幽门螺旋杆菌候选疫苗抗原的研究进展

幽门螺旋杆菌(Helicobacter pylori,HP)是1983 年首次从慢性活动性胃炎患者的胃黏膜组织中分离成功,是目前所知能够在人胃中生存的唯一微生物种类,本文对HP 的尿素酶、空泡毒素、细胞毒素、黏附素、过氧化氢酶、膜炎性蛋白、十二指肠溃疡促进因子及脂多糖抗原进行阐述,以便学者对HP 抗原的研究近况进行了解,对未来筛选高效抗原并增加抗原的表达量、探索HP 表位疫苗中表位结合的新型方式等相关研究奠定基础。     

两株B群流脑菌LOS抗原性的研究

在对我国自７０年代以来从病人和带菌者中分离的９１株Ｂ群脑膜炎奈瑟氏菌（Ｎｍ）进行脂寡糖（ＬＯＳ）免疫型分型、外膜蛋白分型／亚型、多位点酶电泳分型等的基础上，挑选了两株具有代表性的菌株３４０７（Ｂ：１５：Ｐ１．２：Ｌ３，７，９：ＲＦＬＰｂ－２０：克隆群Ｉ）和５４２８５２（Ｂ：ＮＴ：Ｐ１．２：Ｌ３，７，９：ＲＦＬＰｂ－２０：克隆群Ｉ）。提取并纯化了它们的ＬＯＳ，通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析发现：两株菌的Ｌ     

B群脑膜炎奈瑟氏菌外膜蛋白抗原性分析

挑选了１０株具有代表性的菌株，提取了它们的外膜蛋白（ＯＭＰｓ），ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析发现：１０株菌的ＯＭＰｓ带谱不完全相同，但都含有１，２／３，４和５类外膜蛋白，而且纯化的１类外膜蛋白（ＯＭＰ１）显示一条分子量为（４１或４３）×１０＾３的蛋白带。从中选两株菌５４２８５２（Ｂ：ＮＴ：Ｐ１．２：Ｌ３，７，９：克隆Ｉ：ＲＦＬＰ－ｂ２０）和３４０７（Ｂ：１５：Ｐ１．２：Ｌ３，７，９，克隆群Ｉ：ＲＦＬＰ－ｂ     

脑膜炎球菌多糖蛋白结合疫苗研究进展

流行性脑膜炎是细菌性脑脊髓膜炎中唯一能造成流行的疾病,可引起相当高的病死率和致残率。流脑从病原体的发现至今已超过100年,呈世界范围分布,全世界每年流脑病例可达30万到35万,是世界范围的一个严重公共健康问题。流脑由脑膜炎     

肺炎球菌PsaA抗原及其在结合疫苗中的应用

目的 应用基因工程技术表达和制备肺炎链球菌表面黏附素A(pneumococcal surface adhesin A,PsaA),并与细菌荚膜多糖耦联制备成多糖蛋白结合疫苗,探讨PsaA作为肺炎球菌蛋白载体在增强结合疫苗中其他细菌多糖抗原的免疫原性的同时,还能获得对肺炎球菌的抗体反应,从而达到用一种结合疫苗能诱导出针对两种细菌的抗体免疫应答的目的 .方法 从肺炎链球菌基因组中扩增psaA基因,将目的 基因插入原核表达载体pET-28a,获得重组质粒pET28a-psaA,通过转化进入大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导,采用DEAE-阴离子交换层析法纯化基因重组rPsaA蛋白.将纯化到的rPsaA蛋白与A群脑膜炎荚膜多糖(group A meningococcal polysaccharide,GAMP)耦联成多糖蛋白结合疫苗后,用小鼠动物模型进行免疫实验,检测该疫苗的免疫原性,用ELISA法测定该疫苗在小鼠体内产生的针对肺炎球菌和脑膜炎球菌两种病原菌特异性抗原的抗体水平.结果 成功克隆基因重组表达质粒,而且表达的PsaA蛋白在载体上的组氨酸标签之前终止表达,不带有组氨酸标签,保证疫苗的安全性.SDS-PAGE技术分析表明:rPsaA蛋白高效表达,约为菌体蛋白的60%,蛋白质相对分子质量约为37×103,而且蛋白的可溶性好,不形成包涵体,用DEAE-阴离子交换层析法纯化其纯度可达80%以上.纯化到的PsaA蛋白与荚膜多糖耦联成功,应用于小鼠免疫实验,PsaA蛋白载体能显著增强A群脑膜炎荚膜多糖抗原的免疫原性,并同时产生针对肺炎球菌蛋白抗原和脑膜炎球菌多糖抗原的特异性抗体.结论 利用基因工程技术获得无组氨酸标签的PsaA蛋白,并将它与A群脑膜炎荚膜多糖耦联,可以在增强荚膜多糖抗原免疫原性的同时,提高疫苗的免疫保护效果,探讨了给儿童接种一种疫苗能同时预防肺炎和脑膜炎两种传染病的可能性.

