枸杞多糖对细胞膜流动性及蛋白激酶C的体外效应

研究枸杞多糖体外免疫调节效应的作用机制。以ＤＰＨ作为荧光探剂，采用荧光偏振法观察ＬＢＰ对兔红细胞膜流动性的影响。并以＾３２Ｐ－组蛋白内参入的放射性强度检测法，观察ＬＢＰ对淋巴细胞胞膜和胞浆蛋白激酶活性的影响。结果：１００ｍｇ／Ｌ ＬＢＰ可明显促进兔红细胞细胞膜的流动性，并能增强１０ｍｇ／Ｌ和２５ｍｇ／ＬＣｏｎＡ对膜流动性的促进作用。     

肉苁蓉多糖的纯化及其对T细胞功能调节的研究

研究肉苁蓉主要成分之—─—多糖对小鼠胸腺T细胞的功能调节。方法：采用沉淀法获肉苁蓉粗多糖，以DEAE－SephadexA－50和SephacrylS－200柱层析，获得肉苁蓉多糖（CDPS）。再采用噻唑蓝比色法（MTT）观察CDPS对小鼠脾、胸腺淋巴细胞增殖反应的影响及对正常小鼠脾淋巴细胞分泌IL－2的影响。结果：CDPS纯化后经SephacrylS－200鉴定为单一对称峰。CDPS体外实验，在12．5～200μg／ml浓度范围内，有单独和协同ConA、PHA促进小鼠胸腺淋巴细胞增殖的作用（P＜0．01）。CDPS在100μg／ml浓度时，能显著提高小鼠脾淋巴细胞分泌IL－2的能力．其IL－2活性明显高于对照组（P＜0．01）。结论：肉苁蓉多糖能增加小鼠脾、胸腺淋巴细胞的增殖反应，且与ConA、PHA有协同刺激小鼠胸腺淋巴细胞增殖的作用；并能显著提高小鼠脾脏T淋巴细胞分泌IL－2。     

补益中药调控IL—2产生及其作用的实验研究

研究了4种补益中药对大鼠脾淋巴细胞产生TL—2及其作用的影响。结果显示党参、淫羊藿有促进ConA活化的小鼠脾淋巴细胞增殖的作用,麦冬、鸡血藤则无。上述2种中药促进ConA活化的小鼠脾淋巴细胞增殖是由于促进大鼠脾淋巴细胞产生TL—2所致。另一方面,4种中药无明显促进、甚至抑制ConA活化的淋巴细胞对TL—2的反应性。淫羊藿对环磷酰胺(CY;100mg/kg,1次)抑制的大鼠脾淋巴细胞产生IL—2有改善作用。     

银耳多糖对小鼠脾脏淋巴细胞蛋白激酶C活性的影响

目的观察银耳多糖(TPS)体外对小鼠脾脏淋巴细胞蛋白激酶C(PKC)活性的影响,探讨TPS对免疫细胞信息传递系统的效应。方法应用反向离子对高效液相色谱法测定小鼠脾脏淋巴细胞PKC活性。结果TPS能促进体外培养的小鼠脾脏淋巴细胞PKC活性。结论TPS的免疫调节作用与淋巴细胞的信号传导系统密切相关。     

严重烫伤对小鼠脾脏T淋巴细胞经TCRα/β、CD28活化通路和T细胞功能的影响

目的：探讨严重烧伤对小鼠脾脏T淋巴细胞经T细胞抗原受体活化通路的影响及其与伤后T细胞增殖能力和白细胞介素2（IL－2）分泌改变的关系。方法：检测18％Ⅲ度烫伤小鼠T淋巴细胞表达抗原受体TCRα/β,共刺激分子CD28阳性表达率,及蛋白酪氨酸激酶（PTK）,蛋白激酶C（PKC）活性改变,胞浆游离Ca^2 浓度变化,观察伤后不同时相T淋巴细胞增殖功能及IL－2分泌活性,并分析上述信号转导分子活性变化与伤后T细胞功能改变的关系。结果：烧伤后T细胞膜受体TCRα/β和共刺激分子CD28表达阳性率降低,胞膜PTK活性受抑,但于伤后168h恢复,TCRα/β和CD28阳性表达率及PTK活性改变与T细胞增殖功能及IL－2分泌呈现显著相关性。胞浆游离[Ca^2 ]伤后12h明显降低,并持续到伤后168h,胞浆PKC活性出现先升后降的双相改变。结论：烧伤后T淋巴细胞经TCRα/β,CD28活化通路活性降低和胞膜PTK活性受抑是伤后T细胞功能受抑的重要分子机制。     

