蚤休总皂甙与半边莲生物碱对内皮素及内皮型一氧化氮合酶合成影响的对比研究

前期工作显示,清热解毒类中药半边莲和蚤休对动脉内皮具有一定保护作用,进一步研究发现半边莲上述保护作用的有效成分主要是其生物碱组分,而蚤休的有效成分为其总蚤甙.按照祖国医学的观点,半边莲与蚤休同属抗蛇毒中药,其药用机制基本相同;按照现代医学观点,动脉粥样硬化的早期病变为动脉内皮损伤,其中,动脉内皮细胞的内皮素(endothelin,ET)与内皮型一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)表达失衡是重要参与因素.     

大鼠深Ⅱ度烫伤创面渗出液中ET-1含量的变化

内皮素(ET)由血管内皮细胞和血管平滑肌细胞产生,有强烈收缩血管和促进细胞分裂、增殖的作用.热烫伤可直接损伤血管内皮细胞,使发生变形和脱落,同时也刺激其大量合成和释放ET,致使血浆ET水平大幅升高.为探讨ET在深Ⅱ度烫伤创面愈合中的作用,本实验采用放射免疫分析法,观察烫伤创面渗出液中ET含量变化.     

氯沙坦对血管损伤后再狭窄大鼠血浆内皮素含量及动脉平滑肌细胞中血小板源生长因子表达的影响

目的观察氯沙坦对颈总动脉损伤后再狭窄大鼠血浆内皮素(ET)和颈总动脉平滑肌细胞(SMC)中血小板衍生生长因子(PDGF)表达的影响。方法采用大鼠颈总动脉挤压术制备再狭窄模型,设假手术组、手术组和氯沙坦组,每组10只。观察颈总动脉形态学变化,放射免疫法测定血浆ET含量,免疫组织化学法观察颈总动脉PDGF-B的表达。结果假手术组颈总动脉各层结构正常、清晰,无明显血管平滑肌细胞增殖;手术组大鼠颈总动脉SMC大量增殖,内膜显著增厚;氯沙坦组SMC增殖程度降低。与假手术组比较,手术组大鼠血浆ET含量显著升高(P<0.01),颈总动脉SMC中PDGF-B表达显著增强(P<0.01);与手术组比较,氯沙坦组大鼠血浆ET含量与PDGF-B表达显著下降(P<0.05)。结论ET、PDGF参与血管再狭窄的形成,氯沙坦可通过降低ET含量与PDGF-B表达实现抗再狭窄的作用。     

蚤休总皂甙与半边莲生物碱对内皮素及内皮型一氧化氮合酶表达的对比研究

目的:探讨蚤休总皂甙与半边莲生物碱对内皮素和内皮型一氧化氮合酶表达的影响,并比较两种制剂的药效差别。方法:提取蚤休总皂甙与半边莲生物碱,观察两种制剂对高脂血症大鼠主动脉内皮细胞内皮素(ET)合成、血浆ET浓度和血浆内皮型一氧化氮合酶(ecNOS)浓度的影响。结果:高脂喂养大鼠动脉内皮细胞ET-1的合成与释放明显增高,而ecNOS明显降低;应用蚤休总皂甙60d后,动脉内皮细胞ET的合成与释放显著低于高脂对照组(P<0.05),但血浆ecNOS含量无明显变化;应用半边莲生物碱60d后,动脉内皮细胞ET的合成、释放减少(P<0.05)的同时,血浆ecNOS含量较高脂对照组显著升高。结论:蚤休总皂甙与半边莲生物碱均能抑制ET的合成和释放,半边莲生物碱同时还能够促进ecNOS合成和释放,其药效优于蚤休总皂甙。     

内皮素、一氧化氮与甲状腺功能亢进症研究现状

血管内皮细胞分泌的主要缩血管因子-内皮素(Endothelin,ET)与内皮衍生舒血管因子一氧化氮(Nitricoxide,NO)是近年来发现的器官局部血流调节因子.血管内皮细胞通过释放ET收缩血管和促进内皮细胞增值,同时释放N0松弛血管平滑肌和抑制内皮细胞的增殖.     

