钙离子通道部分介导机械牵张力引起的小鼠主动脉血管平滑肌细胞丝裂原活化蛋白激酶的激活

目的为了证实血管紧张素Ⅱ受体是否参与了主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)对机械牵张力信号的直接介导。方法(1)体外分离培养静息状态的小鼠主动脉VSMC给予血管紧张素Ⅱ刺激或血管紧张素Ⅱ受体特异性阻断剂坎地沙坦(candesar-tan)预处理后给予血管紧张素Ⅱ刺激,用Western blot法检测细胞内丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的活性,以证实VSMC血管紧张素Ⅱ受体的存在。(2)静息状态的VSMC给予机械牵张力刺激一定时间和强度,观察细胞内MAPK的活....     

机械牵张力和氧化型低密度脂蛋白协同激活大鼠血管平滑肌细胞LOX-1受体-ERK1/2信号通路

目的为证实α1-肾上腺素能受体(α1-AR)是否介导了机械牵张力和/或去甲肾上腺素(NE)对小鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMC)的细胞外信号调节激酶(ERK1/2)的协同激活并加速血管重构。方法静息培养的小鼠血管平滑肌细胞(VSMC)经有或无Prazosin(α1-AR抑制剂)预处理后,给予机械牵张力和/或NE刺激,Western Blotting检测ERK1/2的磷酸化水平,免疫荧光检测ki-67的表达(细胞增殖),RT-PCR检测细胞α1-AR亚型(α1A-,α1B-和α1D-AR)mRNA的表达。分别用三种亚型的α1-AR-siRNA预处理细胞,观察α1-AR各亚型基因沉默对机械牵张力诱导的VSMC ERK1/2磷酸化的影响。结果机械牵张力可分别上调α1B-和α1D-AR mRNA表达,但α1A-AR mRNA未检测到。机械牵张力和/或NE均可激活ERK1/2,引起ERK1/2磷酸化增加,而两种因素共同存在时ERK1/2激活更加明显;ki-67的表达呈现类似效应;这种由机械牵张力和/或NE激活的作用均可被Prazosin部分抑制。α1B-和α1D-AR-siRNA预处理可分别减少α1B-和α1D-AR ...     

糖基化终产物受体的活化

糖基化终产物受体（RAGE）属于细胞表面分子免疫球蛋白超家族成员,广泛存在于体内多种细胞表面．作为一种细胞信号转导受体与糖基化终产物（AGE）、β-淀粉样肽、双性素等多种配体相互作用,参与糖尿病并发症、阿尔茨海默病、炎症及肿瘤等病理过程。应用抗RAGE抗体或sRAGE阻断RAGE的活化可能为防治上述疾病提供新的靶点。     

氧化型低密度脂蛋白协同机械牵张力促进巨噬细胞ERK1/2活化

目的探讨机械牵张力、氧化型低密度脂蛋白单独或共同存在时对巨噬细胞ERK1/2磷酸化的影响。方法用墨汁染色法对体外培养的巨噬细胞株RAW 264.7进行鉴定;用硫酸铜氧化天然低密度脂蛋白获得氧化型低密度脂蛋白,并用琼脂糖凝胶电泳进行鉴定和定量。体外培养静息状态的巨噬细胞分别给予氧化型低密度脂蛋白、机械牵张力以及机械牵张力+氧化型低密度脂蛋白处理不同时间和强度,收集的细胞蛋白用免疫印迹法检测细胞内ERK1/2磷酸化水平。结果巨噬细胞株RAW 264.7可吞噬墨汁,镜下细胞内有墨汁斑块或墨汁颗粒存在,或者有淡染呈云雾状的黑色物质存在。硫酸铜可氧化天然低密度脂蛋白成氧化型低密度脂蛋白,琼脂糖凝胶电泳显示天然低密度脂蛋白和氧化型低密度脂蛋白泳道在血浆β脂蛋白处出现单一的条带,并且氧化型低密度脂蛋白的迁移率明显较天然低密度脂蛋白高。氧化型低密度脂蛋白和机械牵张力刺激可分别引起细胞内ERK1/2活性增加,呈时间和强度依赖性;与氧化型低密度脂蛋白组和机械牵张力组相比,氧化型低密度脂蛋白和机械牵张力共同处理可使ERK1/2磷酸化明显增加。结论氧化型低密度脂蛋白、机械牵张力单独作用均可激活细胞内ERK1/2,而两者共同存在时可协同促进细胞内ERK1/2信号。为高血压时巨噬细胞如何参与动脉粥样硬化形成的机制探讨提供有用资料。     