藏药结血蒿水提物的免疫抑制作用研究

目的研究结血蒿水提取物（AV-ext）对小鼠免疫反应的抑制作用。方法运用淋巴细胞增殖反应、混合淋巴细胞反应观察AV-ext体外应用和口服给药对小鼠脾细胞增殖的影响;运用小鼠脾细胞增殖试验,观察AV-ext体外应用对小鼠活化脾细胞分泌IL-2的影响;用明胶酶谱法和粘附分析法,观察AV-ext对小鼠活化T淋巴细胞移动和粘附能力的影响。结果AV-ext在1μg／mL-100μg／mL剂量范围内对脾细胞无明显的细胞毒性,但对刀豆蛋白A（ConA）诱导的小鼠脾细胞增殖反应、混合淋巴细胞反应具有明显的抑制作用,对小鼠活化脾细胞分泌IL-2、小鼠活化T淋巴细胞分泌基质金属蛋白酶9（MMP-9）及粘附能力有显著的抑制作用;连续7d每日口服给予150mg／kg和300mg／kg的AV-ext,能明显抑制小鼠脾细胞增殖及活化脾细胞分泌MMP-9。结论AV-ext能显著抑制小鼠的细胞免疫反应。     

紫花地丁水煎剂调节小鼠免疫细胞功能的体外研究

研究紫花地丁水煎剂体外对C57小鼠脾淋巴细胞转化试验和腹腔巨噬细胞的吞噬功能的影响，探讨紫花地丁的免疫调节功能，寻求一种更适宜的免疫调节剂。用^3H-TdR掺入法测定不同浓度的紫花地丁对小鼠脾淋巴细胞和腹腔巨噬细胞的毒性作用，MTT方法检测小鼠脾淋巴细胞转化试验和腹腔巨噬细胞的吞噬功能。结果：发现紫花地丁水煎剂在0.2-1.6mg/ml浓度时，能抑制正常小鼠被LPS诱导的脾淋巴细胞增殖活性，但未见到对ConA诱导的脾淋巴细胞增殖活性及对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能有明显影响。结论：紫花地丁水煎剂通过抑制小鼠由LPS诱导的B淋巴细胞的增殖，下调抗体的生成，但对小鼠细胞免疫功能无明显影响。     

长期接触低剂量氯化甲基汞对老化模型小鼠脑蛋白激酶C活性的影响

目的探讨氯化甲基汞（Methylmercury chloride，MMC）对12月龄快速老化模型小鼠（Senescence-accelerated mouse，SAM）的快速老化亚系SAMP-prone／8（SAMP8）及抗快速老化亚系SAM-resistance／1（SAMR1）小脑组织蛋白激酶C（Protein kinase C，PKC）活性的影响。方法实验小鼠随机分为3组：MMC各剂量组小鼠6月龄开始连续喂饲含有不同剂量（1．00、2．00和3．00mg／kg）MMC的普通饲料至12月龄建立SAM快速老化亚系SAMP8和抗快速老化亚系SAMR1汞中毒模型，对照组给予普通饲料，提取鼠小脑组织胞浆和胞膜PKC。采用改良Takai法观察MMC对鼠小脑PKC活性的影响。结果MMC各剂量组鼠小脑组织胞浆和胞膜PKC活性明显高于对照组（P〈0．05，P〈0．01），与对照组比较其脑汞含量随接触剂量和时间的延长不同程度地明显高于对照组（P〈0．01，P〈0．001）。结论MMC可能通过影响小鼠小脑PKC活性介导其神经毒性作用，在老化进展中具有重要作用。     

