理中汤对Caco-2细胞PepT1转运功能的影响

目的:观察理中汤对Caco-2细胞肽转运载体(PepT1)转运二肽的能力及其蛋白、mRNA表达的影响。方法:Caco-2细胞融合后连续培养28 d后给予理中汤处理,并设立空白及cAMP抑制剂对照组,用放射性同位素示踪技术比较Caco-2细胞转运二肽化合物Glycyl-Sarcosine的能力,用Western blot法测定Caco-2细胞膜上PepT1蛋白的表达,荧光定量PCR法测定PepT1 mRNA(SLC15A1)的表达水平。结果:理中汤处理组Caco-2细胞15,30,60,120 min时点Glycyl-Sarcosine吸收转运累计量分别为(4.52±0.57),(6.34±0.57),(7.29±0.64),(8.23±0.67)μmol/孔,高于空白对照组(P<0.05),后者分别为(2.42±0.68),(3.15±0.76),(5.62±0.20),(6.54±0.54)μmol/孔;理中汤与Rp-8-Br-cAMP合用组15,30,120 min时点分别为(2.68±0.46),(4.13±0.46),(6.73±0.43)μmol/孔,明显低于相应时点单用理中汤组(P<0.05);理中汤处理后Caco-2细胞膜PepT1蛋白表达增加,PepT1表达与内参GAPDH表达灰度比值理中汤组为(0.326±0.031),高于空白对照组(0.220±0.019)(P<0.01);理中汤对Caco-2细胞SLC15A1 mRNA表达未见明显作用,但与cAMP抑制剂合用,理中汤能逆转Rp-8-Br-cAMP下调Caco-2细胞SLC15A1 mRNA表达的作用。结论:理中汤具有促进正常培养Caco-2细胞转运二肽化合物Glycyl-Sarcosine的作用,该作用可能与其促进胞浆中PepT1蛋白嵌入胞膜中发挥转运二肽的功能有关,该过程调控与胞内第二信使cAMP有一定的关系。     

6-姜酚对Caco-2细胞PepT1转运功能的影响

目的:观察6-姜酚对Caco-2细胞肽转运载体PepT1转运二肽的能力及其蛋白、mRNA表达的影响。方法:Caco-2细胞融合后连续培养28 d后给予6-姜酚处理,并设立正常对照组及cAMP抑制剂对照组,用放射性同位素示踪技术比较Caco-2细胞转运二肽化合物Glycyl-Sarcosine的能力,采用Western blot方法测定Caco-2细胞膜上PepT1蛋白的表达,荧光定量PCR方法测定PepT1 mRNA(SLC15A1)的表达水平。结果:6-姜酚处理组Caco-2细胞60,120 min时点Glycyl-Sarcosine吸收转运累计量分别为(6.84±0.46),(8.61±0.54)μmol/孔,高于正常对照组(P<0.05),后者分别为(5.62±0.20)、(6.54±0.54)μmol/孔;6-姜酚与Rp-8-Br-cAMP合用组120 min时点为(6.92±0.67)μmol/孔,明显低于相应时点单用6-姜酚组(P<0.05);6-姜酚处理后Caco-2细胞膜PepT1蛋白表达增加,PepT1表达与内参GAPDH表达灰度比值6-姜酚组为(0.317±0.022),高于空白对照组(0.220±0.019)(P<0.01);荧光定量PCR结果,6-姜酚能上调Caco-2细胞SLC15A1 mRNA表达,但与cAMP抑制剂合用后该抑制作用被阻断。结论:6-姜酚具有促进正常培养Caco-2细胞转运二肽化合物Glycyl-Sarcosine的作用,该作用可能与上调PepT1蛋白及mRNA表达有关,该过程调控与胞内第二信使cAMP有一定的关系。     