Abstract：

Objective To express and purify the pneumococcal surface adhesin A(PsaA) protein,discuss its application as a protein carrier in conjugates vaccine. Methods The gene encoding for the PsaA protein was amplified from the genomic DNA of Streptococcus pneumoniae using PCR. The PCR product was then cloned into the prokaryotic expression vector pET-28a and the recombinant was transformed into host cell E. coli BL21 (DE3). The expression of the recombinant protein(rPsaA) was induced by IPTG and purifled by using DEAE anion-exchange chromatography. The rPsaA was successfully conjugated with group A meningococcal polysaccharide(GAMP). The mice were immunized subcutaneously with the conjugate and the immune responses against GAMP and PsaA were detected by ELISA. Results The recombinant PsaA was expressed as a 37 × 103 soluble protein without His-Tag. The rPsaA was successfully conjugated with GAMP. In addition to the immune response against PsaA, The antibody response against GAMP was significant improved in the mice immunized with conjugate vaccine in comparison with those immunized with GAMP alone. Conclusion The recombinant protein PsaA without His-Tag was obtained and conjugated with GAMP. The strong antibody responses against PsaA and CAMP were obtained in the immunized mice at the same time which may provide the protection against pneumonia and meningitis simultaneously.     

B 群脑膜炎球菌外膜蛋白0315 不同形式疫苗免疫效果比较

目的:初步探讨和评价NMB0315 核酸疫苗、重组蛋白疫苗及核酸疫苗+重组蛋白疫苗联合免疫诱导小鼠产生的特异性体液/ 细胞免疫应答水平及其免疫保护效果,为进一步探索NMB0315 疫苗有效的免疫方法和途径提供实验依据。方法:大量制备核酸疫苗[pcDNA3.1(+) / NMB0315]和重组蛋白疫苗(pET-30a/ NMB0315),采用核酸初免-蛋白加强的方法联合免疫或分别免疫雌性BALB/ c 小鼠,测定特异性体液/ 细胞免疫应答水平、免疫血清体外杀菌效价,观察疫苗对感染B 群脑膜炎球菌小鼠的免疫保护效果。结果:NMB0315 核酸疫苗组(pNMB0315-CpG)、蛋白疫苗组(rNMB0315-FA)及联合免疫疫苗组(pNMB0315-CpG+rNMB0315-FA)诱导的血清特异性IgG、IgG1、IgG2a 及生殖道灌洗液中特异性sIgA 水平在第八周达到峰值,A450 值分别为(0.505±0.042、0.513±0.022、0.342±0.017、0.250±0.015)、(0.823±0.061、0.807±0.045、0.596±0.027、0.450±0.028)和(0.694±0.053、0.711±0.032、0.455±0.021、0.386±0.024),明显高于PBS 对照组(P<0.01);其中,蛋白疫苗组的抗体水平明显高于联合免疫疫苗组和核酸疫苗组(P<0.05)。小鼠脾淋巴细胞刺激指数及IFN-γ酌水平,联合免疫疫苗组明显高于蛋白疫苗组和核酸疫苗组(P<0.05);核酸疫苗组、蛋白疫苗组和联合免疫疫苗组免疫血清在补体介导下的体外杀菌抗体效价分别为1 :64、1 :128 和1 ：128,对实验小鼠的免疫保护率分别为70%、95%和80%。免疫2、4、6、8 周时,核酸疫苗组、重组蛋白疫苗组和联合免疫疫苗组IgG2a/ IgG1 比值均小于1。结论:NMB0315 疫苗诱导的体液免疫(包括黏膜免疫)效果从高到低为:重组蛋白疫苗组、联合免疫疫苗组、核酸疫苗组;诱导细胞免疫的效果从高到低为:联合免疫疫苗组、核酸疫苗组、重组蛋白疫苗组; NMB0315 疫苗对实验小鼠的免疫保护效果从高到低为:重组蛋白疫苗组、联合免疫疫苗组、核酸疫苗组。     

脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NMB0315作为B群流脑疫苗候选抗原的免疫效果

目的研究原核重组表达的B群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白0315(rNMB0315)在诱导小鼠产生特异性免疫应答中的作用、免疫血清抗体体外杀菌活性和重组蛋白的免疫保护效果,初步评价rNMB0315作为B群流脑疫苗候选抗原的潜力。方法将构建的原核表达载体p ET30a-NMB0315转化大肠杆菌BL21表达重组蛋白,纯化鉴定后的重组蛋白免疫雌性BALB/c小鼠,检测体液免疫和细胞免疫水平;测定血清抗体在补体介导下的体外杀菌活性,观察rNMB0315蛋白疫苗对实验小鼠的免疫保护效果。结果 rNMB0315具有良好的免疫原性,能诱导产生较高水平的体液免疫应答:包括血清特异性IgG、IgG1、IgG2a、IgG3、IgG2b和生殖道黏膜特异性分泌型IgA(s IgA),免疫后第6周抗体效价分别为1∶150 000、1∶85 000、1∶60 000、1∶35 000、1∶30 000和1∶30 000;也能激发较高水平的细胞免疫应答,免疫小鼠脾淋巴细胞增殖反应的刺激指数(SI)值明显高于PBS、Freund佐剂对照组。在免疫的2、4、6周,血清IgG2a/IgG1比值均小于1,提示rNMB0315疫苗以诱导Th2细胞性体液免疫应答为主。rNMB0315疫苗免疫血清在补体介导下的体外杀菌抗体效价为1∶128;72 h内,对实验小鼠的免疫保护率为90%。结论原核表达的rNMB0315具有良好的免疫活性和免疫保护效果,NMB0315外膜蛋白具有作为预防B群流脑蛋白疫苗候选抗原的潜力。     

B群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白作为疫苗候选抗原的研究进展

目前获准上市的流脑疫苗主要有A群、A+C群以及A、C、W-135及Y群的四价混合疫苗,上述疫苗的有效免疫原成分均为脑膜炎球菌的荚膜多糖。而B群脑膜炎奈瑟菌的荚膜多糖因与人类N-乙酰神经氨酸聚合物结构相似,可能产生交叉反应,引起自身免疫病,不适合用作B群流脑的疫苗候选抗原。因此,研究者把焦点转向B群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白,目前报道的B群流脑疫苗外膜蛋白候选抗原主要包括fHBP、NspA、NHBA、NhhA、NadA、GNA1946、GNA1162、NMB0315等。本文就上述外膜蛋白作为B群流脑疫苗候选抗原的最新进展作一综述。     

A、C群脑膜炎球菌结合疫苗免疫原性研究

目的 研究A、C群脑膜炎球菌结合疫苗的免疫原性,包括剂量、免疫记忆及抗原相容性.方法 将不同剂量的A、C群脑膜炎球菌结合疫苗分别免疫小鼠,末次免疫后14 d采集血清测定血清抗体滴度,确定最佳免疫剂量后,再分别以单价A群和C群脑膜炎球菌结合疫苗及二价A、C群脑膜炎球菌结合疫苗同时对小鼠分别进行1、2、3针免疫,考察其针次效应和抗原相容性.结果 A、C群脑膜炎球菌结合疫苗中的A抗原和C抗原均以1.25 μg剂量免疫小鼠时,其免疫原性较好.A、C群脑膜炎球菌结合疫苗能够诱导小鼠产生免疫回忆应答,且在二价结合疫苗中的A群耦联物和C群耦联物配伍后无干扰作用,抗原相容性良好.结论 A、C群脑膜炎球菌结合疫苗具有较好的免疫原性和明显的免疫回忆应答,抗原相容性良好.     