茶多酚免疫药理作用研究

目的：研究茶提取物-茶多酚（TP）对小鼠淋巴细胞免疫功能的影响。方法：采用MTT法测定TP在离体给药时对ConA诱导小鼠脾淋巴细胞及小鼠巨噬细胞增殖反应的影响。结果：体外实验证明,TP对丝裂原诱导的小鼠脾淋巴细胞和小鼠巨噬细胞增殖反应具有明显的增强作用,可以显著增强ConA诱导的小鼠离体脾淋巴细胞及小鼠离体巨噬细胞增殖反应。结论：TP具有免疫增强作用。     

视网膜下液促使视网膜色素上皮细胞膜上蛋白激酶C变化的机制分析

目的：研究视网膜下液（SRF）能否引起体外培养的视网膜色素上皮（RPE）细胞浆内蛋白激酶C（PKC）的激活和转位，探讨SRF与RPE细胞中PKC信号系统变化的关系。方法：实验对象为体外培养的RPE细胞；不同的刺激因素分别在不同的时间刺激RPE细胞，通过细胞裂解和离心获取细胞浆和细胞膜蛋白粗提液，用同位素^32P标记和液体闪烁计数法检测细胞浆和细胞膜PKC活性水平。结果：SRF和佛波酯（PMA）都可以激活RPE细胞浆中的PKC（c-PKC），并使其由胞浆向胞膜转位，但胞膜上PKC（m-PKC）活性峰值水平和出现的时间不同。结论：SRF可引起RPE细胞膜上PKC的活性发生变化，变化的幅度与增殖性玻璃体视网膜病变（PVR）的分级呈正相关。     

小檗碱对兔红细胞膜流动性及膜蛋白荧光的影响

目的：研究小檗碱对细胞膜流动性及其膜蛋白荧光的影响．方法：以制备的兔红细胞膜为材料,1,6-diphenyl-1,3,5-hexatriene（DPH）为荧光探针,运用荧光偏振技术检测与小檗碱作用后兔红细胞膜流动性的变化,观察小檗碱与兔血红细胞膜蛋白作用后Tyr残基荧光强度的变化．结果：兔血红细胞膜与小檗碱作用后其荧光偏振P值发生了剂量依赖性的下降;小檗碱使兔血红细胞膜蛋白Tyr残基的荧光产生剂量依赖性的淬灭作用．结论：小檗碱在体外能有效提高细胞膜的流动性,可能与小檗碱多种心血管药理活性有关;小檗碱与膜蛋白的作用可能是膜流动性变化的引发机制．     

二氢青蒿素抑制大鼠胶质瘤C6细胞增殖和诱导凋亡

目的:研究二氢青蒿素(dihydroartemisinin,DHA)对大鼠胶质瘤细胞(C6细胞)增殖和凋亡的影响。方法:在培养的C6细胞,加入DHA1～125μmol/L作用24、48、72h。以台盼蓝染色计数和噻唑蓝(MTT)还原反应,观察细胞增殖和活性;以Hoechst33342染色,观察细胞凋亡;以H2DCFDA氧化试验检测细胞内活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)变化。结果:DHA5～125μmol/L浓度及时间依赖性抑制C6细胞的增殖,作用48h后的IC50是23.4μmol/L;5～25μmol/L能诱导细胞凋亡(P<0.05);5～125μmol/L DHA可增高细胞内的ROS(P<0.01)。结论:DHA能够抑制C6细胞增殖,并诱导其凋亡,其细胞毒作用与细胞内ROS增加相关。     

Effect of herbal tonic on the membrane fluidity of the mice suffered from lymphatic leukemia

By using fluorescence polarization technology, the authors have studied variations in the membrane fluidity of red blood cell and spleen lymphocytes of the mice with lymphatic leukemia (L7212) untreated or treated by the compound tonic of traditional Chinese medicine decoction of reinforcing Qi and nourishing Yin and decoction of reinforcing Qi and nourishing blood. It was not only confirmed that the membrane fluidity of malignant lymphocytes increased more greatly, but also discovered that the variations could appear in early period of leukemia. The membrane fluidity of lymphocytes of the mice with leukemia treated by the herbal tonic could drop to normal level. But the membrane fluidity of the red blood cell between the normal mice (615) and the leukemia mice (L7212), untreated or treated by the herbal tonic, had no significant difference. Result: the above mentioned suggests the herbal tonic could resist leukemia by reducing the membrane fluidity of the lymphocytes and improving structure and function of the membrane.     