理中汤、人参皂苷Rg1、6-姜酚对Caco-2细胞PepT1转运功能影响的比较

目的:观察比较理中汤、人参皂苷Rg1、6-姜酚对Caco-2细胞肽转运载体PepT1转运二肽的能力及其蛋白、mRNA表达的影响。方法:Caco-2细胞融合后连续培养28d后分别给予理中汤、人参皂苷Rg1、6-姜酚处理,并设立正常对照组及cAMP抑制剂对照组,用放射性同位素示踪技术比较Caco-2细胞转运二肽化合物Glycyl-Sarcosine的能力,采用westernblot方法测定Caco-2细胞膜上PepT1蛋白的表达,荧光定量PCR方法测定PepT1mRNA(SLC15A1)的表达水平。结果:理中汤、人参皂苷Rg1及6-姜酚均在不同程度上表现为促进Caco-2细胞转运Glycyl-Sarcosine的作用;Caco-2细胞经理中汤/人参皂苷Rg1/6-姜酚处理24h后,细胞膜PepT1蛋白表达水平均明显增高。6-姜酚能明显上调Caco-2细胞SLC15A1表达,人参皂苷对Caco-2细胞SLC15A1表达的作用表现为下调,理中汤对Caco-2细胞SLC15A1表达作用不明显。且理中汤、人参皂苷Rg1、6-姜酚三者作用各有特点。结论:理中汤及其成分人参皂苷Rg1、6-姜酚具有促进正常培养Caco-2细胞转运二肽化合物Glycyl-Sarcosine的作用,该过程调控与胞内第二信使cAMP有一定的关系。     

理中汤对脾阳虚大鼠模型PepT1及其转运功能的影响

目的 观察理中汤对脾阳虚模型大鼠小肠上皮肽转运载体蛋白1对二肽转运功能改变、肽转运载体PepT1及其mRNA表达变化的影响.方法 采用利血平复合因素造模法建立脾阳虚大鼠模型,以头孢氨苄做为PepT1的转运底物,通过反相高效液相法(RP-HPLC)测定其血药浓度来反映脾阳虚大鼠小肠上皮细胞PepT1的吸收转运功能,RT-PCR:测定大鼠小肠黏膜PepT1 mRNA表达,免疫组织化学方法观察大鼠小肠PeDT1蛋白表达情况,同时用酶联免疫法测定小肠黏膜组织cAMP含量.结果 模型组大鼠血清中cefalexin浓度明显高于正常组,经理中汤治疗后,大鼠cefalexin血药浓度与正常对照组比较无显著性差异;模型组大鼠PeDT1蛋白表达明显上调(P＜0.05),理中汤治疗组大鼠的PepT1蛋白表达与正常组比较未见明显差异;脾阳虚模型大鼠PepT1 mRNA表达水平较正常组明显下调(P＜0.05),经理中汤治疗后,其下调趋势被逆转,与正常组比较未见明显差异;模型组大鼠小肠黏膜cAMP浓度较之于正常组,明显降低,经过理中汤治疗恢复接近正常组水平.结论 脾阳虚模型大鼠小肠黏膜PepT1转运功能增强,蛋白表达上调,理中汤治疗可逆向调节这种改变.     

柴胡皂苷对芍药苷在Caco-2细胞模型中 吸收转运的影响

目的:研究柴胡皂苷a,d对芍药苷在Caco-2细胞模型中转运的影响。方法:用超高压液相法测定药物浓度,计算表观渗透系数,比较不同浓度芍药苷溶液、及芍药苷配伍柴胡皂苷a,d后在Caco-2细胞模型中双向转运的差别;电阻仪测定电阻,比较试验前后细胞电阻的差异。结果:芍药苷通过Caco-2细胞单层的转运量4 h内随时间延长呈线性增大,其吸收渗透系数较小,浓度为20,50,100μmol.L-1时,吸收渗透系数分别为(0.98±0.10)×10-6,(0.92±0.09)×10-6,(0.89±0.04)×10-6cm.s-1;芍药苷与柴胡皂苷a,d配伍后,吸收渗透系数与单体比较分别增加了2.37,2.54倍,且试验后细胞电阻有显著降低。结论:柴胡皂苷a,d能促进芍药苷的肠道吸收,可能与柴胡皂苷能打开Caco-2细胞间的紧密连接有关。     