北京地区A群和C群脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白特征分析

脑膜炎奈瑟菌均表达P1类外膜蛋白,这类蛋白称为PorA蛋白。同时也表达P2或者P3类外膜蛋白,这两类蛋白称为PorB蛋白。PorA和PorB蛋白表面的抗原决定簇是血清亚型和血清型的分类基础。PorA和PorB蛋白二级结构表明,两者分别具有8个暴露在外的环状结构(loopⅠ至Ⅷ)。其中,loopⅠ和Ⅳ是PorA的可变区,而loopⅠ、Ⅴ、Ⅵ和Ⅶ是PorB的可变区,决定菌株血清亚型和血清型的抗原决定簇主要存在于两者的可变区上。我国流脑病例主要是由A群的脑膜炎奈瑟菌引起的,但近年来B和C群     

B群脑膜炎球菌重组H因子结合蛋白的免疫原性研究

目的:通过检测血清抗体滴度和杀菌抗体检测(SBA)评价重组H因子结合蛋白(factor H binding protein,fHBP)的免疫原性。方法:选择并合成fHBP序列,连接至pET43.1a质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3),表达两个亚家族的重组fHBP蛋白,fHBPA和fHBPB,经过纯化后免疫家兔和小鼠,...     

我国间日疟原虫混合流行区分离株Dufry抗原结合蛋白基因多态性分析

为了解我国季节混合流行区云南省间日疟原虫红内期候选抗原Dufly抗原结合蛋白（DBP）基因多态性特点,提取19株我国云南株疟原虫基因组DNA,PCR扩增DBPRⅡ区基因片段。以SalI标准株作为参照,对所获得的基因序列进行排序分析,检测基因突变位点,以中性检验分析评估序列多态性。结果表明,中国间日疟原虫混合流行区云南分离株PvDBPRII的基因多态性与南美、中非等流行突变位点一致,未发现地区特异性的突变位点,但与国内单一流行区湖北和浙江地区突变位点存在一定差异。原因可能为整体上受到自然选择的影响,呈正向选择趋势。上述结果可为以PvDBPRⅡ为基础建立有效传播阻断疫苗的研究提供一定的线索。     

两株B群脑膜炎奈瑟氏菌脂寡糖减毒前后抗原性与毒性的检测

两株Ｂ群脑膜炎奈瑟氏菌脂寡糖减毒前后抗原性与毒性的检测孙银燕胡绪敬王君摘要脂寡糖（ＬＯＳ）是Ｂ群Ｎｍ的一种主要外膜抗原，用ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－３００ＨＲ或ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－７５凝胶层析方法从两株Ｂ群Ｎｍ（５４２８５２和３４０７）中提取获得了纯度较...     

热休克蛋白70融合肿瘤抗原基因的DNA疫苗研究进展

在抗肿瘤免疫治疗中,已经发展了多种形式的热休克蛋白70(HSP70)相关治疗性疫苗,这些疫苗主要包括蛋白疫苗、肽疫苗、细胞疫苗及DNA疫苗等,其中HSP70融合DNA疫苗凭借其自身的优势引起人们的关注。它不但可诱导高效、持久的抗肿瘤免疫应答,而且可以维持免疫记忆。本文就HSP70在肿瘤治疗性DNA疫苗中的作用和应用作一综述。     

用抗人B因子单克隆抗体对B因子等位基因变异型抗原决定簇的初步研究

本文为了研究人B因子(BF)等位基因变异型间是否存在抗原决定簇的差异,用两株针对不同抗原决定簇的抗人BF单克隆抗体(A2、C_9)对纯化的FF型和S_A、S_B亚型的BF进行等电聚焦,免疫印渍,结果发现C_9与FF、S_A S_B均呈阳性反应;A_2与S_B、FF呈阳性反应,但却不与S_A反应。从而说明在FF与S_A间,S_A与S_B间有抗原决定簇的差异,该抗原决定簇与A2相关。     

