转录因子E2F-1对裸鼠人胃癌细胞移植瘤生长的影响

目的 观察含有转录因子E2F-1的重组逆转录病毒载体(pLXSN-E2F-1)对裸鼠人胃癌细胞移植瘤E2F-1基因的表达和肿瘤生长的影响.方法 建立人胃癌MCC-803细胞裸鼠移植肿瘤模型,随机分为pLXSN-E2F-1组、pLXSN组、生理盐水组.隔天向各组分别注射相应药物0.2 ml,共7次,同时测量各组肿瘤体积.15 d后处死裸鼠,显微镜下观察移植瘤组织形态变化,用免疫组织化学法、半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot技术检测移植瘤中E2F-1基因的表达,脱氧核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(TUNEL)检测肿瘤细胞凋亡指数.结果 与生理盐水组和pLXSN组比较.pLXSN-E2F-1组肿瘤生长速度明显减慢(P<0.05);病理学观察确认所取组织为恶性肿瘤组织;免疫组织化学结果 显示pLXSN-E2F-1组的肿瘤细胞细胞质内有较多棕褐色颗粒沉着,pLXSN组和生理盐水组肿瘤细胞细胞质内均未见或偶见棕褐色颗粒沉着;半定量RT-PCR和Western blot结果 均显示pLXSN-E2F-1组E2F-1表达较pLXSN组和生理盐水组明显上调(P<0.05);pLXSN-E2F-1组的凋亡指数(15.4±4.1)%,显著高于pLXSN组(8.3±2.2)%和生理盐水组(8.1±2.3)%(P<0.05).结论 逆转录病毒载体pLXSN-E2F-1瘤内注射可抑制人胃癌裸鼠移植瘤的生长.     

贝伐单抗对裸鼠胃癌移植瘤血管内皮细胞生长因子和核转录因子Sp1表达的影响

目的 观察贝伐单抗对裸鼠胃癌移植瘤生长以及对肿瘤血管内皮细胞生长因子（VEGF）和核转录因子Sp1表达的影响.方法 建立SGC-7901胃癌细胞株裸鼠移植瘤模型,成瘤后分别使用贝伐单抗（BVZ组）和磷酸盐缓冲液（PBS组）治疗4周.绘制肿瘤生长曲线,免疫组织化学染色技术（IHC）检测移植瘤Ki-67、CD34、VEGF及Sp1表达情况,TUNEL法检测肿瘤细胞凋亡.结果 相比PBS组,BVZ组肿瘤生长速度明显减缓（P〈0.05）,肿瘤细胞增殖能力下降,凋亡指数明显增加[（5.3±1.8）％比（16.7±6.7）％,P＜0.01],肿瘤组织内微血管密度下降（4.0±1.0比16.3±1.5,P＜0.001）.贝伐单抗能减少肿瘤内VEGF表达,但对核转录因子Sp1表达水平没有明显影响.结论 贝伐单抗可有效抑制裸鼠胃癌移植瘤生长,减少肿瘤内微血管密度和VEGF表达,但不引起Sp1表达的明显改变.     