四物汤对Caco-2细胞P-糖蛋白功能和表达的影响

研究四物汤对Caco-2细胞P-糖蛋白(P-gp)功能和表达的影响。采用实时定量聚合酶链式反应(Q-PCR)分析Caco-2细胞上MDR1基因mRNA的表达量;采用流式细胞仪检测经四物汤水煎液处理后Caco-2细胞对罗丹明123摄取量的影响,以评价P-gp的外排功能;采用Western blotting法检测四物汤水煎液对Caco-2细胞P-gp蛋白表达量的影响。与空白对照组比较,四物汤水煎液3.3,5.0,10.0 g·L^-1孵育Caco-2细胞24,48,72 h对MDR1基因mRNA的表达量具有上调作用,表明四物汤水煎液对MDR1具有诱导作用;四物汤水煎液作用于Caco-2细胞48 h后,细胞内罗丹明123的摄取量分别减弱了16.6%,22.1%(P<0.05),45.4%(P<0.01),提示长期应用四物汤水煎液,可增强Caco-2细胞P-gp的外排功能;四物汤水煎液孵育Caco-2细胞48 h后,上调了Caco-2细胞膜上P-gp蛋白表达量,表明四物汤水煎液对P-gp的蛋白表达量具有诱导作用。     

小柴胡汤对Caco-2细胞MDR1 mRNA转录量及药物转运活性的影响

曾报道，小柴胡汤可增加细胞因子和细胞色素P450 mRNA转录量。为了明确小柴胡汤对与药物吸收密切相关的MDR1（P-gp）的影响，以Caco-2细胞探讨了MDR1 mRNA转录量及MDR1转运活性。     

Caco-2细胞模型考察不同转运蛋白对瑞香素口服吸收的影响

目的:研究在Caco-2细胞模型中不同转运蛋白对瑞香素吸收的影响。方法:采用Caco-2细胞单层模型研究转运蛋白对瑞香素的吸收影响。采用HPLC法检测药物浓度,计算其表观渗透系数,考察不同转运蛋白抑制剂对瑞香素吸收的影响。结果:在10μg/ml的瑞香素溶液中加入P-gp抑制剂维拉帕米50μmol后,瑞香素PBA/PAB均无显著性差异(P>0.05);加入MRP2抑制剂环孢素10μmol后,PBA/PAB降低了10%;加入BCRP抑制剂潘生丁25μmol后,PBA/PAB降低了29%。结论:在瑞香素的跨膜转运的过程中不存在肠道转运蛋白P-gp的作用,但可能存在MRP2、BCRP的外排。     

Caco-2细胞模型研究川芎提取物中阿魏酸转运机制及白芷提取物对其转运的影响

目的:利用人源结肠腺癌细胞系Caco-2细胞单层模型,研究了川芎提取物中阿魏酸的吸收转运机制,以及白芷提取物对其吸收转运的影响。方法:建立人源结肠腺癌细胞系Caco-2细胞模型,利用此模型研究时间、药物浓度对川芎提取物中阿魏酸的转运影响与阿魏酸的双向转运特征;研究川芎中阿魏酸在有或无P-gp、MRP蛋白专属抑制剂存在时阿魏酸在Caco-2细胞模型的双向转运情况;并考察白芷提取物对川芎中阿魏酸吸收转运的影响。结果:阿魏酸在3h范围内转运速率保持恒定,在浓度范围(28～336mg/ml)内浓度与转运速率呈线性相关;加入P-gp和MRP蛋白抑制剂后,阿魏酸的AP侧转运增加,BL侧转运降低,PDR值下降;加入白芷有效成分(香豆素:0.45mg/ml、挥发油:0.72μl/ml、香豆素+挥发油:0.45mg/ml香豆素+0.72μl/ml挥发油)后阿魏酸的转运显著提高。结论:阿魏酸的转运过程可能为被动转运兼存在载体转运,阿魏酸的转运同时受P-gp和MRP外排影响,MRP影响较为明显,白芷有效成分对阿魏酸的转运有促进作用。     

乌头碱在Caco-2细胞模型上的转运行为

目的:研究乌头碱在Caco-2细胞模型上的转运行为。方法:采用MTT法确定乌头碱在Caco-2细胞转运过程中的安全浓度范围,以乌头碱累积转运量及表观渗透系数Papp为指标,采用高效液相色谱法对成分进行检测,考察不同浓度、不同孵育时间乌头碱在Caco-2细胞模型上的双向转运。结果:乌头碱累积转运量与孵育时间、给药浓度呈正相关,不同浓度乌头碱Papp保持恒定,无统计学差异,且外排作用明显强于吸收,外排比接近1.5,Papp约为1×10-5cm·s-1。结论:乌头碱以被动转运为主,且可能存在外排蛋白的参与,为吸收良好的一类药物。     