大肠杆菌O157∶H7多糖-重组铜绿假单胞菌外毒素A结合疫苗的研制

目的　用大肠杆菌O15 7∶H7(EscherichiacoliO15 7∶H7,E .coliO15 7)的一个重要保护性抗原即菌体脂多糖 (LPS)制备有效的候选疫苗。方法　选用Westphal热酚法提纯E .coliO15 7∶H7的LPS ,经酸水解法进一步脱毒处理后得到无毒但却具弱免疫原性的O 特异性多糖 (O SP) ,然后采用己二酸二肼 (ADH)将其共价结合到琥珀酰化 (或没琥珀酰化 )重组铜绿假单胞菌外毒素 (rEPAsucc或rE PA)上。结果　制备得到的E .coliO15 7∶H7的O SP rEPAsucc或O SP rEPA结合疫苗是安全有效的 ,其免疫原性要比单一O SP的免疫原性强 ,免疫小鼠后产生的血清抗LPSIgG抗体滴度比单一O SP免疫后产生的抗体水平均有显著性升高 (P <0 .0 1) ,且再次注射后存在加强应答。结论　E .coliO15 7∶H7的O SP rEPAsucc结合疫苗可望作为一种预防肠出血性E .coli引起的感染性腹泻的有效候选用疫苗     

表达CS3菌毛和CT—B抗原双价疫苗候选株的构建

肠毒素性大肠杆菌（ＥｎｔｅｒｏｔｏｘｉｇｅｎｉｃＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ，ＥＴＥＣ）是引起幼儿腹泻和旅游者腹泻的重要致病菌。本研究的目的是构建既具有抗菌能力又有中和毒素能力的工程菌株。本研究以Ｂｌｕｅ－ｓｃｒｉｐｔ质粒为载体构建了表达ＣＳ３和ＣＴ－Ｂ的双价重组抗原的克隆株。口服免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠和肌肉注射免疫家兔，该重组菌株可以诱发抗ＣＴ－Ｂ和抗ＣＳ３的双重免疫应答，为构建多价腹泻疫苗株奠定了基础。     

rCTB和TT为蛋白载体的A群流脑多糖黏膜免疫初步研究

目的 对重组霍乱毒素B亚单位(rCTB)作为多糖蛋白结合疫苗候选载体的可行性进行分析,并对以破伤风类毒素(TT)与rCTB为蛋白载体的黏膜投递型疫茸的免疫效果进行初步探讨.方法 首先通过基因工程手段获得具有五聚体结构的rCTB.再将rCTB五聚体蛋白利用化学方法(ADH方法)与A群脑膜炎球菌多糖(GAMP)耦联,获得多糖蛋白结合物GAMP-rCTB,并将其与TT为蛋白载体的A群流脑多糖蛋白结合物(GAMP-TT)以滴鼻和注射途径免疫BALB/c小鼠,并对其进行免疫学评价.结果 以rCTB和TT为载体的A群流脑多糖蛋白结合物,通过黏膜投递途径均可在血清中产生相对较高的多糖特异性IgG抗体,在肺部盥洗液和小肠黏膜也产生了相应的特异性IgA抗体.结论 rCTB和TT均可作为黏膜投递型多糖结合疫苗的候选蛋白载体.以rCTB为载体的多糖蛋白结合物,黏膜途径可能在免疫功能方面优于注射途径.     

rCTB和TT为蛋白载体的A群流脑多糖黏膜免疫初步研究

目的 对重组霍乱毒素B亚单位(rCTB)作为多糖蛋白结合疫苗候选载体的可行性进行分析,并对以破伤风类毒素(TT)与rCTB为蛋白载体的黏膜投递型疫茸的免疫效果进行初步探讨.方法 首先通过基因工程手段获得具有五聚体结构的rCTB.再将rCTB五聚体蛋白利用化学方法(ADH方法)与A群脑膜炎球菌多糖(GAMP)耦联,获得多糖蛋白结合物GAMP-rCTB,并将其与TT为蛋白载体的A群流脑多糖蛋白结合物(GAMP-TT)以滴鼻和注射途径免疫BALB/c小鼠,并对其进行免疫学评价.结果 以rCTB和TT为载体的A群流脑多糖蛋白结合物,通过黏膜投递途径均可在血清中产生相对较高的多糖特异性IgG抗体,在肺部盥洗液和小肠黏膜也产生了相应的特异性IgA抗体.结论 rCTB和TT均可作为黏膜投递型多糖结合疫苗的候选蛋白载体.以rCTB为载体的多糖蛋白结合物,黏膜途径可能在免疫功能方面优于注射途径.