茯苓对裸鼠SGC-7901胃癌细胞移植瘤的影响

目的研究中药茯苓对SGC-7901胃癌细胞株裸鼠体内移植瘤的影响。方法 1将10只裸鼠建立移植瘤模型后,随机分为空白对照组和茯苓组,每组5只,分别给予生理盐水和茯苓灌胃(0.5 mL),连续灌胃32 d。每间隔3 d计算移植瘤的体积,绘制移植瘤生长曲线。至第32天时处死裸鼠,称取瘤体重量,计算抑瘤率;同时采用免疫组化染色方法检测2组裸鼠移植瘤组织中B细胞淋巴瘤基因-2(B cell lymphoma 2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、胱天蛋白酶-9(Caspase-9)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达。2制备含茯苓血清。将SGC-7901胃癌细胞株分为2组,空白对照组加入含生理盐水血清,茯苓组加入含茯苓血清的培养液培养。分别于处理后24 h和48 h行Western-blot法检测胃癌细胞中Bcl-2及Bax的表达。结果第32天时,空白对照组〔(2 652.17±225.01)mm3和(2.48±0.21)g〕裸鼠的移植瘤体积和质量均大于茯苓组〔(1 247.56±277.23)mm~3和(1.28±0.28)g〕,差异均具有统计学意义(P0.050)。茯苓的抑瘤率为48.39%。免疫组化检测结果显示,茯苓组裸鼠移植瘤组织中Bcl-2〔(4.20±1.10)分和(8.00±1.20)分〕和VEGF〔(3.80±0.45)分和(7.80±1.10)分〕的表达均低于空白对照组(P0.050),而Bax〔(7.40±1.34)分和(3.00±0.71)分〕、Caspase-3〔(6.60±1.34)分和(2.60±0.55)分〕及Caspase-9〔(7.20±1.79)分和(4.00±1.22)分〕的表达均高于空白对照组(P0.050)。与空白对照组(1.72±0.03)比较,24 h(0.96±0.04)和48 h(0.77±0.04)时茯苓组Bcl-2的表达水平均较高(P0.050),且茯苓组48 h时Bcl-2的表达水平高于24 h时(P0.050);与空白对照组(0.15±0.01)比较,24 h时(0.19±0)茯苓组Bax的表达水平变化不明显(P0.050),但48 h时(0.55±0.01)Bax的表达水平高于空白对照组和24 h茯苓组(P0.050)。结论茯苓能够抑制裸鼠移植瘤的生长,其机理可能与线粒体凋亡通路及抑制VEGF的表达有关。     

GA反义基因对裸鼠胃癌移植瘤细胞凋亡的影响

目的研究反义核酸技术封闭谷氨酰胺酶（GA）基因对裸鼠体内胃癌细胞凋亡作用的影响。方法将携带GA反义基因的质粒转染胃癌细胞SGC-7901，并将成功转染的胃癌细胞接种于裸鼠皮下，获得裸鼠胃癌移植瘤模型，通过TUNEL技术检测胃癌细胞凋亡的凋亡指数；RT-PCR技术检测移植瘤细胞内GAmRNA的含量。结果GA反义基因质粒载体成功转染胃癌细胞后，肿瘤生长速度减慢，癌细胞凋亡增加，肿瘤细胞内GAmRNA的含量减少。结论GA反义基因可抑制GA基因的表达，明显促进胃癌细胞凋亡。     

核转录因子-kB圈套寡核苷酸对肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的 观察核转录因子-kB(nuclear factor-kappa B,NF-kB)圈套寡核苷酸抑制NF-kB活性后,肝癌HepG2细胞凋亡情况及其对环格列酮敏感性的变化.方法 将NF-kB圈套寡核苷酸转染肝癌HepG2细胞,检测NF-kB活性以及凋亡相关蛋白Bcl-2和Fas的变化.以100 umol/L的环格列酮处理转染和末转染的细胞1-4 d,观察肝癌HepG2细胞的生长曲线和细胞周期分布情况.结果 转染后的肝癌HepG2细胞NF-kB活性明显下降,Bcl-2表达减少和Fas表达增加,并且环格列酮抑制肝癌HepG2细胞增殖的作用增强,更多的细胞被阻滞于C1/G0期.结论 NF-kB圈套寡核苷酸可促进肝癌HepG2细胞的凋亡,增加肝癌HepG2细胞对环格列酮的敏感性,可能与NF-kB圈套寡核苷酸通过下调NF-kB的活性使凋亡蛋白Fas表达增加和凋亡抑制蛋白Bcl-2表达减少有关.     

survivin siRNA对裸鼠乳腺癌细胞移植瘤微血管生成的影响

目的：探讨含survivin siRNA的PcDNA3-siRNA对裸鼠人乳腺癌MCF-7细胞移植瘤微血管生成的影响。 方法：制作裸鼠MCF-7细胞移植瘤模型, 然后随机分为PcDNA3-siRNA处理组,PcDNA3处理组,空白对照组, 成瘤后分别将PcDNA3-siRNA质粒,、PcDNA3空质粒,生理盐水注入裸鼠MCF-7移植瘤中。采用RT-PCR及Western blot半定量法检测各组移植瘤组织中survivin mRNA及survivin蛋白的表达； SP免疫组化法检测各组移植瘤中的微血管密度（MVD）。 结果：PcDNA3-siRNA 组survivin mRNA及survivin蛋白的表达量较PcDNA3组及空白对照组明显降低（P﹤0.05）, 且PcDNA3-siRNA 组MVD明显低于PcDNA3组及空白对照组（P﹤0.05）； PcDNA3组与空白对照组survivin mRNA,survivin蛋白及MVD值差异无统计学意义（P﹥0.05）。 结论：PcDNA3-siRNA可抑制裸鼠MCF-7细胞移植瘤survivin的表达, 而且对移植瘤的微血管生成具有明显的抑制作用。     