内皮素诱导人肺动脉平滑肌细胞增殖及c-fos、c-myc癌基因表达的研究

<正>肺小血管构型重建和肺动脉收缩反应增强是肺动脉高压的血管变化特点,其主要表现形式是平滑肌细胞过度增殖及其表型的改变。内皮素(Endothelin,ET)是由血管内皮细胞合成释放的强效缩血管肽和血管平滑肌细胞有丝分裂原。内皮素是否可以促进人肺动脉平滑肌细胞增殖及促增殖效应的信号传递途径目前还未见报道。我们以人肺动脉平滑肌细胞为研究对象,观察不同浓度的内皮素-1(ET-1)对细胞增殖和c-fos、c-myc癌基因表达的影响,从分子生物学水平探讨先天性心脏病肺动脉高压的发病机制并为其防治提供理论依据。     

凉血活血中药含药血清对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的以血清药理学方法观察凉血活血中药对人脐静脉内皮细胞(ECV304)增殖的影响,从体外实验角度研究,为临床对新生血管类眼病的治疗寻找相应的干预靶点.方法设立空白血清组对照应用MTT法检测不同浓度的凉血活血含药血清对血管内皮细胞ECV304细胞毒性考察及增殖影响,并检测VEGF含量的变化.结果 20%浓度凉血活血含药血清组既可抑制细胞增殖又对细胞无毒性作用.结论凉血活血中药抑制血管新生可能与其通过抑制ECV304细胞增殖及降低VEGF的表达有关.     

大鼠体内ET和NO水平与衰老的关系

循环中内皮素(ET)和一氧化氮(NO)主要来源于血管内皮细胞,ET是迄今发现最强的缩血管物质,在高血压发病中占有重要的位置,NO具有舒张血管、降低血压、抑制血管平滑肌细胞增殖等作用.正常情况下ET和NO之间相互制约,维持血压的稳定.ET和NO在血浆和组织中随着年龄的变化已有报道,但结果不尽一致.本研究通过测定老龄大鼠体内ET和NO,以寻找其与衰老的变化关系.     

烟雾染毒下血管平滑肌细胞和内皮细胞中p-c-jun与细胞周期蛋白D1的表达

目的探讨香烟烟雾对血管壁组织中的两种主要细胞:血管平滑肌细胞和血管内皮细胞增殖活力的影响。方法应用磷酸盐缓冲液(PBS)作为溶剂萃取香烟烟雾,制备烟雾萃取剂。用此烟雾萃取剂依据不同浓度对以上两种细胞进行染毒处理,CCK-8试剂盒测定细胞增殖活力,Western blot检测转录因子c-jun、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)的变化,转染过表达c-jun质粒检测cyclinD1的变化。结果 CCK-8检测显示在烟雾染毒浓度(0.625%～10%)范围内,平滑肌细胞增殖活力增加,内皮细胞在染毒处理后随浓度增加其活力降低。染毒处理48 h后,平滑肌细胞和内皮细胞的染毒处理组的c-jun表达与PBS对照组相比差异均无统计学意义,平滑肌细胞染毒组的p-c-jun比PBS对照组明显增加(P<0.05),内皮细胞染毒组的p-c-jun降低(P<0.05)。细胞周期蛋白cyclinD1在平滑肌细胞染毒处理后明显增加(P<0.05),内皮细胞染毒后则显著降低(P<0.05),并且过表达c-jun后cyclinD1的表达水平也相应增高。结论烟雾染毒具有增加血管平滑肌细胞增殖活力和降低内皮细胞活力的作用,其与c-jun磷酸化和cyclinD1表达有关。     