中药热毒清对淋巴细胞膜流动性和DNA合成的影响

本文观察了中药热毒清对小鼠脾脏淋巴细胞膜流动性及淋巴细胞DNA合成的影响,并与伴刀豆球蛋白(ConA)和植物血凝素(PHA)的作用进行比较。结果表明:热毒清使脾混合淋巴细胞或T淋巴细胞膜的流动性升高,并能拮抗ConA或PHA诱导的使膜流动性降低的效应。体外,热毒清抑制ConA转化小鼠淋巴细胞的能力,随浓度加大而增强。上述生物效应,在整体实验中并不明显。     

HL-60细胞诱分化及细胞膜恶性标志逆转的实验研究

本文采用荧光偏振技术和受体荧光定量测定法,动态观察DMSO(二甲亚砜)体外诱导人急性早幼粒白血病细胞系(HL-60细胞)沿粒系统成熟分化过程中细胞膜流动性及膜ConA受体结合量的改变,还测定Molt4和Raji淋巴瘤细胞膜的相应变化.结果表明,随分化细胞百分率增加膜流动性和ConA受体结合量降低,呈现有意义的逆转改变(P<0.01).二株淋巴瘤细胞膜的流动性和ConA受体结合量均明显高于正常淋巴细胞。实验结果证实了膜流动性增高及ConA受体结合量增加是HL-60细胞的膜表型特征,并能随恶性细胞的诱导分化而逆转。     

Normal and leukeymic lmphocyte membrane fluidity and response to stimulation with ConA and PHA

In our experiment, lymphocyte membrane was 1abeled by DPH fluorescence probe. The rate of rotation of the probe can be measured from the value of fluorescence polarization (P_DPH). With this method useful information could be provided about membrane fluidity of lymphocytes. It was found that the F value (unit of lipid fluidity of membrane) of leukemic lymphocytes was obviously higher than that of normal ones. Furthermore, the F value of cultured leukemic T_s lymphocytes was the highest. In contrast with normal spleen T-lymphocytes or mixed lymphocytes, the response of malignant lymphocytes to the stimulation with ConA or PHA was reflected in the decrease of P_DPH value or the increase of F value. Unexpectedly, the F value of T-lymphocytes from “615” mouse not injected with tumour cells was also higher than that of the mixed. The possibility of using the membrane fluidity as a diagnostic criterion was also discussed.     

黄芪舒张血管平滑肌的作用及机制

目的:探讨黄芪对血管平滑肌的舒张作用及其机制.方法:采用大鼠离体胸主动脉环灌流模型.在去除血管环内皮后,观察累积浓度黄芪对基础状态(基础组)、苯肾上腺素(PE)预收缩(苯肾上腺素组)、氯化钾预收缩(氯化钾组)的血管环的作用和黄芪对经无钙液(无钙液组)、无钙液加肝素(肝素组)、普萘洛尔(普萘洛尔组)预处理后的血管环的作用.结果:在血管内皮被去除后,黄芪对基础状态或氯化钾预收缩的血管环无影响;当黄芪浓度累积达(10-1、3×10-1、100、3×100)g/L时,对PE(3×10-7mol/L)预收缩的血管环产生剂量依赖性舒张作用(P<0.05).经无钙液预处理后,黄芪(3×100 g/L)对血管环的舒张作用未被阻断;但经无钙液加肝素预处理后,该作用被显著抑制(P<0.01);而普萘洛尔预处理不影响黄芪对PE预收缩血管环的舒张作用.结论:黄芪对去除内皮的血管具有舒张作用.其机制可能与阻断血管平滑肌细胞内质网上的三磷酸肌醇敏感的钙离子通道,抑制内钙的释放有关.     

