Snail在17β雌二醇引起的卵巢透明细胞癌ES-2细胞系侵袭力增加中的作用

目的 转录因子Snail可诱发上皮细胞-间充质细胞转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT),在肿瘤的黏附、侵袭、转移中起重要作用.本研究通过RNA干扰抑制Snail的表达,观察Snail表达抑制后是否影响17β雌二醇对卵巢透明细胞癌细胞系ES-2细胞趋向运动力、侵袭力及MMP-2表达的调控.方法 构建针对Snail的dsRNA表达载体pRNAT-U6.1/Neo-Snail,瞬时转染抑制Snail表达.10-8 mol/L 17β雌二醇及DMSO分别作用于阴性对照组及RNAi组细胞,用改良的Boyden小室检测细胞侵袭力、运动力的变化,RT-PCR检测MMP-2 mRNA表达的改变情况,明胶酶谱检测基质金属蛋白酶活性.结果 用针对Snail的RNAi阻断Snail表达后,可使ES-2细胞胞质突起变短,细胞的趋向运动力、侵袭力及MMP-2表达降低;针对Snail的RNAi可部分阻断17β雌二醇对ES-2细胞趋向运动力、侵袭力的调节,并可阻断17β雌二醇对细胞MMP-2表达的调节作用.结论 Snail在雌激素引起的卵巢透明细胞癌肿瘤细胞侵袭能力增强的过程中起重要作用,可作为卵巢透明细胞癌治疗的重要靶点.     

Snail在17β雌二醇所引起的卵巢透明细胞癌ES-2细胞系侵袭力增加中的作用

目的 转录因子Snail可诱发上皮细胞-间充质细胞转化（epithelial-mesenchymal transitions,EMT），在肿瘤的黏附、侵袭、转移中起重要作用。本研究通过RNA干扰抑制Snail的表达，观察Snail表达抑制后是否影响17β雌二醇对卵巢透明细胞癌细胞系ES-2细胞趋向运动力、侵袭力及MMP-2表达的调控。方法 构建针对Snail的dsRNA表达载体pRNAT-U6.1/Neo-Snail，瞬时转染抑制Snail表达。10-8mol/L 17β雌二醇及DMSO分别作用于阴性对照组及RNAi组细胞，用改良的Boyden小室检测细胞侵袭力、运动力的变化，RT-PCR检测MMP-2 mRNA表达的改变情况,明胶酶谱检测基质金属蛋白酶活性。 结果 用针对Snail的RNAi阻断Snail表达后，可使ES-2细胞胞质突起变短，细胞的趋向运动力、侵袭力及MMP-2表达降低；针对Snail的RNAi可部分阻断17β雌二醇对ES-2细胞趋向运动力、侵袭力的调节，并可阻断17β雌二醇对细胞MMP-2表达的调节作用。 结论 Snail在雌激素引起的卵巢透明细胞癌肿瘤细胞侵袭能力增强的过程中起重要作用，可作为卵巢透明细胞癌治疗的重要靶点。     

Snail在17β雌二醇所引起的卵巢透明细胞癌ES-2细胞系侵袭力增加中的作用

 目的 转录因子Snail可诱发上皮细胞-间充质细胞转化（epithelial-mesenchymal transitions,EMT），在肿瘤的黏附、侵袭、转移中起重要作用。本研究通过RNA干扰抑制Snail的表达，观察Snail表达抑制后是否影响17β雌二醇对卵巢透明细胞癌细胞系ES-2细胞趋向运动力、侵袭力及MMP-2表达的调控。方法 构建针对Snail的dsRNA表达载体pRNAT-U6.1/Neo-Snail，瞬时转染抑制Snail表达。10-8mol/L 17β雌二醇及DMSO分别作用于阴性对照组及RNAi组细胞，用改良的Boyden小室检测细胞侵袭力、运动力的变化，RT-PCR检测MMP-2 mRNA表达的改变情况,明胶酶谱检测基质金属蛋白酶活性。 结果 用针对Snail的RNAi阻断Snail表达后，可使ES-2细胞胞质突起变短，细胞的趋向运动力、侵袭力及MMP-2表达降低；针对Snail的RNAi可部分阻断17β雌二醇对ES-2细胞趋向运动力、侵袭力的调节，并可阻断17β雌二醇对细胞MMP-2表达的调节作用。 结论 Snail在雌激素引起的卵巢透明细胞癌肿瘤细胞侵袭能力增强的过程中起重要作用，可作为卵巢透明细胞癌治疗的重要靶点。     