姜黄对Caco-2细胞结合反应的影响

以人结肠癌培养细胞Caco-2，探讨了功能性食品姜黄对人体消化道的药物及异物结合反应的影响。     

芍药苷对乌头碱在Caco-2细胞模型上转运行为的影响研究

目的:研究芍药苷对乌头碱在Caco-2细胞模型转运行为的影响。方法:以乌头碱累积转运量及表观渗透系数Papp值为指标,采用高效液相色谱法对乌头碱含量进行检测,考察不同浓度、不同孵育时间、不同方向乌头碱在Caco-2细胞上的转运行为,以及与芍药苷不同配伍后转运行为的变化,并考察P-gp抑制剂存在与否对乌头碱转运行为的影响。结果:乌头碱累积转运量与给药浓度、孵育时间呈正相关,不同浓度乌头碱Papp值均大于1×10-6cm·s-1,且保持恒定,无统计学意义,但外排作用明显强于吸收,外排比接近1.5。在P-gp抑制剂维拉帕米存在条件下乌头碱转运量显著增加。当乌头碱与芍药苷配伍比例为1∶60时,乌头碱转运量显著减小。结论:乌头碱为吸收良好的一类药物,以被动转运为主,但仍存在外排蛋白P-gp的参与。当芍药苷配伍乌头碱达到一定比例时,对乌头碱的肠吸收具有显著的抑制作用。     

羟基红花黄色素A的Caco-2细胞摄取转运研究

 目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)的胃肠吸收转运机制。方法采用Caco-2细胞模型考察孵育时间、介质pH、药物浓度及抑制剂(环孢菌素A和叠氮钠)对羟基红花黄色素A摄取转运的影响,并分析HSYA灌胃给药后在大鼠尿及粪中的累积排泄。结果HSYA的摄取符合被动扩散过程,pH7.8环境下药物的细胞摄取量[(1.05±0.045)mg·g^-1]低于pH5.4[(1.24±0.09)mg·g^-1](P<0.05),其在Caco-2单细胞层的表观透过系数(Papp)为(2.16±1.21)×10^-8cm·s^-1,加入环孢菌素A和叠氮钠后其Papp显著提高(P<0.05),分别为(47.92±17.8)×10^-8和(12.53±4.55)×10^-8cm·s^-1。HSYA大鼠灌胃给药(5.6mg·kg^-1)后31h,其尿和粪中的累积排泄量分别为给药剂量的0.74%和28.57%。结论HSYA的吸收基本符合被动扩散过程并有P-gp的参与,其黏膜透过性较差,碱性环境相对不利于药物的吸收。HSYA口服后的胃肠吸收较差,大量的药物被排出体外或在胃肠道内被代谢转化。     

游离蒽醌在人肠Caco-2细胞模型的转运

目的：研究1，8-二羟基蒽醌（1，8-dihydroxyanthraquinone，DQ）、大黄酚（chrysophanol，CP）、大黄素（emodin，EN）、大黄酸（rhein，RN）、芦荟大黄素（aloe—emodin，AE）和ω-羟基大黄素（citreorosein，CN）在人肠Caco-2细胞单层模型的转运。方法：以人源Caco-2细胞单层为药物的肠吸收转运模型，将DQ、CP、EN、RN、AE和CN与其共温孵进行吸收转运，高效液相色谱法测定吸收转运量。结果：DQ、CP、EN、RN、AE和CN从顶侧（肠腔侧）向底侧（体循环侧）吸收转运的表观渗透系数（Papp）值分别为（2．16±0．38）×10^-6、（3．00±0．09）×10^-7、（1．99±0．94）×10^-6、（4．58±0．20）×10^-6、（6.24±0．19）×10^-6和（7．34±0.61）×10^-6cm·s^-1；从底侧向顶侧吸收转运的Papp分别为（3．20±0．10）×10^-6，（4．50±0．02）×10^-7，（2．22±0．62）×10^-6，（4．94±0．39）×10^-6，（2．87±0．18）×10^-6和（6．80±0．37）×10^-6cm·s^-1。DQ、EN、RN、AE和CN的Papp值比在Caco-2细胞单层模型上呈被动扩散机制、吸收良好的阳性对照化合物普萘洛尔的Papp值[（6．30±0．26）×10～cm·s^-1]小10倍，但比呈被动扩散机制、吸收不良的阳性对照化合物阿替洛尔的Papp值（〈1×10^-7cm·s^-1）大10倍。CP的Papp值与阿替洛尔的Papp值基本上在同一数量级。ATP耗竭剂碘乙酰胺不影响AE在两个方向上的转运。结论：DQ、CP、EN、RN、AE和CN在人源Caco-2细胞单层模型的吸收转运机制为被动扩散；DQ、EN、RN、AE和CN属于中等吸收的化合物，CP属于吸收不良的化合物。     