三七花总皂苷对人主动脉血管平滑肌细胞增殖及细胞内钙离子浓度的影响

目的:观察三七花总皂苷(PNFS)对血管平滑肌细胞增殖及细胞内钙离子浓度的影响.方法:采用去甲肾上腺素诱导的人主动脉血管平滑肌细胞增殖和钙超载模型,应用CCK-8法观察血管平滑肌细胞增殖活力;钙荧光指示剂Fluo-3/AM检测细胞内钙浓度变化.观察不同剂量PNFS对两者的影响.结果:PNFS能够改善去甲肾上腺素诱导的人主动脉血管平滑肌细胞增殖,降低细胞内钙离子浓度,并呈一定的量效关系.结论:PNFS对去甲肾上腺素诱导的人主动脉血管平滑肌细胞增殖有抑制作用,这一作用可能与降低细胞内钙离子浓度有关.     

丹参酮ⅡA对高糖培养的大鼠血管平滑肌细胞p38MAPK信号通路的影响

目的:观察丹参酮ⅡA对高糖诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响,分析该作用与氧化应激以及丝裂原活化蛋白激酶p38(p38 mitogen-activated protein kinases,p38 MAPK)信号通路的关系。方法:取第3代原代培养的大鼠血管平滑肌细胞建立高糖诱导细胞增殖模型,实验分为正常对照组、高糖组和丹参酮ⅡA组,BrdU掺入法测定血管平滑肌细胞的DNA合成水平;黄嘌呤氧化酶法、硫代巴比妥酸法分别测定细胞培养上清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量;免疫印迹法(Westernblot)检测磷酸化p38MAPK蛋白表达。结果:高糖诱导的血管平滑肌细胞呈快速增殖状态,在10~25 mmol.L-1间增殖效应呈剂量依赖性;丹参酮ⅡA能抑制高糖诱导的血管平滑肌细胞增殖,提高高糖培养的细胞中SOD水平,降低MDA含量,减少p-p38MAPK蛋白的表达。结论:丹参酮ⅡA抑制高糖诱导的血管平滑肌细胞增殖,这可能与其能减少血管平滑肌细胞中的氧自由基,抑制p38MAPK信号通路有关。     

通脉益智胶囊对动脉粥样硬化兔大脑中动脉的影响

目的观察通脉益智胶囊对动脉粥样硬化兔大脑中动脉的影响和作用.方法21只健康雄性日本大白兔按体重随机分为3组.实验全程12周,光镜下观察兔大脑中动脉的病理学改变;扫描电镜下观察大脑中动脉内皮细胞的病理学变化.结果.与胆固醇造模组比较,通脉益智胶囊具有明显的保护大脑中动脉内皮细胞和抑制血管平滑肌细胞增殖的作用.结论.通脉益智胶囊具有良好的保护大脑中动脉的作用,这可能与其保护血管内皮细胞和抑制血管平滑肌细胞增殖有关.     

肺炎患儿血浆内皮素和血管紧张素Ⅱ的变化及相互关系

近年研究证明血管内皮细胞可以产生多种活性肽参与体内代谢活动而被认为是一种“内分泌器官”,其中发现血管内皮素(ET)具有强烈的缩血管作用;血管局部肾素—血管紧张素系统产生的血管紧张素Ⅱ(AⅡ),也同时参与体内代谢,它们通过不同的方式影响内皮细胞的功能。AⅡ和ET具有生物学协同作用,促进血管平滑肌细胞收缩和细胞增殖,而出现一系列病理生理的变化。我科于1992年8月～1993年7月对20例住院的肺炎患儿进行放射免疫分析方法测定血浆ET、AⅡ的含量变化、观察其变化与肺炎的关系,现报告如下。     

TRPC6介导血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞的增殖

目的 探讨瞬时受体电位阳离子通道6(TRPC6)在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导大鼠的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中的作用.方法 应用组织贴块法培养大鼠主动脉VSMC,用AngⅡ刺激VSMC建立细胞增殖模型,应用Western blot技术检测平滑肌细胞的TRPC6表达水平,采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)检测不同浓度的SKF96365(TRPC通道阻断剂)和不同浓度的flufenamic acid(TRPC6激动剂)对VSMC增殖的影响.结果 Western blot显示在VSMC中TRPC6通道蛋白表达水平很高.用SKF96365(10、50、100 μmol/L)阻断TRPC6通道后.经过72h的作用抑制AngⅡ诱导的VSMC的增殖,且呈剂量依赖性.用flufenamic acid(10、20、40 μmol/L)激动TRPC6通道,经过24 h的作用促进了VSMC的增殖.结论 在AngⅡ诱导大鼠的血管平滑肌细胞增殖中,TRPC6通道起着很重要的作用.     