糖基化终产物及其受体在糖尿病血管并发症中的作用

高血糖记忆现象可能与糖尿病患者体内高水平的糖基化终产物（AGEs）有关,现就AGEs及其晚期糖基化终末产物受体（RAGE）在糖尿病血管并发症中的作用综述如下。     

晚期糖基化终产物受体在心血管疾病中的研究进展

晚期糖基化终产物受体属于细胞表面分子免疫球蛋白超家族中的一个新成员,可与多种配体结合后影响细胞内信号传导、刺激细胞因子释放等从而发挥其生物学效应。已知晚期糖基化终产物受体在糖尿病并发症、心血管疾病、神经系统疾病、肿瘤等疾病中起重要作用。现主要综述其在心血管疾病中的作用。     

糖基化终产物通过其受体诱导小鼠足细胞表达单核细胞趋化因子1

目的了解糖基化终产物(AGE)能否在体外诱导小鼠足细胞表达单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)以及其受体RAGE在其中的作用。方法以RT-PCR和ELISA的方法检测AGE、羰甲基化白蛋白(CML)、S100蛋白和RAGE中和抗体对小鼠足细胞的MCP-1的基因和蛋白质表达的影响。结果(1)未分化和已分化的足细胞都能表达RAGE。(2)AGE和CML以剂量依赖的方式诱导足细胞表达MCP-1mRNA。AGE和CML孵育8h诱导足细胞产生MCP-1蛋白[分别为(7.44±1.01,8.06±0.96)ng/L],明显高于牛血清白蛋白(BSA)孵育的足细胞[(3.77±0.39)ng/L,均P<0.05],而孵育24hMCP-1的浓度分别为(87.78±9.32,85.35±9.83和17.95±0.76)ng/L(均P<0.01)。(3)RAGE的另外一个配体,S100蛋白,也能以剂量依赖的方式诱导足细胞表达MCP-1mRNA。RAGE中和抗体完全阻断了AGE、CML和S100的作用。结论AGE和CML通过RAGE使诱导分化的足细胞表达MCP-1。     

小檗碱抑制机械牵张力诱导的小鼠血管平滑肌细胞PKCδ磷酸化及增殖/迁移

目的 观察机械牵张力(SS)是否通过激活PKCδ诱导小鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移,并进一步探究小檗碱(BBR)对其的影响及作用机制.方法 体外常规培养小鼠VSMC分为6组:阴性对照组(NC)、小檗碱组(BBR)、PKCδ抑制剂Sotrastaurin组(Sotras)、SS组、SS+BBR组和SS+Sotr...     

色素上皮衍生因子抑制糖基化终产物介导人肾小球系膜细胞糖基化终产物受体表达的研究

目的 观察色素上皮衍生因子（PEDF）、晚期糖基化终产物受体（RAGE）的表达及重组PEDF对RAGE表达的抑制作用,探讨PEDF与DN的关系及对DN的保护作用. 方法 采用糖化小牛血清白蛋白（AGE-BSA）体外诱导人肾小球系膜细胞（HRMCs）,Western blot及RT-PCR法分别检测RAGE、PEDF蛋白和mRNA表达. 结果 （1） AGE-BSA（100～400 mg/L）呈浓度梯度减少HRMCsPEDF表达（P＜0.01）,升高RAGE表达（P＜0.01）;（2）重组PEDF蛋白（5～40 nmol/L）呈浓度依赖性抑制AGE-BSA介导RAGE蛋白在HRMCs的表达（P＜0.05）. 结论 AGEs通过降低PEDF表达,增加RAGE表达参与DN的发生,PEDF可能通过抑制AGE-RAGE轴对DN发挥保护作用.     

机械牵张力和氧化型低密度脂蛋白协同激活大鼠血管平滑肌细胞LOX-1受体-ERK1/2信号通路

目的高血压和高血脂均可导致动脉粥样硬化(As)的发生,罹患两种疾病的患者,病情进展更快且预后更差。弄清高血压和高血脂共同的致病机制,对于As的防治有重要的指导意义。方法应用机械牵张力和/或氧化型低密度脂蛋白(oxidized lowdensity lipoprotein,ox-LDL)刺激静息培养的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC),Western Blotting检测ERK1/2的磷酸化水平;RT-PCR检测细胞血凝素样氧化型低密度脂蛋受体1(LOX-1)的表达;LOX-1-siRNA预处理细胞,观察LOX-1基因沉默对机械牵张力和/或ox-LDL处理的VSMC ERK1/2磷酸化的影响。结果机械牵张力和/或ox-LDL均可激活ERK1/2,引起明显的ERK1/2磷酸化增加,而两种因素共同存在时ERK1/2激活更加明显。ox-LDL和机械牵张力均可分别上调LOX-1 mRNA表达水平,前者在第3 h达到峰值,随后维持在一较高的水平;后者在第6 h达到峰值,随后逐渐下降,24 h恢复到基础水平。此外,LOX-1-siRNA预处理可以减少LOX-1 mRNA量,进而导致机械牵张力和/或ox-LDL诱导的ERK1/2...     