塞来昔布对膀胱癌裸鼠皮下移植瘤及移植瘤细胞凋亡的影响

目的探讨环氧化酶-2(COX-2)抑制剂塞来昔布对膀胱癌裸鼠皮下移植瘤及移植瘤细胞凋亡的影响.方法6周龄BALB/c裸鼠8只,建立膀胱癌裸鼠皮下移植瘤动物模型,分为2组,实验组每kg食物添加1 g塞来昔布,观察塞来昔布对裸鼠健康状况、体重变化及移植瘤变化的影响,并用TUNEL方法检测其对移植瘤细胞凋亡的影响.结果塞来昔布对裸鼠健康状况及体重变化无明显影响(P＞0.05),对移植瘤的生长有抑制作用,肿瘤抑制率为83.7%(P＜0.05),对移植瘤细胞的凋亡有促进作用(P＜0.05).结论塞来昔布可能通过促进肿瘤细胞凋亡等途径对膀胱肿瘤产生抑制作用,可能成为膀胱肿瘤化学预防及治疗的辅助手段.     

脂质体Tie-2-siRNA表达载体对HepG2细胞裸鼠移植瘤作用的研究

目的探讨Tie-2小干扰RNA(siRNA)对HepG2细胞裸鼠皮下移植瘤的作用。方法将HepG2肿瘤细胞植于6周龄鼠后背皮下,荷瘤鼠分为对照组及实验组,分别用生理盐水/脂质体及Tie-2-siRNA/脂质体瘤内注射,检测基因治疗前后肿瘤体积、质量变化,血清AFP、MVD及肿瘤组织学变化。结果治疗组治疗后第4、7及10d,抑瘤率分别为26.94%、53.01%及68.91%;肿瘤体积分别为118.47、111.57及104.59mm3,明显小于对照组的162.17、237.46及336.41mm3,差异有统计学意义(P<0.01)。肿瘤瘤重治疗组轻于对照组〔(0.89±0.09)gvs(1.24±0.03)g,P<0.01〕;AFP值治疗组明显小于对照组〔(107.66±24.13)ng/mlvs(266.08±50.96)ng/ml,P<0.01〕;MVD值治疗组亦明显小于对照组(34.63±4.07vs81.01±9.44,P<0.01)。病理组织学显示,对照组肿瘤体积大,异形明显;治疗组可见肿瘤以坏死为主要病理改变,有大片坏死灶。治疗组只有2例在坏死灶与未坏死灶肿瘤间可见凋亡细胞。结论Tie-2-siRNA可抑制肿瘤生长和肿瘤血管生成,为肝癌的基因治疗开辟了新的思路。     

血管生成抑制因子Arresten基因对裸鼠移植瘤的研究

Arresten是新发现的一种强有效血管生成抑制因子，是Ⅳ型胶原α1链的羧基末端NC1结构域多肽片段；它能有效抑制新生血管形成及肿瘤的生长和转移。最近，我们采用RT-PCR方法和基因重组技术，已成功地完成了人arresten基因的分子克隆与序列测定。并已构建arresten基因的原核表达载体。且在大肠杆菌中进行了表达。在此基础上，     