体内不同环境对组织工程血管形成的影响

目的 探讨体内不同环境对组织工程血管形成的影响.方法 清洁级犬10只;切取一侧10 cm隐动脉.消化、离心收集内皮细胞和平滑肌细胞,与Ⅰ型胶原蛋白凝胶均匀混合,种植于猪小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)组织膜表面,在直径3 mm聚乙烯管壁外包绕3层,制成管状组织工程支架20支.将支架分别植于犬皮下和套于股动脉管壁外,即皮下组、动脉周围组(n=10).术后4周,取出培养组织行大体和组织学观察,并行组织工程血管形成评分及抗静水压检测.结果 皮下组管腔结构不完整,内皮及平滑肌种子细胞增殖弱.SIS支架材料分解慢,腔面无内皮细胞覆盖;动脉周围组可见完整血管样结构形成,种子细胞生长增殖良好,管腔有完整内皮细胞覆盖,平滑肌细胞形态、分布良好.皮下组、动脉周围组组织工程血管形成总评分分别为(5.529±0.272)和(14.824±0.253)分,组间差异均有统计学意义(P＜0.05);抗静水压二组分别为(67.0±5.8)kPa和(247.0±3.5)kPa,动脉周围组与皮下组比较,差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 体内不同环境对细胞增殖和组织工程血管形成有明显影响.     

Captopril对家兔动脉损伤后内膜增生的影响

在家兔颈总动脉球囊损伤模型上,观察卡托普利（Captopril）对术后2周血浆内皮素（ET1）、血管内膜增殖细胞核抗原（PCNA）阳性表达率、血管内膜厚度的影响。结果表明：Captopril能显著降低球囊损伤后家兔血浆ET1水平及血管内膜PCNA阳性表达率（P＜0.01);与剥脱对照组相比,Captopril组血管内膜厚度及管腔狭窄明显降低（P＜0.01)。提示：Captopril能抑制血管损伤后内膜的增生,可能是通过降低ET1水平及抑制平滑肌细胞增殖实现的,为Captopril应用于动脉粥样硬化及经皮冠装动脉成形术后再狭窄的治疗提供一定的依据。     

高浓度氧抑制兔动脉平滑肌细胞的增殖

目的　探讨缺氧和高氧环境对兔主动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用 ,间接判断缺氧与冠脉再狭窄的关系和研究氧疗是否能用于 PTCA支架后冠脉再狭窄的防治 .方法　用含 10 0 m L· L- 1小牛血清的 RPMI16 40培养液体外培养新西兰白兔的主动脉平滑肌细胞至 3～ 7代 ,将含 5 0 m L· L- 1小牛血清的 RPMI16 40培养液与动脉平滑肌细胞的混悬液10 0 μL 加入 96孔培养板中培养 ,按照实验分组分别在 10 0 ,2 10 ,2 5 0 ,5 0 0和 75 0 m L· L- 1 O2 及纯氧环境中培养主动脉平滑肌细胞 48h.用 MTT法和 3H- Td R掺入法检测动脉平滑肌细胞增殖的数量 .结果　以 2 10 m L· L- 1 O2 环境下动脉平滑肌细胞增殖的数量为基准对照组 ,其他各组为实验组 .5 0 0 m L· L- 1 O2 至纯氧环境下动脉平滑肌细胞的增殖显著低于对照组 (P<0 .0 5 ) ,2 5 0 m L· L- 1 O2 与 2 10 m L·L- 1 O2环境下主动脉平滑肌细胞的增殖无显著差异 (P>0 .0 5 ) ,10 0m L· L- 1 O2 环境下动脉平滑肌细胞的增殖显著高于对照组(P<0 .0 5 ) .结论　动脉平滑肌细胞的增殖随着培养环境中氧浓度升高而降低 ,缺氧促进动脉平滑肌细胞的增殖 ,高氧对动脉平滑肌细胞增殖具有显著的抑制作用 ;氧疗可能有助于降低冠脉再狭窄率 ,并为高压氧治疗其他以动脉血管     