高血压机械力诱导血管平滑肌细胞结构与功能变化及其在血管疾病中的作用

血压升高产生的机械力在血管分化与发育、血管正常结构与功能维持以及血管病变过程中起决定作用,血脂和/或血糖异常升高可协同机械力作用加速血管重构及疾病发生发展。机械力可非特异性激活血管细胞所有跨膜蛋白分子,引起细胞内多信号通道分子(第二效应分子)同步活化。多通道信号分子在信号网络结点分子汇集,继而再散发,启动更多信号通路活化,实现信号的级联瀑布放大,导致细胞一系列病理生理学变化如细胞分化、迁移、炎症、表型变化、钙化、增殖、凋亡等,最终引起血管的结构与功能改变如动脉粥样硬化等,成为心脑血管疾病致死、致残的主要原因。本文对本课题组及国际同行相关研究进展,亦即血压升高产生的机械力对血管平滑肌细胞作用相关的血管重构做一简要综述。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ对糖基化终产物诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用

目的观察吡格列酮对糖基化终产物（AGEs）刺激下大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖的作用及对过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）基因及蛋白表达水平的影响,探讨PPARγ在AGEs诱导VSMCs增殖中的作用。方法（1）MTY法观察不同浓度、不同时间的AGEs对VSMCs增殖的影响及吡格列酮（1．0、10、100μmol／L）与AGEs共孵育对VSMCs增殖的干预作用。（2）用半定量逆转录聚合酶链反应测定VSMCs中PPARγ mRNA的表达。（3）用Western blot法检测PPARγ的蛋白表达。结果AGEs作用导致VSMCs增殖,AGEs抑制PPARγ mRNA和蛋白表达水平,这种抑制作用随着AGEs干预的时间延长和浓度的增加而增强（P〈0．05）。PPARγ激活剂吡格列酮通过增加PPARγ的表达,抑制AGEs诱导的VSMCs增殖。结论PPARγ表达的下降可能是糖尿病易患动脉粥样硬化的重要原因之一。     

1-磷酸鞘氨醇受体1参与晚期糖基化终产物引起的血管平滑肌细胞增殖和迁移

目的观察1-磷酸鞘氨醇受体1(S1PR1)在晚期糖基化终产物(AGE)引起的血管平滑肌细胞增殖和迁移中的作用。方法培养人脐动脉平滑肌细胞(HUASMC),葡萄糖与牛血清白蛋白(BSA)孵育法获得AGE-BSA,分为对照组、BSA组和AGE-BSA组,采用CCK-8实验检测平滑肌细胞增殖能力,采用细胞划痕和Transwell实验检测平滑肌细胞迁移能力,并进一步观察BSA和AGE-BSA在有或无S1PR1拮抗剂VPC23019/激动剂SEW2871预处理后的细胞增殖和迁移。结果与对照组比较,BSA和AGE-BSA均能诱导HUASMC增殖和迁移,AGE-BSA的作用比BSA更加显著(P0.05);S1PR1拮抗剂VPC23019可以明显抑制BSA和AGE-BSA诱导的HUASMC增殖和迁移;S1PR1激动剂SEW2871本身就可以促进HUASMC增殖和迁移,并且进一步促进BSA诱导的HUASMC增殖和迁移,而对AGE-BSA诱导的HUASMC增殖和迁移没有进一步的促进作用。结论血浆白蛋白本身对平滑肌细胞的增殖具有促进作用,糖基化修饰的白蛋白这一作用更加明显;S1PR1的激活参与了BSA和AGE-BSA促进平滑肌细胞增殖和迁移,AGE-BSA对S1PR1的激活作用更加显著。     