核转录因子κB decoy寡核苷酸对移植静脉内膜增生的影响

目的 研究核转录因子κB(NFKB)decoy寡核苷酸(decoy ODNs)对移植静脉内膜增生的抑制作用,探讨其作用机制。方法 Wistar大鼠72只,建立自体静脉移植模型,术后随机分为：对照组,NFκB decoyODNs 50μg、200μg组,杂码decoyODNs 50μg、200μg组,lipofectin pluronic组等6个组,施加不同的处理方法,在移植后1、2周取材。组织形态学方法比较内膜增生程度,半定量RT-PCR方法检测细胞间黏附分子(ICAM)-1的mRNA表达,Western blot和免疫组化方法检测p65、ICAM-1的蛋白产物表达。结果 移植后1、2周内膜增生明显,局部应用50μg NFκB decoyODNs明显抑制内膜增生,抑制率为22％-31％;200μg组受抑制程度更为明显,抑制率达41％～53％,其他组内膜增生无明显变化。NFκB decoyODNs能够抑制：ICAM-1mRNA表达,p65和：ICAM-1的蛋白表达均显著低于各对照组,抑制率为30％-57％。结论 NFκB decoyODNs可显著抑制移植静脉的内膜增生,其作用可能是通过减少黏附分子的基因转录及蛋白产物表达而实现的。     

抑制核转录因子-κB对移植静脉内膜增生的影响

目的　研究核转录因子 κB(NF κB)抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸酯 (PDTC)对移植静脉内膜增生的影响。方法　Wistar大鼠 64只 ,建立自体静脉移植模型 ,随机分为 4组 :对照组、阴性对照组、PDTC 5 0mg/kg组、PDTC 2 0 0mg/kg组。实验组腹腔注射不同剂量的PDTC连续 3d ,对照组给以生理盐水或不予处理 ;分别在术后 1、2周取材 ,比较内膜增生程度 ;逆转录 多聚酶链反应 (RT PCR)检测NF κBp65mRNA及细胞间粘附分子 (ICAM) 1mRNA的表达 ,原位杂交定位ICAM 1的mRNA表达 ,Westernblot和免疫组织化学方法检测 p65、ICAM 1蛋白产物表达。结果PDTC明显抑制内膜增生 (P <0 .0 5 ) ,2 0 0mg/kg组受抑制程度明显 ,与 5 0mg/kg组比较差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,抑制率 3 1%～ 5 4%。PDTC能够抑制 p65及ICAM 1的mRNA表达 (P <0 .0 1) ,p65和ICAM 1蛋白表达也显著低于各对照组 (P <0 .0 1) ,抑制率 44 %～ 68%。 结论　PDTC可显著抑制移植静脉内膜增生 ,其作用机制可能是通过抑制核转录因子 κB激活、减少黏附分子基因及蛋白产物表达而实现的。     

组织因子途径抑制物2基因对Panc-1细胞裸鼠成瘤及转移的影响

目的观察组织因子途径抑制物2（TFPI-2）对胰腺癌细胞系Pane-1细胞裸鼠成瘤及转移的影响。方法将Pane-1-TFPI-2细胞接种到裸鼠皮下作为实验组，观察肿瘤生长情况并测量其大小；取皮下新生肿瘤组织进行原位胰腺接种，观察其对周围组织浸润及远处转移能力的影响。同时以Pane-1-V和Pane-1-P细胞作为对照组。结果实验组和对照组裸鼠皮下均成瘤，但实验组肿瘤体积小于对照组，分别为（438．0±69．8）、（852．0±102．9）和（831．0±78．1）mm’，差异有统计学意义（P〈0．05）。原位胰腺接种，对照组移植瘤浸润胰腺组织，有肝、肺、淋巴结及腹膜转移灶形成，免疫染色显示转移灶CEA阳性，证实其为胰腺肿瘤转移而来。实验组移植瘤包膜完整，无明显浸润及转移现象。结论TFPI-2能抑制肿瘤细胞生长、周围组织浸润及远处转移，为胰腺癌的基因治疗奠定了实验基础。     

MDA-7联合内皮抑素对肝癌HepG2细胞裸鼠移植瘤的抑制作用

内皮抑素抗肿瘤作用已得到证实,但单独应用抗肿瘤效果尚不够理想.黑色素瘤分化相关基因-7(melanoma differentiation-associated gene-7,MDA-7)不但可抑制多种肿瘤细胞的增殖,且与部分抗肿瘤药物存在协同作用.我们研究MDA-7联合内皮抑素对肝癌细胞HepG2裸鼠移植瘤的作用.     