17β雌二醇对卵巢透明细胞癌ES-2细胞系侵袭力及Snail表达的影响

目的研究雌激素对体外培养的卵巢透明细胞癌细胞系ES2增殖、侵袭力的影响和对MTA3、Snail、基质金属蛋白酶2(MMP2)表达的调节作用,以探讨雌激素作用对ES2细胞系的影响。方法体外培养卵巢透明细胞癌ES2细胞系,去激素培养7d后加入17β雌二醇(E2)1×10-7、1×10-8、1×10-9mol/L,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪测定细胞周期,改良的Boyden小室检测细胞侵袭力、运动力的变化,RTPCR检测MTA3、Snail、MMP2mRNA表达,免疫组化法检测Snail、MMP2表达,明胶酶谱检测基质金属蛋白酶活性。结果RTPCR、WesternBlot结果示ES2细胞系为ERα阴性表达,ERβ阳性表达,Ecad为阴性表达。17βE21×10-7、1×10-8、1×10-9mol/L均可促进细胞增殖;E21×10-8mol/L可使G0～G1期细胞减少,S期细胞增加,但对细胞凋亡无影响;17βE21×10-8mol/L可显著增强ES2细胞的侵袭力和趋向运动能力,并可降低MTA3mRNA表达,增加Snail、MMP2mRNA及蛋白表达。结论17βE2可显著促进ES2细胞的侵袭能力,此作用可能是通过17βE2对MTA3表达下调和对Snail、MMP2表达的上调实现的。     

肝细胞生长因子对滋养细胞HLX1基因的表达及侵袭能力的影响

目的 探讨肝细胞生长因子(HGF)对胎盘滋养细胞株HTR-8/SVneo细胞HLX1基因的表达及侵袭能力的影响.方法 常规体外培养HTR-8/SVneo细胞,用不同浓度HGF(0、10、20、50、100ng/mL)处理细胞48h.设0浓度组为对照组;用HLX1 siRNA转染细胞24h后继续以20 ng/mL HGF刺激48h,分空白对照组(MC)、siRNA+HGF组、MC+HGF 3个实验组;应用实时荧光定量RT-PCR和蛋白印迹法测定各组细胞中HLX1 mRNA和蛋白的表达;明胶酶谱测定上清中MMP-2的表达;Matrigel侵袭实验检测各组细胞的侵袭能力.结果 ① HGF处理组细胞HLX1 mRNA表达水平与对照组比较上调了90%～475%(P<0.01),且与HGF呈剂量依赖性;20ng/mL HGF使HLX1蛋白表达水平上调(156.7±6.4)%,P<0.01;② siRNA+HGF组与MC组比较.细胞HLX1 mRNA和蛋白的表达水平分别下降(54.57±0.31)%及(68.44±2.48)%,P<0.01;③ 20ng/mL HGF处理组细胞其上清MMP-2表达水平与对照组比较上调(394.6±2.9)%,P<0.01;siRNA+HGF组与MC组比较MMP-2表达水平下降(81.5±0.6)%,P<0.01;④ 20ng/mL HGF处理的HTR-8/SVneo细胞穿过Matrigel的细胞数为(71±5)个,与对照组(50±3)个比较侵袭能力明显增强(P<0.01);siRNA+HGF组穿膜细胞数明显减少为(20±4)个,MC组为(43±3)个,两组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 HGF可提高HTR-8/SVneo细胞HLX1基因的表达及细胞的侵袭力,且侵袭力的增加可能与HLX1表达水平升高有关.     