C反应蛋白对血管内皮细胞表达糖基化终产物受体和MCP-1的影响

目的研究C反应蛋白（C-RP）对内皮细胞（Ec）晚期糖基化终产物受体（RAGE）的影响,及RAGE在C-RP促动脉粥样硬化中的作用。方法在不同时间用不同剂量C-RP刺激EC。用Western blot检测CRP对RAGE蛋白表达的影响,RT-PCR研究RAGEmRNA的变化。利用特异的小分子干扰RNA（siRNA）敲低RAGE基因表达,通过ELISA方法检测各组培养液中单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）水平变化。结果与对照组相比,C-RP刺激可以增加EC的RAGE蛋白和mRNA的表达（P〈O．05）,并且旱浓度-时间依赖性。在干扰RAGE基因表达后,C-RP促MCP-1分泌作用消失。结论c反应蛋白可以增加糖基化终产物受体蛋白和mRNA表达水平,并通过RAGE促进MCP1水平的增加。     

晚期糖基化终末产物及其受体对血管平滑肌细胞作用机制的研究

晚期糖基化终末产物(AGEs)是导致糖尿病心血管并发症的重要影响因素。经过深入研究和探讨,发现AGEs对血管平滑肌细胞(VSMC)的病理生理学作用是其中关键之一。在此过程中,AGEs与存在于VSMC膜表面的受体(RAGE)结合,导致了一系列促炎症和促血栓形成反应。了解其中机制并发现拮抗抑制剂,有助于指导我们临床的预防和治疗。本文就AGEs及RAGE对VSMC作用机制予以综述。     

晚期糖基化终产物受体阻断剂FPS-ZM1减缓ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化进展的作用

目的 研究晚期糖基化终产物受体(receptor for advanced glycation end products,RAGE)阻断剂FPS-ZM1对ApoE-/-小鼠高脂喂养后动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)进展的干预作用.方法 ApoE-/-小鼠随机分成对照组(普通喂养),AS模型组(高脂喂...     

糖基化终产物对人血管内皮细胞过氧化体增殖物激活型受体γ基因表达的影响

为探讨糖基化终产物对人血管内皮细胞表达过氧化体增殖物激活型受体γ基因的影响 ,体外培养人血管内皮细胞株 (ECV30 4 ) ,分别用不同浓度葡萄糖 (0、2 0、5 0和 80mmol L)孵育的糖基化终产物修饰牛血清白蛋白(2 0 0mg L)、不同浓度的糖基化终产物修饰牛血清白蛋白 (5 0、10 0、2 0 0和 4 0 0mg L)干预 2 4h和葡萄糖浓度为 5 0mmol L孵育的糖基化终产物修饰牛血清白蛋白干预细胞 0、12、2 4、36、4 8和 72h ,逆转录聚合酶链反应检测细胞中过氧化体增殖物激活型受体γmRNA的表达水平。结果发现 ,葡萄糖浓度为 2 0、5 0和 80mmol L孵育的糖基化终产物修饰牛血清白蛋白及浓度为 5 0、10 0、2 0 0和 4 0 0mg L的糖基化终产物修饰牛血清白蛋白都减少过氧化体增殖物激活型受体γmRNA的表达 (P <0 .0 0 1) ,干预 12、2 4、36、4 8和 72h后过氧化体增殖物激活型受体γmRNA表达均较未干预组明显减少 (P <0 .0 0 1)。此结果提示 ,糖基化终产物可抑制人血管内皮细胞过氧化体增殖物激活型受体γ基因的表达。     

血管紧张素Ⅱ1型受体与高血压左心室重构

左心室重构是高血压病重要的病理生理过程，包括心肌细胞肥大和心肌间质重塑两个方面。血管紧张素Ⅱ及其它激素，细胞因子等共同组成的神经-内分泌-细胞因子网络对左心室重构的形成起着调控作用。在这个过程中，血管紧张素Ⅱ1型受体联系着细胞间和细胞内各种信息的传递和沟通，成为重构形成的桥梁；同时，该受体的遗传背景可能引起受体功能的变化并影响左心室重构的表型，对个体化治疗和预防有潜在意义。     

糖基化终产物对糖尿病大鼠肾脏血管紧张素转换酶2表达的调节

目的 观察糖基化终产物(AGEs)对糖尿病大鼠肾脏血管紧张素转换酶2(ACE2)表达的调节和意义.方法 诱导糖尿病模型后,立即给予干预组糖尿病大鼠氨基胍.第12周末检测尿白蛋白排泄率(UAER)、肾脏系膜外基质增生(MME),测定肾内ACE2、ACE蛋白表达,计算ACE2/ACE比值,并检测肾脏ACE2mRNA水平.结果 与糖尿病对照组相比,氨基胍干预组UAER及MME降低(P< 0.05),肾脏ACE2表达及ACE2/ACE比值增加(P< 0.05).结论 AGEs可下调糖尿病大鼠肾脏ACE2表达,减少ACE2/ACE比值,可能是导致糖尿病肾病的重要原因之一.