一氧化氮抑制单核-内皮细胞粘附的机制

目的：研究一氧化氮（ＮＯ）抑制单核内皮细胞粘附的机制。方法：以硝普钠作为ＮＯ的供体，用细胞粘附实验、流式细胞仪荧光强度测定、细胞ＥＬＩＳＡ、Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ等方法分别从细胞、蛋白表达、基因表达方面研究ＮＯ对内皮细胞粘附分子（ｖａｓｃｕｌａｒｃｅｌａｄｈｅｓｉｏｎｍｏｌｅｃｕｌｅ，ＶＣＡＭ１）表达的影响。结果：ＮＯ抑制ＩＬ１α诱导的单核内皮细胞粘附，抑制ＩＬ１α诱发的ＶＣＡＭ１的表达并呈时间依赖性及浓度依赖性，ＮＯ在粘附分子ＶＣＡＭ１的基因表达水平上亦呈现抑制作用。结论：ＮＯ抑制ＶＣＡＭ１的表达是其抑制单核内皮细胞粘附及抗动脉粥样硬化的机制之一。     

桑叶乙酸乙酯提取物的血管作用及其机制

目的:探讨桑叶乙酸乙酯提取物对离体大鼠胸主动脉环收缩张力的作用及其机制。方法:采用生物信号采集系统记录灌流胸主动脉环张力变化。结果:①桑叶乙酸乙酯提取物(0.25~32.0 g/L)对苯肾上腺素(PE,1-0 6m o l/L)和KC l(6×1-0 2m o l/L)预收缩的内皮完整和去内皮的血管环均有舒张作用,且呈浓度依赖性;②EC50(KC l 6 g/L,PE 6.4 g/L)的桑叶乙酸乙酯提取物可使CaC l2量效曲线下移,最大反应降低;③经钙通道阻断剂维拉帕米预处理的去内皮血管,桑叶乙酸乙酯提取物可加强PE引起的血管收缩,与ryanod ine受体阻断剂钌红共孵育可取消维拉帕米的上述作用,而IP3受体阻断剂肝素则不能取消其作用。结论:桑叶乙酸乙酯提取物对血管呈非内皮依赖性的双重作用,其舒张效应大于收缩效应。桑叶乙酸乙酯提取物产生的血管舒张作用可能是通过抑制电压依从性钙通道和受体依从性钙通道减少Ca2 内流入血管平滑肌细胞所致;其收缩作用可能是通过激活内质网ryanod ine受体,引起内质网内Ca2 释放引起的。     

槲皮素与芦丁对离体大鼠主动脉环的舒张作用及机制

目的:比较研究槲皮素与芦丁对离体大鼠胸主动脉环的作用及其可能的途径。方法:采用累积加药法,检测槲皮素和芦丁对去氧肾上腺素(pheny lephrine,PE)预收缩的胸主动脉环张力的影响。结果:槲皮素对离体大鼠内皮完整和去内皮的胸主动脉环均有浓度依赖性的舒张作用,而芦丁对PE预收缩血管的舒张作用是内皮依赖性的。槲皮素和芦丁对内皮完整的胸主动脉环的最大舒张反应分别为(77.20±6.11)%和(44.28±7.48)%,但两者对内皮完整的胸主动脉环最大舒张的半数有效浓度无明显差异。用一氧化氮合酶抑制剂L-NAM E(0.1 mm o l/L)预处理后,可阻断芦丁诱导的舒张血管作用,但不能阻断槲皮素引起的舒张血管作用;用鸟苷酸环化酶抑制剂亚甲蓝(10μm o l/L)预处理后,两者的血管舒张作用均被阻断。用环氧合酶抑制剂吲哚美辛(10μm o l/L)预处理后可减弱槲皮素诱导的舒张血管作用,但不能阻断芦丁引起的舒张血管作用。结论:槲皮素的舒血管作用强于芦丁,槲皮素可能是通过鸟苷酸环化酶和环氧合酶途径产生非内皮依赖性的血管舒张作用,而芦丁可能是通过NO-鸟苷酸环化酶途径产生内皮依赖性的血管舒张作用。