血管紧张素Ⅱ-NADPH氧化酶-活性氧信号传导通路对人肠系膜动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的观察血管紧张素Ⅱ—NADPH氧化酶-活性氧物质信号传导通路对人肠系膜动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法用培养的二至四代人肠系膜动脉平滑肌细胞作为标本;以四甲基偶氮唑盐（MTT）法、流式细胞仪、逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）分别测定细胞增殖率、细胞内活性氧及p22phox蛋白mRNA的表达。结果①加入血管紧张素Ⅱ药物组的细胞增殖率、活性氧物质量、p22phox蛋白mRNA的表达均明显高于空白对照组,差异统计学意义（P〈0．05）。②细胞增殖与活性氧物质的生成量、p22phox蛋白mRNA的表达成明显正相关关系,相关系数分别为0．92、0．967。结论血管紧张素Ⅱ在浓度为10μmol／L时,促进人肠系膜动脉平滑肌增殖、细胞内活性氧物质的生成、细胞内的p22phox蛋白的表达,推测血管紧张素Ⅱ促人肠系膜动脉平滑肌增殖作用部分机制是通过血管紧张素Ⅱ-NADPH氧化酶-活性氧通路来实现。     

多巴胺D_4受体对血管紧张素Ⅱ介导的血管平滑肌细胞增殖的影响

目的观察多巴胺D4受体对血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)介导的血管平滑肌细胞(vascular smoothmuscle cells,VSMCs)增殖的影响。方法以大鼠胸主动脉平滑肌细胞株(A10细胞)、原代的Wistar-Kyoto(WKY VSMCs)和自发性高血压大鼠(SHR)胸主动脉血管平滑细胞(VSMCs)为研究对象,观察刺激D4受体对AngⅡ促增殖作用的影响以及D4受体特异性阻断剂L745870对该作用的阻断效应。细胞增殖采用MTT和细胞计数方法测定。结果 AngⅡ(10-7mol/L)可促进A10细胞增殖,最大增殖幅度为64%。D4受体激动剂PD168077本身对A10细胞无增殖影响,但D4受体特异激动剂PD168077可抑制AngⅡ(10-7mol/L)介导的血管平滑肌细胞的增殖作用,最大抑制幅度为40%;应用D4受体阻断剂L745870后该抑制作用丧失;D4受体对AngⅡ介导血管增殖的作用在SHR和WKY大鼠的VSMCs之间并无区别。结论 D4受体对AngⅡ介导的血管平滑肌细胞增殖具有抑制作用,该作用可能在一定程度上抑制了高血压病所伴发的血管平滑肌细胞增殖。     

中药对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用的研究*

[目的]研究中药抑制血管平滑肌细胞(VSMC)生长增殖的作用和机制.[方法]采用3H-TdR(氚胸腺苷)掺入和外源性c-jun cDNA在血管平滑肌细胞中表达的方法,观察血管平滑肌细胞(VSMC)生长增殖变化.[结果]与对照血清+内皮素组(cpm 2 534.54±54.2/105细胞)相比,中药血清+内皮素组(cpm 1 104.33±37.31/105细胞)血管平滑肌细胞3H-TdR掺入量有显著下降(P＜0.01),而且血管平滑肌细胞原癌基因的c-jun mRNA表达也较弱.[结论]本实验表明复方丹参对血管平滑肌细胞增殖及其原癌基因c-jun mRNA的表达有明显的抑制作用.