RNAi抑制卵巢癌SKOV3细胞MMP-24基因表达及对细胞侵袭的影响

目的 探讨应用RNA干扰技术沉默MMP-24基因表达,研究其对人卵巢上皮癌SKOV3细胞侵袭力的影响.方法 设计合成2条特异性针对MMP-24基因的siRNA,转染至SKOV3中,采用RT-PCR和Western blotting检测MMP-24mRNA和蛋白表达情况,细胞侵袭实验观察转染后细胞侵袭能力的变化.结果 转染siRNA后,卵巢癌细胞MMP-24mRNA表达受抑制,蛋白表达降低,细胞侵袭力减弱.结论 RNAi沉默MMP-24基因可影响卵巢癌细胞的侵袭,有可能成为治疗卵巢癌的新途径.     

HYAL2基因沉默对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭的影响

目的：利用RNA干扰（RNAi）技术抑制人卵巢癌SKOV3细胞株HYAL2基因的表达,探讨siRNA-HYAL2对卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭能力的影响.方法：将靶向HYAL2的siRNA及对照分别转染人卵巢癌SKOV3细胞株,RT-PCR测定HYAL2基因mRNA表达情况,MTT法检测SKOV3细胞增殖,FCM检测细胞周期变化,构建Transwell小室体外侵袭模型观察其对细胞侵袭能力的影响.结果：转染siRNA-HYAL248 h后HYAL2基因mRNA表达水平明显降低,细胞存活率下降（P〈0.05）,S期细胞百分比降低、G0/G1期细胞百分比升高（P〈0.05）;转染24 h后平均穿膜细胞数减少（P〈0.05）.结论：siRNA-HYAL2能特异性抑制HYAL2的mRNA表达水平,HYAL2基因沉默后,卵巢癌SKOV3细胞增殖和侵袭能力降低,HYAL基因可能成为卵巢癌基因治疗的新靶点.     

Clusterin基因沉默对卵巢癌SKOV3细胞增殖与侵袭的影响

目的通过RNA干扰技术抑制卵巢癌SKOV3细胞分泌型clusterin(sCLU)基因的表达,研究其对卵巢癌细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。方法通过脂质体介导靶向sCLU基因的siRNA转染卵巢癌SKOV3细胞,实验分为4组:实验组(sCLU-siRNA+脂质体)、阴性对照组Ⅰ(negative control siRNA+脂质体)、阴性对照组Ⅱ(sCLU-siRNA)、空白对照组(等体积的完全培养液)。RT-PCR和蛋白质印迹分析法检测sCLU表达;利用MTT法、Transwell小室体外侵袭实验及流式细胞仪AnnexinⅤ/PI法检测评价sCLU基因抑制后对卵巢癌细胞增殖、侵袭及凋亡的影响。结果靶向sCLU基因的siRNA明显、特异性地抑制了sCLU mRNA和蛋白的表达水平;MTT实验结果显示实验组细胞增殖能力较各对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪AnnexinⅤ/PI法检测结果显示实验组细胞凋亡率较各对照组明显升高,达到(15.84±1.53)%,较空白对照组升高了约9%,差异有统计学意义(P<0.01)。侵袭实验结果提示实验组细胞侵袭能力受到明显抑制,实验组穿膜细胞数量为(26.52±6.22)个/视野,较各对照组明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 sCLU基因沉默明显抑制了卵巢癌SKOV3细胞的增殖、侵袭能力,并增加了其凋亡率,sCLU基因有望成为卵巢癌治疗的新靶点。     