香附烯酮在Caco-2细胞模型中的转运机制分析

目的:考察香附烯酮在Caco-2细胞模型中的转运机制,为香附的临床应用提供实验依据。方法:通过噻唑蓝(MTT)比色法考察不同质量浓度香附烯酮对Caco-2细胞的毒性,以确定转运试验的给药浓度。以香附烯酮表观渗透系数(P_(app))和累积转运量为评价指标,采用液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)测定香附烯酮的含量,色谱条件为流动相乙腈(A)-水(B)梯度洗脱(0～1.5 min,35%A;1.5～2 min,35%～90%A;2～4 min,90%A;4～4.1 min,90%～35%A;4.1～8 min,35%A),流速0.3 m L·min~(-1),进样量1μL,柱温30℃;质谱条件为电喷雾离子源(ESI),正离子模式,香附烯酮及内标物蛇床子素的检测离子分别为m/z 219.2～110.9,m/z 245.0～189.0。探讨了香附烯酮质量浓度、给药时间、乙二胺四乙酸(EDTA)及P-糖蛋白(P-gp)抑制剂对香附烯酮在体外细胞模型上跨膜转运的影响。结果:香附烯酮质量浓度处于3～90 mg·L~(-1)时,孵育4 h内对Caco-2细胞没有明显毒性。香附烯酮在Caco-2细胞模型中的转运存在一定的浓度及时间依赖性,其P_(app)1×10~(-6)cm·s~(-1),说明药物吸收良好,外排率处于0.5～1.5;加入细胞旁路转运抑制剂EDTA及P-gp转运体抑制剂维拉帕米后,双向P_(app)没有显著性差异。结论:香附烯酮在Caco-2细胞模型转运机制主要是被动扩散,细胞旁路转运及P-gp不参与其转运。     

巴戟天中有效成分在Caco-2细胞模型中的吸收转运

目的：研究巴戟天中的有效成分水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸和耐斯糖在人源结肠癌细胞Caco-2单层模型中的吸收特性。方法：通过细胞培养技术建立Caco-2细胞单层模型,以细胞形态学特征、细胞跨膜电阻等指标验证和筛选模型。考察不同pH、不同质量浓度的水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸和耐斯糖对Caco-2细胞活力的影响,以确定给药pH和质量浓度。通过Caco-2细胞转运实验探究药物质量浓度、作用时间与P-糖蛋白抑制剂维拉帕米对水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸和耐斯糖吸收转运的影响。采用高效液相色谱法(HPLC)测定水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸和耐斯糖的累积转运量。结果：水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸和耐斯糖在Caco-2细胞单层模型中吸收良好,三者低质量浓度的双侧表观渗透系数(P_app)明显大于中、高质量浓度;加入盐酸维拉帕米后,三者的P_app变化不大,说明这3个成分的小肠吸收不需要载体。去乙酰车叶草苷酸的液相色谱图中存在少量水晶兰苷,说明去乙酰车叶草苷酸存在首过效应。结论：巴戟天中水晶兰苷、去乙酰车叶草苷酸和耐斯糖3个特征性成分在跨膜转运过程中均以被动转运为主,且3...     

