补中益气汤对A549/DDP肺腺癌耐药动物模型中凋亡相关信号分子caspase-9的影响

目的研究补中益气汤对肺腺癌荷瘤BALB/c小鼠实体瘤中凋亡相关信号分子Caspase-9表达的影响,探讨其对肺腺癌可能的作用机制。方法体外培养肺腺癌A549/DDP细胞,接种健康BALB/c小鼠,荷瘤成功后予补中益气汤治疗,实验分为:荷瘤对照组,补中益气汤低剂量组及补中益气汤高剂量组。观察转移病灶情况,利用RT-PCR检测Caspase-9 mRNA的表达,免疫组化法检测Caspase-9蛋白表达。结果同荷瘤对照组相比,高、低剂量的补中益气汤均可上调凋亡相关信号分子Caspase-9 mRNA和蛋白的表达水平,并且补中益气汤高剂量组效果优于低剂量组。结论补中益气汤对肺腺癌的抑制作用可能与Caspase-9表达上调相关。     

补中益气汤含药血清诱导肺癌A549细胞凋亡及抗氧化能力的研究

目的研究补中益气汤含药血清诱导肺癌A549细胞凋亡及其抗氧化能力的分子机制。方法利用补中益气汤含药血清干预体外培养的肺癌A549细胞,分别应用MTT法检检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡发生,蛋白质免疫印迹实验检测Caspase 3活化,细胞活性氧实验检测细胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生。结果补中益气汤含药血清能抑制A549细胞增殖,诱导Caspase 3依赖的细胞凋亡,且细胞凋亡发生与ROS活化相关。结论补中益气汤含药血清诱导A549细胞凋亡可能与ROS信号通路相关     

补中益气汤对A549/DDP肺癌荷瘤BALB/c小鼠耐药相关蛋白MRP表达的影响

目的研究补中益气汤对A549/DDP肺癌荷瘤BALB/c小鼠实体瘤中耐药相关蛋白(multidrug resistance-associated protein,MRP)表达的影响,探讨补中益气汤对A549/DDP的治疗作用机制。方法体外培养A549/DDP细胞,接种健康BALB/c小鼠,荷瘤成功后予补中益气汤治疗,实验分组为:荷瘤对照组,补中益气汤低剂量组及补中益气汤高剂量组,利用RT-PCR检测实体瘤MRP mRNA的表达,免疫组化法检测MRP蛋白表达。结果同荷瘤对照组相比,高、低剂量的补中益气汤均可降低耐药相关蛋白MRP的表达水平,且补中益气汤高剂量组效果同低剂量组相比无明显区别。结论补中益气汤的抗肿瘤作用可能与其降低MRP的表达相关。     

补中益气汤对A549/DDP动物模型实体瘤中耐药相关酶GST和TopoⅡ表达的影响

目的研究补中益气汤对A549/DDP细胞荷瘤小鼠实体瘤中耐药相关酶GST和TopoⅡ表达的影响,探讨补中益气汤的作用机制。方法体外培养A549/DDP细胞,接种健康BALB/c小鼠,荷瘤成功后予补中益气汤治疗,实验分为:荷瘤组,补中益气汤低剂量组及补中益气汤高剂量组。取实体瘤后,利用RT-PCR检测GST和TopoⅡmRNA的表达,免疫组化法检测蛋白表达。结果同荷瘤组相比,高低剂量的补中益气汤均可降低耐药相关酶GST和TopoⅡmRNA表达水平,但补中益气汤高剂量组效果同低剂量组区别不大(0.05)。同荷瘤组相比,高低剂量的补中益气汤均可降低耐药相关酶GST和TopoⅡ蛋白的表达(0.05),补中益气汤高剂量组的效果优于补中益气汤低剂量组(0.05)。结论补中益气汤能下调A549/DDP实体瘤中耐药相关酶GST和TopoⅡ的表达水平。     