COX-2基因沉默对OS-RC-2细胞生长和侵袭能力的影响

目的：观察RNA干扰沉默肾癌细胞株OS-RC-2的环氧合酶-2（COX-2）基因表达对肾癌细胞生长及体外侵袭能力的影响。方法：构建靶向COX-2的小干扰RNA（siRNA）真核表达质粒pSilencer2.0-U6-COX-2-siRNA。将对数生长期的OS-RC-2细胞分3组,干扰组转染pSilencer2.0-U6-COX-2-siRNA,空转组转染pSliencer2.0-U6,对照组不转染。培养72h后采用半定量RT-PCR、Westernblot检测COX-2mRNA和蛋白表达,CCK8增殖抑制实验观察细胞生长情况,改良Boyden小室法评估细胞体外侵袭能力。结果：酶切和测序证实pSilencer2.0-U6-COX-2-siRNA构建成功。3组细胞COX-2mRNA和蛋白的表达、细胞存活率及穿孔细胞数差异均有统计学意义（F分别为189.800,89.326,188.403和75.349,P均〈0.001）。与其他2组比较,干扰组COX-2mRNA及蛋白表达下调（P〈0.05）,细胞存活率、穿孔细胞数降低（P〈0.05）。结论：COX-2有望成为肾癌基因治疗的靶点。     

LIM同源盒基因8对卵巢癌细胞SKOV3生物学行为的影响

目的 探讨LIM同源盒基因8(Lhx8)对卵巢癌细胞株SKOV3增殖、转移和侵袭的影响.方法 采用Lhx8过表达慢病毒(LV-Lhx8)转染卵巢癌细胞株SKOV3构建过表达模型;设阴性对照慢病毒(LV-NC)组通过Lipofectamine 2000转染Lhx8-siRNA构建细胞干扰模型并设阴性对照序列(FAM-siRNA;NC)组;野生(WT)组细胞仅给予等量不含病毒或任何干扰片段的转染试剂.通过免疫荧光、蛋白质印迹法和qPCR验证过表达和干扰效果.采用EDU和细胞周期实验检测过表达或干扰Lhx8后细胞的增殖能力;采用Transwell和划痕实验分别检测转染后细胞的迁移和侵袭能力.结果 Lhx8过表达组SKOV3细胞中Lhx8的表达高于LV-NC和WT组(P＜0.01),干扰后Lhx8的mRNA和蛋白表达均降低,与NC和WT组相比差异有统计学意义(P＜0.01).与WT和LV-NC组相比,Lhx8过表达抑制SKOV3细胞的增殖(P＜0.01),而干扰Lhx8后其增殖能力增加(P＜0.01);细胞周期实验结果示过表达Lhx8能够增加进入G0/Q期的细胞数目,从而抑制细胞增殖(P＜0.01),干扰Lhx8表达后进入S期的细胞数目多于WT和NC组(P＜0.01).划痕和Transwell实验结果示SKOV3细胞过表达Lhx8后其迁移和侵袭能力均低于WT和LV-NC组(P＜0.01),干扰Lhx8表达后细胞的迁移和侵袭能力均高于WT和NC组(P＜0.01).SKOV3细胞过表达Lhx8后基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9的表达均低于WT和LV-NC组(P＜0.01),干扰Lhx8后MMP-2、MMP-9表达均高于WT和NC组(P＜0.01).结论 Lhx8能够抑制SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭,同时能够下调MMP-2和MMP-9的表达.     

靶向Her2基因SiRNA对人卵巢癌细胞株SKOV-3 顺铂敏感性的影响

目的通过siRNA沉默Her2基因的表达探讨其对卵巢癌细胞株SKOV-3顺铂（DDP）敏感性的影响。方法靶向Her2的siRNA通过阳离子脂质体介导转染到SKOV-3中,经过嘌呤霉素筛选得到稳定抑制Her2基因表达的SK-OV-3细胞株,通过RT-PCR方法检测各组SKOV-3细胞Her2基因的表达。应用四甲基偶氮唑蓝检测DDP对各组SKOV-3细胞增殖水平的影响,应用膜联蛋白V异-硫氰酸荧光素细胞凋亡试剂盒在流式细胞仪上检测DDP作用后各组SKOV-3细胞凋亡水平。结果建立了稳定抑制Her2基因表达的细胞株,SKOV3/siRNA-1组和SKOV3/siRNA-2组细胞Her2基因表达分别为对照组的53.8%和38.4%,而空载体组为92.3%。在DDP作用下SKOV3/siRNA-1和SKOV3/siRNA-2的细胞存活率在4 d时分别为67.7%±4.4%和66.4%±3.3%,与未转染对照组81.7%±1.3%和空载体组81.3%±1.4%比较差异有显著性（P〈0.05）。FCM分析显示SK-OV3/siRNA-1和SKOV3/siRNA-2细胞的DDP诱导凋亡率分别为38.6%±1.1%和42.8%±1.4%,明显高于未转染组9.1%±0.8%和空载体组8.8%±0.7%,差异有显著性（P〈0.05）。结论靶向Her2基因的siRNA可以增强卵巢癌细胞株SKOV-3对DDP的敏感性。     

