑制胰腺癌细胞的扩散产生一定作用。     

蝙蝠葛酚性碱对大鼠致畸胎及行为致畸试验研究

本文报道了蝙蝠葛酚性碱对大鼠致畸胎及行为致畸试验研究,结果表明,蝙蝠葛酚性碱灌胃的各剂量组母鼠在体重增长、脏器系数及血清锌和铜含量上与对照组均无差异,未发现外观畸形和内脏畸形,但可使胎鼠胸骨缺失率增高,蝶、枕骨骨化迟缓率显著高于对照组,且有一定的剂量一效应关系,表明蝙蝠葛酚性碱有一定的胚胎毒性。观察蝙蝠酚性碱对大鼠后代发育和行为的影响,发现80mg/kg的剂量使仔鼠早期体重增长迟缓,负趋地反射迟缓,旷场试验中排便与修饰次数增多,提示蝙蝠葛酚性碱对仔鼠早期生长及断乳后仔鼠情感有一定的影响。