六君子汤含药血清对A549/DDP细胞及E-cadherin和N-cadherin表达的影响

目的研究六君子汤含药血清对人肺腺癌顺铂耐药细胞株(A549/DDP)顺铂(DDP)耐药的作用及其对上皮钙黏蛋白(E-cadherin)和神经钙黏蛋白(N-cadherin)表达的影响。方法采用血清药理学方法制备含药血清,随机将40只SD大鼠分为血清对照组和六君子汤(高、中、低剂量)含药血清组,每日灌胃给药1次,连续5天后提取血清。再用培养液将各组血清稀释成5%和10%浓度作用于A549/DDP细胞株12h、24h、48h,以此筛选出最佳浓度及最佳作用时间点。MTT法检测各组细胞对DDP的IC50,计算耐药逆转倍数;免疫细胞化学法和Western blot检测各组细胞中E-cadherin和N-cadherin蛋白的表达。结果六君子汤含药血清对A549/DDP细胞有明显抑制作用,且呈浓度和时间依赖关系,中剂量10%浓度含药血清作用48h作用较强且细胞毒性低,在此浓度下,TGF-β1诱导的A549/DDP的IC50明显下降(P0.05),对A549/DDP细胞的耐药逆转倍数为4.12,E-cadherin表达水平上调,N-cadherin的表达水平下调。结论六君子汤含药血清逆转A549/DDP细胞的顺铂耐药可能与抑制细胞上皮-间质转化,增强A549/DDP对DDP的敏感性有关。     

补中益气汤含药血清调控GSK-3β介导的Wnt/β-catenin信号通路增强A549细胞对顺铂敏感性的研究北大核心CSCD

目的:探讨补中益气汤含药血清增强A549细胞对顺铂敏感性的机制是否与GSK-3β介导的Wnt/β-catenin信号通路有关。方法:制备补中益气汤含药血清作用于A549细胞株,随机分为a组(对照血清组)、b组(顺铂组)、c组(补中益气汤组)、d组(补中益气汤含药血清联合顺铂组)。流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测GSK-3β、p-GSK-3β^(ser9)、p-GSK-3β^(tyr216)、β-catenin、survivin蛋白表达。结果:补中益气汤含药血清联合顺铂可降低p-GSK-3β^(ser9)、β-catenin、survivin蛋白表达,提高晚期细胞凋亡率。结论:抑制GSK-3β介导的Wnt/β-catenin信号通路激活可能是补中益气汤含药血清增强A549细胞对顺铂敏感性的作用机制之一。     

补中益气汤调节肺腺癌裸鼠移植瘤GSK-3β活性表达干预顺铂耐药

目的 探讨补中益气汤调节A549/DDP荷瘤裸鼠移植瘤GSK-3β活性表达干预顺铂耐药的机制研究。方法 体外培养A549/DDP细胞,接种于BALB/c nu/nu裸鼠腋窝皮下,8 d后成瘤,隔天开始分别给予低剂量(1.46 g·kg^-1)、中剂量(2.91 g·kg^-1)、高剂量(5.82 g·kg^-1)补中益气汤治疗25d。30只裸鼠随机分为A549/DDP荷瘤对照组(A组)、A549/DDP荷瘤+顺铂组(B组)、A549/DDP荷瘤+顺铂+低剂量补中益气汤组(C组)、A549/DDP荷瘤+顺铂+中剂量补中益气汤组(D组)、A549/DDP荷瘤+顺铂+高剂量补中益气汤组(E组),测量移植瘤质量并计算药物抑瘤率;蛋白质印迹法检测移植瘤组织中胞浆、胞核的GSK-3β、p-GSK-3β^{se r9}、p-GSK-3β^{tyr 216}蛋白表达。结果 顺铂联合补中益气汤可使移植瘤质量逐渐缩小,抑瘤率逐渐增加,呈现剂量依赖性。顺铂联合补中益气汤可显...     