环磷酰胺和5-氟尿嘧啶对卵巢透明细胞腺癌的协同作用

目的 研究环磷酰胺和5-氟尿嘧啶对卵巢透明细胞腺癌的协同作用。方法 采用四唑基础半自动化的比色（MTT）检验法，评价在6个卵巢癌细胞系包括4个透明细胞腺癌和两个浆液性乳头状腺癌中，应用7种单独的药物和7种药物联合体系化疗药物的细胞毒性作用。结果 顺铂产生的50%生长抑制药物浓度（IC50）在5个细胞系中是在临床可达到的药物浓度范围之内，环磷酰胺的IC50曲线下的面积（AUC）在两个浆液性乳头细胞系中是在临床中可达到的AUC之下，Paclitxel在透明细胞癌中比浆液乳头细胞癌中更加有效。当不考虑这些原发肿瘤的组织病理学特征，在Paclitaxel和顺铂，环磷酰胺和顺铂或5-Fu联合用药中发现细胞毒性加强，结论 卵巢癌细胞系对于化疗药物反应的不同依赖于组织病理学特性，个性化的治疗方案可能改善卵巢癌患者的预后。     

RNA干扰Ezrin体外对胃癌AGS细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨膜-细胞骨架联接蛋白Ezrin对胃癌细胞株AGS侵袭和迁移能力的影响.方法 针对人Villin2基因(Ezrin编码基因)设计发夹式RNA(shRNA).合成后克隆入载体pGCsileneer,扩增并中量提取质粒,应用脂质体Lipofectamine 2000转染进AGS细胞.采用RT-PCR和Western印迹检测Ezrin的表达.shRNA转染AGS细胞并行G418筛选,传代扩增.结果 shRNA-Ezrin对Ezrin表达抑制作用明显,稳定转染细胞Ezrin下调率达93%.侵袭实验AGSEzrin 细胞的跨膜数为(27.67±4.50),与对照组(125.50±8.33)比较差异具有统计学意义(P<0.01).结论 Ezrin在人胃癌细胞侵袭迁移过程中发挥重要作用,可能成为胃癌基因治疗的一个新靶点.     

RNA干扰假基因Cripto-3表达对大肠癌细胞增殖和侵袭的影响

目的：探讨RNA干扰下调假基因Cripto-3（Cr-3）对人大肠癌细胞SW480增殖和侵袭的影响。方法：将大肠癌细胞随机分为5组：空白对照组,空载对照组,siRNA转染组（5 nmol/L组、10 nmol/L和20 nmol/L组）。将Cr-3小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）转染人大肠癌SW480细胞后,采用实时荧光定量PCR检测Cr-3表达水平;分别采用平板克隆形成实验和Transwell法检测大肠癌细胞的增殖和侵袭能力。结果：与空白对照组和空载对照组比较,siRNA转染组Cr-3表达水平均明显下降,且呈浓度依赖性（P〈0.05）,癌细胞克隆形成和穿过滤膜的细胞均明显减少,且与浓度相关（P〈0.05）。结论：假基因Cr-3在大肠癌细胞增殖侵袭中起着重要的作用,可能是大肠癌诊疗中的一个重要靶点。     