TPX2-siRNA对裸鼠体内移植瘤生长及TPX2表达的影响

我们通过建立裸鼠食管鳞癌细胞EC9706的移植瘤模型,观察TPX2干扰前后对移植瘤的影响和肿瘤组织中TPX2的表达水平. 一、材料与方法 1.材料:人食管癌细胞株EC9706(中国医学科学院肿瘤医院惠赠).裸鼠:BALB/c裸小鼠15只,雄性,4周龄,体质量16～20 g[中国科学院动物所,SCXK(京)2009-0004].TPX2兔抗人多克隆抗体(由德国 Ulrike Bauer惠赠).免疫组织化学试剂盒(北京中山生物技术有限公司).TPX2与β-肌动蛋白(β-actin)引物(北京奥科生物技术有限责任公司),逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)试剂盒(大连TaKaRa公司).     

不同压力CO2气腹对胃癌细胞裸鼠移植瘤成瘤能力的影响

目的 通过将不同压力CO2气腹环境下培养的胃癌MKN-45细胞接种于裸鼠皮下,观察CO2气腹对胃癌细胞体内生长增殖的影响.方法 将胃癌MKN-45细胞置于0、10、12和15 mm Hg CO2气腹环境下培养4 h,然后取2×106个细胞接种于裸鼠皮下,3周后处死裸鼠,测量肿瘤的体积和重量,再对各组移植瘤行HE染色和Ki-67免疫组化染色.结果 0、10、12 mm Hg CO2气腹组裸鼠移植瘤成瘤时间、肿瘤体积和重量(分别为7.8 d、7.2 d、7.8 d;1.2 cm3、1.3 cm3、1.3 cm3;1.5 g、1.9 g、1.6 g)与对照组(分别为7.3 d、1.2 cm3、1.4 g)比较差异均无统计学意义(P>0.05),15mm Hg CO2气腹组移植瘤成瘤时间(12.5 d)与对照组比较显著延长,肿瘤体积(0.5 cm3)和重量(0.5 g)与对照组比较显著下降(P<0.05).0、10、12 mm Hg CO2气腹组裸鼠移植瘤细胞内Ki-67抗原阳性率(61.2%、60.5%、63.4%)与对照组(59.6%)比较差异均无统计学意义(P>0.05),15 mm Hg CO2气腹组的阳性率(27.5%)与对照组比较显著下降(P<0.01).结论 临床常用压力CO2气腹对胃癌MKN-45细胞体内生长增殖无显著影响.     

PTEN真核表达质粒对人膀胱癌裸鼠移植瘤的抑制效应

目的:探讨PTEN真核表达质粒对人膀胱癌裸鼠移植瘤的抑制作用。方法:将人膀胱癌细胞株BIU-87裸鼠背部皮下接种,成瘤后于瘤内多点注射重组真核表达质粒pBp-PTEN,设pBp空质粒和生理盐水为对照,观察肿瘤生长情况、PTEN表达的变化。结果:pBp-PTEN治疗组肿瘤变小,PTEN表达阳性率提高,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:PTEN真核表达质粒pBp-PTEN瘤内注射对人膀胱癌裸鼠移植瘤有一定的抑制作用。     

内皮抑素对乳腺癌MCF-7细胞裸鼠移植瘤的抑制作用

目的 观察内皮抑素对乳腺癌裸鼠皮下移植瘤的影响,探讨内皮抑素用于乳腺癌治疗的应用前景.方法 MTT法测定内皮抑素对MCF-7细胞生长的抑制率.构建乳腺癌细胞MCF-7裸鼠皮下移植瘤模型,瘤体周边注射内皮抑素,观察其对乳腺癌细胞的抑制作用.结果 10μg/mL和15 μg/mL浓度的内皮抑素能有效抑制MCF-7细胞生长(P<0.05).皮下注射内皮抑素后,移植瘤的瘤重和瘤体积及肿瘤微血管密度均较对照组下降(P<0.05).结论 内皮抑素具有良好的生物学活性,通过抑制血管生成及直接抑制肿瘤细胞生长而发挥抗乳腺癌的作用.     

核转录相关因子与脏器损伤研究进展

氧化应激损伤与机体多种病理过程密切相关,Nrf2/ARE信号通路是细胞氧化应激反应中的关键通路。大量的临床研究证实,Nrf2对多种疾病的病理状态有多器官保护作用。本文重点阐述Nrf2/ARE信号通路对脏器损伤可能的保护机制。