加味补中益气汤治疗大鼠肺孢子虫肺炎的疗效观察

目的探讨加味补中益气汤治疗大鼠肺孢子虫肺炎（PCP）的疗效。方法按国内公认的PCP造模方法，建立大鼠PCP动物模型。设中药治疗组和预防组，同时建立西药对照组、PCP模型对照组及正常对照组。通过观察各组大鼠存活率、体重、肺内肺孢子虫包囊的数量和肺组织病理学变化考核药物疗效。结果中药组大鼠存活率高于PCP模型组，但低于正常组；中药治疗组和预防组大鼠平均体重高于PCP模型组，包囊数低于PCP模型对照组；中药治疗组和预防组大鼠肺组织炎症反应明显轻于PCP模型对照组。结论加味补中益气汤对大鼠肺孢子虫肺炎，有一定的疗效。     

GeXP 检测rhIL-24 联合DDP 对人肺腺癌A549 / DDP 细胞凋亡相关基因的实验研究

目的:利用多基因遗传表达分析系统(GeXP)探讨重组人白细胞介素-24(rhIL-24)联合顺铂(DDP)诱导人肺腺癌顺铂耐药株A549/ DDP 细胞6 个凋亡相关基因的变化。方法:用rhIL-24、DDP 及rhIL-24+DDP 干预A549/ DDP 细胞,应用多基因遗传表达分析系统(GeXP)同时检测Bax、Bcl-2、Survivin、Caspase3、Rb 与P53 等6 个凋亡相关基因。结果:rhIL-24 蛋白可引起A549/ DDP 细胞Bax 基因、Caspase3 基因、Rb 基因转录上调;Bcl-2 基因、Survivin 基因转录下调,但抑癌基因P53 变化无规律,rhIL-24 联合DDP 后Bax、Survivin、Rb 表达较单独rhIL-24 组变化更加显著。结论:rhIL-24 蛋白可通过上调Bax,下调Bcl-2、Survivin,激活Caspase3,上调抑癌基因Rb 诱导人肺腺癌A549/ DDP 细胞凋亡。     

复方中药含药血清对人A375黑素瘤细胞酪氨酸酶活性的影响

目的探讨复方中药含药血清对人A375黑素瘤细胞酪氨酸酶（TYR）活性的影响。方法体外培养人A375黑素瘤细胞,采用多巴速率氧化法研究复方中药含药血清对TYR活性的影响。结果低浓度（5%～10%）的Ⅰ方、Ⅱ方、Ⅲ方对酪氨酸酶活性无明显激活作用（P〉0.05）;高浓度（20%～30%）的Ⅰ方、Ⅲ方、Ⅵ方对TYR活性均有明显激活作用（P〈0.05）,以Ⅵ方作用最显著,且与其它各组相比,差异均有统计学意义（P〈0.01）。结论对TYR具有激活作用的中药组成复方并不一定对TYR有激活作用,具有祛风活血和补肾三重作用的Ⅵ方在促进TYR活性上优于祛风除湿Ⅰ方、养血活血Ⅱ方和滋补肝肾Ⅲ方。     

柚皮苷对人肺癌顺铂耐药株A549/DDP细胞的逆转作用

目的:探究柚皮苷(naringin,NRG)对人肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药性的影响及其可能的分子机制。方法:采用CCK-8法检测柚皮苷和顺铂对A549/DDP细胞的毒性作用,采用Chou-Talalay中效分析法对两药的联合效应进行评价;采用流式细胞术检测细胞凋亡;采用Western blot法检测P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、多药耐药相关蛋白1(multidrug resistance-associated protein 1,MRP1)、p-Akt、CXC趋化因子受体4(CXC chemokine receptor 4, CXCR4)、Bcl-2、Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平。结果:顺铂耐药株A549/DDP细胞中P-gp、MRP1、p-Akt和CXCR4蛋白的水平显著高于非顺铂耐药株A549细胞(P0.05);柚皮苷和顺铂可剂量依赖性地抑制A549/DDP细胞活力(P0.05),IC_(50)分别为36.92μmol/L和129.77μmol/L;当抑制率超过15%时,二者联用呈协同效应;柚皮苷与顺铂可诱导A549/DDP细胞凋亡(P0.05),并且两药联用组的细胞凋亡率高于顺铂组(P0.05);柚皮苷和顺铂可上调Bax和cleaved caspase-3的蛋白水平(P0.05),下调Bcl-2的蛋白水平(P0.05),同时柚皮苷还可剂量依赖性地下调P-gp、MRP1、p-Akt和CXCR4的蛋白水平(P0.05)。结论:柚皮苷可增强人肺癌A549/DDP细胞对顺铂的敏感性。这可能与柚皮苷上调Bax的蛋白水平,下调Bcl-2、P-gp、MRP1、p-Akt和CXCR4的蛋白水平有关。     