蛇床子素在Caco-2细胞模型中的转运机制研究

 目的 研究蛇床子素在 Caco-2 细胞模型中的转运机制。方法 通过研究蛇床子素在 Caco-2 细胞模型中的转运,考察蛇床子素浓度、PEG600、P-gp抑制剂维拉帕米（verapamil及温度对蛇床子素转运的影响。结果 随着蛇床子素溶液浓度和温度的升高,蛇床子素在Caco-2 细胞中 AP-BL 的转运量增加;PEG600对蛇床子素在 Caco-2 细胞中的 AP-BL 的转运量有显著增加;P-gp 抑制剂维拉帕米对蛇床子素在 Caco-2 细胞中转运的表观通透系数 PAP 和 PBL 无显著影响。结论 蛇床子素表观通透系数 PAP大于10×10-6 cm·s-1,较易被 Caco-2 细胞吸收,但由于3个浓度蛇床子素溶液的PAP 和 PBL比值无明显变化、P-gp 抑制剂对 PAP 和 PBL 无明显影响及转运的活化能较低(17.31 kJ·mol-1,因此,蛇床子素在 Caco-2 细胞模型中的转运机制主要是被动转运。     

替米沙坦在Caco-2细胞模型中的体外转运研究

 目的研究替米沙坦(telmisartan,TMS)在Caco-2细胞中的跨膜转运特征。方法采用体外培养的人小肠上皮细胞Caco-2模型对TMS的跨膜转运进行研究。考察了浓度、pH、P-糖蛋白(P-glyprotein,P-gp)抑制剂对TMS跨膜转运的影响。结果TMS在Caco-2细胞中的转运存在外排作用,并且外排作用随着浓度的增加趋于饱和;另外TMS的吸收转运随pH值的增加而减少。加入P-糖蛋白抑制剂环孢素A和胺碘酮后,P_ratio从3.5分别下降到1.2和0.9,加入前后有极显著性差异(P<0.01)。结论P-gp参与了TMS的跨膜转运,从而从吸收机制上初步解释了P-gp的外排作用可能是TMS生物利用度低,个体差异大的原因。     

痛泻要方及防风对肠上皮Caco-2细胞屏障功能的影响

目的:研究痛泻要方及防风对肠上皮Caco-2细胞屏障功能的影响。方法:应用蛋白酶激活受体2(PAR-2)激动剂(胰蛋白酶)诱导Caco-2细胞建立肠上皮细胞屏障功能障碍模型,以跨膜电阻(TEER)和荧光黄透过率为指标,评价其屏障通透性。分别给予含痛泻要方原方、痛泻要方无防风方、防风的血清研究药物对Caco-2细胞屏障通透性的影响。结果:痛泻要方和防风均显著升高Caco-2细胞屏障的TEER值,降低细胞屏障荧光黄透过率(P0.05),痛泻要方无防风方对上述指标无显著影响(P0.05)。结论:痛泻要方及防风对肠上皮Caco-2细胞屏障起保护作用。     

甘草黄酮类成分对Caco-2细胞P-糖蛋白功能和表达的影响

目的 研究甘草黄酮类成分对Caco-2细胞P-糖蛋白（P-gp）功能和表达的影响,探讨甘草解毒的作用机制。方法 采用流式细胞仪检测经甘草黄酮类成分处理后Caco-2细胞对罗丹明123摄取量的影响,以评价P-gp的外排功能;采用Western blotting法检测甘草黄酮类成分对Caco-2细胞P-gp表达的影响。结果 与对照组相比,甘草总黄酮5、10、50、100 μg/mL作用Caco-2细胞1 h后,使细胞内罗丹明123的荧光强度分别减少61.1%、56.3%、49.2%、45.4%;甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素、芹糖基甘草苷、芹糖基异甘草苷在相同质量浓度,使细胞内罗丹明123的荧光强度减少了19.3%～37.9%。与对照组相比,甘草总黄酮10～400 μg/mL给药后72 h,使Caco-2细胞膜上P-gp的表达显著增加（P＜0.01）;甘草苷、异甘草苷、甘草素、芹糖基甘草苷5～400 μmol/L,异甘草素、芹糖基异甘草苷10～400 μmol/L对此也有显著作用（P＜0.01）。结论 甘草黄酮类成分增强Caco-2细胞P-gp的功能,上调P-gp的表达,促进细胞内有毒物质的外排,减少有毒物质在肠道的吸收,这可能是甘草配伍其他中药的解毒机制之一。