siRNA干扰骨形态发生蛋白2对肝癌SMMC7721细胞迁移和侵袭能力的抑制作用

目的 设计并化学合成针对骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic proteins,BMP-2)的siRNA分子片段,转染人肝癌SMMC7721细胞,观察其对SMMC7721细胞迁移和侵袭能力的影响.方法 设计并化学合成针对BMP-2的3个siRNA分子序列,阳离子脂质体法瞬间转染SMMC7721细胞,运用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western印迹法检测细胞中BMP-2在mRNA水平和蛋白水平的变化,体外侵袭实验榆测转染后细胞侵袭能力的变化.实验共分6组,①正常对照组;②空白对照组;③阴性对照组;④～⑥分别为BMP-2-siRNA-A、BMP-2-siRNA-B、BMP-2一siRNA-C转染组.结果 RT-PCR和Western blot显示3对特异性BMP-2-siRNA转染肝癌细胞SMMC7721之后,其BMP-2的基凶和蛋白表达均受到抑制,以siRNA-B抑制效果最明显[(0.32±0.07)vs(0.92±0.14),(0.37±0.10)vs(0.89±0.17),P<0.01].体外侵袭实验显示转染后肝癌细胞数明显低于未转染组和阴性对照组[分别为(6.48±3.62)、(23.72±3.24)、(22.38 4-3.84),P<0.05].结论 BMP-2与肝癌的侵袭转移潜能相关,siRNA-BMP-2能明显抑制肝癌细胞SMMC7721的BMP-2表达,从而抑制肝癌细胞的迁移和侵袭能力.     

基质金属蛋白酶-2及基质金属蛋白酶-9与卵巢上皮性癌血管生成的关系

目的 探讨基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)对卵巢上皮性癌(EOC)血管生成的影响。方法 采用免疫组织化学法(SP法)检测60例卵巢上皮性癌组织中MMP-2以及MMP-9的表达,并对标本微血管密度(MVD)进行检测,与10例正常卵巢组织和16例卵巢良性肿瘤组织进行对比分析。结果 卵巢上皮性癌组织及卵巢良性肿瘤中的MMP-2及MMP-9的阳性表达率显著性高于正常卵巢组织(均P<0.01);MMP-2及MMP-9在卵巢癌组织中的表达与MVD呈正相关(均P<0.05)。结论 MMP-2及MMP-9可能在卵巢上皮性癌血管生成中起重要的作用,MMP-2和MMP-9的表达增强,血管生成的能力也显著增强。     

RN Ai对胃癌SGC-7901细胞侵袭及迁移能力的影响

目的：运用RNA干扰（RNAi）技术抑制HER2基因的表达,探讨其对胃癌SGC‐7901细胞侵袭及迁移能力的影响。方法设计、构建RNAi片段靶向抑制HER2高表达的胃癌细胞株（HER2‐RNAi组）,以转染阴性对照系列（阴性对照组）及未转染的SGC‐7901细胞（空白对照组）为对照组。利用RT‐PCR和Western blot法检测各组胃癌SGC‐7901细胞中 HER2的表达情况;采用Transwell小室模型及划痕实验检测RNAi对胃癌细胞体外的侵袭和迁移能力的影响。结果 RNAi片段转染后SGC‐7901细胞的HER2 mRNA和蛋白表达水平明显下降（P＜0．05）;侵袭实验结果显示,HER2‐RNAi组的穿膜细胞数[（31．5±3．8）个／视野]显著低于未转染组[（103．6±4．5）个／视野];迁移实验结果显示,HER2‐RNAi组的穿膜细胞数[（63．6±5．1）个／视野]显著低于未转染组[（193．5±6．2）个／视野],各组间比较差异有统计学意义（P＜0．05）。结论 RNAi沉默 HER2基因可以抑制胃癌SGC‐7901细胞的侵袭和迁移能力,提示RNAi基因沉默技术有可能成为进展期胃癌治疗的新方法。     

Correlation of RECK with Matrix Metalloproteinase-2 in Regulation of Trophoblast Invasion of Early Pregnancy

Trophoblast invasion into maternal decidualized endometrium and the proximal one third of the myo-metrium is one of the keys of successful human preg-nancy. At present, the mechanisms of trophoblast inva-sion regulation are still not fully understood. Many re-searches showed that matrix metalloproteinase-2 (MMP-2) was closely correlated with trophoblastic inva-sion[1]. RECK gene is a newly discovered endogeneous inhibitor of MMPs in recent years[2]. Researches found that RECK is one of n…