盐霉素抑制人肺腺癌耐顺铂细胞株A549/DDP增殖及诱导凋亡的机制

目的: 探讨盐霉素对人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP增殖的抑制作用及其可能机制。方法: 采用MTT法检测盐霉素对A549/DDP细胞生长的抑制作用;流式细胞术检测盐霉素对A549/DDP细胞凋亡及线粒体膜电位(ΔΨ_m)的影响;比色法检测caspase-3、8和9活性;Western blotting分析细胞色素C、Bcl-2、Bax、β-catenin和磷酸化低密度脂蛋白受体相关蛋白6(p-LRP6)蛋白水平。结果: 盐霉素对A549/DDP细胞生长具有剂量依赖性抑制作用。0.2 μmol/L盐霉素作用于A549/DDP细胞,ΔΨ_m显著下降,而细胞内活性氧和Ca²⁺浓度在短期显著升高,胞浆细胞色素C蛋白水平、caspase-3、8和9酶活性均显著增加,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01);Bcl- 2 的表达下调,Bax 的表达明显增加,Bcl-2/Bax 比值显著降低。48 h时增殖抑制率为(34.61±1.97)%,细胞凋亡率为(18.74±2.08)%。盐霉素也减少A549/DDP细胞内β-catenin和p-LRP6蛋白水平。结论: 盐霉素通过抑制Wnt信号通路抑制A549/DDP细胞增殖,通过Bcl-2/Bax途径和线粒体凋亡途径诱导人肺腺癌耐药细胞株A549/DDP凋亡。     

参慈胶囊联合顺铂通过PI3K/AKT/mTOR信号通路逆转人肺腺癌顺铂耐药的机制研究

目的:探讨参慈胶囊联合顺铂是否通过PI3K/AKT/mTOR信号通路逆转接种人肺腺癌A549/DDP细胞的裸鼠体内的顺铂耐药。方法:建立裸鼠人肺腺癌移植瘤模型,随机分为对照组、参慈胶囊组、顺铂组和参慈胶囊+顺铂组。对照组予生理盐水,其余各组荷瘤裸鼠均用药21 d,断颈处死,取肿瘤组织,采用流式细胞术检测细胞周期与细胞凋亡;采用FQ-PCR技术检测A549/DDP肺癌组织PTEN、P-糖蛋白、PI3K、AKT和mTOR的mRNA表达情况。结果:参慈胶囊组、顺铂组和参慈胶囊+顺铂组与对照组比较,对人肺腺癌A549/DDP细胞的增殖均有抑制作用,其中参慈胶囊+顺铂组较其它治疗组能够进一步将人肺腺癌A549/DDP细胞阻滞于G_2/M期,促进细胞凋亡,增加PTEN的表达,抑制P-糖蛋白、PI3K、AKT和mTOR的表达。结论:参慈胶囊可能通过阻断PI3K/AKT/mTOR信号通路,促进PTEN的表达,或者抑制P-糖蛋白介导的耐药途径,增强裸鼠体内人肺腺癌A549/DDP耐药细胞对顺铂的敏感性。     

miR-134调控人肺腺癌细胞顺铂耐药

目的:探讨微小RNA-134(miR-134)在人肺腺癌细胞顺铂耐药中的作用及机制。方法:采用miRNA芯片筛选A549/CDDP和A549细胞差异表达miRNA,应用real-time PCR验证miR-134的表达。将miR-134模拟物和抑制物分别转染A549/CDDP和A549细胞,应用MTT法检测肺癌细胞对顺铂的敏感性。Western blot技术检测miR-134对叉头框蛋白M1(FOXM1)和多药耐药相关蛋白1(MRP1)表达的影响。结果:miRNA芯片显示,13种miRNAs在A549/CDDP和A549细胞中呈显著表达;其中,miR-134下调最显著。miR-134模拟物转染组A549/CDDP细胞对顺铂的敏感性较阴性对照组显著提高(P0.01),而miR-134抑制物转染组A549细胞对顺铂的敏感性较阴性对照组显著降低(P0.01)。FOXM1 siRNA能够有效抑制FOXM1蛋白表达,si-FOXM1转染组A549/CDDP细胞对顺铂的敏感性较阴性对照组显著提高(P0.01)。此外,Western blot结果显示miR-134能够抑制MRP1蛋白表达。结论:miR-134能够增加肺腺癌细胞对顺铂的敏感性,其机制可能与调控FOXM1和MRP1表达有关。     

体外肺癌上皮-间充质转化三维模型的建立及其对顺铂抵抗的机制研究

目的:探索转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导三维培养肺癌细胞发生上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)及对顺铂抵抗的相关机制.方法:用荧光倒置显微镜、扫描电镜及激光共聚焦观察人非小细胞肺癌细胞系95D在...     

IL-8促进A549细胞迁移过程中对线粒体融合与分裂基因表达的影响

目的:探讨IL-8作用下人肺腺癌A549细胞的迁移率变化以及线粒体融合与分裂基因的变化。方法:实验分为对照组和IL-8作用组。采用细胞划痕实验方法观察IL-8作用下细胞迁移能力的变化;Transwell小室检测细胞的迁移率;ELISA实验检测不同迁移率的细胞内源性IL-8的分泌量;Western blot法检测线粒体外膜蛋白Tom20及线粒体膜间腔蛋白细胞色素C(cytochrome C,Cyt C)的表达。RT-PCR检测线粒体融合基因Mfn1、Mfn2、OPA1及分裂基因Fis1、Drp1、MTP18的表达;Mito Tracker Red CMXRos染色激光共聚焦显微镜观察细胞中线粒体的形态。结果:肺腺癌A549细胞的迁移率高于SPC-A-1细胞,且内源性IL-8的分泌也高于SPC-A-1细胞。IL-8作用下A549细胞的迁移率增加,并存在时间依赖性。与对照组比较,IL-8作用组的A549细胞线粒体膜间腔蛋白Cyt C蛋白表达降低(P0.05),外膜蛋白Tom20表达增加(P0.05),线粒体外膜融合基因Mfn1及Mfn2表达增加(P0.05),内膜融合基因OPA1表达降低(P0.05),分裂基因Fis1无明显变化(P0.05),Drp1及MTP18增加(P0.05);激光共聚焦显微镜显示IL-8作用下线粒体形态发生变化,出现点状聚集。结论:A549细胞在IL-8作用下迁移率增加,可能与A549细胞线粒体融合与分裂基因变化有关。     

C‐Myc participates in β‐catenin–mediated drug resistance in A549/DDP lung adenocarcinoma cells

The aim of this study was to investigate c‐Myc and β‐catenin–mediated drug resistance in A549/DDP lung adenocarcinoma cells. Cisplatin sensitivity was determined by the 3‐(4,5‐dimethylthiazol‐2‐yl)‐2,5‐diphenyltetrazolium bromide (MTT) toxicity assay. β‐Catenin and c‐Myc protein expression following cisplatin treatment were determined using western blotting and immunofluorescence. Flow cytometry was performed to detect cell cycle and apoptosis in A549, A549/DDP, and c‐Myc small interfering RNA (siRNA)–transfected A549/DDP cells before and after treatment with different doses of cisplatin. The median inhibitory concentration (IC₅₀) in cisplatin‐treated A549 and A549/DDP cells was 5.769 ± 0.24 μmol/L and 28.373 ± 0.96 μmol/L, respectively; the cisplatin resistance of A549 cells was about five times that of A549/DDP cells. Endogenous β‐catenin and c‐Myc expression in A549/DDP cells were higher than that in A549 cells, and were upregulated in A549/DDP cells (p < 0.05) and downregulated in A549 cells after 48 h cisplatin treatment (p < 0.05). β‐catenin localization transferred from membrane/cytoplasmic/nuclear to cytoplasmic/nuclear, and c‐Myc localization transferred from cytoplasmic/nuclear to nuclear in both cell lines following cisplatin treatment. The rate of apoptosis increased in a dose‐dependent manner with cisplatin. After 48‐h transfection with c‐myc siRNA, A549/DDP cells were blocked in the S phase, and G0/G1‐phase cells increased. Simultaneously, the apoptotic rate was increased (p < 0.05) and the IC₅₀ decreased significantly (p < 0.05). C‐myc, the downstream target gene of β‐catenin, plays an important role in regulating cisplatin resistance in A549/DDP cells. C‐Myc siRNA improved the sensitivity of A549/DDP cells to cisplatin.     

丙泊酚对肝缺血再灌注大鼠肺损伤及PI3K/Akt通路的影响

 目的：通过研究丙泊酚对全肝缺血再灌注大鼠肺组织磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）信号通路活化的影响,探讨丙泊酚在全肝缺血再灌注肺损伤中的作用机制。方法：SD 大鼠66只,随机分成4组,假手术组(S组,n=6)、肝缺血再灌注组 (IR 组,n=24)、丙泊酚预处理组 (P 组,n=24)和丙泊酚预处理+PI3K阻断剂 wortmannin 组 (P+W组,n=12),IR 组和 P 组按再灌注 1 h、3 h、6 h和12 h 分为 4 个亚组,P+W 组按再灌注 3 h和6 h分为 2 个亚组。S 组仅解剖肝门,不结扎;IR 组采用结扎肝蒂全肝缺血 30 min、再灌注的方法建立大鼠肝缺血再灌注模型;P 组缺血前 10 min 经尾静脉缓慢注射负荷剂量的丙泊酚 20 mg·kg-1,再以 20 mg·kg-1·h-1的速度尾静脉持续泵注直至处死,余同IR 组;P+W组缺血前经尾静脉注射 PI3K 阻断剂 wortmannin 15 μg·kg-1,余同 P 组。各组于再灌注 1 h、3 h、6 h和12 h时处死大鼠取肺组织。采用 Western  blotting 检测大鼠肺组织中总 Akt（t-Akt）、磷酸化 Akt（p-Akt)及 Bcl-2 蛋白表达水平;用 Annexin V-FITC/PI 法检测肺细胞凋亡率。结果：与 S 组比较,IR 组、P 组和 P+W 组肺组织中 p-Akt和 Bcl-2蛋白表达水平和肺细胞凋亡率升高（P<0.05）;与 IR 组比较,P 组 p-Akt 和 Bcl-2 蛋白表达水平升高,肺细胞凋亡率降低（P<0.05）,P+W 组上述指标表达差异无统计学意义（P>0.05）;与 P 组比较,P+W 组 p-Akt 和 Bcl-2蛋白表达水平下降,肺细胞凋亡率升高（P<0.05）;各组中 t-Akt 蛋白表达差异无统计学意义（P>0.05）。结论：丙泊酚可以减轻大鼠肝缺血再灌注诱发的肺损伤,其机制可能与 PI3K/Akt 信号通路的激活进而减轻肺细胞凋亡有关。